实验一 有丝分裂染色体标本制片技术

（制片——临时装片）
4. 解离：取95%乙醇中保存的根尖水洗两次，用 1mol/L HCl 在60℃处理根尖8-10min后，水 洗3~4次。 5. 染色：根尖在有盖的小瓶中加入希夫试剂染色 10~20min。 6. 压片：在干净的载玻片上切下根尖分生区，滴一滴 45%醋酸，加盖玻片，用滤纸吸净多余的液体， 一手压住盖玻片一角，另一手持竹针轻敲盖玻片至 组织呈云雾状。将载玻片在酒精灯上轻烤，迅速在 盖玻片上覆滤纸条，用拇指垂直按压制片。 7. 镜检及观察。
有丝分裂时，染色体呈现连续的、动态的 变化。
细胞周期
分裂期
分裂间期
前期
中期
后期
末期
分裂间期
制作染色体标本的用途：
1. 染色体可作为一个指标进行物种分类并探 索物种之间的亲缘关系，如染色体数目、 大小、随体、形态及特殊染色体（如性染 色体、B染色体、唾腺染色体）等特点。 2. 染色体数目或结构在一定的生理、病理或 外界条件下会发生改变，在临床上对疾病 的早期诊断及产前遗传咨询等十分重要。 3. 新型染色体识别技术的基础：如各种显带 技术、荧光原位杂交等。
将05g碱性品红溶于100ml热蒸馏水中使之充分溶解待溶液冷却至50时过滤再冷却到25时加入1moll盐酸hcl10ml和1g亚硫酸氢钠nahso放置暗处静置24h后加02505g活性炭摇荡1min过滤溶液呈无色装入棕色瓶中塞紧瓶塞保存在冰箱内04用前预先取出使之恢复至室温后再用
实验一 有丝分裂染色体标本制片技术
需要注意的问题：
1. 控制好解离时间，解离不能过度，是实验 成功与否的关键； 2. 每次水洗都要充分； 3. 找准根尖分生区，切片尽量要薄； 4. 烤片时不要过度，不要烤干； 5. 压片时必须用力适当，盖玻片千万不能移 动，不要产生气泡； 6. 希夫试剂如呈粉红色不能使用，须重配。 7. 卡诺固定液要新鲜配制。
实验原理：
1. 各种生长旺盛的植物组织中，如根尖、茎 尖、居间分生、愈伤组织等，细胞常进行 着旺盛的有丝分裂。在细胞分裂的适当时 期取材，并进行一定的处理，就可以在显 微镜下观察染色体的变化特点和染色体的 形态特征，并进行染色体计数。
2. 由于有丝分裂的中期染色体具有典型的形 态特征，并易于计数，因此为了获得更多 的中期染色体图像，可以采用药物处理或 冰冻处理(预处理)的方法，阻止纺锤体的 形成，使细胞分裂停止在中期。同时通过 处理还可使染色体缩短，易于分散，便于 进行观察研究。 3. 通过对细胞组织进行酸性水解或酶处理除 去细胞之间的果胶层，并软化细胞壁，使 细胞容易彼此散开，有利于压片和染色。
哈尔滨师范大学 生命科学与技术学院 遗传教研室
背景知识
细胞周期：通过 细胞分裂产生新 细胞的生长开始 到下一次细胞分 裂形成子细胞结 束为止所经历的 过程。
G2
有丝分裂的意义:
有丝分裂促进细胞数目增加，核内各染色体 准确复制为二，子母细胞具有同样质量和数 量的染色体，保证物种的连续性和稳定性。
实验材料：
毛葱（Allium fistulosum） 根尖（2n=16）。
实验器材：
显微镜，冰箱，水浴锅，分析天平，剪刀，镊子， 刀片，载玻片，盖玻片，滤纸，量筒，滴瓶，酒精 灯，指管等。
试剂及配制：
1.
2.
0.02%秋水仙素：称取0.02g秋水仙素溶于100ml水中，在 棕色瓶中保存。
卡诺（Carnoy‘s）固定液：酒精:冰醋酸=3:1（体积比），即 30ml酒精与10ml冰醋酸混合。
3.
希夫（Schiff‘s）试剂：将0.5g碱性品红溶于100ml热蒸馏 水中，使之充分溶解，待溶液冷却至50℃时过滤，再冷却到 25℃时加入1 mol/L盐酸（HCl）10mL和1g亚硫酸氢钠 （NaHSO3）或1.5g偏重亚硫酸钠（Na2S2O5），放置暗处， 静置24h后，加0.25～0.5g活性炭摇荡1min，过滤，溶液呈 无色，装入棕色瓶中塞紧瓶塞，保存在冰箱内（0～4℃），用 前预先取出，使之恢复至室温后再用。 45%醋酸： 45ml醋酸和55ml水混合。
染色体标本的制作方法：
1. 滴片法：用于动物细胞，如人 体外周血淋巴细胞和小白鼠骨 髓细胞染色体标本的制备等；
2. 压片法：用于植物细胞，如洋 葱、玉米、小麦等根尖分生区 细胞染色体标本的制备。
实验目的：
1. 了解有丝分裂过程在遗传学中的意义和重要 性；
2. 掌握制作有丝分裂染色体标本的压片方法； 3. 观察有丝分裂过程中染色体的动态变化。
根尖分生区：
染色体与染色单体
着丝点
染色体
姐妹染色单体
观察结果：
洋葱根尖细胞有丝分裂不同时期的细胞学特征：
间期
前期
中期
极面观
后期
末期
侧面观
作业：
1. 绘图说明观察到的有丝分裂中期的 特征。 2. 预处理和解离的目的是什么？固定 液的作用是什么？
预习：实验二 染色体核型及其分析 准备：竹签，细线，毫米尺。
4.
实验步骤：
根尖的培养 预处理 固定 解离 染色 压片 镜检及观察 实验材料 准备
临时装片 制片
（实验材料准备）
1. 根尖的培养：挑选当地种植的未经发芽抑制剂 处理且已过收获后2~3个月休眠期的毛葱鳞茎， 剥除鳞茎外干枯的表皮，将其置于盛清水的沙 盘中，让清水没过鳞茎根部，每பைடு நூலகம்换水。
2. 预处理：培养至根长1~2cm时，切取根尖， 用0.02%秋水仙素暗处理3~5h。 3. 固定：水洗后用卡诺固定液固定24小时，水洗， 转入95%乙醇或70%乙醇中保存。