蛇床子素上调miRNA9抑制BACE1表达治疗阿尔茨海默病
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ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡｓ）是 一 种 调 节 内 源 性 基 因 的非编码小 ＲＮＡ，它主要通过抑制 ｍＲＮＡ的翻译或 促进其降 解 而 发 挥 作 用［１２］。 近 年 来 研 究 表 明，ＡＤ 的发生与多种 ｍｉＲＮＡｓ异常表达相关。现代药理学
ｐｌｏｙｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ．ＣＣＫ８ｍｅｔｈｏｄｗａｓ ｕｓｅｄｔｏｔｅｓｔｃｅｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ．ＬＤＨ ｍｅｔｈｏｄｗａｓａｐ ｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃｅｌｌｄａｍａｇｅ，ａｎｄＢａｘ，Ｂｃｌ２ｉｍｍｕｎｏ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌ，ｔｈｅｓｙｎａｐｓｅｓｏｆｃｅｌｌｂｏｄｉｅｓｄｅ ｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｃｅｌｌｓｓｈｒａｎｋ，ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ，ａｎｄＬＤＨｌｅａｋａｇｅａｎｄＢａｘ／Ｂｃｌ２ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｉｎＡＳＩＶ ｇｒｏｕｐａｎｄＲａｐａ ｇｒｏｕｐｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄＬＤＨｌｅａｋａｇｅａｎｄＢａｘ／
蛇床子素上调 ｍｉＲＮＡ９抑制 ＢＡＣＥ１表达治疗阿尔茨海默病
蔺 莹，姚璎珈，梁喜才，时 悦，倪颖男，吴雨桐，杨静娴
（辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 １１６６００）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１９．０４．０１６ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１９）０４－０５２４－０６ 中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ２８４１；Ｒ３２９２４；Ｒ３４２２；Ｒ３９４２； Ｒ７４５７；Ｒ９７７３ 摘要：目的 探讨蛇床子素上调 ｍｉＲＮＡ９治疗 ＡＤ的作用机 制。方法 基因芯片技术筛选蛇床子素治疗后差异表达的 ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ；数据库 和 Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ预 测 ｍｉＲＮＡ９调 控 的 靶 基 因；脂质 体 ２０００建 立 ＡＰＰ高 表 达 的 ＳＨＳＹ５Ｙ细 胞 模 型， ＭＴＴ法检测蛇床子素对细胞活力的影响；将 ｍｉＲＮＡ９抑制 剂转入到 ＡＰＰ高表达的 ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中，ＲＴＰＣＲ法检测各 组 ｍｉＲ９、ＢＡＣＥ１ｍＲＮＡ的表达情况；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测 细胞中 ＢＡＣＥ１蛋白的表达情况。结果 数据库结果显示， 蛇床子素调控的 ｍｉＲＮＡ９可以与 ＢＡＣＥ１靶向结合。本实 验成功建立 ＡＰＰ高表达的 ＳＨＳＹ５Ｙ细胞模型。ＭＴＴ结果 显示，５０μｍｏｌ· Ｌ－１蛇 床 子 素 对 细 胞 有 较 好 的 保 护 作 用。 ＲＴＰＣＲ结果显示，蛇床子素可以上调 ｍｉＲ９的表达，抑制剂 组 ｍｉＲＮＡ９表达最低。与模型组相比，蛇床子素可以抑制 ＢＡＣＥ１ｍＲＮＡ和蛋白的表达，且抑制剂组的 ＢＡＣＥ１ｍＲＮＡ 和蛋白表达最多。结论 蛇床子素治疗阿尔茨海默病可能 与上调 ｍｉＲＮＡ９，从而抑制 ＢＡＣＥ１表达有关。
关键词：蛇床子素；基因芯片；ｍｉＲＮＡ９；生物信息学分析；β 分泌酶；阿尔茨海默病
收稿日期：２０１８－１１－２０，修回日期：２０１９－０１－１５ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１１７３５８０） 作者简介：蔺 莹 （１９９３－），女，硕 士 生，研 究 方 向：神 经 药 理 学，Ｅ
ｍａｉｌ：ｌｎｕｔｃｍ＿ｌｙ＠１６３．ｃｏｍ； 杨静娴（１９６３－），女，博士，教授，博士生导师，研究方向： 神经药理学，通讯作者，Ｅｍａｉｌ：ｊｉｎｇｘｉａｎｙａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ
阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）是一 种发病过程漫长，多发生于中老年人，具有一定遗传 性的神经退行性疾病。主要的临床表现为记忆力的 减退以及认知功能的缺失［１－２］。关于 ＡＤ的发病机 制存在着多种假说，其中 β淀粉样蛋白（ａｍｙｌｏｉｄβ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ａβ）沉 积 学 说 是 当 今 的 研 究 热 点。 β分 泌 酶 １（βｓｉｔｅＡＰＰｃｌｅａｖｅｄｅｎｚｙｍｅ１，ＢＡＣＥ１）作为 Ａβ 生成的限制酶，促进淀粉样前体蛋白 （ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅ ｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＰＰ）水解成 Ａβ，间接控制着 Ａβ产 生。ＢＡＣＥ１活性增强，Ａβ生成增多，易导致 Ａβ异 常聚集，沉积在脑内引起炎症等反应，造成神经元丢 失、脑组织萎缩 。 ［３－４］ 因此，抑制 ＢＡＣＥ１表达，减 少 Ａβ的生成，可以延缓 ＡＤ的发生。
·５２４·
中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０１９Ａｐｒ；３５（４）：５２４～９
网络出版时间：２０１９－３－１４１４：１７ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０１９０３１２．１４４５．０３２．ｈｔｍｌ
Ｂｃｌ２ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００１）；ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉ ｔｙｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ， ａｎｄ Ｂａｘ／Ｂｃｌ２ ｗａｓｍａｒｋｅｄｌｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ３ＭＡ ｇｒｏｕｐ （Ｐ ＜ ００１）．ＡｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶ＋３ＭＡｇｒｏｕｐｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉ ｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕ ｓｉｏｎ ＡｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶ ｐｒｏｔｅｃｔｓＯＧＤ／Ｒ ＨＴ２２ｂｙｉｎ ｈｉｂｉｔｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓｖｉａａｃｔｉｖａｔｉｎｇａｕｔｏｐｈａｇｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｏｘｙｇｅｎａｎｄｇｌｕｃｏｓｅｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ／ｒｅｏｘｙｇｅｎ ａｔｉｏｎ；ａｕｔｏｐｈａｇｙ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶ；ＨＴ２２； ｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ
蛇床 子 素 （Biblioteka ｓｔｈｏｌｅ，ＯＳＴ）又 名 甲 氧 基 欧 芹 酚 （Ｃ１５Ｈ１６Ｏ３），是伞形科植物独活中的活性单体［５］。 现代药理学发现，ＯＳＴ具有广泛的药理作用，包括抗 炎、抗凋亡、抗 氧 化 应 激 等 ［５－７］。 中 医 中，独 活 具 有 温肾壮阳、燥湿、祛风、杀虫等作用。实验室前期研 究发现，ＯＳＴ可以调控 ｍｉＲＮＡ９，并且对神经系统具 有一定的保护作用 。 ［８－１０］ 体内实验发现，以 ２０ｍｇ ·ｋｇ－１ＯＳＴ灌胃给予 ＡＰＰ／ＰＳ１小鼠，对 ＡＤ有一定 的治疗作用 。 ［１１］
ｐｌｏｙｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ．ＣＣＫ８ｍｅｔｈｏｄｗａｓ ｕｓｅｄｔｏｔｅｓｔｃｅｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ．ＬＤＨ ｍｅｔｈｏｄｗａｓａｐ ｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃｅｌｌｄａｍａｇｅ，ａｎｄＢａｘ，Ｂｃｌ２ｉｍｍｕｎｏ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌ，ｔｈｅｓｙｎａｐｓｅｓｏｆｃｅｌｌｂｏｄｉｅｓｄｅ ｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｃｅｌｌｓｓｈｒａｎｋ，ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ，ａｎｄＬＤＨｌｅａｋａｇｅａｎｄＢａｘ／Ｂｃｌ２ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｉｎＡＳＩＶ ｇｒｏｕｐａｎｄＲａｐａ ｇｒｏｕｐｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄＬＤＨｌｅａｋａｇｅａｎｄＢａｘ／
蛇床子素上调 ｍｉＲＮＡ９抑制 ＢＡＣＥ１表达治疗阿尔茨海默病
蔺 莹，姚璎珈，梁喜才，时 悦，倪颖男，吴雨桐，杨静娴
（辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 １１６６００）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１９．０４．０１６ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１９）０４－０５２４－０６ 中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ２８４１；Ｒ３２９２４；Ｒ３４２２；Ｒ３９４２； Ｒ７４５７；Ｒ９７７３ 摘要：目的 探讨蛇床子素上调 ｍｉＲＮＡ９治疗 ＡＤ的作用机 制。方法 基因芯片技术筛选蛇床子素治疗后差异表达的 ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ；数据库 和 Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ预 测 ｍｉＲＮＡ９调 控 的 靶 基 因；脂质 体 ２０００建 立 ＡＰＰ高 表 达 的 ＳＨＳＹ５Ｙ细 胞 模 型， ＭＴＴ法检测蛇床子素对细胞活力的影响；将 ｍｉＲＮＡ９抑制 剂转入到 ＡＰＰ高表达的 ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中，ＲＴＰＣＲ法检测各 组 ｍｉＲ９、ＢＡＣＥ１ｍＲＮＡ的表达情况；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测 细胞中 ＢＡＣＥ１蛋白的表达情况。结果 数据库结果显示， 蛇床子素调控的 ｍｉＲＮＡ９可以与 ＢＡＣＥ１靶向结合。本实 验成功建立 ＡＰＰ高表达的 ＳＨＳＹ５Ｙ细胞模型。ＭＴＴ结果 显示，５０μｍｏｌ· Ｌ－１蛇 床 子 素 对 细 胞 有 较 好 的 保 护 作 用。 ＲＴＰＣＲ结果显示，蛇床子素可以上调 ｍｉＲ９的表达，抑制剂 组 ｍｉＲＮＡ９表达最低。与模型组相比，蛇床子素可以抑制 ＢＡＣＥ１ｍＲＮＡ和蛋白的表达，且抑制剂组的 ＢＡＣＥ１ｍＲＮＡ 和蛋白表达最多。结论 蛇床子素治疗阿尔茨海默病可能 与上调 ｍｉＲＮＡ９，从而抑制 ＢＡＣＥ１表达有关。
关键词：蛇床子素；基因芯片；ｍｉＲＮＡ９；生物信息学分析；β 分泌酶；阿尔茨海默病
收稿日期：２０１８－１１－２０，修回日期：２０１９－０１－１５ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１１７３５８０） 作者简介：蔺 莹 （１９９３－），女，硕 士 生，研 究 方 向：神 经 药 理 学，Ｅ
ｍａｉｌ：ｌｎｕｔｃｍ＿ｌｙ＠１６３．ｃｏｍ； 杨静娴（１９６３－），女，博士，教授，博士生导师，研究方向： 神经药理学，通讯作者，Ｅｍａｉｌ：ｊｉｎｇｘｉａｎｙａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ
阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）是一 种发病过程漫长，多发生于中老年人，具有一定遗传 性的神经退行性疾病。主要的临床表现为记忆力的 减退以及认知功能的缺失［１－２］。关于 ＡＤ的发病机 制存在着多种假说，其中 β淀粉样蛋白（ａｍｙｌｏｉｄβ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ａβ）沉 积 学 说 是 当 今 的 研 究 热 点。 β分 泌 酶 １（βｓｉｔｅＡＰＰｃｌｅａｖｅｄｅｎｚｙｍｅ１，ＢＡＣＥ１）作为 Ａβ 生成的限制酶，促进淀粉样前体蛋白 （ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅ ｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＰＰ）水解成 Ａβ，间接控制着 Ａβ产 生。ＢＡＣＥ１活性增强，Ａβ生成增多，易导致 Ａβ异 常聚集，沉积在脑内引起炎症等反应，造成神经元丢 失、脑组织萎缩 。 ［３－４］ 因此，抑制 ＢＡＣＥ１表达，减 少 Ａβ的生成，可以延缓 ＡＤ的发生。
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中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０１９Ａｐｒ；３５（４）：５２４～９
网络出版时间：２０１９－３－１４１４：１７ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０１９０３１２．１４４５．０３２．ｈｔｍｌ
Ｂｃｌ２ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００１）；ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉ ｔｙｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ， ａｎｄ Ｂａｘ／Ｂｃｌ２ ｗａｓｍａｒｋｅｄｌｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ３ＭＡ ｇｒｏｕｐ （Ｐ ＜ ００１）．ＡｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶ＋３ＭＡｇｒｏｕｐｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉ ｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕ ｓｉｏｎ ＡｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶ ｐｒｏｔｅｃｔｓＯＧＤ／Ｒ ＨＴ２２ｂｙｉｎ ｈｉｂｉｔｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓｖｉａａｃｔｉｖａｔｉｎｇａｕｔｏｐｈａｇｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｏｘｙｇｅｎａｎｄｇｌｕｃｏｓｅｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ／ｒｅｏｘｙｇｅｎ ａｔｉｏｎ；ａｕｔｏｐｈａｇｙ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅＩＶ；ＨＴ２２； ｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ
蛇床 子 素 （Biblioteka ｓｔｈｏｌｅ，ＯＳＴ）又 名 甲 氧 基 欧 芹 酚 （Ｃ１５Ｈ１６Ｏ３），是伞形科植物独活中的活性单体［５］。 现代药理学发现，ＯＳＴ具有广泛的药理作用，包括抗 炎、抗凋亡、抗 氧 化 应 激 等 ［５－７］。 中 医 中，独 活 具 有 温肾壮阳、燥湿、祛风、杀虫等作用。实验室前期研 究发现，ＯＳＴ可以调控 ｍｉＲＮＡ９，并且对神经系统具 有一定的保护作用 。 ［８－１０］ 体内实验发现，以 ２０ｍｇ ·ｋｇ－１ＯＳＴ灌胃给予 ＡＰＰ／ＰＳ１小鼠，对 ＡＤ有一定 的治疗作用 。 ［１１］