HPLC法测定酱腌菜中2种防腐剂和2种甜味剂

HPLC法测定酱腌菜中2种防腐剂和2种甜味剂
郎娜
【摘要】建立HPLC法同时测定酱腌菜中2种防腐剂和2种甜味剂的方法.采用C18色谱柱(Agilent,250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.02 mol/L的乙酸铵和甲醇为流动相,采用梯度淋洗,柱温30℃,DAD检测器在波长233 nm进行检测.整个分离过程在18 min内完成.样品处理简单.安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的回收率分别为101.0％,99.1％,99.6％,98.5％,相对标准偏差小于0.86％.方法快速准确,重复性好,能够有效提高日常检验工作效率.
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2013(034)003
【总页数】4页(P81-84)
【关键词】酱腌菜;同时测定;高效液相色谱法;防腐剂;甜味剂
【作者】郎娜
【作者单位】天津市静海县产品质量监督检验所,天津301600
【正文语种】中文
酱腌制蔬菜为百姓餐桌常见食品。

酱腌菜主要是以新鲜蔬菜为主要原料，采用不同腌渍工艺加工而成。

包括各种酱菜、咸菜、发酵性腌菜和其他腌菜。

近年来，酱腌菜产品逐渐趋向低盐化，盐分含量的降低可使常温保存的酱腌制蔬菜保质期变短，为抑制微生物的生长，延长保存期，防腐剂在酱腌制蔬菜中的使用较为普遍。

一般
食品企业比较常用的防腐剂有山梨酸和苯甲酸。

而甜味剂则是用于改善食品口味的一种食品添加剂，有着热量低、甜度高等特点。

糖精钠是常见的无营养型甜味剂；安赛蜜，化学名称乙酰磺胺酸钾，也称AK糖。

这两种甜味剂在我国均可使用，用来提高酱腌制蔬菜的风味与口感。

因此，食品添加剂对于改善酱腌菜的品质以及防腐等方面发挥重要的作用。

但是，一些产品存在滥用或超量使用食品添加剂的现象。

长期过量摄入对人体健康会造成一定损害。

目前，对超范围、超量使用食品添加剂的行为，我国也加大了监管力度。

山梨酸、苯甲酸、糖精钠、安赛蜜这4种添加
剂也是监督检查必检项目。

目前，测定这些物质常用的方法主要为国标方法，但是国标方法确有不足：国标方法单一，不能同时检测多个组分；样品前处理不统一且较为复杂，工作效率低，容易损失，造成样品回收率低。

本文主要采用液相色谱法，研究同时检测酱腌菜中的这4种食品添加剂含量的最佳方法，最终达到能够在同
一条件下将2种甜味剂和2种防腐剂快速、准确分离检测。

1 材料与方法
1.1 仪器、试剂、样品
1.1.1 仪器
Agilent1260高效液相色仪系统（配有DAD检测器，四元泵，自动进样器，色谱工作站，柱温箱）：美国安捷伦科技有限公司；C18色谱柱（Agilent 250
mm×4.6 mm，5 μm）：美国安捷伦科技有限公司；XS204分析天平（0.1 mg）：瑞士梅特勒；隔膜真空泵：天津市津腾实验设备有限公司。

1.1.2 试剂
苯甲酸1 mg/mL（标准溶液）、山梨酸1 mg/mL（标准溶液）、糖精钠1
mg/mL（标准溶液）、安赛蜜1 mg/mL（标准溶液）：天津市光复精细化工研
究所；乙酸铵（优级纯）、甲醇（色谱纯）、氨水（分析纯）：天津市大茂化学试剂厂；娃哈哈纯净水（电导率≤5 μs/cm）：杭州娃哈哈集团有限公司。

1.1.3 样品
糖醋蒜购自华润万家超市
1.2 色谱条件
流动相为：甲醇－乙酸铵溶液（0.02 mol/L），梯度淋洗：甲醇：5%～10%保持
4 min；甲醇 10%～80%，12 min；甲醇 80%保持 2 min，流速 1.0 mL/min；
柱温30℃；进样量为10 μL；紫外波长扫描范围190 nm～400 nm；紫外检测器：233 nm波长，以保留时间和紫外吸收谱图定性，峰面积定量。

1.3 实验方法
1.3.1 标准曲线的绘制
准确吸取浓度为1 mg/mL的山梨酸、苯甲酸、安赛蜜、糖精钠各1mL于10mL
容量瓶中，用甲醇+0.02mol/L乙酸铵溶液（5∶95，体积比）溶液定容至10 mL，此混合中间液的浓度为0.10 mg/mL。

分别吸取混合中间液0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL 用甲醇+0.02 mol/L 乙酸铵溶液（5∶95，体积比）溶液定容至 10 mL，构成浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mg/L 的标准使用液系列。

在选定的色谱条件下进行测定。

1.3 2 样品制备
准确称取剪样5.00 g，放入烧杯中，用氨水调节pH 约为 7，用甲醇+0.02 mol/L 乙酸铵溶液（5∶95，体积比）定容至50.00 mL，充分振摇，再经0.45 μm滤膜过滤后进样测定。

2 结果与分析
2.1 HPLC条件的选择
本实验选择甲醇和0.02 mol/L乙酸铵溶液作为流动相。

梯度淋洗：甲醇5%～10%保持4 min；甲醇10%～80%，12 min；甲醇80%保持2 min。

甲醇和乙酸铵在流动相中的比例的少量变化会使4种组分的保留时间发生显著改变，减少甲醇含
量各组分保留时间变长，分离效果较好，峰形展宽，影响积分，对结果有一定影响。

反之，会使出峰时间提前，特别是对山梨酸和糖精钠的分离影响更大，稍微改变梯度淋洗时间，山梨酸和糖精钠就无法有效分离。

采用以上梯度淋洗条件，分离效果较好，在18 min内可使4种组分完全分离。

流速选择在1.0 mL/min时，4种组分能完全分开，时间短，峰形尖锐，灵敏度高，效果较为理想。

柱温对峰的影响较小，故柱温选为此C18色谱柱的最佳使用柱温30℃。

2.2 检测波长的选择：
本实验对4种添加剂在190 nm～400 nm之间进行全波长扫描，安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的最大吸收波长分别在 226、237、226、254 nm 处，为兼顾各
组分的灵敏度，选择的实验波长为233 nm。

以上述选定的最佳实验条件，进行实验，4种组分的HPLC色谱图见图1。

2.3 样品分析
在相同的色谱条件下，进行样品测定，根据保留时间定性，峰面积定量，计算检测结果。

样品的HPLC色谱图见图2。

2.4 回归方程，相关系数及检出限
根据实验方法对不同浓度标准溶液进行测定，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，各组分标准曲线结果见图3～图6。

回归方程，相关系数，测得各组分检出限，结果见表1。

2.5 回收率与RSD
配制一混合标准溶液，连续进样5次，做精密度实验。

吸取一定量标准溶液，加入到5.00 g样品中，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表2。

图6 糖精钠的标准曲线Fig.6 The standard curves of saccharin sodium
表1 回归方程，相关系数及检出限Table 1 Regressive equation，correlation and detection limit组分回归方程相关系数检出限/（mg/L）安赛蜜 A=32.460 8×C+3.014 7 0.999 92 0.03苯甲酸A=36.843 9×C+2.139 9 0.999 98 0.05山梨酸A=60.081 7×C+2.007 8 0.999 98 0.02糖精钠A=22.667 1×C+0.344 4 0.999 93 0.05
表2 各组分的RSD和回收率Table 2 Precision and accuracy of the test回收率/%安赛蜜10.11±0.075 0.75 198.24 10 208.34 101.0苯甲酸9.97±0.072 0.72 400.05 10 409.96 99.1山梨酸10.11±0.081 0.81 260.12 10 270.08 99.6糖精钠9.99±0.008 6 0.86 204.57 10 214.42 98.5组分（X±s）/（mg/L）RSD （n=5%）样品测定量/（mg/L）加标量/（mg/L）检出总量/（mg/L）
2.6 结果分析
依据本法所确定的色谱条件检测样品中的安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸4种组分，可得到良好的分离效果，并且检出限低，回收率高。

3 结论
本法可准确、快速地同时测定酱腌菜中2种甜味剂和2种防腐剂，操作简单，精密度和准确度高，方法性能能够满足实际工作的需要，有效提高工作效率。

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