卫生微生物检验的质量控制

卫生微生物检验的质量控制
发表时间：2012-08-10T14:47:12.420Z 来源：《中外健康文摘》2012年第18期供稿作者：王琳
[导读] 吸管和滴管上端口松塞棉花后干热灭菌或高压蒸汽灭菌后烘干，使有缓冲和阻尘作用。

王琳（深圳市宝安区龙华预防保健所广东深圳 518109）
【中图分类号】R37【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）18-0125-03
【摘要】目的为进一步促进卫生微生物检验工作再上新台阶。

方法结合本单位工作实际，对卫生微生物检验的质量控制，分别从组织与制度、人员、仪器设备、培养基、试剂、染色液、抗血清、环境设施、参加实验室间比对与能力验证等方面进行了系统的论述。

结论微生物检验的质量控制，其内容及其丰富，必须尽可能地把各个环节影响检测质量的因素，都事先进行有效控制，其检测结果才是科学合理，真实可靠的。

【关键词】卫生检验微生物质量控制
The Quality Control of Hygiene Microorganism Test
【Abstract】Object:To promote the work of Hygiene microorganism test to move forward a single step.Method:Combine the practice of our unit,to control the quality of Hygiene microorganism test.Separately,it is treated by the numbers in
organization,system,crew,instrument,culture medium,reagent,dye(ing) liquor,antiserum,environment facilities,to participate in the laboratory Contrast and the inspect and verify of ability.Conclusion: The quality control of Hygiene microorganism test whose content is plentiful.It must try its best to control effectively every factor which effect every quality of the connection in advance.Then,the result of the test is scientific ,reasonable,true and reliable.
【Key words】Hygiene test Microorganism The quality control
质量是产品的生命，也是一切为社会提供服务的机构赖以生存和发展的不谒源泉。

为客户和社会提供公共卫生检测服务，是疾病预防控制机构的一项重要职能。

而卫生微生物检测工作又是公共卫生检测的重要组成部分，包括病原微生物学检验、血清学检验、分子生物学检验和卫生微生物学检验[1]。

既有定性检验也有强制性定量指标检测。

而检测结果就是我们的劳动产品[2]，其所涉及质量问题的严重性已远不止于产品的本身，它关系到政府的信誉、执法的公正和疾病预防控制的准确及时、关系到社会公众的生命与健康保障。

为此，本所一贯十分重视检测的质量控制，特别是对微生物检验的质量控制进行了一系列的探索与实践。

为进一步促进卫生微生物检验工作再上新台阶，现就以下方面对其质量控制进行描述：
1 组织与制度
组织与制度是实现本所诚信公正、求真务实质量方针的保证，不仅在单位内成立了专门负责质量控制的质量管理科，2004年5月顺利通过了广东省计量认证，建立了一整套由所长挂帅的检测质量保证体系，并授权实验室不受任何干扰独立完成检测工作，使实验室有了明确的法律地位。

实验室在科主任监督下有业务骨干主抓质量控制，并设立了有副主任技师职称资格的人员担任质量监督员，而且编制了龙华预防保健所质量管理手册和检测质量控制的各项程序文件。

同时在实验室内各项管理制度与各类人员职责，均张榜上墙，做到组织严密，分工明确，职责到人。

2 人员
由于微生物检验的所有试验都是中度或高度复杂的实验，首先必须注重人的综合素质。

除强烈的事业心，高度的责任感外，从事微生物检验的技术人员，必须经过广泛的基础教育和训练，包括微生物学、基础医学等知识的学习，以及专业化的实验技能培训，并经过考核合格后持证上岗[1]。

除此之外，特别需要培养的是微生物检验人员严谨求实的工作态度。

疾病预防控制机构的微生物检验，既有病原微生物检验的定性检测，也有国家强制性定量指标的检测。

如菌落总数、霉菌和酵母计数以及大肠菌群数等。

同时从方法学上看，基本上是以手工法为主，主观性强。

在操作过程中每一个环节都可能会出现变化，因此，操作人员的经验、态度、操作熟练程度尢为重要。

所以，一方面，检验人员要加强自我训练，要有自我监督、自我控制的指导思想。

同时，单位和科室要为微生物检验人员，了解当今的科技进步信息，掌握先进的实验技术创造条件，多采取走出去请进来的方式增加技术交流。

还应在按国家标准方法和规范操作的同时，不断探索更加先进的技术。

在技术人员的管理与诱导上，采取培训与考核严密结合，以随时评估其检验能力和操作熟练程度，必要时采取再培训。

可用以下技术作为考核评价方法[3]：①用标准样品或已有预期结果的样品定期进行实际操作考核，有时为了考核无菌技术，还可发放无菌（空白）样品进行监控考核。

②菌数测定技术，使用分散性和稳定性好的枯草杆菌CMCC（B）63501标准菌株，制作芽胞悬液，让被试人员用直径9cm 的普通琼脂平板作表面涂沫接种计数，重复几次求平均数和标准差，以标准差小，和显微镜直接计数折算值接近的为佳。

③生化试验重现性，用铜绿假单胞菌CMCC（B）1012株做系列生化试验3次，观察结果的符合率和重现性。

正确结果是：分解葡萄糖和木糖产酸不产气、H2S阴性、氧化酶阳性、精氨酸阳性、赖氨酸脱羧酶阴性、七叶苷阴性。

④模拟样品检出考核，选合适的基质如奶粉，加入指标菌如普通变性杆菌CMCC（B）49001株。

考核前先作预备试验，指定检验方法，确定检出最少菌数。

然后，用最小菌数的5倍10倍量加入基质中，进行检出试验，从盲检结果的正误进行评定。

3 仪器设备质量控制
表1 微生物实验室常用仪器设备质量控制
微生物实验室最常使用的仪器设备主要有培养箱、水浴箱、生化培养箱、高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、普通冰箱、低温冰箱、光学显微镜、接种环（针）等。

这些仪器的质量控制见表1
4 培养基、试剂、染色液及抗血清的质量控制
培养基的质量直接关系到细菌培养的成败，不同种类的培养基除常规进行无菌试验外，衡量质量的标准也不同。

培养基的制备过程十分繁琐，且影响质量的因素众多，实验室基本倾向使用市售半合成干粉培养基或采用一次性新鲜配制的市售培养基。

在购买时应要求供货商出具相关证件，在使用前先通过外观、批号、PH值、选择性等进行初步评估，检查是否合格，是否在保质期内。

并且配制要有记录可查，按要求选择合适的方法（如温度和时间）进行灭菌，还应有高压灭菌效果的监测记录，配制后使用前进行无菌试验，并有记录可查。

同时，根据检验微生物指标不同，应选择不同的培养基，如基础培养基、选择性培养基和生化反应培养基等。

基础培养基要求多种细菌都能够生长良好，能表现其典型特征如典型菌落形态等。

有些基础培养基，应能满足营养要求高的细菌生长，评定其质量应用灵敏的菌种；选择性培养基，一般是通过向培养基中加入抑制剂，抑制杂菌，选择性地促进某种特定细菌生长。

衡量其质量，必须包括被抑制细菌不能生长或生长较弱，而被选择性生长的细菌应生长良好；生化反应培养基，主要用于观察细菌是否具备某种生化反应能力，用作生化反应培养基质量控制的菌株，应是标准阳性或阴性的细菌。

几种常用培养基及其质量监控见表2 。

表2 几种常用培养基及其质量监控菌株与预期结果
对于染色液，最常用的是革兰氏染色液，自配的染色液要求将整个配制过程形成记录并保存。

实验室常购买商品化的染色液，购买时应核对品牌、试剂名称、批号、存放条件、失效期等，初次使用必须用标准菌株作质量鉴定，以证实其质量要求，以后每周用金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠埃希氏菌ATCC25922对染色液进行室内质量控制，过期的不得再使用。

随着细菌鉴定仪和快速微量生化鉴定板条的普及，实验室常用自配的生化反应试剂种类已越来越少，凝固酶血浆，触酶、氧化酶、VP等试剂，及杆菌肽、Optichin纸片，每次均用标准阴性和阳性菌株进行同步试验，并应符合要求，平时要注意贮存时避光、冷藏，以保证试剂的稳定性[4]。

生化反应试剂盒每个批号，在正式用于出报告之前，都要按说明书作一次专门测试判别质量，同一批号不同时间到货的也需要同样专门测试，因运送、储存条件不同，可能会影响质量。

诊断血清，应从有资质的生产单位购买，以确保来源可靠，验收时要看清批号、效价、透明度与色泽。

初次使用时应注意工作浓度，并与原用的诊断血清对照比较后，再用于标本的测试，以后应每月用相应的标准菌株进行一次质量检测，使用时要特别注意无菌操作，避免污染，并经常检查贮存在4℃冰箱中的各种血清，若发现浑浊，出现絮状，应停止使用。

对于标准菌株，实验室应贮存有试验所需的相应标准菌株，设专人管理，并在相关文件中规定其职责，菌株保存地点或设施应采取相应措施，使非管理者非经许可不能获得，菌株的购买、保存、使用和销毁均应有细致的记录备查[5]，并有科主任复核签字。

5 环境设施的控制
微生物检验对检测场所的设施和环境条件要求较高，必须对其进行有效的控制，使各项设施和环境条件既符合检测技术规范的要求，又能保障工作人员的健康和环境的安全，才能确保检验结果的准确、有效、可靠。

所以首先必须对实验室合理分区，按规范进行装饰。

非洁净区、更衣区、缓冲区、无菌区应标志显目，按制度要求严加管理。

同时，必须对无菌室、超净工作台、生物安全柜进行定期监测和日常维护，并有监测和维护记录。

日常维护包括紫外线灯擦拭、滤网擦洗更换、空气消毒及全面的清洁卫生。

作为空气消毒的紫外线，应大于或等于1.5W/m3，每次实验前后均进行照射消毒不少于30分钟6；定期监测包括紫外线强度（以30W功率计，强度应大于或等于70uW/m2），空气菌落总数（以￠9cm平板，暴皿15min计，菌落总数应小于或等于10cfu/皿）[7]。

实验中要强化无菌操作要领：①换鞋、更衣进实验室，尽量控制人员走动。

带口罩、帽子、消毒手套，穿消毒隔离衣，既可防止操作人员呼吸道常在细菌或体表散落微粒污染培养物，又能防止被试微生物感染自己。

②移液和接种利用火焰灭菌，靠近酒精灯或燃气喷灯火焰操作，利用火焰的净化作用和气流上升，防止带菌尘粒进入容器。

③接种管装或瓶装的培养基时，开塞加塞都要用火焰灭菌管口或瓶口。

④用无菌的吸管、滴管、注射器吸取无菌液体或液体纯培养物时，不要在空气中抽空，要直接插入待吸物中吸取。

⑤倾注平皿培养或作划线分离时，应利用皿盖遮挡防尘。

⑥吸管和滴管上端口松塞棉花后干热灭菌或高压蒸汽灭菌后烘干，使有缓冲和阻尘作用。

6 积极参加实验室间比对和能力验证
实验室间比对和能力验证是检测质量保证体系的重要组成部份，是对实验室检测水平和能力的综合判断[5]，也是对实验室内质量控制效果的检验，通过比对和能力验证，可以有一个纵向的比较，了解本实验室在本地区或全国实验室中的技术地位，并找出不足和差距，有利于实验室技术水平的提高。

活动的层次越高，其质量标准的可靠性更强，能了解到的信息更多，情况更全面。

因此，一个常规实验室，应该尽可能参加范围更加广泛的室间质量控制评价活动。

其实，卫生微生物实验室的质量控制，其内容十分丰富，相对于临床微生物实验室，还应有定量指标的内容，同时样品的采集、运送和处理都会对检测结果的可靠性产生重大影响，还有数据的处理，结果的报告和审核，都必须严格地按制度和规范进行。

总之，只有把各个环节影响卫生微生物检测质量的因素，都事先进行有效的控制，我们的结果才是科学合理、真实可靠的，才能真正为卫生监督和疾病预防控制提供强有力的技术支撑。

参考文献
[1]卫生部办公厅全国疾病预防控制机构工作规范（2001版）236-240.
[2]李家学，吴德林.卫生检测质量管理中的人员管理医学动物防制2004年.
[3]陈文胜.卫生微生物检验.公共卫生实验室质量技术与安全 2004年12月罗建波刘礼平主编673-675.
[4]罗小铭.微生物检验的质量控制,广东省疾病预防控制中心2006年质量管理简报41—45.
[5]蔡妙森,王琳.卫生检验中微生物检验质量控制职业与建康2005.21(4)531-532.
[6]卫生部.消毒技术工作规范(2002年板)159.
[7]黄薇,蔡炯,黄剑屏等.疾病预防控制系统微生物实验室质量控制与评价.中国卫生检验杂志2007年第一期134-136.。