阿尔茨海默病中miR-29c对APP表达调控的初步研究
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２１ ０ １年 ９月 第２ １卷 第 ９期
中 国 比较 医 学 杂 志
ＣＨＩ Ｓ Ｊ ＮＥ Ｅ ＯＵＲＮＡＬ ＯＭＰ ＯＦ Ｃ ＡＲＡＴＩ ＤＩ ＮＥ ＶＥ ＭＥ ＣＩ
Ｓ ｐ ｅ ｂ ｒ ０１ ｅ ｔ ｍ ｅ ，２ １ Ｖｏ ． ＮＯ ９ １２１ ．
阿尔 茨 海 默病 中 ｍＲ ２ ｃ对 Ａ Ｐ表 达 调控 ｉ一９ Ｐ 的初 步 研 究
果 可 靠 性 ， 过 ｍｃｏ Ｎ 通 ｉ Ｒ Ａ靶 基 因数 据 库 预 测 选 出与 阿尔 茨 海 默 病 相 关 的 靶 基 因 ， 建 ｍ Ｒ２ ｃ表 达 载 体 ， 其 转 ｒ 构 ｉ－ ９ 将
染 Ｓ ・Ｙ Ｙ及 Ｈ Ｋ ２３ ＨＳ ５ Ｅ 一９ Ｔ细 胞 ， 高 表 达 ｍｉ一９ 在 Ｒ ２ ｃ的 Ｓ －Ｙ Ｙ及 Ｈ Ｋ ２ ３ ＨＳ ５ Ｅ －９ Ｔ细胞 系 中验 证 ｍ Ｒ２ ｅ对 靶 基 因 的 调 ｉ一 ９
宗 园媛 ，朱 华 ，王 海 林 ，徐 艳 峰 ，马 春 梅 ，代 小伟 ，黄 澜 ，
李 晓颖 ，董 伟 ，张连 峰 ， 秦 川
（ 生 部 人 类 疾 病 比较 医学 重 点 实 验 室 ， 家 中 医 药 管 理 局 人 类 疾 病 动 物 模 型 三 级 实 验 室 ， 卫 国 中 国 医 学 科 学 院 医 学 实 验 动 物 研 究 所 ， 京 协 和 医学 院 比较 医 学 中 心 ， 京 北 北 １０ １ ０２ ）
【 中图分类 号】Ｒ ９ ； ３ ２ ５ ７ Ｒ ３
【 文献标识码 】Ａ
【 文章编号 】１７ －８６ ２ １ ）９０ ２ －６ ６ １７ ５ （０ １ ０ ￣０７０
ｄ ｉ ０ ３ ６ ／ ．ｓｎ １ ７ ． ８ ６ ２ ． ９．０ ｏ ：１ ． ９ ９ ｊ ｉ ． ６ １ ７ ５ ． ０１ ０ ０ ７ ｓ １
Ｈ Ａ Ｇ Ｌ ｎ Ｌ ｉ —ｉ ， Ｏ Ｇ Ｗｅ ， Ｈ Ｎ ｉ － ｎ ， Ｉ ｈ ａ Ｕ Ｎ ａ ， Ｉ ａ ｙｎ Ｄ Ｎ ｉ Ｚ Ａ Ｇ Ｌａ ｆ ｇ Ｑ Ｎ Ｃ ｕ ｎ Ｘ ｏ ｇ ｎｅ
（ ｙＬ ｂ ｒｔｒ ｆＨｕ ｎ Ｄｉ ａ ｅＣ ｍｐ ｒｔ ｅＭｅ ｉｉｅ，Ｍｉｉ ｒ ｆ ａｔ Ｋｅ ａ ｏａｏｙｏ ｍａ ｓ ｓ ｏ ａａｉ ｄｃｎ ｅ ｖ ｎｓ ｙｏ ｌ ｔ Ｈｅ ｈ＆ Ｋｅ ａ ｏａｏ ｆＨｕ ｎ ｙＬ ｂ ｒｔｒ ｏ ｍａ ｙ
【 要 】 目的 摘
探 讨 ｍｉ ｏ Ｎ ２ ｃ（ Ｒ２ ｃ 在 阿 尔 茨 海 默 病 中 的作 用 。 方 法 ｃ Ｒ Ａ ９ ｍｉ－９ ） ｒ
采 用 了 ｍｉ ｏｒ ｙ芯 片 检 测 ｃ ａａ ｒ ｒ
３月 龄 、 ６月 龄 Ａ Ｐｗ ／ ｓ Ｅ Ｐ ｓ ｅ Ｐ △ ９双 转 基 因 阿 尔 茨 海 默 病 小 鼠大 脑 中 ｍｉ ｏ Ｎ ｅ Ｒ Ａ表 达 情 况并 利 用 实 时 定 量 Ｐ Ｒ验 证 结 ｒ Ｃ
Ｄｉｅ ｓ ｓ Ａｎ ｍａ ｏ ｌ Ｓａ ｅ Ａｄ ｎ ｓｒ ｔｏ ｆＴｒ ｄｔｏ ａ ｓ ａ ｅ ｉ ｌＭ ｄｅ ， ｔｔ ｍｉ ｉｔａｉ ｎ ｏ ａ ｉｉｎ ｌＣｈｉ ｓ ｅ ｉｉ ｅ； Ｉ ｔｔ ｔ ｆＬａ ｏ ａｏ ｎｅ ｅ Ｍ ｄ ｃｎ ｎｓｉｕ ｅ ｏ ｂ ｒ ｔｒ Ａｎｉ ｌ ｙ ｍａ
控 作 用 。将 靶 基 因 Ａ ＰｍＲ Ａ 的野 生及 突变 ３ Ｕ Ｒ序 列 克 隆 到 双 荧 光 素 酶 报 告 基 因 载 体 ， 双 荧 光 素 酶 报 告 检 Ｐ Ｎ ’Ｔ 用
测 系 统 检 测 ｍｉ－９ 与 靶 基 因 的结 合 位 点 。 结 果 根 据 ｍ ｃｏ Ｎ 芯 片 结 果 筛 选 出 在 ３ ６月 龄 Ａ Ｐ ＷＥ Ｐ １ Ｅ Ｒ２ｃ ｉｒＲ Ａ 、 Ｐ Ｓ ／ ＳＡ ９ 双 转 基 因小 鼠 大脑 表 达 均 有 差 异 的 ｍ Ｒ２ ｃ 通 过 实 时 定 量 Ｐ Ｒ 证 实 ｍ Ｒ２ ｃ ３月 、 ｉ－ ， ９ Ｃ ｉ 一９ 在 ６月 、 龄 小 鼠 中表 达 明 显 ９月
于 其 ３ Ｕ பைடு நூலகம் 区域 。 ’Ｔ
ｍｉ－９ 对 Ａ Ｐ表 达 的具 有 负 向 调控 作 用 ， 其 调 控 位 点 可 能 不 位 Ｒ２ｃ Ｐ 但
【 键 词 】 ｍｉ ｏ Ｎ ２ ｃ ｍ Ｒ２ ｃ Ａ Ｐ 关 ｅ Ｒ Ａ ９ ／ ｉ － ； Ｐ ；阿尔 茨 海 默 病 ；Ａ Ｐｗ ／ Ｓ Ｅ ｒ ９ Ｐ ｓ ｅＰ Ａ ９转 基 因 小 鼠
Ｍ ｉ ２ Ｄｏ Ｒ－ ９ ｗｎ－ ｅ ｕｌ ｔ ｄ ＡＰＰ ｐｒ ｓ ｉ ｎ ｉ ｚ ｉ ｅ ’ Ｄｉｅ ｓ ｃ ｒ ｇ ａｅ Ｅｘ ｅ ｓｏ ｎ Ａｌ ｈｅ ｍ ｒ Ｓ ｓ ａ ｅ
ＺＯＮＧ Ｙｕａ — ｕ ｎ，ＺＨ Ｕ ａ，Ｗ ＡＮＧ ｉｌｎ，ＸＵ ｎ—ｅ ｎｙ ａ Ｈｕ Ｈａ—ｉ Ｙａ ｆｎｇ，Ｍ Ａ ｕ ｍｅ ，ＤＡＩＸｉｏ ｗｅｉ Ｃｈ ｎ－ ｉ ａ— ，
Ｓ ｉ ｃ ， ｈｎ ｓ ｃｄ ｍ ｆ ｅ ｉ ｌ ｃ ｎ ｅ（ Ａ ）＆ Ｃ ｍｐ ｒｔ ｅ Ｍｅ ｉ ｌ ｅ ｔｒ Ｐ ｋｎ ｎｏ ｃ ｎ ｅ Ｃ ｉ ｅＡ ａ ｅ ｙｏ ｄｃ ｉ ｃ Ｃ ＭＳ ｅ ｅ Ｍ ａＳ ｅ ｏ ａａ ｖ ｄｃ ｎｅ ， ｅ ｉｇＵ ｉｎ ｉ ａＣ Ｍ ｄｃ ｌ ｏ ｅｅ（ Ｕ Ｃ） Ｂ ｉｎ ０ ０ １ Ｃ ｉａ ｅ ｉ ｌｇ Ｐ Ｍ ， ｅ ｉ １０ ２ ， ｈ ） ａＣ ｌ ｊｇ ｎ
升 高 。通 过 ｍｃｏ Ｎ ｉ Ｒ Ａ靶 基 因数 据 库 预 测 ｍｉ－９ 可 以调 控 阿尔 茨 海 默 病 的 靶 基 因 Ａ Ｐ 利 用 Ｗｅｔ ｎｂｏ 检 测 到 ｒ Ｒ２ｃ Ｐ， ｓ ｒ ｌｔ ｅ
高表 达 ｍＲ ２ ｃ的 Ｓ Ｓ ５ 细 胞及 Ｈ Ｋ２ ３ ｉ－９ Ｈ—Ｙ Ｙ Ｅ － Ｔ细 胞 中 Ａ Ｐ蛋 白表 达 减 少 。将 ｍ Ｒ２ ｅ表 达 载 体 与 带 有 野 生 及 突 ９ Ｐ ｉ一 ９ 变 Ａ Ｐ Ｎ 的 ３ Ｕ Ｒ 的双 荧 光 素 酶 报 告 载 体 共 转染 Ｈ Ｋ ２ ３ Ｐ ｍＲ Ａ ’Ｔ Ｅ －９ Ｔ细 胞 ， 过 双 荧 光 素 酶 检 测 系统 检 测 未 找 到 ｍ Ｒ 通 ｉ一 ２ ｃ与 Ａ ＰｍＲ Ａ ３ Ｕ Ｒ 的结 合 位 点 。结 论 ９ Ｐ Ｎ ’ Ｔ
中 国 比较 医 学 杂 志
ＣＨＩ Ｓ Ｊ ＮＥ Ｅ ＯＵＲＮＡＬ ＯＭＰ ＯＦ Ｃ ＡＲＡＴＩ ＤＩ ＮＥ ＶＥ ＭＥ ＣＩ
Ｓ ｐ ｅ ｂ ｒ ０１ ｅ ｔ ｍ ｅ ，２ １ Ｖｏ ． ＮＯ ９ １２１ ．
阿尔 茨 海 默病 中 ｍＲ ２ ｃ对 Ａ Ｐ表 达 调控 ｉ一９ Ｐ 的初 步 研 究
果 可 靠 性 ， 过 ｍｃｏ Ｎ 通 ｉ Ｒ Ａ靶 基 因数 据 库 预 测 选 出与 阿尔 茨 海 默 病 相 关 的 靶 基 因 ， 建 ｍ Ｒ２ ｃ表 达 载 体 ， 其 转 ｒ 构 ｉ－ ９ 将
染 Ｓ ・Ｙ Ｙ及 Ｈ Ｋ ２３ ＨＳ ５ Ｅ 一９ Ｔ细 胞 ， 高 表 达 ｍｉ一９ 在 Ｒ ２ ｃ的 Ｓ －Ｙ Ｙ及 Ｈ Ｋ ２ ３ ＨＳ ５ Ｅ －９ Ｔ细胞 系 中验 证 ｍ Ｒ２ ｅ对 靶 基 因 的 调 ｉ一 ９
宗 园媛 ，朱 华 ，王 海 林 ，徐 艳 峰 ，马 春 梅 ，代 小伟 ，黄 澜 ，
李 晓颖 ，董 伟 ，张连 峰 ， 秦 川
（ 生 部 人 类 疾 病 比较 医学 重 点 实 验 室 ， 家 中 医 药 管 理 局 人 类 疾 病 动 物 模 型 三 级 实 验 室 ， 卫 国 中 国 医 学 科 学 院 医 学 实 验 动 物 研 究 所 ， 京 协 和 医学 院 比较 医 学 中 心 ， 京 北 北 １０ １ ０２ ）
【 中图分类 号】Ｒ ９ ； ３ ２ ５ ７ Ｒ ３
【 文献标识码 】Ａ
【 文章编号 】１７ －８６ ２ １ ）９０ ２ －６ ６ １７ ５ （０ １ ０ ￣０７０
ｄ ｉ ０ ３ ６ ／ ．ｓｎ １ ７ ． ８ ６ ２ ． ９．０ ｏ ：１ ． ９ ９ ｊ ｉ ． ６ １ ７ ５ ． ０１ ０ ０ ７ ｓ １
Ｈ Ａ Ｇ Ｌ ｎ Ｌ ｉ —ｉ ， Ｏ Ｇ Ｗｅ ， Ｈ Ｎ ｉ － ｎ ， Ｉ ｈ ａ Ｕ Ｎ ａ ， Ｉ ａ ｙｎ Ｄ Ｎ ｉ Ｚ Ａ Ｇ Ｌａ ｆ ｇ Ｑ Ｎ Ｃ ｕ ｎ Ｘ ｏ ｇ ｎｅ
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【 要 】 目的 摘
探 讨 ｍｉ ｏ Ｎ ２ ｃ（ Ｒ２ ｃ 在 阿 尔 茨 海 默 病 中 的作 用 。 方 法 ｃ Ｒ Ａ ９ ｍｉ－９ ） ｒ
采 用 了 ｍｉ ｏｒ ｙ芯 片 检 测 ｃ ａａ ｒ ｒ
３月 龄 、 ６月 龄 Ａ Ｐｗ ／ ｓ Ｅ Ｐ ｓ ｅ Ｐ △ ９双 转 基 因 阿 尔 茨 海 默 病 小 鼠大 脑 中 ｍｉ ｏ Ｎ ｅ Ｒ Ａ表 达 情 况并 利 用 实 时 定 量 Ｐ Ｒ验 证 结 ｒ Ｃ
Ｄｉｅ ｓ ｓ Ａｎ ｍａ ｏ ｌ Ｓａ ｅ Ａｄ ｎ ｓｒ ｔｏ ｆＴｒ ｄｔｏ ａ ｓ ａ ｅ ｉ ｌＭ ｄｅ ， ｔｔ ｍｉ ｉｔａｉ ｎ ｏ ａ ｉｉｎ ｌＣｈｉ ｓ ｅ ｉｉ ｅ； Ｉ ｔｔ ｔ ｆＬａ ｏ ａｏ ｎｅ ｅ Ｍ ｄ ｃｎ ｎｓｉｕ ｅ ｏ ｂ ｒ ｔｒ Ａｎｉ ｌ ｙ ｍａ
控 作 用 。将 靶 基 因 Ａ ＰｍＲ Ａ 的野 生及 突变 ３ Ｕ Ｒ序 列 克 隆 到 双 荧 光 素 酶 报 告 基 因 载 体 ， 双 荧 光 素 酶 报 告 检 Ｐ Ｎ ’Ｔ 用
测 系 统 检 测 ｍｉ－９ 与 靶 基 因 的结 合 位 点 。 结 果 根 据 ｍ ｃｏ Ｎ 芯 片 结 果 筛 选 出 在 ３ ６月 龄 Ａ Ｐ ＷＥ Ｐ １ Ｅ Ｒ２ｃ ｉｒＲ Ａ 、 Ｐ Ｓ ／ ＳＡ ９ 双 转 基 因小 鼠 大脑 表 达 均 有 差 异 的 ｍ Ｒ２ ｃ 通 过 实 时 定 量 Ｐ Ｒ 证 实 ｍ Ｒ２ ｃ ３月 、 ｉ－ ， ９ Ｃ ｉ 一９ 在 ６月 、 龄 小 鼠 中表 达 明 显 ９月
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ｍｉ－９ 对 Ａ Ｐ表 达 的具 有 负 向 调控 作 用 ， 其 调 控 位 点 可 能 不 位 Ｒ２ｃ Ｐ 但
【 键 词 】 ｍｉ ｏ Ｎ ２ ｃ ｍ Ｒ２ ｃ Ａ Ｐ 关 ｅ Ｒ Ａ ９ ／ ｉ － ； Ｐ ；阿尔 茨 海 默 病 ；Ａ Ｐｗ ／ Ｓ Ｅ ｒ ９ Ｐ ｓ ｅＰ Ａ ９转 基 因 小 鼠
Ｍ ｉ ２ Ｄｏ Ｒ－ ９ ｗｎ－ ｅ ｕｌ ｔ ｄ ＡＰＰ ｐｒ ｓ ｉ ｎ ｉ ｚ ｉ ｅ ’ Ｄｉｅ ｓ ｃ ｒ ｇ ａｅ Ｅｘ ｅ ｓｏ ｎ Ａｌ ｈｅ ｍ ｒ Ｓ ｓ ａ ｅ
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Ｓ ｉ ｃ ， ｈｎ ｓ ｃｄ ｍ ｆ ｅ ｉ ｌ ｃ ｎ ｅ（ Ａ ）＆ Ｃ ｍｐ ｒｔ ｅ Ｍｅ ｉ ｌ ｅ ｔｒ Ｐ ｋｎ ｎｏ ｃ ｎ ｅ Ｃ ｉ ｅＡ ａ ｅ ｙｏ ｄｃ ｉ ｃ Ｃ ＭＳ ｅ ｅ Ｍ ａＳ ｅ ｏ ａａ ｖ ｄｃ ｎｅ ， ｅ ｉｇＵ ｉｎ ｉ ａＣ Ｍ ｄｃ ｌ ｏ ｅｅ（ Ｕ Ｃ） Ｂ ｉｎ ０ ０ １ Ｃ ｉａ ｅ ｉ ｌｇ Ｐ Ｍ ， ｅ ｉ １０ ２ ， ｈ ） ａＣ ｌ ｊｇ ｎ
升 高 。通 过 ｍｃｏ Ｎ ｉ Ｒ Ａ靶 基 因数 据 库 预 测 ｍｉ－９ 可 以调 控 阿尔 茨 海 默 病 的 靶 基 因 Ａ Ｐ 利 用 Ｗｅｔ ｎｂｏ 检 测 到 ｒ Ｒ２ｃ Ｐ， ｓ ｒ ｌｔ ｅ
高表 达 ｍＲ ２ ｃ的 Ｓ Ｓ ５ 细 胞及 Ｈ Ｋ２ ３ ｉ－９ Ｈ—Ｙ Ｙ Ｅ － Ｔ细 胞 中 Ａ Ｐ蛋 白表 达 减 少 。将 ｍ Ｒ２ ｅ表 达 载 体 与 带 有 野 生 及 突 ９ Ｐ ｉ一 ９ 变 Ａ Ｐ Ｎ 的 ３ Ｕ Ｒ 的双 荧 光 素 酶 报 告 载 体 共 转染 Ｈ Ｋ ２ ３ Ｐ ｍＲ Ａ ’Ｔ Ｅ －９ Ｔ细 胞 ， 过 双 荧 光 素 酶 检 测 系统 检 测 未 找 到 ｍ Ｒ 通 ｉ一 ２ ｃ与 Ａ ＰｍＲ Ａ ３ Ｕ Ｒ 的结 合 位 点 。结 论 ９ Ｐ Ｎ ’ Ｔ