外周血单细胞测序悬液制备

外周血单细胞测序悬液制备
外周血单细胞测序悬液的制备步骤如下：
1. 采集外周血样本，加入含有抗凝剂的试管中，防止血液凝固。

2. 将抗凝的外周血样本与等体积的PBS溶液混合，并充分混匀。

3. 将混合液加入离心管中，离心管底部有预先处理过的红细胞裂解液。

4. 轻轻摇动离心管，使混合液充分接触红细胞裂解液，从而裂解红细胞。

5. 将离心管中的液体重新悬浮在PBS溶液中，并洗涤细胞两次，去除杂质和死细胞。

6. 加入适量的人淋巴细胞分离液，将单个核细胞（包括外周血中的淋巴细胞和其他单核细胞）与红细胞和血小板分离。

7. 离心后，将离心管中的液体弃去，留下单个核细胞层。

8. 用PBS溶液洗涤单个核细胞两次，去除残留的分离液和杂质。

9. 将单个核细胞转移到另一离心管中，加入适量的完全RPMI 1640培养液，使细胞浓度达到所需的浓度。

10. 再次离心后，弃去上清液，得到外周血单细胞悬液。

注意事项：
1. 在采集外周血样本时，要使用含有抗凝剂的试管，以防止血液凝固。

2. 在洗涤细胞时，要使用PBS溶液，这样可以去除杂质和死细胞。

3. 在制备过程中，要保持无菌操作，避免污染。

4. 在离心时，要控制好离心速度和时间，以免影响细胞分离效果。

5. 在制备过程中，要注意温度的控制，避免温度过高或过低影响细胞的活性。