HPLC法测定妇血安片中特女贞苷的含量

甘肃医药2020年39卷第12期Gansu Medical Journal ，2020，Vol.39，No.12
妇血安片主要由当归、益母草、女贞子、墨旱莲等12味中药材经加工制得，各药味相互作用，共同达到活血祛瘀、止血调经的作用，用于治疗血瘀经期延长，
疗效显著［1］。

其中女贞子为妇血安片中的处方君药，为
处方中活血调经的主要药物。

女贞子具有滋补肝肾、明目乌发的作用，用于眩晕耳鸣、肝肾阴虚、腰膝酸软、须
发早白、目暗不明、内热消渴、骨蒸潮热等症
［2-5］。

女贞子主要成分有环烯醚萜苷类、三萜类、苯乙醇类、糖类和脂肪油类等，其中环烯醚萜苷类特女贞苷是女贞子的专属性成分之一，也是2015版中国药典用于女贞子含量测定的指标性成分［5，6］。

将特女贞苷作为妇血安片质量标准提高的指标性成分，与妇血安片的功效息息相关，既可以控制其原药材的质量，还可以作为有效成分控制药品的质量，保证药品的疗效。

妇血安片原有的质量控制标准只对女贞子、三七、丹参、仙鹤草、白术和党参进行了TLC 鉴别，并对当归中阿魏酸的含量进行了测定［1］。

处方中含量测定指标较少，尤其君药中的质量控制指标单一。

为进一步完善产品质量标准，本研究以制剂中女贞子为研究对象，采用高效液相色谱法（
HPLC ）测定妇血安片中特女贞苷的含量。

1设备与药品1.1设备
SHIMADZU LC-20AT 高效液相色谱仪；
METTLER TOLEDO 电子天平。

1.2
试剂及样品
甲醇为色谱纯，水为超纯水；对照
品特女贞苷（含量93.3%，批号111926-201605，购自中国食品药品检定研究院，供含量测定用）。

阴性对照样品由广东德鑫制药有限公司按标准制备并提供。

妇血安薄膜衣片（规格0.52g/片，批号181101，181201，190101，190201，190202，190301，广东德鑫制药有限公司）。

2方法与结果2.1
色谱柱及色谱条件
CAPCELL PAK C18（MG2）
（5μm ，250mm ×4.6mm ；柱温为35℃；流动相：甲醇-水（40∶60）；流速1.0mL/min ，检测波长为224nm ；进样量：10μL 。

2.2溶液准备
2.2.1对照品溶液。

准确称取特女贞苷对照品约25mg ，置50mL 容量瓶中加甲醇制成0.5mg/mL 的对照品储备液。

精密量取上述对照品储备液5mL 置于20mL 容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得0.125mg/mL 的特女贞苷对照品溶液。

2.2.2供试品溶液。

取妇血安片（批号：190201）20片，研细后准确称取约1.2g ，置于锥形瓶中，精密加入50mL 稀乙醇，称定重量，加热回流30分钟后冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足损失的重量，摇匀、离心、滤过，取续滤液。

2.3
方法适用性考察
分别取对照品溶液、供试品溶
液、阴性对照样品溶液，按2.1中色谱条件测定，考察方法适用性（图1）。

由图可见，供试品溶液在与特女贞苷对照品相同保留时间处出现色谱峰，而阴性对照品溶液在此保留时间处无峰，说明该方法适用性良好。

2.4
线性关系考察
精密量取“2.2.1”项下对照品储
备液2、3、5、7、8、10mL 置6个20mL 容量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，制成分别含特女贞苷0.05、0.075、0.125、0.175、0.200、0.250mg/mL 的系列溶液，按“2.1”中色谱条件测定峰面积。

以溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

所得线性回归方程为：Y=11352836.87X+12624.79；相关系数r 大于0.999。

结果表明在0.05～
HPLC 法测定妇血安片中特女贞苷的含量
胡珍珍1，2李淑琴2徐嘉华2源淑莹2曾志坚2向全生3
1.江门市食品检验所，广东江门529030；
2.江门市药品检验所，广东江门529030；
3.广东德鑫制药有限公司，广东江门529100
【摘要】目的：建立测定妇血安片中特女贞苷含量的高效液相色谱方法。

方法：色谱柱为CAPCELL PAK C18（MG2）（5μm ，250mm ×4.6mm ），流动相为甲醇－水（40∶60），流速为1.0mL/min ，柱温为35℃，检测波长为224nm 。

结果：特女贞苷在0.05~0.25mg/mL 范围内呈现良好的线性（R 2=0.9999）；精密度实验和稳定性实验的RSD 均小于0.6%；重复性实验的RSD 为1.8％（n =6）；平均加样回收率为101.1％，RSD 为1.1%（n =9）。

结论：该方法简单、准确、可靠、重复性好，适合妇血安片中特女贞苷含量测定，可用于妇血安片质量控制。

【关键词】妇血安片；特女贞苷；高效液相色谱中图分类号：R286
文献标识码：A
文章编号：1004-2725（2020）12-1113-03
第一作者：胡珍珍，女，工程师，从事食品药品分析检验工作通信作者：李淑琴，女，主管中药师，从事药品检验工作E-mail ：****************
1113··
0.250mg/mL 范围内，特女贞苷浓度与峰面积具有良好线性关系。

2.5
精密度考察
取“2.2.1”中对照品溶液按“2.1”中
色谱条件连续进样6针，记录特女贞苷峰面积及保留时间。

计算得，特女贞苷峰面积的RSD 值为0.4%，保留时间的RSD 值为0.1%（n =6），表明该方法的仪器精密度良好。

2.6稳定性实验取“2.2.1”中对照品溶液和“2.2.2”
中供试品溶液10μL 分别于0、2、4、8、12、24h 注入色谱仪中，记录各时间的峰面积。

结果对照品溶液和供试品溶液中特女贞苷峰面积的RSD 值分别为0.5%和0.4%，表明对照品溶液与供试品溶液于24小时内均处于稳定状态。

2.7重复性试验
取本品（批号为190201）粉末6份，
各约1.2g ，精密称定，并按“2.2.2”中方法制成供试品溶液。

最后按“2.1”中的色谱条件测定，经计算得6次实验测定的特女贞苷平均含量为2.7mg/片，RSD 值为1.8％（n =6），说明本方法的重现性良好。

2.8
准确度试验
取本品（批号为190201，含特女贞
苷为5.13mg/g ）20片，研细，取约0.6g ，精密称定，按“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法设计高、中、低3种不同的浓度，使得对照品加入的浓度与供试品中待测成分含量之比控制在0.5∶1，1∶1，1.5∶1左右，最后按
“2.1”中的色谱条件测定，计算样品回收率（表1），经计算得平均回收率为101.1%，RSD 为1.1%（n =9），说明该
方法的准确度较好。

注：A ：特女贞苷对照品；B ：妇血安片供试品；C ：阴性对照样品
图1方法系统适用性色谱图
A
B
C
样品编号
称样量（g ）实测量C （mg ）
供试品所含被测成分量A （mg ）加入对照品量B （mg ）回收率（%）平均回收率（%）RSD 值（%）
50%-10.6029 4.45 3.20 1.213103.450%-20.6068 4.45 3.22 1.213101.750%-30.6038 4.42 3.20 1.213100.6100%-10.6059 5.91 3.21 2.652101.8100%-20.6026 5.88 3.19 2.652101.3101.1 1.1100%-30.6089 5.90 3.23 2.652100.8150%-10.6031 6.89 3.20 3.692100.0150%-20.6032 6.89 3.20 3.692100.0150%-30.6067 6.93 3.22 3.692100.6
表1准确度试验
表2不同批次样品中特女贞苷含量测定结果
样品批号
特女贞苷含量(mg/片)
181101 3.2181201 3.5190101 2.9190201 2.7190202 2.8190301
2.7
2.9样品含量的测定取6批妇血安片，按2.2.2项
下的方法操作，测定含量。

见表2。

3讨论3.1
检测波长的选择
精密吸取对照品溶液10μL ，
注入液相色谱仪，使用DAD 检测器对特女贞苷进行全波长扫描，发现其在224nm 处有最大吸收，同时参考
中国药典及文献［3，5，8］
，将检测波长定为224nm 。

3.2流动相组成及比例选择通过查阅文献，筛选出
以下流动相进行试验，流动相1
［5］
∶甲醇-水（40∶60）；流（下转第1124页）
参考文献
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的含量［J ］.湖南中医杂志，2014，36（6）：154-155.
（本文编辑：马佰菁）
动相2［8］
∶乙腈-水（18∶82）；流动相3［9］∶甲醇-0.05%磷
酸水（34∶66）。

结果：使用流动相1，2，3时样品分离度均大于1.5，特女贞苷峰的拖尾因子均小于2.0，且阴性样品图谱中与特女贞苷相应位置无干扰，但特女贞苷峰保留时间不同，分别为10～11分钟、19～20分钟、22～23分钟。

结果显示，采用流动相1，主峰保留时间较短，节约时间与成本。

因此，选择甲醇-水（40∶60）作为该试验流动相。

对不同比例甲醇∶水（30∶70，40∶60，50∶50，60∶40，70∶30）流动相进行考察，结果表明只有甲醇-水流动相在40∶60比例条件下样品分离度、拖尾因子均符合要求，且阴性样品在主峰相应的位置无干扰。

故最终流动相确定为甲醇-水（40∶60）。

3.3
样品提取方法的选择
参考中国药典
［5］
及相关
文献［3，4，8］，对用不同浓度的甲醇（50%、70%、100%）和乙醇（稀乙醇、70%、100%）作为提取溶剂，采用超声（功率500W ，频率50kHz ，提取15、30、60min ）和加热回流（30、60、90min ）两种提取方法进行考察。

结果表明，用稀乙醇加热回流30min 提取效果较好，而且稀乙醇较甲醇毒性低，方法简单快速，节能减耗。

从而确定用稀乙醇加热回流提取30min 为本试验的提取方法。

综上，本试验用HPLC 法测定了妇血安片中君药女贞子的有效成分特女贞苷的含量，该方法专属性强、精密度高、稳定性好，可以有效提高妇血安片的质量控制。

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（本文编辑：马佰菁）
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