HBV外膜大蛋白在判断HBV复制中的价值

HBV外膜大蛋白在判断HBV复制中的价值
庄国华;李宏;张丽萍
【摘要】Objective To investigate the diagnosis significance of hepatitis B virus ( HBV)-large surface protein (LP) detection in the diagnosis of chronic hepatitis B by measuring and analyzing comparatively the serum HBV-LP,HBV DNA and HBV pre S1 antigen (PreS1). Methods Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to measure hepatitis B e antigen (HBeAg) and the levels of serum HBV-LP and HBV-PreS1, and real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR) was used to detect HBV DNA in 416 patients with chronic hepatitis B.The patients were classified according to the positivity and negativity of HBeAg, and the positive rate differences of HBV-LP, HBV-PreS1 and HBV DNA were compared and analyzed. Results No significant difference of the positive rates in 416 patients with chronic hepatitis B was found between the HBV-LP(76.68％ ) and HBV DNA(72.60％, P ＞ 0.05 ).The positive rates of HBV-LP and HBV DNA were significantly higher than that of HBV-PreS1 (36.06％, P ＜ 0.01 ).The positive rates of HBV-LP and HBV DNA were not significantly different ( P ＞ 0.05 ), and also were significantly higher than that of HBV-PreS1 among various patterns of HBeAg (P ＜0.01 ). Conclusions The level of serum HBV-LP can reflect the HBV replication of the chronic hepatitis B patients, and the sensitivity is superior to HBV-PreS1. It may serve as a new index in reflection of HBV replication levels.%目的通过检测慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)外膜大蛋白(LP)、DNA、前S1抗原(PreS1)并进行比较分
析,探讨血清HBV-LP检测在慢性乙型肝炎中的诊断价值.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测416例慢性乙型肝炎患者乙型肝炎e抗原(HBeAg)、HBV-LP和HBV-PreS1,并应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)平行检测HBV DNA.按HBeAg阴阳性不同分组,比较HBV-LP、HBV-PreS1及HBV DNA阳性率的差异.结果 416例慢性乙型肝炎患者血清HBV-LP有较高的阳性检出率(76.68%),与
HBV DNA的阳性率(72.60%)差异无统计学意义(P>0.05),两者阳性率均高于
HBV-PreS1阳性率(36.06%,P<0.01);在HBeAg阴、阳性患者中,HBV-LP与HBV DNA的阳性率差异均无统计学意义(P均＞0.05),均显著高于HBV-PreS1阳性率(P<0.01).结论血清HBV-LP水平能反映慢性乙型肝炎患者体内HBV复制程度,其
敏感性高于HBV-PreS1,可作为判断HBV复制新的血清学指标.
【期刊名称】《检验医学》
【年(卷),期】2011(026)007
【总页数】3页(P444-446)
【关键词】乙型肝炎病毒;外膜大蛋白;DNA;前S1抗原;慢性乙型肝炎
【作者】庄国华;李宏;张丽萍
【作者单位】杭州市余杭区第一人民医院,浙江,杭州,311100;杭州市余杭区第一人
民医院,浙江,杭州,311100;杭州市余杭区第一人民医院,浙江,杭州,311100
【正文语种】中文
【中图分类】R446.62
乙型肝炎病毒(HBV)是引发乙型肝炎的病原体，目前全国约有1.2亿HBV携带者，
慢性乙型肝炎患者约有3000万[1]。

随着人们对HBV的认识越来越深入，在预防、诊断和治疗方面都有所突破，但传统常规诊断项目(如HBV感染的5项血清学指标)已不能全面、真实、快速地反映HBV在患者体内的感染状况和抗病毒治疗的效果[2]。

我们使用包被针对构象型前S区的高亲和力、高特异性单克隆抗体的HBV外膜大蛋白(LP)酶免试剂盒，检测慢性乙型肝炎患者血清中HBV-LP，同时检测
HBV DNA、HBV前S1抗原(PreS1)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)并进行比较分析，评价检测慢性乙型肝炎患者血清HBV-LP的临床意义。

材料和方法
一、材料
1.研究对象 416例慢性乙型肝炎患者为2008年6月至2009年10月余杭区第一人民医院住院或门诊患者，其中男270例，女146例，年龄16～68岁，平均年
龄37.6岁。

所有研究对象均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、
肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》中的病毒性肝炎诊断标准。

2.样本采集所有研究对象均于清晨空腹抽取外周静脉血5 mL，3500 r/min(离心
半径为15 cm)离心10 min，分离血清置于－30℃保存备用。

所有样本均无溶血、脂血。

二、方法
HBV-LP采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测，试剂盒由北京热景生物技术有限公
司提供，临界值=阴性对照孔吸光度均值×2.1;HBeAg采用ELISA检测，试剂盒由北京万泰生物制药股份有限公司提供;HBV-PreS1采用ELISA检测，试剂盒由上海阿尔法生物技术有限公司提供;HBV DNA采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测，试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供，检测下限为1.79×102IU/mL。

所有试剂盒均在有效期内，检测均严格按试剂盒操作说明进行。

三、统计学方法
采用SPSS 11.0软件进行统计学分析，计数资料用率表示，组间差异采用χ2检验分析。

P＜0.05为差异具有统计学意义。

结果
一、416例慢性乙型肝炎患者 HBV DNA、HBV-LP、HBV-PreS1、HBeAg检出
阳性率分别为72.60%、76.68%、36.06%、36.29%，HBV-LP 与HBV DNA的
阳性率间差异无统计学意义(χ2=1.84，P ＞0.05)，其余阳性率两两比较差异均有
统计学意义(P均＜0.01)。

二、HBeAg阴、阳性患者中 HBV DNA、HBVLP和 HBV-PreS1阳性率进行比较，在151例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清中，HBV DNA与HBV-LP的阳性
率分别为97.35%和99.34%，两者差异无统计学意义(P＞0.05)，其余阳性率两两比较差异均有统计学意义(P均＜0.01);在265例HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中，HBV DNA与HBV-LP的阳性率分别为58.49%和63.77%，两者差异无统
计学意义(P ＞0.05)，其余阳性率两两比较差异均有统计学意义(P均＜0.01)。

见
表1。

表1 HBeAg阴、阳性患者中HBV DNA、HBV-LP和HBV-PreS1阳性率比较HBeAg 例数 HBV DNA阳性(%) HBV-LP阳性(%) HBV-PreS1阳性(%)+151
147(97.35) 150(99.34) 93(61.59)－265 155(58.49) 169(63.77) 57(21.51)合计416 302(72.60) 319(76.68) 150(36.06)
讨论
实验室诊断对于乙型肝炎患者判断病毒复制程度、监测治疗效果及预后评估至关重要，临床主要依靠HBeAg和HBV DNA 2个指标评估HBV复制程度，近年来也
较多运用HBV-PreS1作为辅助评估HBV复制程度的指标，判断慢性乙型肝炎患
者预后和估计抗病毒治疗终点。

由于HBV基因前C区或CP区存在变异而导致HBeAg合成障碍[2]和近年抗病毒治疗的普遍实施，目前HBeAg阴性慢性乙型肝
炎患者比例呈明显上升趋势，但仍然伴有高水平的HBV复制[3]，临床表现为HBeAg呈阴性，但 HBV DNA仍为阳性，血液中病毒仍持续复制。

本研究416
例慢性乙型肝炎患者HBeAg阳性率仅为36.29%，显然HBeAg阴性并不能作为HBV复制终止的判断依据。

作为近年来应用于临床的辅助评估 HBV复制程度的指标HBV-PreS1，在本研究中阳性率也仅为36.06%，阳性率还不如HBeAg阳性
率高，临床应用中不够理想。

PreS1作为乙型肝炎大蛋白的一部分，通过检测PreS1也可以判断乙型肝炎大蛋白的存在。

但由于大蛋白是构象蛋白，在采用PreS1区合成多肽制作单克隆抗体时，线性表位在形成高级结构过程中可能被折叠、卷曲而失去暴露表位的机会，无法模拟其复杂的拓扑结构，故在临床应用中敏感性不够理想[4，5]。

由于定量 PCR 检测 HBV DNA需要较高的试验条件，目前许多基层医疗单位尚不能开展。

HBV-LP是 HBV完整病毒颗粒(Dane颗粒)和不具有病毒核衣壳蛋白及核酸DNA
的亚病毒颗粒(管状颗粒)的主要包膜成分，与HBV的复制程度密切相关。

在感染
早期，其与细胞受体结合介导病毒的细胞内摄入;感染晚期，是病毒组装和分泌的
关键。

Bruss[6]通过鸭乙型肝炎动物模型研究发现，含有嗜肝病毒血清的感染性不仅依赖于Dane颗粒的多少，而且还依赖于缺乏核酸的亚病毒颗粒的数量。

有研究发现亚病毒颗粒在HBV感染过程中，能显著增强细胞内的病毒复制和基因表达[7]，而这种增强作用就是HBV-LP的反式激活病毒复制功能[8，9]。

因此实验室检测HBV-LP用于判定体内HBV复制和预后具有较高的临床意义。

本研究表明，HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中，HBV-LP有较高的阳性率(63.77%)，与HBV DNA阳性率差异无统计学意义，远高于HBV-PreS1阳性率(21.51%)，原因是本研究所使用的HBV-LP试剂是应用结构生物学、蛋白晶体学
针对HBV前S区的构象型单克隆抗体试剂[6，10]。

综上所述，检测慢性乙型肝炎患者血清中HBV-LP水平，能较好地反映HBV的复
制情况，是判断HBV复制新的血清学指标，具有重要的临床意义。

而且，基于ELISA的HBV-LP检测试剂更经济，更有利于基层医院推广应用，从而提高临床
对慢性乙型肝炎的诊断和治疗水平。

参考文献
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