蝙蝠葛酚性碱(PAMD)调控Gli1基因抗胰腺癌的机制研究

蝙蝠葛酚性碱(PAMD)调控Gli1基因抗胰腺癌的机制研究魏冬梅;陈宏;尹钢;仲丽丽;周忠光
【期刊名称】《云南中医中药杂志》
【年(卷),期】2015(036)003
【总页数】2页(P64-65)
【关键词】蝙蝠葛酚性碱;Gli1;胰腺癌
【作者】魏冬梅;陈宏;尹钢;仲丽丽;周忠光
【作者单位】黑龙江省齐齐哈尔市第一医院,黑龙江齐齐哈尔161005;黑龙江省齐齐哈尔市第一医院,黑龙江齐齐哈尔161005;黑龙江省齐齐哈尔市中医医院,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
PAMD为多种脂溶性生物碱的混合物，是从中药北豆根(防己科植物蝙蝠葛根茎)中所提取。

为了证实PAMD抗胰腺癌的相关作用机理是否与通过抑制Hedgehog 信号通路的激活所发挥的作用有关，本实验主要采用了RT-PCR检测PAMD对人胰腺癌细胞株BxPC-3裸鼠移植瘤Hedgehog 信号通路中关键分子Gli1mRNA 表达的影响，探讨PAMD的抗肿瘤作用以及 Hedgehog信号通路在胰腺癌中的作用机制，为临床上抗肿瘤新药的研发提供了新的方向和思路。

PAMD购自于黑龙江中医药大学药学院；5-氟尿嘧啶(5-Fu)购自sigma公司；人
源性胰腺癌BxPC-3细胞株购自中国科学院(上海生命科学院细胞资源中心)；实验动物购自上海斯莱克动物实验有限公司；胰蛋白酶(GIBCO分装伯安生命技术有限公司)；DU800核酸蛋白分析仪购自Beckman公司；SYBR Premix Ex Taq试剂盒购自TaKaRa公司；Prime-Script RT试剂盒购自TaKaRa公司；ABI 7500实时荧光PCR仪购自Applied Biosystems公司。

2.1 动物分组 50只裸鼠，雌性，(4-6)W龄。

造模24 h后，随机将其分成5组，分别为模型对照组、空白组、5-FU组、PAMD低剂量组、PAMD高剂量组，每组10只。

2.2 给药途径及剂量实验分组和给药剂量：模型组及空白组：每天给予同等容积的生理盐水(0.9% NaCl)，但空白组不需要接种瘤株；5-FU组：按20 mg/kg腹腔注射给药PAMD；低剂量组：按10 mg/kg腹腔注射给药；PAMD 高剂量组：按20 mg/kg腹腔注射给药。

各实验用药治疗组均连续给药21 d。

2.3 造模及取材取冻存胰腺癌细胞株BXPC-3，投入37℃水中，1 min 内融化，离心去除冻存液，用约10倍冷RPMI1640完全培养液洗1 次，接种于培养瓶中，置于37℃、饱和湿度、5% CO2培养箱中，隔日换液，细胞长成单层后，用0.25%胰酶、EDTA 消化、传代，并以倒置显微镜监控。

待细胞进入对数生长期后，收集细胞并用RPMI1640 调整浓度为5×106个·mL-1的细胞悬液，接种于40 只裸鼠右腋窝皮下，每只鼠0.2 mL。

21天后处死动物，取瘤组织1.0 g，Trizol 法进行提取总RNA，Trizol 法提取总RNA，总RNA 反转录为cDNA，相对定量数据处理(2-△△CT法)。

引物由上海生工生物工程公司合成。

2.4 统计学方法数据经检测均符合正态分布和方差齐分析，并用统计学软件SPSS 19.0数据处理分析，所得实验数据以均数±标准差表示，而多组间的差异性比较主要采用单因素的方差分析(one way ANOVA)。

3.1 β-action扩增曲线及溶解曲线β-action mRNA Real-time PCR 扩增曲线及Ct 值见图1，溶解曲线见图2。

3.2 Gli1 mRNA Real-time PCR扩增曲线及溶解曲线 Gli1 mRNA Real-time PCR 扩增曲线及Ct 值见图3，溶解曲线见图4。

3.3 PAMD对Gli1 mRNA表达影响 PAMD对Gli1 mRNA表达的影响见表1。

从表1结果表明，PAMD治疗组Gli1 mRNA的表达与模型对照组比较，差异显
著具有统计学意义(P<0.01)。

研究显示，Hedgehog信号通路的调节失衡或异常激活与胰腺癌的产生以及其恶
性的生物学特性是密切相关的，但在正常的胰腺组织中却不表达或仅有轻度的表达[1]。

本实验结果表明Gli-1蛋白在模型组中呈高表达、强阳性。

而PAMD治疗组与模型对照组比较表达水平均有所降低，有差异性具有统计学意义(P<0.01)。

结
果提示：在胰腺癌的肿瘤组织中Hedgehog信号通路的活性被重新激活，其主要成员表达异常增高，这与其他恶性肿瘤中该通路的表达情况是一致的[2-4]。

同时
说明PAMD具有抑制此信号通路主要蛋白表达的功能，从而起到抗肿瘤的作用。

【相关文献】
[1]Kayed H，Kleeff J，Esposito I，et al.Localization of the human hedgehog-interacting protein(Hip)in the normal and diseased pancreas[J].Mol Carcinog，2005，42(4)：183-192.
[2]Oro A E，Higgins K M，Hu Z，et al.Basal cell carcinomas in mice overexpressing sonic hedgehog[J].Science，1997，276(5313)：817-821.
[3]Thayer S P，di Magliano M P，Heiser P W，et al.Hedgehog is an early and late mediator of pancreatic cancer tumorigenesis[J].Nature，2003，425(6960)：851-856.
[4]Lauth M，Toftgrd R.Non-Canonical Activation of GLI Transcription Factors[J].Cell Cycle，2007，6(20)：2458-2462.
抗击艾滋，关爱生命！。