实验一ABO正反定型及Rh定型、唾液血型物质检测

操作(盐水试管测试法)
1.取单克隆抗-D（IgM）-C、-c、-E、-e试
剂各1滴到5支试管中。
2.每管各加1滴3％～5％待检红细胞悬液。
3.充分混匀，以1000 g离心15秒。
4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，
用肉眼观看凝集。
5.判定结果
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注意事项
1．如临床上只检查是否为Rh阳性，只需用抗D血清 进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查排除Du 型。
－＋ － ＋－ － ＋＋ － －－－
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注意事项 1.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染
作业 简述ABO血型鉴定正反不一致的原因
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红细胞凝集强度判断标准 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。 l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 ± 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离
红细胞。
mf 混合凝集外观（mixed field）指镜下可见少数红细 胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
－ 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
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二 、 Rh血型鉴定
目的 掌握Rh血型鉴定的原理、方法。
原理 Rh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用 相应的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清 来检查红细胞抗原。
３.加3％悬红：每排各管对应加悬红50μl， 振摇混匀，1000g，离心15秒。
４.结果：以３+为标化血清的最适稀释度。
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操作步骤
反应物
抗Ａ管 抗Ｂ管
受检唾液
１d
１d
标化抗Ａ
１d
标化抗Ｂ
１d
标化抗Ｈ
混匀，室温中和10min
３%Ａ红细胞 １d
３%Ｂ红细胞
１d
３%Ｏ红细胞
混匀室温放置10min，离心后观察
2．因抗e血清难以得到，故临床上常用四种Rh抗血 清来定型。
3．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原 、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时， 应轻轻摇动试管，不可用力振摇。
4．如鉴定结果只与抗D血清起反应，而与抗C、-c 、-E、-e都不凝集，则受检者为Rh缺失型，以D-表示。
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唾液中HAB血型物质测定
【目的】
了解唾液HAB血型物质测定的原理、方法。
【原理】
HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中 HAB血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结 合，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集。所以利
用凝集抑制试验，可测定唾液中HAB血型物质，它 有助于ABO亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定
ABO血型鉴定、Rh血型鉴定
唾液中HAB血型物质测定
临床检验基础与输血教研室
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实验一 ABO、Rh血型鉴定
目的：掌握ABO正反定型的原理、方法及Rh血型鉴定 原理：通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反 定型鉴定ABO血型。 正定型是用已知血型特异性抗体（抗-A、抗-B、抗D…等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原； 反定型是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相 应的抗体。
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【器材】 小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机
【试剂】 1. ５％A、B和O型红细胞盐水悬液。 2. 最适稀释度抗血清的制备（标化血清）
【标本】受检者唾液
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1.被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml，将留取 的唾液1000g离心，取上清液置于大试管中，煮 沸10min，再离心10min，留取上清液备用。
在临床输血中一般只做D抗原的鉴定，被检红 细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴 性。
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器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、载 玻片、显微镜、离心机。
试剂
1.Rh抗血清：常用的为IgM抗D。
2.己知Rh阳性和阴性的5％红细胞悬液各1份
3.盐水溶液。
标本 静脉血。
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(5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。
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操作：玻片法(鉴定纸板)
(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标－A、－B，分别用 滴管滴加－A、－B试剂1滴，再加受检者3％～5％红 细胞悬液l滴，混匀。
(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc， 各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。
2.排列试管3支，分别标明-A、-B、-H，3管各加 唾液1滴，每管加相应标化血清1滴。
3.混匀，置室温，中和10min。 4.每管加相应悬红1滴. 5. 混匀，离心15秒，观察结果.
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标化血清
1.标记试管：3排18支，分别抗A、抗B及 抗H。每排再标2、4、8、16……
２.稀释：每管加盐水50μl。每排第1管对应 加抗A抗B及抗H血清50μl，倍量稀释成2、 4、8、16……稀释液。
抗Ｈ管 １d １d
１d
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结果判定
非分泌型
抗A管 4+
A型分泌型 —
B型分泌型 4+
0型分泌型 4+
AB型分泌型 —
(2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加 2ml生理盐水，混匀，2500r/min离心3分钟，弃上清 ；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5% 悬红。
(3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红， 反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。
（4）离心：3000r／min离心15秒（1000g）。
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器材:小试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸
板、载玻片、记号笔、显微镜。
试剂:
1. ABO血型抗体：抗A、抗B；Rh血型抗体：
抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。
2．3％～5％A型、B型及O型试剂红细胞。
3. 生理盐水。
标本:抗凝静脉血
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操作（试管法）
(1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标 明－A、－B；反定型：取3支小试管分别标记Ac、Bc 、Oc。
(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ，使血清与细胞充
分混匀连续约2min，肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片
试验时可用低倍镜观察结果。
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表l ABO血型正反定型结果
试剂血清+受检红细胞 （正定型）
-A -B 受检血型
受检血清+试剂红细胞 （反定型）
Ac Bc Oc
＋－
A
－＋
B
－－
O
＋＋
AB