实验一ABO正反定型及Rh定型、唾液血型物质检测
01 ABO血型定型试管法操作规程---作业指导书
2.2 2%-5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；2.3 受检者血清；2.4 受检者2%-5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。
方法3.1 试管法a)取洁净小试管(内径10mm×60mm)2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管分别加抗-B。
分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者2%-5％红细胞盐水悬液混合。
b)另取洁净小试管(内径10mm×60mm)3支，分别标明A、B和O细胞。
用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型3％试剂红细胞悬液l滴，混合。
c)立即以1000r／min离心lmin。
d)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B A细胞B细胞O细胞十─ A ─十──十 B 十一───O 十十─十十AB ───注：十为凝集；一为不凝集。
a)分型血清质量性能符合要求，用毕应放置冰箱保存，以免细菌污染。
b)试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。
c)试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
d)操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
c)对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。
d)用Al 、Az 、B 、O 红细胞及自身红细胞检查受检血清。
如果怀疑是抗-I ，用O 相合的)b)将红细胞洗涤数次，配成5％盐水细胞悬液，用抗-A 、抗-B 、抗-Al ，抗-A 十抗-H 做试验可以得到其它有用的信息。
脐血红细胞检查。
f)如疑为A 抗原或B 抗原减弱，则可将受检红细胞与抗-A 或抗-B 血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A 、B 、H 血型物质测定。
后者只对80％ABH e)如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4℃放置30min ，用显微镜检查核实。
ABO正反定型不符的问题分析及解决办法
ABO正反定型不符的问题分析及解决办法第一篇：ABO正反定型不符的问题分析及解决办法ABO正反定型不符的问题分析及解决办法ABO正定型是用已知的标准血清检测红细胞上未知的抗原ABO反定型是用已知的标准红细胞检测血清中未知的抗体一．引起ABO正反定型不一致的原因分析 1.技术因素例如(1)试剂贮存不当(2)使用技术错误(3)使用错误的试剂(4)使用污染或失效的试剂(5)离心速度不当 2.存在IgM性质的自身冷抗体由于自身冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自身溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。
3.抗原表达弱或缺失例如 a.白血病 b.双胞胎 c.H基因变异4.高水平可溶性血型物质的病人。
5.混合视野：例如(1)来自近期输注非ABO同型红细胞病人的血样(2)骨髓移植后不久(3)Tn或A3型红细胞 6.缺失或弱抗-A、抗-B例如(1)新生儿血清(2)免疫缺陷、紊乱病人(3)老年人 7.前带现象当抗-A或抗-B的效价（如35000）IgG太高时, 立即离心法与A 或B细胞不反应。
8.多凝集：多凝集红细胞，具有不正常的膜结构，可被正常成人血清凝集。
9.不正常血清蛋白：白蛋白/球蛋白比例失调的血清引起红细胞产生缗钱状假凝集。
10.血样血清中存在抗试剂成分的抗体：例如抗防腐剂的抗体、抗EDTA的抗体等，此种抗体可以通过将红细胞洗涤而解除。
二、ABO正反定型不符的解决方法有以下几个（一）出现弱反应或缺失抗原的解决方法有1.洗涤RBC且延长孵育时间进行试验，如果使用洗涤红细胞后反应加强，则考虑是血型物质的抑制2.酶处理红细胞再次试验3.吸收放散确定是否是亚型。
4.了解输血史(尤其是O型红细胞输注)来分析混合视野5.了解病情诊断（尤其是白血病）6.了解是否是骨髓移植受者7.了解是否是双胞胎8.是否使用从前未使用过的单克隆抗体血清进行了血型鉴定9.分泌型型物质检查10.进行玫瑰花试验来确定是否混入其它红细胞，或进行细胞分离（二）出现弱反应或缺失抗体例如 1.年龄：新生儿及老人。
ABO定型及配血不合的分析
获得类B 获得类B解决办法
询问病史：是否有肠道感染 用自身血清检查红细胞，获得性类B 用自身血清检查红细胞，获得性类B抗原其血清不 凝聚自身红细胞。 唾液型物质检测：如是分泌型，其唾液只含有A物 唾液型物质检测：如是分泌型，其唾液只含有A 质而不含B 质而不含B物质
缗钱状假凝集
特点： ①在显微镜下红细胞膜完整，细胞间界限 清洗地成缗钱串聚集。 ②缗钱状假凝集反应不受温度影响，室温 与37℃结果一样。 37℃结果一样。 解决方法：被检细胞先用盐水洗涤后再作 配血试验
缗钱状凝集引起的正反定型不符
正定型 抗Ａ 抗Ｂ 抗ＡＢ ４＋ ２＋ ４＋
反定型 Ａ细胞 Ｂ细胞 O细胞 ２＋ ４＋ 2+
弱或缺失抗体导致的正反定型不符
正定型 抗Ａ 抗Ｂ － ３＋ 反定型 Ａ细胞 Ｂ细胞 － －
抗ＡＢ ４＋
＊：可能血型：Ｂ（老年人）
ＡＢＯ定型不一致的原因分析（二） ＡＢＯ定型Байду номын сангаас一致的原因分析（ 定型不一致的原因分析 弱反应或缺失抗原
１、Ａ亚型、Ｂ亚型或ＡＢ亚型 亚型、 亚型或ＡＢ亚型 ＡＢ 白血病导致Ａ ２、白血病导致Ａ或Ｂ抗原减弱 何杰金病（Hodgkin’ 有时会抑制抗原表达， ３、何杰金病（Hodgkin’s）有时会抑制抗原表达， 与白血病类似 由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌） ４ 、 由于某种疾病 （ 如腹腔癌 、 胰腺癌 ） 导致血浆 中存在大量的型物质，中和抗－Ａ或抗－Ｂ抗体， －Ａ或抗－Ｂ抗体 中存在大量的型物质 ， 中和抗 －Ａ 或抗 －Ｂ 抗体 ， 引起正定型为假阴性或弱阳性。 引起正定型为假阴性或弱阳性 。 通过洗涤红细胞 可解决此问题。 可解决此问题。 获得性Ｂ ５、获得性Ｂ －Ａ或抗－Ｂ试剂中存在低频抗原的抗体 或抗－Ｂ 6、抗－Ａ或抗－Ｂ试剂中存在低频抗原的抗体
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项一.原理根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。
二.试剂和材料1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注）2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清；4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。
三.方法1．试管法(1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。
分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。
(2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。
用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。
(3)立即以1000r／min离心1min。
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。
如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
(5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。
(6)凝集强度判断标准凝集强度判断标准4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2+红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细+-胞混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝MF集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
-表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
2.玻片法（1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。
ABO-Rh正反定型血型定型操作规程
ABO-Rh正反定型血型定型操作规程一、项目名称、检验方法名称1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型2．检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代号：BioVue -ABO/Rh-Reverse3．包装规格：400卡/箱试剂卡（707100）；100卡/箱试剂卡（707155）4．试剂成分：BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述第一柱：抗－A试剂抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料第二柱：抗－B试剂抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料第三柱：抗－D试剂（抗RH）抗－D人单克隆(lgM)抗体第四柱：质控优化增强剂，用于血型检测的质控对照第五，第六柱：反定型稀释液优化增强剂，用于反定型血型检测5．试剂的储存与效期：储存条件： 2～25℃环境中保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。
ABO血型鉴定正反向定型不符的原因与分析
ABO血型鉴定正反向定型不符的原因与分析【摘要】目的分析ABO血型正反向定型不符的原因及防治措施。
方法应用正反向定型、唾液血型物质测定试验及吸收放散试验，检测16例ABO血型正反定型不符标本。
分析其原因，并正确分型。
结果本组16例出现正反向定型不符。
其中冷抗体6例，血浆异常3例，ABO亚型3例，抗原或抗体减弱2例，人为操作因素和试剂因素2例。
结论对ABO血型正反向定型不符，无法定型的血液样本，可针对原因，采取多种方法，正确鉴定ABO血型。
【关键词】ABO血型鉴定；正反定型不符；原因；解决方法正确的血型鉴定，是保证临床输血安全和抢救生命的重要工作。
输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血，结果完全相合才能输血［1］。
但在临床血型鉴定时，也会遇到正反向定型不符等情况，给临床输血带来隐患，2008年8月至2010年10月，我院共接受各科申请血型鉴定2380例，其中ABO 血型正反定型不符16例，现分析如下。
1 资料与方法1.1 一般资料血型鉴定对象：2380例血型鉴定者，均为我院2008年8月至2010年10月间住院患者；其中男1630例，女750例；年龄1.6~86岁，平均58.6岁；正反向定型不符16例。
1.2 方法1.2.1 试剂来源正定型单克隆抗A、抗B、抗AB试剂由长春生物制品有限公司提供。
反定型标准红细胞A、B、O有上海血液研究所提供。
1.2.2 鉴定方法①血型正反定型：玻片法和试管法；②唾液血型物质的检测：检测分泌型者唾液中的血型物质，并结合临床病史、用药史、输血史等为血型鉴定提供依据；③ABO亚型鉴定及抗人球蛋白试验、抗体鉴定试验等均按照文献操作［2］。
2 结果本组血型鉴定者2380例，其中16例出现正反向定型不符。
经过对16例血液样本各种方法的综合检查，其中冷抗体6例，血浆异常3例，ABO亚型3例，抗原或抗体减弱2例，人为操作因素和试剂因素2例。
3 讨论3.1 血型鉴定的意义随着现代工业、交通的发达，很多肿瘤、创伤的发病率呈上升趋势；而外科手术，器官移植，创伤急救等均需要进行治疗性输血。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
ABO疑难血型鉴定标准操作规程
ABO疑难血型鉴定标准操作规程1.目的为规范ABO疑难血型鉴定操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7（2）条款制定本规程。
2.适用范围适用于输血科（血库）对ABO血型鉴定正反定型不相符，常规方法不能确定ABO血型的进一步确认试验。
3.职责输血科（血库）技术人员负责ABO疑难血型鉴定。
4.原理、抗-AB、抗-H试ABO血型鉴定正反定型不相符时，通过采用单克隆抗-A、抗-B、抗-A1剂与受检者红细胞反应检测ABH抗原、A、B、O型试剂红细胞及自身红细胞与受检者血清（血浆）反应检测血型抗体，红细胞吸收放散试验检测弱A、弱B抗原，凝集抑制试验检测唾液ABH血型物质，血清（血浆）吸收试验排除ABO血型以外的抗体对鉴定的影响，从而获得确定受检者ABO血型的依据，确定ABO血型。
5.所需设备和试剂5.1设备普通离心机，血型血清学专用离心机，电热恒温水浴箱或电炉，普通显微镜，水浴振荡仪。
5.2试剂红细胞不规则抗体筛选阴性的人源抗-A、抗-B血清，单克隆抗-A、抗-B、抗-H试剂，抗球蛋白试剂，A、B、O型试剂红细胞。
6.检测环境条件室温应控制在18-27℃，湿度应保持30%-70%。
7.步骤与方法7.1收集受检者临床资料当执行《血型鉴定标准操作规程》鉴定ABO血型出现正反定型不相符，并以排除试剂及操作因素时，应调查受检者的疾病史、输血史、药物治疗情况、组织或器官移植史、孕产史及以前的血型记录，分析可能影响ABO血型鉴定的临床资料。
7.2根据受检者正反定型的反应结果及临床资料，初步分析引起正反定型不符的可能原因。
7.2.1当正定型红细胞与抗-A和（或）抗-B无凝集，而反定型未检出预期的凝集反应时，应首先确认是否红细胞表达弱A和（或）弱B，与抗-A和（或）抗-B不凝集。
经吸收放散等实验确认红细胞不表达A和（或）B抗原后，可考虑是否为低免疫球蛋白血症、免疫抑制等致血型抗体异常。
7.2.2当反定型检出了与正定型不相符的凝集时（如反定型与O型试剂红细胞凝集）应考虑血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体。
1.ABO血型鉴定操作规程
9.2.3受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤）以及类B或cisAB等。
9.2.4受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。
9.2.5受检者血清中缺乏应有的抗—A和抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。
8.2血浆成分异常
8.3抗体减弱或丢失
8.4抗原减弱或变异
8.5亚型
9.超出范围结果处理:
9.1红细胞自凝：冷凝集系增高是最为常见原因。应用37℃-40℃的生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷集素。
9.2正反定型结果不一致原因
9.2.1分型血清效价太低、亲和力不强。如抗—A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。
11.2进行组织器官移植时，供、受器官者的ABO系统血型必须相同。
11.3母、子ABO系统血型不合可以造成ABO系统新生儿溶血病。
11.4ABO血型在人群中的分布，可作遗传学的研究。
12.最常见的误差来源:
12.1标本采集错误
12.2标本信息登记错误
12.3红细胞和血清比例不当
12.4离心过度或不足
9.3.5如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4℃放置30min，用显微镜检查核实。
9.3.6如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗A或抗—B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对90％HAB分泌型的人有用。
9.3.7如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混合。往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。
ABO-Rh正反定型血型定型操作规程
ABO-Rh正反定型血型定型操作规程一、项目名称、检验方法名称1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型2．检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代号：BioVue -ABO/Rh-Reverse3．包装规格：400卡/箱试剂卡（707100）；100卡/箱试剂卡（707155）4．试剂成分：BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述第一柱：抗－A试剂抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料第二柱：抗－B试剂抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料第三柱：抗－D试剂（抗RH）抗－D人单克隆(lgM)抗体第四柱：质控优化增强剂，用于血型检测的质控对照第五，第六柱：反定型稀释液优化增强剂，用于反定型血型检测5．试剂的储存与效期：储存条件： 2～25℃环境中保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
A B O血型鉴定正反定型试验方法(总1页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除ABO血型鉴定正反定型试验方法一、试剂和材料：（一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供）（二）显微镜、载玻片（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血（五）竹签二、方法（玻片法）：（一）正定型：1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂；2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。
（二）反定型：1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。
分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；3.混匀（同正定型）；4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。
6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1三、附注：（一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验；（四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO 血型；（五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。
3。
ABO血型鉴定正反不一致的原因及处理流程
ABO血型鉴定正反不一致的原因及处理流程发表时间：2013-05-24T10:53:03.937Z 来源：《中外健康文摘》2013年第14期供稿作者：胡文秀[导读] 反定型: 3%-5%的标准红细胞悬液购买于长春博德生物技术有限公司。
胡文秀 (内蒙古呼和浩特市第一医院检验科 010030）【中图分类号】R446 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）14-0203-01【摘要】目的探讨ABO血型鉴定正反不一致的原因及解决办法。
方法我院输血科2006年-2010年发现了63例ABO血型鉴定正反不一致的患者，对其正反定型不一致血液样本通过采用消除红细胞自凝、红细胞不规则抗体检查、A1抗原检测、直接抗人球蛋白试验、吸收放散试验、唾液血型物质的检测等方法找出原因,正确鉴定血型,最终总结原因及对策。
结果红细胞因素造成的ABO正反定型不符11例，抗体因素造成的9例，红细胞和抗体混合因素造成的43例。
结论对ABO血型正反定型不一致无法定型的血液样本,应根据血清学试验并结合临床资料以正确鉴定ABO血型,以保证输血安全。
【关键词】 ABO血型正反不一致原因解决方法ABO血型鉴定，即指ABH血型抗原的检测。
输血时若血型不符会使输入的红细胞发生凝集，引起血管阻塞和血管内大量溶血，造成严重后果。
所以在输血前必须作血型鉴定。
ABO血型正反定型一致是ABO血型鉴定关键所在，出现ABO血型正反定型结果不一致原因可能是检验技术错误或是被鉴定者自身ABO血型抗原或抗体存在问题[1]。
笔者将我院输血科2006年-2010年发现的63例ABO血型鉴定正反不一致的资料回顾分析如下。
1.资料与方法1.1一般资料我院输血科2006年-2010年发现了63例ABO血型鉴定正反不一致的患者，年龄1-76岁，男性36例，女性27例。
1.2试剂正定型: 抗-A、抗-B、抗-AB和抗-H 单克隆标准血清购买于上海生物技术有限公司，特异性、亲和力及效价均符合国家标准。
S007红细胞ABO血型(正反定型)、RhD鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型与RhD血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型（正反定型）与RhD 血型。
三、原理将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。
微柱检测系统的上端为反应室，将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，卡片上从左向右顺序第一支至第三支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM 试剂，检测人红细胞ABO、RhD抗原。
第四支至第六支微管中只有凝胶，第四支微管作阴性对照管，第五支和第六支微管作为ABO血型反定型管。
微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。
凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。
四、适用范围适用于输血前患者红细胞ABO血型（正反定型）确认与RhD血型复查。
五、仪器设备普通离心机；血型血清学多用离心机；37℃免疫微柱孵育器；六、试剂1、试剂名称：ABO、RhD血型试剂卡（单克隆抗体）；试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司；批准文号：国药准字S2*******；包装规格：聚丙烯卡12检测人份/盒；贮藏条件；18-25℃避光保存；有效期：自检定合格之日起12个月；试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；抗D效价≥32；特异性试验合格。
2、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；批准文号：国药准字S2*******；包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻；有效期：自检定合格之日起2个月；试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
20ABO血型鉴定标准化操作规程
ABO血型鉴定标准化操作规程1.检测原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B 型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。
2.标本采集与处理2.1受检者的准备病人不需空腹，根据病情随时可抽血检测。
2.2静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 标本的处理血标本室温放置30min～45min（或在37℃水温箱放置20分钟）后离心分离血清，置洁净试管加盖低温（4-8℃）保存。
3. 试剂和材料3.1抗A、抗B血型定型试剂。
（单克隆抗体）3.2 献血员5%红细胞盐水悬液；3.3 受检者血清；3.4 受检者5%红细胞盐水悬液。
4.方法4.1玻片法：4.1.1取清洁玻片1张（或用白瓷板1块），用蜡笔标明抗-A、抗-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B分型血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴，混和。
4.1.2取洁净玻片一张（或白瓷板1块）用蜡笔标明A细胞、B细胞，然后分别滴加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B红细胞悬液1滴。
将玻片不断轻轻转动，使分型血清与红细胞充分混匀。
连续15min，以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。
4.2试管法4.2.1 取洁净小试管2支，分别标明抗-A 和抗-B，分别滴加抗-A和抗-B分型血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5%红细胞悬液1滴，混和。
4.2.2 另取洁净小试管2支，分别表明A、B细胞。
用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别滴加入A、B型5%试剂红细胞悬液1滴，混和。
4.2.3 立即以1000r/min离心5min。
4.2.4 将试管轻轻摇动，使沉于底部的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
14
唾液中HAB血型物质测定
【目的】
了解唾液HAB血型物质测定的原理、方法。
【原理】
HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中 HAB血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结 合，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集。所以利
用凝集抑制试验，可测定唾液中HAB血型物质，它 有助于ABO亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定
(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ，使血清与细胞充
分混匀连续约2min，肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片
试验时可用低倍镜观察结果。
医学ppt
6
表l ABO血型正反定型结果
试剂血清+受检红细胞 （正定型）
-A -B 受检血型
受检血清+试剂红细胞 （反定型）
Ac Bc Oc
＋－
A
－＋
B
－－
O
＋＋
AB
医学ppt
15
【器材】 小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机
【试剂】 1. ５％A、B和O型红细胞盐水悬液。 2. 最适稀释度抗血清的制备（标化血清）
【标本】受检者唾液
医学ppt
16
1.被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml，将留取 的唾液1000g离心，取上清液置于大试管中，煮 沸10min，再离心10min，留取上清液备用。
－＋ － ＋－ － ＋＋ － －－－
医学ppt
7
医学ppt
8
注意事项 1.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染
作业 简述ABO血型鉴定正反不一致的原因
医学ppt
9
红细胞凝集强度判断标准 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。 l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 ± 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离
操作(盐水试管测试法)
1.取单克隆抗-D（IgM）-C、-c、-E、-e试
剂各1滴到5支试管中。
2.每管各加1滴3％～5％待检红细胞悬液。
3.充分混匀，以1000 g离心15秒。
4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，
用肉眼观看凝集。
5.判定结果
医学ppt
13
注意事项
1．如临床上只检查是否为Rh阳性，只需用抗D血清 进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查排除Du 型。
３.加3％悬红：每排各管对应加悬红50μl， 振摇混匀，1000g，离心15秒。
４.结果：以３+为标化血清的最适稀释度。
医学ppt
18
操作步骤
反应物
抗Ａ管 抗Ｂ管
受检唾液
１d
１d
标化抗Ａ
１d
标化抗Ｂ
１d
标化抗Ｈ
混匀，室温中和10min
３%Ａ红细胞 １d
３%Ｂ红细胞
１d
３%Ｏ红细胞
混匀室温放置10min，离心后观察
红细胞。
mf 混合凝集外观（mixed field）指镜下可见少数红细 胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
－ 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
医学ppt
10
二 、 Rh血型鉴定
目的 掌握Rh血型鉴定的原理、方法。
原理 Rh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用 相应的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清 来检查红细胞抗原。
(5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。
医学ppt
5
操作：玻片法(鉴定纸板)
(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标－A、－B，分别用 滴管滴加－A、－B试剂1滴，再加受检者3％～5％红 细胞悬液l滴，混匀。
(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc， 各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。
(2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加 2ml生理盐水，混匀，2500r/min离心3分钟，弃上清 ；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5% 悬红。
(3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红， 反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。
（4）离心：3000r／min离心15秒（1000g）。
医学ppt
2
医学ppt
3
器材:小试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸
板、载玻片、记号笔、显微镜。
试剂:
1. ABO血型抗体：抗A、抗B；Rh血型抗体：
抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。
2．3％～5％A型、B型及O型试剂红细胞。
3. 生理盐作（试管法）
(1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标 明－A、－B；反定型：取3支小试管分别标记Ac、Bc 、Oc。
2．因抗e血清难以得到，故临床上常用四种Rh抗血 清来定型。
3．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原 、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时， 应轻轻摇动试管，不可用力振摇。
4．如鉴定结果只与抗D血清起反应，而与抗C、-c 、-E、-e都不凝集，则受检者为Rh缺失型，以D-表示。
医学ppt
2.排列试管3支，分别标明-A、-B、-H，3管各加 唾液1滴，每管加相应标化血清1滴。
3.混匀，置室温，中和10min。 4.每管加相应悬红1滴. 5. 混匀，离心15秒，观察结果.
医学ppt
17
标化血清
1.标记试管：3排18支，分别抗A、抗B及 抗H。每排再标2、4、8、16……
２.稀释：每管加盐水50μl。每排第1管对应 加抗A抗B及抗H血清50μl，倍量稀释成2、 4、8、16……稀释液。
ABO血型鉴定、Rh血型鉴定
唾液中HAB血型物质测定
临床检验基础与输血教研室
医学ppt
1
实验一 ABO、Rh血型鉴定
目的：掌握ABO正反定型的原理、方法及Rh血型鉴定 原理：通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反 定型鉴定ABO血型。 正定型是用已知血型特异性抗体（抗-A、抗-B、抗D…等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原； 反定型是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相 应的抗体。
抗Ｈ管 １d １d
１d
医学ppt
19
结果判定
非分泌型
抗A管 4+
A型分泌型 —
B型分泌型 4+
0型分泌型 4+
AB型分泌型 —
在临床输血中一般只做D抗原的鉴定，被检红 细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴 性。
医学ppt
11
器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、载 玻片、显微镜、离心机。
试剂
1.Rh抗血清：常用的为IgM抗D。
2.己知Rh阳性和阴性的5％红细胞悬液各1份
3.盐水溶液。
标本 静脉血。
医学ppt
12