一种经济的脆性X综合征的PCR检测法

合集下载

脆性X染色体综合征的临床检测方法研究

脆性X染色体综合征的临床检测方法研究魏婷婷;周东蕊;张红琳;付文忠;张仁敏;杜彩贺;胡芳【摘要】目的是建立一种简便、快捷的脆性X染色体综合征的临床检测方法.在常规PCR的基础上,采用热启动法,同时加入PCR增强剂Btaine、DMSO,对20例表型正常人群外周血样本进行FMR1基因(CGG)n重复序列检测.结果表明,改良后的FMR1基因PCR扩增技术能够高效扩增CG富集区,采用该方法我们检测了20例外周血样本均获得目标片段,PCR扩增产物片段长度400～500bp(相当于n=20～53).因此,该方法简便、快速、经济而且重复性好,可用于群体普查和门诊快速筛查脆性X染色体综合征.【期刊名称】《南京晓庄学院学报》【年(卷),期】2011(027)003【总页数】4页(P63-66)【关键词】脆性X染色体综合征;FMR1基因;CGG重复序列;PCR【作者】魏婷婷;周东蕊;张红琳;付文忠;张仁敏;杜彩贺;胡芳【作者单位】东南大学学习科学研究中心,江苏南京210096;东南大学学习科学研究中心,江苏南京210096;南京晓庄学院,江苏南京211171;山东省菏泽市牡丹区畜牧局,山东菏泽274009;东南大学学习科学研究中心,江苏南京210096;东南大学学习科学研究中心,江苏南京210096;东南大学生物科学与医学工程学院,江苏南京210096【正文语种】中文【中图分类】R749.94脆性 X染色体综合征(fragile X syndrome，FraX)又称脆性X综合征，是一种发病率仅次于唐氏综合征(Down syndrome)的常见遗传性智力低下疾病，由Martin 和Bell在1943年首次报道并命名为Martin-Bell综合征.Fra X为X连锁不完全显性遗传病，占X连锁遗传性智力低下的40%［1］，据报道［2］男性发病率约为1/4000，女性发病率约为1/8000.Fra X的临床表现除认知障碍外还有前额高、耳大和下颌突出，青春期后睾丸大，关节活动度增大等体格特征，以及注意障碍和孤独症样行为等.近年来，随着遗传学和分子生物学技术的发展与应用，FraX的发病机制也渐渐为人所知，1991年Verkerk等［3］分离并用酵母人工染色体技术克隆出位于Xq27.3处的脆性X综合征的致病基因，将其命名为脆性X智力低下1号基因(fragile X mental retardation 1，FMR-1)，脆性X综合征发病的分子基础就是该基因所含(CGG)n重复序列不稳定的扩增.在正常人群CGG重复数具有多态性，范围在7～50个之间，以30个居多.CGG重复数在55～200之间称为前突变(premutation)，在女性携带者中不稳定，其子女CGG重复数会增加.如果女性携带者CGG重复数超过90，其子女CGG重复数几乎均超过200，达到全突变(fullmutation)水平.此时，其CpG岛出现异常甲基化，并导致FMR1基因转录终止，其编码产物FMRP(fragile X mental retardation protein)缺如［4］，引起脆性X综合征.目前临床尚无FraX的有效治疗方法，而其高发病率给家庭和社会都造成很大的负担.本研究旨在优化FraX分子水平上的检测条件，为该病的早期诊断建立经济、简便、快速的基因筛查法，使病人早日得到对症治疗，减轻疾病负担，提高生命质量.1 材料与方法1.1 材料表型正常者外周血2 ml，EDTA抗凝，碘化钾法提取基因组DNA，置于－20℃保存.1.2 仪器与试剂PTC-200 PCR仪(MJ Research公司);引物Primer－1、Primer－2参照文献［5］由Invitrogen生物技术有限公司合成，Primer-1:5’-GGA ACA GCGTTG ATC ACG TGA CGT GGT TTC-3’，Primer-2:5’-GGG GCC TGC CCT AGA GCC AAG TAC CTT GT-3’.PCR扩增产物片段长度400～500bp(相当于n =20～53).Taq酶、dNTP、10*Taq Buffer(含Mg2+)购自Tiangen公司，DMSO、Betaine购自Sigma公司.5MKI，生理盐水，苯酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)，70%乙醇.1.3 方法1.3.1 样本处理取抗凝血500μl加灭菌水1000 μl，充分摇匀后1000 rpm离心5 min弃上清，沉淀加5MKI150 μl，旋涡振荡60 s，加生理盐水550 μl、苯酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)1000 μl，1000 rpm离心5 min，小心吸取上清至另一Eppendoff管中，加异丙醇400 μl，轻轻摇匀，1000 rpm离心5 min，弃上清，加70%乙醇1000 μl，1000 rpm离心5 min，弃上清，37℃烘干多余乙醇，加100 μl灭菌水55℃水浴过夜溶解.1.3.2 常规PCR扩增PCR反应体系共50 μl，含dN TP1 μl，Primer－1、Primer－2各1 μl(10 μM)，Buffer(含Mg2+)5 μl，模板DNA1 μl，Taq酶1 μl，其余用去离子水补足.PCR反应条件，95℃5 min预变性，后经34个循环扩增，每一循环包括95℃变性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸1 min，循环结束后再于72℃延伸5 min.1.3.3 热启动PCR法并加入增强剂DMSO扩增引物不变，PCR反应体系共50 μl，含dNTP1 μl，Primer－1、Primer－2各1μl(10 μM)，Buffer(含Mg2+)5μl，DMSO2.5 μl(5%)，模板DNA1μl，用去离子水补足体系49 μl，暂不加入Taq酶1 μl.PCR反应条件，95℃10 min预变性，后经34个循环扩增，每一循环包括95℃变性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸1 min，循环结束后再于72℃延伸5 min.在第一次循环中退火温度下加入1 μlTaq 酶.1.3.4 采用热启动并加入增强剂DMSO及Betaine的PCR扩增引物不变，PCR反应体系共50 μl，含dNTP1 μl，DMSO2.5 μl(5%)，Betaine12 μl(5M)，Primer－1、Primer－2各1 μl(10 μM)，Buffer(含Mg2+)5 μl，模板DNA1 μl，Taq酶0.5 μl，其余用去离子水补足.PCR反应条件，95℃10 min预变性，后经34个循环扩增，每一循环包括95℃变性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸1 min，循环结束后再于72℃延伸5 min.在第一次循环中退火温度下加入0.5 μlTaq酶.1.3.5 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳法检测配制2%琼脂糖凝胶，取5 μl扩增产物加载样缓冲液1 μl混匀后上样，于130 V电泳30 min后成像分析结果.2 结果2.1 常规PCR扩增产物的检测用2%琼脂糖凝胶电泳检测常规PCR产物，20例样本均未检测出扩增片段，产物多为引物二聚体(图1).图1 常规PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测(扩增样本均来自表型正常人群)2.2 热启动并加入增强剂DMSO的PCR扩增产物的检测采用热启动法后20例样本中仅2例有明显特异性条带出现，重现性差，扩增效率低(图2).图2 热启动并加入增强剂DMSO的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测(样本均来自表型正常人群)2.3 采用热启动并加入增强剂的DMSO及Betaine的PCR扩增产物的检测采用热启动法并加入增强剂DMSO及Betaine扩增FMR1基因5’端CGG重复序列，20例样本均可检测出特异性扩增产物，目标带清晰，结果稳定，重复性好，扩增效率明显较常规PCR高(图3).图3 采用热启动并加入增强剂的DMSO及Betaine的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测(样本均来自表型正常人群)3 讨论3.1 PCR技术在该病基因诊断中的应用及其局限性PCR技术作为分子生物学研究的最重要技术，得以在生物科研和临床应用中广泛应用，而由于其简便、灵敏和快捷的特点在FraX的诊断中也有不可替代的优势.Fu 等［6］最先用PCR扩增包括(CGG)n重复区域在内的DNA片段，对(CGG)n重复拷贝数进行精确的测定.PCR由于简便易操作特别适用于群体筛查及前突变者的诊断，但当拷贝数过多时扩增就比较困难.本实验中在扩增FMR1基因时就遇到了PCR低效率的问题.由于该段基因富含CG(＞85%)，碱基配对时，鸟嘌呤与胞嘧啶之间形成三对氢键，双链稳定性高，解链所需能量高，因而模板DNA解链较困难.另外，由于单链的CG富集区易于自身互补配对，形成稳定的发夹或二级结构，导致在扩增过程中引物难于结合到单链模板上，且DNA聚合酶在含有稳定二级结构的模板链上也难以延伸，反应表现为严重的非特异性扩增，出现较多引物二聚体或多聚体，并伴随目的产物量降低，或根本无靶序列的扩增.本文中图1结果显示扩增效率低且存在很多引物二聚体.3.2 热启动PCR及DMSO的应用由于模板DNA的CG含量高，解链所需能量高，而普通的DNA聚合酶(Taq酶)在95℃以上高温活性降低或失活，再者，尽管Taq DNA聚合酶的最佳延伸温度在72℃，聚合酶在室温仍然有活性.因此，在进行PCR反应配制过程中，以及在热循环刚开始，保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物.这些非特异性产物一旦形成，就会被有效扩增，限制Taq DNA聚合酶活性的常用方法是在冰上配制PCR反应液，并将其置于预热的PCR仪.这种方法简单、成本低，但并不能完全抑制酶的活性，因此并不能完全消除非特异性产物的扩增.本文采用一种简便、无外源性污染的热启动方法，通过控制一种关键成分即Taq酶的加入来延迟DNA 合成，直到PCR反应体系经过高温变性后，保持退火温度以上的温度下加入Taq 酶，优点有4个:(1)通过高温启动反应，促进引物的特异性复性与延伸，增加有效引物的长度，从而减少了引物二聚体或多聚体的形成; (2)在扩增前的高温加热使模板DNA双链充分解链;(3)减少Taq酶处于高温的时间，保护其活性; (4)在最佳退火温度下加入Taq酶可以减少非特异性产物的产生.DMSO属于有机溶剂(Organic solvent)，其作用机制是通过脱水(Dehydration)作用导致DNA结构的不稳定性，导致GC富集区的熔点及解链温度降低，进一步提高了扩增效率.据报道，每10%的DMSO降低熔点及解链温度5.5～6℃，但10%的DMSO会降低Taq酶高达50%的活性，故而本文经研究加入5%DMSO.热启动联合应用DMSO一方面促进DNA有效解链，另一方面保护了酶的活性，增强了酶的特异性.本文中图2结果显示采用此法扩增效率比常规PCR法有提高，由于GC含量过高，仍可能存在假阴性结果.3.3 热启动PCR及DMSO和Betaine的应用热启动法与DMSO联用可以提高扩增效率，但结果不稳定，重复性差，为了进一步提高扩增效率和特异性产物的产量，提高结果的稳定性和可重复性，本文又加入了另外一种PCR增强剂Betaine(甜菜碱，三甲基甘氨酸，N，N，N-trimethylglycine)，该增强剂可降低富含GC的模板形成二级结构的可能，提高Taq DNA聚合酶的稳定性.本文图3结果显示采用该法扩增效率大大提高，产物特异性增强，而且结果稳定，具有良好的可重复性.在人类基因组中CG含量高的DNA序列广泛存在，使用常规PCR法很难(甚至根本不能)得到扩增目的产物，本文在常规PCR方法上做了一些改良，提高了CG富集区域的扩增效率及特异性，取得了较好的结果.这些方法为FXS的早期诊断建立经济、简便、快速的基因筛查法，适于临床的群体筛检和门诊的快速筛查，使病人早日得到对症治疗，减轻疾病痛苦，提高生命质量.也可为本病的进一步研究及其他高CG含量的基因的PCR扩增奠定基础.参考文献:【相关文献】［1］Warren ST，Ashley CT Jr.Triplet repeat expansion mutations:the example of fragile X syndrome［J］.Annu Rev Neurosci，1995，18:77-99.［2］ACOG committee opinion.No.338:Screening for fragile X syndrome［J］.Obstet Gynecol，2006，107:1483-1485.［3］Verkerk AJ，pieretti M，Suteliffe JS et al.Identification of a gene(FMR-1)containing a CGG repeat concident with a fragile X breakpoint cluster region exhibiting length variation in fragile X syndrome.Cell，1991，65(5):905-914.［4］Bell MV，Hirst MC，Nakahori Y，et al.Physical mapping across the fragile X Hypermethylation and clinical expression of the fragile X syndrome［J］.Cell，1991，64:861-866.［5］李东至，廖灿，黄以宁.脆性X染色体综合征快速筛查的聚合酶链反应技术［J］.中国生育健康杂志，2005，16 (1):33-37.［6］Fu YH，Kuhl DP，Pizzuti A，et al.Variation of the CGG repeat at the fragile X site results in genetic instability:resolution of the Sherman paradox［J］.Cell，1991，67(6): 1047-1058.。

脆性X综合征

6000-8000 男性前突变携带者1:800
女性前途变携带者1:260 台湾筛查10046例男性新生儿发现全突变1例
临床特征——FXS（1）
智力障碍
男性患者大多数都表现为中度至重度智力障，这与甲基化嵌合体及前突变/全突变嵌合体有关
约有30%-50%的女性全突变携带者患病，大多数表现为难以觉察的或轻度的智力障碍，女性全突变携带者是否患病及患者智力障碍的差异是由于X染色体差异性失活所致。
中，发现均带有一条长臂末端具随体样结构的C组染色体，并经放射自显影证实为X染色体，称为“标记X染色体” 1977年Sutherland，定位于Xq27，并命名为脆性部位（fragile site），脆性X综合征因此得名 1991年Verkerk等在Xq27.3附近克隆了脆性X综合征致病基因，命名为脆性X智力低下基因1---FMR1
甲基化嵌合基因超甲基化与非甲基化嵌合
实验室诊断——检测策略
有脆性X综合征家族史的病人
临床拟诊震因的智力低下病人，生长发育迟缓的病人，孤独症样表现者
分子遗传检测：PCR 和 Southern基因组印迹
常规染色体核型分析
>200个重复： 55~200个重复：
扩增为全突变的几率（%）
3.7 5.3 31.1 57.8 80.1 100 98.1 97.2 94.4 100
临床特征——FXPOI（1）
脆性X相关原发性卵巢功能不全（FXPOI）：40岁
前出现卵巢功能衰退的症状如闭经、骨质疏松、焦虑、注意力不集中等
25% 20% 15% 10%
5% 0%
临床特征——FXS（2）
特殊面容颜面瘦长前额突出耳朵大下巴前突下颌大嘴大唇厚上门齿长腭弓高头围大

2024CAH-X综合征研究进展(全文)

CAH-X综合征研究进展（全文）摘要CAH-X综合征是指先天性肾上腺皮质增生症（CAH）患者中，合并肌腱蛋白X（TNX）缺陷而出现埃勒斯-当洛综合征表型的特殊亚群，占CAH 患者的10%~15%。

TNX缺陷可导致一系列结缔组织症状，包括全身性关节活动过度、皮肤过度伸展、反复关节脱位、慢性疼痛、心脏缺陷等，严重影响患者生存质量。

CAH-X 综合征的遗传学病因是CYP21A2和TNXB基因的连续性缺陷，由于致病基因的复杂性，其分子诊断充满挑战。

现对CAH-X综合征研究进展进行综述，以提高临床医师对于这一新发现疾病的认识。

关键词先天性肾上腺皮质增生症；CAH-X综合征；埃勒斯-当洛综合征；TNXB 基因先天性肾上腺皮质增生症（congenital adrenocortical hyperplasia,CAH）是一类肾上腺类固醇合成酶缺乏的常染色体隐性遗传病，由CYP21A2基因缺陷所致的21-羟化酶缺乏症（21-hydroxylase deficiency,21-OHD）是CAH中占比约95%的主要类型，以肾上腺皮质功能不全和高雄激素血症为临床特征［1］。

埃勒斯-当洛综合征（Ehlers-Danlos syndrome,EDS）是一组异质性遗传性结缔组织病，以全身性关节活动过度、皮肤过度伸展和组织脆性为特点［2］。

一部分EDS是由于肌腱蛋白X（tenascin-X,TNX）缺陷所致，编码TNX的TNXB 基因与编码21-羟化酶的CYP21A2基因紧密连锁。

现已发现一种CYP21A2及TNXB基因的连续性缺陷，可同时引起21-OHD和EDS表型，称为CAH-X综合征。

自该综合征于2013年被命名以来，全球范围内累计报道的患者数量已近200例，但鲜有中文文献报道。

近年研究显示，CAH-X综合征在CAH患者中占比10%~15%［3-8］。

为提高临床医师对于这一新发现疾病的认识，现就CAH-X综合征研究进展进行综述。

脆性X综合征

脆性X综合征
李东至;廖灿
【期刊名称】《东南大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2005(13)5
【摘要】脆性X综合征(FraX)是最常见的遗传性智力低下综合征。

其发病机理是
由于X染色体上FMR1基因三核苷酸重复序列(CGG)n动态突变引起。

携带前突
变的母亲在传递给子代时,(CGG)n大多扩展为全突变,子代发病机会增加。

目前FraX的诊断主要依靠分子生物学技术,对于前突变携带者的母亲建议进行产前诊断。

【总页数】3页(P121-123)
【作者】李东至;廖灿
【作者单位】广州市妇婴医院
【正文语种】中文
【中图分类】R596.12
【相关文献】
1.脆性X综合征国家参考品的研制 [J], 高飞;胡泽斌;游延军;蒲小聪;陈蕊;黄杰
2.脆性X综合征外周血淋巴细胞永生化细胞系的建立与验证 [J], 高飞;胡泽斌;孙楠;段然慧;游延军;左甜甜;夏昆;黄杰
3.新生儿脆性X综合征筛查对本地区CGG重复数情况分析 [J], 马会卿; 郝秀双;
刘晓玲; 郭志娟; 杨灵敏
4.甲基化荧光定量PCR快速检测自闭症男童中脆性X综合征的临床应用 [J], 陈剑虹; 黄淑君; 马健; 周伟平; 张亮
5.不明原因智力低下和孤独症谱系障碍儿童脆性X综合征的筛查结果分析 [J], 雷洁;龙敏;肖砚微;林晓文;张静
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脆性X综合征的快速PCR筛查

脆性X综合征的快速PCR筛查
李东至;廖灿;黄以宁
【期刊名称】《中国优生与遗传杂志》
【年(卷),期】2005(13)2
【摘要】目的建立一种简便、快速、经济的脆性X综合征基因筛查PCR方法。

方法通过提高预变性温度联合应用betaine扩增FMR1基因的三核苷酸重复序列。

结果本方法扩增正常等位基因效率高 ,重复性好。

结论该方法简便、价廉 ,可用于高危人群的快速筛查。

【总页数】2页(P31-32)
【关键词】脆性X综合征;基因筛查;扩增;FMR1;三核苷酸重复;正常;PCR;结论;方法;目的
【作者】李东至;廖灿;黄以宁
【作者单位】广州市妇婴医院优生围产研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R394;R596
【相关文献】
1.脆性X 染色体综合征快速筛查的聚合酶链反应技术 [J], 李东至;廖灿;黄以宁
2.PCR-短串联重复法快速产前筛查唐氏综合征的应用价值 [J], 管立学;任翠爱;李海波;高丽;贾南;管晖
3.男性脆性X综合征快速筛查 [J], 胡韶毅;董敏;黄尚志
4.脆性X综合征基因的快速直接筛查法 [J], 朱宁宁;范钰
5.脆性X综合征的PCR筛查与诊断 [J], 陈敬春;杨爱德;费洪宝;金润铭;何美娟;王碧玉
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

浅谈脆性X染色体综合征的概况

浅谈脆性X染色体综合征的概况摘要：脆性X染色体综合征（fragile X syndrome）是一种不完全外显的X染色体连锁显性遗传病，X染色体长臂2区7带呈细丝状（宋小俊，2012）。

发病机理是由于X染色体上智力低下基因FMR-1突变，导致无法制造正常蛋白质。

临床以智力低下、巨睾症、特殊面容、语言行为障碍为特征。

目前对于脆性X染色体综合征的诊断主要是临床诊断和实验室诊断等。

关键词：脆性X染色体综合征；发病机理；临床表现脆性X综合征是一种具有家族好发现象的遗传病，后代成员的患病比例也会随着代数的增加而增加，其临床特征一般为“一低五大”:智力低下、大头、大耳朵、巨睾、第三指间类型比例大、出生时体重大。

在人群中,男性发病率要比女性大，约为1/1500,而女性的患病率则在为1/2500。

本文就其发病机理、临床表现及诊断等研究进展进行综述。

1 发现史在20世纪初期，就有一些学者注意到智力低下的患者中男性多于女性这一现象。

到了1943年，Martin和Bell在一个家系的两代人中发现了11名男性患者和两名轻度智力低下的女性，对此他们认为该家系智力低下是与X连锁的，也因此X连锁智力低下又称为Martin-Bell综合征（李东至，2005）。

1969年Lubs首先在男性智力低下患者及其女性亲属中发现了长臂具有“随体和呈细丝状次缢痕”的X染色体。

后来，Sortherland 证明细丝位位于X染色体长臂2区7带（Xq27）。

它在低叶酸培养条件下表达，并提出了脆性部位（fragile site）的概念。

现今人们把在Xq27处有脆性部位的X染色体称为脆性X染色体（fragile X,fra X），而它所导致的疾病称为脆性X染色体综合征。

2发病机理脆性X染色体综合征是1991年美国的一群研究人员在X染色体上的叫做脆性X染色体智力低下基因1(fragile X mental retardation gene1，FMR-1)发生突变而导致的。

用PCR结合甲基化特异PCR方法检测遗传性脆性X综合征

ＮＭＦＯＬ５．Ｔ兀ＴｒＴｒＩＡＧ＿兀’ｒｒＴＴＧＧ＿ｒＧｒＡＧＧＴｒ３ＮＭＲ０Ｌ５．ＣＣＣＡＴＡＴＡＣＩＴＡＡＡＡＡＣＣＣ３ＡＣＡ．ＭＦＯＬ
ＭＲ０Ｌ
５ｒｒｒｒＡＧｌｒＧＴＣＣ．ＴｒｒｒＴ ’ｒＴＡＧＧＴＧ３
为国产分析纯。
１２方法．
测序结果表明Ｆ基因中的非甲基化的Ｃ碱基转变为ＴＭＲＩ碱基，甲基化的Ｃ碱基保持不变。结论方法可以同时检测Ｆ因的（Ｇ）重复数和ＣＧ岛ＭＲＩ基ＣＧＩ１ｐ的甲基化情况，临床检测ＦＳ提供了依据。为Ｘ主题词
ＷＷｕｏｅｅｏｇｍｔｒｅ／ｎｅ１ｈｍｌ线甲基Ｗ．ｒｇｎ．ｒｅｐｉｒｉｘ．ｔ在／ｈｍｄ
中图分类号
Ｒ５６Ｒ３４；４．９；９Ｒ４６９
文献标识码Ａ文章编号１０００—１９（００００４０４２２１）６— ７８— ４
１６９Ｆ
５．ＧＡＡＧＴＡＴＡＧＴＡＣＴＴＣ．ＧＡＣＧＣＴＧＣＣＧＧＧＧｎ’ ３５．ＧＧＣＧＣＴＡＧＣＡＴＣｒＴ．ＧＧＣＴＣＣＡＧＣＡＧＡＣｒＧ３
ｎ
＋１４４Ｒ
ｍ
× ｎ × ｎ
英范礼斌，
化情况可对ＦＳ进行基因分型。Ｘ
１材料与方法
重复数。首先，ＣＰＲ扩增脆性Ｘ智力低下基因Ｉ（ＭＲＩ）Ｆ

脆性X综合征

三．特殊面容长脸，大耳、招风耳，前额突岀，头颅前后径较大。青春期出现大睾丸。
诊断和预防
用PCR法可以进行男性人群FMR1基因的筛查，而患者的确诊则需要进行DNA 的Southern杂交。一旦发现先证者，必须进行家系调査，及时发现女性携带者, 开展遗传监测，携带者通过产前诊断可以避免出现类似患儿。到目前为止，脆性X综合征还没有办法治愈，可进行康复训练。
脆性X综合征
基本介绍
在美国高加索人群中的发病率较高，据推测男性为1/4000〜1/6000,女性为 1/8000，基因异常导致相关基因不能正常转录,其编码的脆性X智力低下蛋白缺乏，即出现相应的症状。
临床表现
一．智力障碍男性患儿表现为中-重度智力障碍;女性患儿程度较轻,或仅表现为学习困难。
二．行为异常多动、注意力不集中；社交退缩、害羞;刻板的语言和动作等孤独症样表现。约30%的FXS儿童被诊断为孤独症谱系障碍，而孤独症谱系障碍儿童中有2%〜7%为F

非同位素PCR方法检测脆性X 综合征FMR-1基因CGG重复序列数目

非同位素PCR方法检测脆性X 综合征FMR-1基因CGG重
复序列数目
李红;肖丽娟;韩冰
【期刊名称】《苏州大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2003(023)005
【摘要】目的建立一种可靠、简便的非同位素PCR方法检测脆性X综合征的突变基因.方法采用生物素标记的CGG寡核苷酸探针,检测通过PCR扩增的FMR-1基因中CGG三核苷酸重复序列数目.从而判断所检样品中FMR-1基因是否正常.结果该法可检测出正常人及携带者的CGG重复拷贝数.结论该方法可以简便、安全、可靠地检测FMR-1 基因中(CGG)n重复拷贝数,从而确定为正常人或携带者,可作为临床上筛查脆性X 综合征的首选方法.
【总页数】3页(P537-539)
【作者】李红;肖丽娟;韩冰
【作者单位】苏州大学附属第一医院,妇产科,苏州,215006;苏州大学附属第一医院,妇产科,苏州,215006;苏州大学附属第一医院,妇产科,苏州,215006
【正文语种】中文
【中图分类】R596
【相关文献】
1.FMR-1基因与脆性X综合征 [J], 方针强;隋建峰
2.FMR-1基因中CGG重复序列扩增条件的优化 [J], 马云;何淑雅;Nanbert
Zhong;李斌元;喻长顺;苏娇
3.脆性X智力低下基因(FMR-1)异常甲基化与(CGG)n重复序列的动态突变 [J], 吴冠芸;沈岩;傅四东;林田;范钰
4.非同位素PCR及Southern印迹杂交分析检测脆性X综合征FMR-1基因突变[J], 李红;肖丽娟;韩冰
5.脆性X综合征的FMR-1基因 [J], 张海芸;高锦声
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脆性X综合征的产前基因筛查与诊断

脆性X综合征的产前基因筛查与诊断
杨丹彤;贾颐舫;吴爱华;张爱东
【期刊名称】《中国生育健康杂志》
【年(卷),期】2010(021)002
【摘要】目的对脆性X综合征进行产前基因筛查与诊断.方法采用聚合酶链式反应(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对32例孕妇及其胎儿的脆性X基因(CGG)n 重复序列进行检测,同时采用PCR扩增牙幼基因对胎儿性别进行鉴定.结果在32例孕妇及其胎儿中,检出1例孕妇为前突变携带者,1例男性胎儿为脆性X综合征患者.结论采用PCR扩增脆性X基因(CGG)n重复序列,结合扩增牙幼基因进行性别鉴定,可对脆性X综合征进行产前筛查与诊断.
【总页数】4页(P84-85,88,封3)
【作者】杨丹彤;贾颐舫;吴爱华;张爱东
【作者单位】250002,济南,山东省优生技术重点实验室(山东省计划生育科学技术研究所);250002,济南,山东省优生技术重点实验室(山东省计划生育科学技术研究所);250002,济南,山东省优生技术重点实验室(山东省计划生育科学技术研究所);250002,济南,山东省优生技术重点实验室(山东省计划生育科学技术研究所)【正文语种】中文
【相关文献】
1.脆性x等位基因的出现频率和不稳定性对后代脆性X综合征产前诊断的提示 [J], 葛玉纯
2.产前分子遗传诊断胎儿脆性X综合征的可行性分析 [J], 梁建恩;雷毅怡
3.脆性X综合征的基因诊断与产前诊断 [J], 邬玲仟;潘乾;龙志高;朱俊真;戴和平;郑多;夏昆;黄幸青;夏家辉
4.脆性X综合征的遗传学诊断与产前诊断 [J], 曾静;王和
5.家族遗传性疾病-脆性X综合征的筛查及产前诊断 [J], 李长民;刘巍;谭文华
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脆性X综合征FMR—1基因CGG重复数变异的研究

脆性X综合征FMR—1基因CGG重复数变异的研究
高素清;李晓利
【期刊名称】《中国计划生育学杂志》
【年(卷),期】1999(007)005
【摘要】采用ＰＣＲ凝凝胶电泳法测定１２６例正常人群Ｘ染色体及来源于脆性Ｘ综合征家族的１８条染色体的Ｐ（ＣＧＧ）ｎ。

结果（１）正常人群中，ＣＧＧ重复数目昂多为２８，变动范围２１－４１（ＣＧＧ）。

ＦＭＲ－１基因可稳定扩增，且后代受损程度不一。

（２）脆性Ｘ家族中，母亲均为正常传递携带者，他们的前突变在卵子减数分裂过程中转变为全突变，从而导致了患病后代。

脆性Ｘ综合征最罕见的遗传特点是存在正常传递男子，而且了前突变
【总页数】3页(P200-202)
【作者】高素清;李晓利
【作者单位】深圳市红十字会医院妇产科;深圳市红十字会医院妇产科
【正文语种】中文
【中图分类】R596.104
【相关文献】
1.FMR1基因CGG重复序列多态性与不明原因早期自然流产的相关性研究 [J], 冯旺琴;陈素文;武淑英;陈雁鸣
2.新生儿脆性X综合征筛查对本地区CGG重复数情况分析 [J], 马会卿; 郝秀双; 刘晓玲; 郭志娟; 杨灵敏
3.不明原因复发性流产女性FMR1基因CGG重复序列多态性研究 [J], 曹琴英;彭
园园;穆卫红;孙东兰;张静
4.FMR1基因(CGG)n重复数与不良妊娠结局的相关性 [J], 屈小玲(综述);孙敬霞(审校)
5.FMR1基因(CGG)n重复数与不良妊娠结局的相关性 [J], 屈小玲(综述);孙敬霞(审校)
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

脆性X综合症有什么症状,哪些人适合脆性X综合症基因检测

脆性X综合症有什么症状?哪些人适合脆性X综合症基因检测?脆性X综合症(Fragile X syndrome,FXS)，又叫做“脆性X染色体综合征”，是一种常见的遗传性智能发展疾病，也是造成胎儿智力发育迟缓的第二大主因，仅次于唐氏综合征。

建议孕妇可尽早进行脆性X综合症基因检测，以提前作出医疗及遗传咨询安排，为宝宝的降生做好准备。

脆性X综合症(FXS)的症状表现是什么?患上脆性X综合症，一般难以于产前超声波发现异常，或从婴儿时期的外观上见到分别。

患儿除了智力低下外，还会出现过度活跃、语言迟缓及自闭症等症状。

患有前突变携带者的女性在50岁后，亦有机会患上神经退化疾病，如出现震颠、失平衡、卵巢机能不全症的风险、记忆力下降、认知力下降及情绪不稳等情况。

香港卓信医疗指出，脆性X综合症携带者未必有明显病徵。

一般而言，脆性X综合症男性患者的病徵较女性的严重，而女性患者也许会出现跟成年男性患者一样的身体特徵，但她们通常外观上的特徵并不明显，程度较为轻微。

有些女性本身有脆性X综合症(FXS)的携带基因，但却没有明显病徵，她们很大机会影响自身及下一代，出现由脆性X综合症引致的疾病。

由于遗传方式的特殊性，通常只建议妈妈做脆性X综合症基因检测。

哪些人适合进行脆性FXS基因检测?需要注意的是，由于患儿一般不会显示产前超声波异常，亦不容易从外观诊断出患病的新生儿。

因此，香港卓信医疗特别建议，以下人群应进行脆性FXS基因检测：-怀孕及计划怀孕的女性-家族中曾患有FXTAS-家族中的女性有早期停经的情况(<40岁)-家族中曾患有不明原因的智力障碍/发展迟缓/自闭症脆性X综合症(FXS)基因检测怎么做?通过检测母亲FMR1基因的CGG重复次数，以及CpG区域的甲基化程度，可评估其后代罹患脆性X综合症的风险，令夫妇双方及早作出生育安排。

>>建议周数：怀孕7周以上>>检测费用：3000～5000港币>>采样方式：6～12mL母体静脉血>>检测报告：最快1个工作日后发送报告>>染色体异常筛查：仅需抽一次血，即可同时进行敏儿安safeT21无创产前基因筛查，检测内容包含3项染色体三体症(T21、T18、T13)，4项性染色体相关疾病以及7项/105项染色体微缺失症候群。

基于三引物荧光PCR-毛细管电泳法的FMR1基因突变检测技术建立及其在自闭症辅助诊断中的应用

基于三引物荧光PCR-毛细管电泳法的FMR1基因突变检测技术建立及其在自闭症辅助诊断中的应用孙莉;杨琳艳;叶倩平;杨旭;杨学习【摘要】目的对自闭症患者FMR1基因5'非编码区CGG重复序列及重复数进行检测,探索检测脆性X综合征的新方法. 方法应用三引物荧光PCR-毛细管电泳法(Qseq100TM全自动核酸分析系统检测)对111例自闭症患者进行筛查,检测其FMR1基因5'非编码区CGG序列,计算CGG重复数,并与ABI 3500Dx基因分析仪毛细管电泳测序法进行结果比较验证. 结果 111例临床检测为自闭症的样本中,有2例为FMR1前突变携带者,一例为中间型.与3500Dx毛细管电泳测序结果一致. 结论三引物荧光PCR-毛细管电泳法能够用来检测FMR1基因5'非编码区CGG重复序列,在脆性X综合征发病机制及大规模携带者筛查方面都具有一定的应用价值.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2017(009)005【总页数】6页(P319-324)【关键词】自闭症;FMR1基因;脆性X综合征;三引物荧光PCR-毛细管电泳【作者】孙莉;杨琳艳;叶倩平;杨旭;杨学习【作者单位】华北石油管理局总医院检验科,河北,任丘062552;广州市达瑞生物技术股份有限公司,广东,广州510665;广州市达瑞生物技术股份有限公司,广东,广州510665;南方医科大学基础医学院,广东,深圳518110;南方医科大学检验与生物技术学院,广东,广州510515【正文语种】中文脆性X综合征是X连锁不完全显性遗传病［1⁃2］，是最常见的遗传性智力障碍类型之一。

其致病基因为FMR1（fragile X mental retardation 1），位于X染色体上的Xq27.3［3］，该病主要是由于FMR1基因5′非编码区的CGG重复序列动态突变导致。

根据CGG重复数不同可以分为4种类型：全突变（＞200个CGG重复），前突变（55～200个CGG重复），中间型突变（45～54个CGG重复）和正常型（＜45个CGG重复）［4］。

脆性X综合症的基因克隆

脆性X综合症的基因克隆
Connor JM;曾美麟
【期刊名称】《国外医学：遗传学分册》
【年(卷),期】1993(16)1
【摘要】脆性X综合征基因(FMR—1)是儿童智力低下的最常见病因,其特征是在编码精氨酸残基的第一个外显子内有一长的CGG3核苷酸重复(突变)。

本病的男性患者CGG重复明显增多,与其相应的DNA片段显著增大,并可发现有多条粗大的带或模糊区带。

无脆性X综合征表现的男性携带者增大较轻,但女性携带者增大的带和模糊区带较男性携带者明显。

这些所见现在均可用PCR法进行检测,也可用Sourthern法分析FMR—1内的长度突变。

FMR—1可用于检测携带者、产前诊断和进行群体的筛选。

【总页数】3页(P36-38)
【关键词】脆性X综合征;基因克隆
【作者】Connor JM;曾美麟
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R596
【相关文献】
1.人脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的克隆及在HeLa细胞中表达的研究 [J], 刘慧;梁浩;刘明秋;扈廷茂
2.脆性组氨酸三联体基因与HIV-TAT蛋白转导域融合蛋白表达、纯化和多克隆抗体制备 [J], 赵亚;周景师;江少杰
3.脆性X相关基因lcDNA基因克隆及序列测定 [J], 王桂良;何淑雅;陈琼;马云;李斌元;刘鸿;Nanbert Zhong
4.脆性X综合征的基因克隆进展 [J], 贺明伟
5.脆性X综合征的基因克隆 [J], Conn.,JM;曾美麟
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

智低人群中脆性X综合征的细胞,分子遗传学研究

智低人群中脆性X综合征的细胞,分子遗传学研究
赵蓓;傅伯津
【期刊名称】《天津医药》
【年(卷),期】1998(026)012
【摘要】采用ＰＣＲ、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ印迹杂交及细胞遗传学方法，对２３３名原性智力低下患儿进行了ＦＭＲ－１基因的突变分析和Ｘｑ２７．３脆性位点检查。

结果：确诊９名脆性Ｘ综合征患者，占３．８６％，并在部分家庭成员中检出了女性前突变和全突变携带者，排除细胞学方法假阳性１例。

【总页数】3页(P711-713)
【作者】赵蓓;傅伯津
【作者单位】天津市儿童保健所;天津市儿童保健所
【正文语种】中文
【中图分类】R596.1
【相关文献】
1.一例智低及眼部等多发畸形患儿的细胞遗传学研究 [J], 秦梅
2.脆性X综合征的临床及细胞遗传学研究：附两家系分析 [J], 王怀立;王应太
3.一家系二例脆性X综合征患者的临床和细胞遗传学研究 [J], 李艳华;武守山;赵恩禄;肖晓素;轩维存
4.脆性X综合征的细胞遗传学研究 [J], 张铭湘;王锡鲁;张伟
5.脆性X综合征的分子遗传学研究进展 [J], 周海燕;陈勇;倪斌
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。