葱兰和韭兰花色色素种类和质量分数的研究_董博

第３６卷第３期 西南大学学报（自然科学版） ２０１４年３月Ｖｏｌ．３６　Ｎｏ．３Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍａｒ．　２０１４文章编号：１６７３－９８６８（２０１４）３－００３４－０８葱兰和韭兰花色色素种类和质量分数的研究①董　博，　刘　雪，　付　春，陆俊杏，　王通明，　柴友荣西南大学农学与生物科技学院；南方山地农业教育部工程研究中心；重庆市作物品质改良重点实验室；重庆４００７１５摘要：葱兰和韭兰背景性状相似，但花色一白一红，是园林绿化常用的一对姊妹花，有必要对其花色成分类型和色差原因进行研究．该研究提取了葱兰和韭兰的花瓣色素，用特征颜色反应法、紫外－可见分光光度计法和薄层色谱法进行了鉴定．结果表明：葱兰花瓣色素主要为黄酮类的木犀草素，不含花青素；韭兰花瓣色素既含有黄酮类的木犀草素和另一种迁移率大的未知黄酮类成分，还含有花青素类的锦葵色素．韭兰花瓣中总类黄酮质量分数为９．５０５ｍｇ／ｇ，其中花青素（苷）的质量分数为１．３７５ｍｇ／ｇ，葱兰花瓣总类黄酮质量分数为５．２１ｍｇ／ｇ．韭兰的红色花色源于其比葱兰多出的锦葵色素或其糖苷．该结果将深入解析韭兰和葱兰花色物质的结构和生物合成途径、克隆其相关功能基因和开展花色分子育种．关　键　词：葱兰；韭兰；花色色素；种类；含量中图分类号：Ｑ９４９．７１＋８．２５文献标志码：Ａ葱兰Ｚｅｐｈｙｒａｎｔｈｅｓ　ｃａｎｄｉｄａ别名葱莲、玉帘、白花菖蒲莲、韭菜莲、肝风草，韭兰Ｚｅｐｈｙｒａｎｔｈｅｓｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ别名韭菜兰、红菖蒲莲、红菖蒲、假番红花、赛番红花，二者都原产南美洲，都是石蒜科Ａｍａ－ｒｙｌｌｉｄａｃｅａｅ葱帘属Ｚｅｐｈｙｒａｎｔｈｅｓ　Ｈｅｒｂ多年生球茎草本花卉．它们呈鳞茎卵状，叶数枚，线形，簇生，花茎纤细，中空，花单生于花茎顶端，花漏斗状，花被片６，各片近等长，雄蕊６，花柱细长［１］．葱兰和韭兰因为花大（花被直径７．５～９．０ｃｍ），色泽艳丽，花期长，是受人喜爱的观赏植物，世界各国均引种栽培．二者叶丛碧绿，闪烁着洁白和粉红色的花朵，美丽幽雅，适用于林下、边缘或半荫处作园林地被植物，也可作花坛、花径的镶边材料，在草坪中成丛散植，可组成缀花草坪，饶有野趣，也可盆栽供室内观赏［２］．作为园林应用广泛的两种花卉，二者具亲缘关系，形态习性相近，栽培方法相同，是不折不扣的姐妹花［３］．自然界花卉颜色种类繁多，但葱兰和韭兰却分别只有乳白色和粉红色，颜色过于单调．目前国内外对葱兰和韭兰的研究主要集中在药理学［４－５］、病虫害防治［６－８］、繁殖技术［９］及园林应用［１０］等方面，对其花色成色机理的研究未见报道，其花色分子育种更是无从开展．为了使葱兰和韭兰在园林景观中得到更好的应用，本文首次以葱兰和韭兰的花瓣为研究材料，对其花色成色色素进行分析，确定决定其花色的因素，为深入解析葱兰和韭兰花色的机理，进行分子育种提供参考．①收稿日期：２０１３－０３－０６基金项目：重庆市科技攻关计划资助项目（ＣＳＴＣ２００９ＡＢ１０３０）；国家８６３计划专题课题资助项目（２００６ＡＡ１０Ｚ１１０）．作者简介：董　博（１９８７－），男，陕西渭南人，硕士研究生，主要从事植物转基因工程研究．通信作者：柴友荣，研究员，博士生导师．１　材料与方法１．１　试验材料西南大学北区花园内种植的乳白色葱兰和粉红色韭兰，在盛花期，于晴天早晨露水刚干时取花瓣用于试验．槲皮素、山柰酚、木犀草素、柚皮素和异鼠李素标准品购自上海华壹生物科技有限公司；锦葵色素、矢车菊素和飞燕草素购自Ｓｉｇｍａ公司；１．２　葱兰和韭兰花色色素的定性鉴定和定量测定１．２．１　色素化学成分的系统预试：特征颜色反应称取０．１００ｇ花瓣，迅速用液氮研磨至粉末，分别加石油醚、１０％盐酸和３０％氨水约５ｍＬ提取，过滤，观察滤液颜色并进行记录［１１］．各取葱兰和韭兰花瓣０．１００ｇ，迅速用液氮研磨至粉末，分别用甲醇和盐酸化甲醇溶液（ＨＣＬ∶ＭｅＯＨ＝１∶９９，Ｖ／Ｖ）提取２４ｈ［１２－１３］，过滤，定容至２５ｍＬ，各取２ｍＬ提取液，进行下列显色反应［１４－１６］．１）浓盐酸－镁粉反应：加入镁粉少量，然后加入浓盐酸５滴，摇匀，静置１ｈ．２）浓盐酸－锌粉反应：加入锌粉少量，然后加入浓盐酸１０滴，摇匀，静置１ｈ．３）醋酸铅反应：加１．０％Ｐｂ（ＣＨ３ＣＯＯ）·３Ｈ２Ｏ　２ｍＬ，摇匀，静置２ｈ．４）三氯化铁反应：加５．０％ＦｅＣｌ３·６Ｈ２Ｏ　２ｍＬ．５）三氯化铝反应：加１．０％ＡｌＣ１３·６Ｈ２Ｏ甲醇溶液１ｍＬ．６）浓硫酸反应：加１．５ｍＬ浓Ｈ２ＳＯ４，摇匀，再置沸水浴５ｍｉｎ．７）四氢硼钠反应：加ＮａＢＨ４８ｍｇ，再加１．０％盐酸２ｍＬ，摇匀，静置２ｈ．８）碱性试剂反应：加５％Ｎａ２ＣＯ３３ｍＬ，摇匀，密闭静置３０ｍｉｎ，通空气１０ｍｉｎ．９）氨性氯化锶反应：取甲醇１０ｍＬ，加氨水定容至２５ｍＬ，成为被氨气饱和的甲醇液；向样品液中加入０．０１ｍｏｌ／Ｌ　ＳｒＣ１２．６Ｈ２Ｏ甲醇液１０滴，再加被氨气饱和的甲醇液１０滴，摇匀，静置１ｈ．１０）硼酸反应：加１．０％Ｈ２Ｃ２Ｏ４·２Ｈ２０　１０滴，再加２．０％Ｈ３ＢＯ３３ｍＬ．１．２．２　花色素成分的紫外－可见光谱分析（１）花瓣中的叶绿素检测取花瓣０．１００ｇ，迅速用液氮研磨至粉末，用９０％的丙酮∶乙醇（４∶１，ｖ／ｖ）提取，定容至１０ｍＬ，用紫外－可见分光光度计在２００～７００ｎｍ范围内扫描，比色皿光径为１ｃｍ［１７］．（２）花瓣中的类胡萝卜素检测取花瓣０．１００ｇ，迅速用液氮研磨至粉末，用石油醚∶丙酮（１∶１，Ｖ／Ｖ）提取，定容至１０ｍＬ，在２００～７００ｎｍ范围内扫描．（３）花瓣中的类黄酮检测取花瓣０．１００ｇ，迅速用液氮研磨至粉末，葱兰加盐酸化甲醇（ｐＨ＝３）２ｍＬ置于４℃冰箱中提取２４ｈ；韭兰加盐酸∶甲醇（１∶９９，ｖ／ｖ）放在常温下避光提取２４ｈ，然后定容至１０ｍＬ，在２２０～６００ｎｍ范围内扫描［１２，１８］．（４）色素的紫外－可见光谱分析取花瓣０．１００ｇ，迅速用液氮研磨至粉末，葱兰用盐酸化的甲醇提取，韭兰用含１％浓盐酸的甲醇提取，定容至５０ｍＬ，立刻在２００～７００ｎｍ范围内扫描．１．２．３　葱兰和韭兰花色色素的薄层色谱（１）色素萃取５３第３期 董　博，等：葱兰和韭兰花色色素种类和质量分数的研究称量１．０００ｇ葱兰和韭兰花瓣，葱兰用４０ｍＬ的甲醇萃取，韭兰分别用４０ｍＬ　１％的甲醇盐酸（９７ｍＬ甲醇＋３ｍＬ　３６％盐酸）和甲醇萃取，４℃条件下萃取２４ｈ（２）萃取物浓缩与水解将萃取液过滤，放在１００ｍＬ的异形瓶里，用旋转蒸发仪在真空条件下将萃取液蒸发，然后用１ｍＬ甲醇溶解浓缩物，获得浓缩的萃取液．萃取物的水解：取３００μＬ浓缩萃取液，加３００μＬ　２ｍｏｌ／Ｌ盐酸，９０℃水解４５ｍｉｎ，冷却后加１００μＬ异戊醇，１４　０００ｒ／ｍｉｎ下离心３ｍｉｎ后，上相中含有浓缩状态的花青素和其他类黄酮．（３）薄层色谱法鉴定色素①色素分离．用玻璃毛细管线性点滴测试物质和标样到同一块硅胶Ｇ薄层板上，在薄层层析槽里进行色谱分离．甲醇盐酸萃取物的展开剂为正丁醇∶醋酸∶水（４∶１∶２）；甲醇萃取物的展开剂为甲苯∶甲酸乙酯∶甲酸（１０∶８∶１）．②色素鉴定．展开，取出，晾干，在正常光照条件下，通过薄层色谱分离后的距离和标样进行对照，确定化合物种类．喷以１％三氯化铝乙醇溶液，在１０５℃加热５ｍｉｎ，然后将层析后的硅胶Ｇ薄层板置紫外光灯（３６５ｎｍ），观察类黄酮的颜色变化，通过对比标样并参考Ｈａｒｂｏｒｎｅ的方法［１９］进行鉴定．１．２．４　葱兰和韭兰花色色素质量分数的检测（１）韭兰花青素苷的测定取花瓣０．１００ｇ，迅速用液氮研磨至粉末，用含１．０％浓盐酸的甲醇溶液（Ｖ浓盐酸∶Ｖ甲醇＝１∶９９）提取１２ｈ，定容至５０ｍＬ，立刻在波长２００～７００ｎｍ范围内扫描［１９－２０］，每次测量设置３个重复．采用改进的Ｆｕｌｅｋｉ方法［２１］计算花青素苷的质量分数（ｍｇ／ｇ）．花青素苷质量分数／＝Ａ５３５ｎｍ×Ｖ×ｎ９８．２×ｍ式中：Ａ５３５ｎｍ为色素在５３５ｎｍ波长处的吸光度，Ｖ为一定质量的花瓣提取色素时的定容体积ｍＬ；ｎ为比色时稀释的倍数，９８．２为花青素苷色素在５３５ｎｍ波长处的平均消光系数，ｍ为花瓣的质量ｇ．（２）花色色素的总类黄酮质量分数的测定称取花瓣０．１００ｇ放入具塞试管中，迅速用液氮研磨至粉末，加入提取剂为１％浓盐酸的甲醇溶液１０ｍＬ浸提４８ｈ，将浸提液定容至１０ｍＬ，每次测量设置３个重复．根据氯化铝显色法［２２］，黄酮类化合物与ＡｌＣ１３形成黄色的黄酮铝配合物．将标样芦丁于１０２℃烘干１ｈ，准确称取２０．３ｍｇ用少量甲醇溶解，用浓盐酸∶甲醇（１∶９９，ｖ／ｖ）定容至２５ｍＬ，配成０．８１２ｍｇ／ｍＬ标准样品溶液．分别取０，０．２，０．４，０．６，０．８，１．０ｍＬ标准样品溶液，加浓盐酸∶甲醇（１∶９９，ｖ／ｖ）至４ｍＬ，再分别加入１％ＡｌＣ１３·６Ｈ２Ｏ甲醇溶液６ｍＬ平衡１０ｍｉｎ．在２２０～７００ｎｍ范围内，采样间隔１ｎｍ慢速扫描，发现在４０１ｎｍ和２６８ｎｍ处各有一吸收峰，以４０１ｎｍ为检测波长测定标准样品的吸光值，根据标样芦丁溶液体积质量分数和Ａ４０１吸光值绘制标准曲线，求出线性回归方程．芦丁标准曲线方程分别为Ｃ＝０．０５２　７×Ａ４０１ｎｍ＋０．００１　３ Ｒ２＝０．９９９　９Ｃ＝０．０３３　７×Ａ２６８ｎｍ＋０．００４　０ Ｒ２＝０．９８１　８式中：ｃ为芦丁体积质量分数（ｍｇ／ｍＬ）；Ａλｍａｘ为吸光度．经实验后得出，λｍａｘ＝２６８ｎｍ波长处得到的工作曲线，线性关系及精密度数据均不佳，故本实验选取λｍａｘ＝４０１ｎｍ为测定波长．取２ｍＬ提取液加入３ｍＬ　１％ＡｌＣ１３·６Ｈ２Ｏ甲醇溶液平衡１０ｍｉｎ，测定Ａ４０１利用标准曲线线性回归６３西南大学学报（自然科学版） ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ 第３６卷方程计算样品溶液体积质量分数，并计算冷冻样品总类黄酮质量分数，单位为ｍｇ／ｇ．２　结果与分析２．１　葱兰和韭兰花色色素的特征颜色反应葱兰和韭兰花色色素特征颜色反应见表１．葱兰花瓣色素主要是类黄酮，不含花青素，类黄酮化合物则主要是黄酮，可能也含有异黄酮，不含有黄酮醇、查尔酮、橙酮、二氢黄酮和二氢异黄酮，色素可能具备３′，４′，５′－三羟基，所有色素的Ｃ３位无游离羟基．韭兰花瓣色素主要是花青素和类黄酮，类黄酮化合物也主要是黄酮，可能含有二氢黄酮和二氢异黄酮，不含黄酮醇，色素具有邻二酚羟基结构．表１　葱兰和韭兰花色色素的颜色反应和结果韭兰葱兰测　试　结　果石油醚测试无色无色均表现出无色，说明两种花色色素均不含类胡萝卜素［９，１２－１３］．盐酸测试红色微黄色韭兰显示出红色，说明含有花青素，葱兰出现黄色则说明可能是黄酮类化合物．氨水测试黄绿色亮黄色韭兰色素表现的黄绿色是由花青素苷呈现的蓝色和类黄酮呈现的黄色混合而成．浓盐酸－镁粉反应红色退为粉红色微紫红韭兰由红色退为粉红色，说明含有花青素苷．葱兰显示出的微紫红，意味着葱兰可能含有黄酮，可能也含异黄酮（ｉｓｏｆｌａ－ｖｏｎｅ）［１４，２３］．浓盐酸－锌粉反应微紫红淡紫红均呈现出不同程度的紫红，意味着这两种花花色色素不含黄酮醇，可能含二氢黄酮醇［１５，２４－２５］．醋酸铅反应白色沉淀黄色沉淀韭兰产生白色沉淀，葱兰产生黄色沉淀，表明这两种花色色素具备酚羟基，而且不含查尔酮、橙酮，可能具邻二酚羟基或者兼有４－酮基、３－ＯＨ或者４－酮基、５－ＯＨ结构［１４－１５，２３］．三氯化铁反应墨绿色深黄色韭兰和葱兰分别呈现出墨绿色和深褐色，表明这两种花的花色素必然具备酚羟基．并且葱兰的花色色素可能具备３′，４′，５′－三羟基，所有色素的Ｃ３位无游离羟基［１４－１５，２３］．三氯化铝反应黄橙色黄橙色韭兰和葱兰均呈现出黄橙色，证实这两种花花色色素属于黄酮类［１４－１５，２３］．浓硫酸反应深黄色深黄色韭兰和葱兰均呈现出深黄色，再次证实这两种花花色素属于黄酮类［１４－１５，２３］．四氢硼钠反应洋红色无色韭兰呈现出洋红色，证明其含有二氢黄酮和二氢异黄酮．葱兰呈现出无色，证明其不含二氢黄酮和二氢异黄酮［１４－１５，２３］．碱性试剂反应绿色淡黄色韭兰呈现出绿色，证明其含有二氢黄酮；葱兰呈现出淡黄色，通空气后颜色不变，说明其不含二氢黄酮醇［１４－１５，２３］．氨性氯化铯反应黑色沉淀白色沉定意味着两种花花色色素中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物［１４－１５，２３］．硼酸反应无色无色韭兰和葱兰均未发生反应，说明两者花色色素的黄酮可能不含Ｃ５－ＯＨ［１４－１５，２３］．７３第３期 董　博，等：葱兰和韭兰花色色素种类和质量分数的研究２．２　花色素成分的紫外－可见光谱分析２．２．１　花瓣中的叶绿素检测葱兰和韭兰花色色素的丙酮∶乙醇溶液在６６２ｎｍ和６４４ｎｍ处均无吸收峰（表２），这意味着葱兰和韭兰花色色素可能不含叶绿素［１７］．２．２．２　花瓣中的类胡萝卜素检测葱兰和韭兰花色色素的石油醚∶丙酮溶液在４４０ｎｍ和４７０ｎｍ附近均无吸收（表２），说明葱兰和韭兰中不含有类胡萝卜素［１６］．２．２．３　色素的紫外－可见光谱分析韭兰花色色素的１％浓盐酸的甲醇溶液中，在５３０ｎｍ处有一个吸收峰，这为花青素苷的特征峰．在３５２ｎｍ和２６５ｎｍ处的吸收峰为韭兰和葱兰所具备（表２，图１），这表明韭兰与葱兰的花色色素含有相同的非红色黄酮类化合物，韭兰的红色是源于花色色素或其苷，即确证韭兰的花色色素为花青素苷和黄酮类，葱兰花色色素仅为黄酮类；带Ⅰ吸收峰３５２ｎｍ、带Ⅱ吸收峰２６４或２６６ｎｍ，再次证实葱兰色素含黄酮，不含黄酮醇和二氢黄酮［２６］，２６４或２６６ｎｍ处吸收峰的非低强度再次说明韭兰和葱兰色素不含查尔酮、橙酮．表２　葱兰和韭兰用不同溶剂提取的花色色素的紫外－可见光最大吸收峰品　种溶 剂９０％的丙酮∶乙醇石油醚∶丙酮１％浓盐酸的甲醇盐酸化甲醇韭兰无最大吸收峰３４２　５３２，３５０，２６６葱兰无最大吸收峰３３９　３５３，２６４图１　葱兰和韭兰花色色素的紫外－可见光谱（左：葱兰右：韭兰）２．２．４　薄层层析色谱检测实验中分别考察了乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水（５∶３∶１∶１）、甲苯－甲酸乙酯－甲酸（１０∶８∶１）、甲苯乙酸乙酯－甲酸（５∶２∶１）、正丁醇∶醋酸∶水（４∶１∶２）等多个展开系统．结果表明甲醇盐酸萃取物以正丁醇∶醋酸∶水（４∶１∶２），甲醇萃取物以甲苯∶甲酸乙酯∶甲酸（１０∶８∶１）系统分离和展开效果最佳．薄层色谱检测结果表明，葱兰和韭兰含有相同的非红色黄酮类化合物；葱兰花主要成色色素为木犀草素（图２Ａ），韭兰花的主要成色色素为锦葵色素和木犀草素，还含有一种迁移快的待定黄酮类化合物（图２Ｂ）．２．３　葱兰和韭兰花色色素质量分数的检测根据Ｆｕｌｅｋｉ方法计算得出粉红色韭兰色素中花青素苷质量分数为１．３７５ｍｇ／ｇ．本次实验中测得１．０００ｇ葱兰花中含有的总类黄酮质量为５．２１ｍｇ．１．０００ｇ韭兰花中含有的总类黄酮质量为９．５０５ｍｇ．８３西南大学学报（自然科学版） ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ 第３６卷１．槲皮素，２．山柰素，３．木犀草素，４．韭兰，５．葱兰．ａ．锦葵色素，ｂ．矢车菊素，ｃ．飞燕草素，ｄ．韭兰．图２　薄层层析色谱检测结果３　讨　论花色是光线照射到花瓣上穿透色素层时部分被吸收，部分被海绵组织反射折回，再通过色素层而进入我们眼帘所产生的色彩，因此它与花瓣细胞中的色素种类、色素质量分数（包括多种色素的相对质量分数）、花瓣内部或表面构造引起的物理性状等多种因素有关，但花色色素起主要作用［２７］．与花成色有关的色素包括叶绿素、类胡萝卜素、类黄酮、水溶性生物碱及其生物４大类群［２８］．花的颜色主要由类黄酮类色素决定，其中花青素是影响花色的主要因素［２９－３０］．花青素应为花色素及其与糖形成的苷（即花青素苷）［２２］，花青素主要分为３类：花葵素苷（橘黄→砖红色）、矢车菊素苷（红色→粉红）、飞燕草素苷（紫色→蓝色）［２４］．而花青素本身为花色色素之一［３１－３３］，即花青素属于类黄酮．因此，葱兰和韭兰色素均属类黄酮化合物，不含有类胡萝卜素．韭兰显示出粉红色，葱兰为白色，从紫外可见光谱扫描的曲线可以看出，两者只在５３０ｎｍ处（花色苷特征吸收峰）有差异，由薄层色谱检测出韭兰含有锦葵色素，故目前推测韭兰粉红色的色素为锦葵色素或其苷，而葱兰白色花色的色素则为黄色或无色的黄酮类或其苷．特征显色反应，紫外－可见光谱和薄层色谱都是色素成分初步分析常用的方法，具有简单易行、结果直观的特点．在本试验中，葱兰和韭兰色素的特征显色反应，紫外－可见光谱和薄层色谱都出现了相应的结果，但是由于葱兰和韭兰色素成分的复杂性以及该方法的直观性较强，尤其是特征显色反应，使色素成分的判断和鉴定更为困难．所以，在特征显色反应，紫外－可见光谱和薄层色谱试验结果的基础上，结合其他鉴定方法更为必要，比如核磁共振、高效液相色谱和质谱等方法．葱兰和韭兰是很受人们喜爱的两种观赏植物，但对于其花色的育种未见报道．蓝色系是自然界较少的花卉色系，世界上许多园艺育种家都将蓝色花卉的培育作为研究重点．飞燕草素衍生而来的花青素苷，包括矮牵牛素是蓝色花必不可少的色素，飞燕草素的缺乏是自然界缺少蓝色葱莲的重要原因．这些色素的生９３第３期 董　博，等：葱兰和韭兰花色色素种类和质量分数的研究物合成途径成为蓝色花分子育种的突破口．目前已经将类黄酮生物合成途径研究得相当清楚．类黄酮－３′，５′－羟基化酶基因（Ｆ３′５′Ｈ）是合成飞燕草素的关键酶基因，利用基因工程手段将编码Ｆ３′５′Ｈ或调节其活性的基因导入，并促使其在花瓣中表达将为蓝色葱莲的生成提供重要的技术支持．目前已经从矮牵牛、茄子、长春花、马鞭草、龙胆等植物中成功分离出编码Ｆ３′５′Ｈ基因．该结果将深入解析韭兰和葱兰花色物质的结构和生物合成途径、克隆其相关功能基因和开展花色分子育种．此外，本研究结果还为同科或相近的单子叶植物花卉如兰花、水仙等花色物质的研究提供了参考．参考文献：［１］中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志：第１６卷第１分册［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７９：５－７．［２］　邱国金．园林植物［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２００６：２４３－２４５．［３］　李万方，杨勤槐．姐妹花葱兰与韭兰［Ｊ］．中国花卉盆景，２００６，（１）：１０．［４］　ＷＵ　Ｚ　Ｐ，ＣＨＥＮ　Ｙ，ＸＩＡ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｗｏ　Ｎｏｖｅｌ　Ｃｅｒａｍｉｄｅｓ　ｗｉｔｈ　ａ　Ｐｈｙｔｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ　ａｎｄ　ａ　Ｔｅｒｔｉａｒｙ　Ａｍｉｄｅ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｆｒｏｍＺｅｐｈｙｒａｎｔｈｅｓ　Ｃａｎｄｉｄａ［Ｊ］．Ｌｉｐｉｄｓ，２００９，４４（１）：６３－７０．［５］　冯　巍，谈　锋，韭莲组培快繁及其石蒜碱和加兰他敏积累的研究［Ｊ］．西南大学学报：自然科学版，２００８，３０（１２）：１３４－１３８．［６］　周庆椿，卿　励．葱兰菌核病在三峡库区的发生及药剂防治研究［Ｊ］．中国农学通报，２０１１，２７（３）：２４７－２５０．［７］　李　腾．葱兰炭疽病发生及其防治初报［Ｊ］．广东园林，２００６，２８（４）：４９－５０［８］　刘起丽，李春民，张定法，等．优良园林植物葱兰的叶部病害识别及防治［Ｊ］．资源开发与市场，２００９，２５（１２）：１０７２－１０７３．［９］　陈　祥，包　兵．三种污水污泥对两种地被植物和土壤的影响［Ｊ］．西南大学学报：自然科学版，２００９，３１（５）：１３０－１３３．［１０］陈海云，戴益源．韭兰的繁殖技术与园林应用［Ｊ］．现代园艺，２００７，４：３８－３９．［１１］安田齐．花色之谜［Ｍ］．张承志，佟　丽，译．北京：中国林业出版社，１９８９：１－１４９．［１２］雷　明．桂花果类黄酮分离纯化工艺及其抗氧化研究［Ｊ］．西南大学学报：自然科学版，２０１１，３３（４）：７７－８２．［１３］Ｋ　Ｒ马卡姆．黄酮类化合物结构鉴定技术［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９０：１９－５７．［１４］陈孝泉．植物化学分类学［Ｍ］．北京：高等教育出版社，１９９０：５５－６３．［１５］赵昶灵，郭维明，陈俊愉．梅花花色色素种类和含量的初步研究［Ｊ］．北京林业大学学报：自然科学版，２００４，２６（２）：６８－７３．［１６］北京医学院，北京中医学院．中草药化学成分［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９８０：２８８－２９２．［１７］Ｘ　Ｈ波钦诺克．植物生物化学分析方法［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８１：２５５－２５９．［１８］哈本．黄酮类化合物［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８３：５１－８８．［１９］ＨＡＲＢＯＲＮＥ　Ｊ　Ｂ，ＢＡＸＴＥＲ　Ｈ．Ｔｈｅ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ［Ｍ］．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ　Ｐｒｅｓｓ，１９９９．［２０］罗向东，吴丽媛．杜鹃花色素的分离和鉴定分析［Ｊ］．食品科学，２０１１，３２（１３）：１９－２２．［２１］ＦＵＬＥＫＩ　Ｔ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ．Ｉ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ　ｉｎ　Ｃｒａｎｂｅｒ－ｒｉｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９６８，３３（１）：７２－７７．［２２］刈米达夫．植物化学［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８５：１１２－１３３．［２３］高锦明．植物化学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００３：１６６－１６９．［２４］安银岭．植物化学［Ｍ］．哈尔滨：东北林业大学出版社，１９９６：１７８－１８８．［２５］林启寿．中草药成分化学［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７７：３０５－３１１．［２６］谭任祥，孟军才，陈道峰，等．植物成分分析［Ｍ］．北京：科学出版社，２００２：４９８－５００．［２７］赵云鹏，陈发棣，郭维明．观赏植物花色基因工程研究进展［Ｊ］．植物学通报，２００３，２０（１）：５１－５８．［２８］郑志亮．花卉作物的花色基因工程［Ｊ］．福建农业科技，１９９６，１：２３－２４．［２９］夏玉凤．植物花色素代谢途径改变机理及应用［Ｊ］．生物技术通报，２００９，１０：２６－３０．０４西南大学学报（自然科学版） 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１４第３期 董　博，等：葱兰和韭兰花色色素种类和质量分数的研究。