细菌的人工培养方法及意义(平板划线)
平板划线法分离菌种
实验六平板划线法分离菌种一、实验目的1、了解平板划线法分离菌种的基本原理2、练习平板划线法分离菌种的基本操作，掌握无菌操作技术二、实验原理平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。
一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。
通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。
实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。
平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的分离多采用稀释分离法进行菌种的分离纯化。
具体的划线形式有多种，这里仅介绍一种经过长期实践并证明可获得良好实验效果的方法：将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。
由此可知，这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。
鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。
这样的培养基称之为鉴别培养基。
例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。
（参考GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数）其配方中含有乳糖、伊红和美蓝，用以鉴别肠道病原菌及其他杂菌。
伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，由于细菌带正电荷，所以被伊红着色。
在大肠埃希氏菌中因为伊红与美蓝结合，所以菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且具有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝与伊红结合，所以菌落为淡紫色。
微生物平板划线法
3
细菌接种方法
常见的几种细菌的培养和基接种方法举例
平板划线接种 法 菌种 培养 基 葡萄球菌和大 肠杆菌的混合 菌液 普通琼脂平板
斜面培养基 接种法
液体培养基 接种法 大肠杆菌培养 物枯草杆菌培 养物 普通肉汤 培养基
2
培养基
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植 物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若 要研究其中某种细菌，就必须将各种细菌进行 分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当 细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养 基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌 需要不同的培养基进行培养。
培养基的种类
平板划线法——接种方法
（三）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液 的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试 管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中， 取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管 管口及试管塞再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管 塞，放至原来的位置。
平板划线法——接种方法
（一）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种 的菌名、接种者姓名、日期等。
平板划线法——接种方法
（二）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环 ，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接 种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延 至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然 后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随 后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接 种环移开火焰，待其冷却。
平板划线法——接种方法
（四）分离划线接种细菌（四区接种法） （1）左手手掌持琼脂平板培养基，大 拇指与中指轻轻将平皿盖子拿起，右手持接 种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌 薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线 时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以 腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。
细菌的人工培养方法
细菌的人工培养方法[适用对象]生物工程专业[实验学时] 4学时一、实验目的了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。
初步掌握各种培养基接种技术；观察细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。
二、实验原理培养基是用人工方法将微生物生长繁殖所需的多种营养物质调配在一起，形成的一种营养物质的混合物，用以分离、传代和培养细菌。
按培养基的用途分为基础（普通）培养基、营养培养基、鉴别培养基，选择培养基、厌氧培养基等。
按培养基的物理形状又分为液体、固体和半固体三种。
三、仪器设备三角烧瓶、天平、试管、平皿、高压消毒灭菌器。
四、相关知识点培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多。
但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
不同的微生物在固体、半固体和液体培养基中能表现出各自特有的培养特征，这些特征可以作为不同种类微生物的鉴别特征之一。
了解它们的培养特征、掌握其生长规律对识别、控制和利用微生物具有重要价值。
五、实验步骤（一）常用培养基的制备1、普通液体培养基(1)将新鲜的精牛肉除去脂肪和筋膜制成肉馅，取500克牛肉馅加l000ml蒸馏水，置4℃冰箱浸泡过夜，使牛肉中的水溶性营养物质充分浸出。
(2)次日将浸泡过夜的牛肉馅加热煮沸30分钟，放凉，使残余的脂肪凝固，然后用纱布和滤纸过滤，最后将滤液补足为原量，此种液体为牛肉浸汁。
(3)取1 000ml牛肉浸汁加蛋白胨10克，氯化钠5克加热溶解，冷至50℃左右时用氢氧化钠调整pH至7．6，再煮沸10分钟(因牛肉浸汁中部分碳水化合物，经加热破坏产酸，影响pH；产生多磷酸盐，培养基不澄清)待冷却后，再调整pH至7．6，然后以滤纸过滤，滤液必须澄清，此种液体称为肉汤培养基。
(4)将肉汤培养基分装于试管或三角烧瓶中，塞好试管和瓶塞，包装好后，用15磅(121℃)蒸气15～30分钟灭菌。
2-5动物微生物--细菌的人工培养(实验一)
1、3：有动力 2：无动力
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（2）在琼脂斜面上长成菌台。
a丝状
b刺毛状 c念珠状 d扩展状
e树状 f假根状
2、在液体培养基中的生长情况
（1）表面生长：液体清晰，细菌生长在 液面上形成菌膜。 （2）混浊生长：液体均匀混浊或有少量 沉淀。 （3）沉淀生长：液体清晰，细菌生长在 管底，形成沉淀。
三. 细菌在液体培养基中的生长情况
（1）在平板上形成肉眼可见的细菌集团， 称为菌落，观察菌落的大小、形状、边缘、 表面、颜色、溶血等情况。
Colony morphology
¹ ÌÅ à Ñ øÏ ù íµ ± æ Ï ¸Î ú ¾ úÆ ä Ï ¸ ¾ ú ¸» ° û µ Ä çÃ × Ó Ï Ô ¢¾ ¾ µ Í ¼ ¬Â
实验一
细菌的人工培养
一、实验目的
1、掌握平板划线、斜面、液体和半固体 培养基等各种接种方法。 2、熟悉接种细菌用具、接种细菌的环境 要求和无菌操作要领。
3、熟悉细菌在各种培养基的生长现象。
二、实验原理
1、细菌在适宜的生长环境下，如营养、 酸碱度、温度和氧等条件下进行生长繁殖。 2、细菌的分离培养是根据细菌在固体 培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个 细胞繁殖而成的集合体。因此可通过调取单 菌落而获得一种纯培养。
菌膜
对照
菌沉淀
均匀浑浊
3、在半固体培养基中的生长情况 （1）有鞭毛的细菌，由于能运动，在半 固体培养基内沿穿刺线弥漫生长，原来的 穿刺线不清。 （2）无鞭毛的细菌，因不能运动，接种 后仍沿穿刺线生长，穿刺线与周围界限清 晰。
细菌在半固体培养上的培养特征
abd 沿穿刺线生长
cef运动生长
三. 细菌在半固体培养基中的生长情况
细菌的人工培养
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理；
常规高压蒸汽灭菌： 1.05kg/cm2,121.3℃15-30分钟；0.56kg/cm2,112.6℃15-30分钟
培养基制备的一般程序
调配
培养基灭菌
★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟
溶化
矫正pH
★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 过滤澄清 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 分装 灭菌 检定 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌
保存
1、选用和设计培养基的原则和方法
目的明确 营养协调 理化条件适宜
经济节约
1）目的明确
根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。
培养化能自养型的氧化硫杆菌的培养基组成为： S 10g MgSO4.7H2O 0.5g NH4)2SO4 0.4g CaCl2 0.25g H2O 1000ml FeSO4 0.01g H2PO4 4g
液体培养基
不加任何凝固剂
大规模工业生产及在实验室进行微生物的 基础理论和应用方面的研究
含有一般微生物生长繁殖所 需的基本营养物质的培养基 按 用 途 不 同 划 分 基础培养基
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的 一类营养丰富的培养基。特殊营养物质包括血 液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等 在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质， 用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体 抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物 中分离出来的培养基 的生长
4）经济节约
以粗代精
以氮代朊
以野代家
以废代好 以简代繁
以纤代糖
微生物平板划线试验
在液体培养基中加入一定量凝固 剂，使其成为固体状态，琼脂含 量一般为1.5%-2.0%
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基 半固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分 离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
液体培养基
不加任何凝固剂 大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
平板划线实验实习
一、相关基础理论－－细菌的培养
一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖， 以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为 了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除 采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外， 掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环 节。
1、培养基
圆形、突起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽， 不透明菌落，直径1～2mm
4、平板划线接种法
图2-4 灭菌接种环
4、平板划线接种法
（3）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的 试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞， 将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取 一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口 再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来 的位置。
2、液体培养基接种方法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及 接种的肉汤管。 （3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再 伸入肉汤管内，在接近液面管壁处轻轻研磨， 蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中。塞好试 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。 （4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉 汤管放37℃温箱培养，18～24小时后观察生长 情况。
细菌的人工培养一般检验方法主要动物细菌
（3） 致病性与抵抗力
致病力主要是毒素和酶,所 致的疾病为畜禽的化脓性疾 病，如：创伤感染、脓肿、 皮炎、乳房炎、败血症等。
抵抗力是在不形成芽胞的 细菌中是最强的，80℃30分 钟才被杀死，碳酸效果最好。
对青霉素、庆大霉素高度 敏感。耐药菌株逐年增多。
（4）检查： 根据病型采集病料，如取血液，乳汁，脓汁等
链球菌在血平板上菌落特征
丙链
甲链
乙链
（3）致病性与抵抗力： 产生多种酶和外毒素，不同的血清群的链球菌所致动
物的疾病不同，引起急性败血症，肺炎，淋巴结脓肿，脓 毒败血症。
本菌抵抗力不强，青霉素是首选药物。
（4）检查 根据不同的疾病，采集相应的病料，如取血液，乳汁，
脓汁、渗出物等。
• 1、直接涂片镜检：链状排列的球菌。 • 分离培养：病料接种于血液琼脂平板。
菌 膜
对
液体培养基
照
菌沉 淀
均匀浑浊
固体培养基
半固体培养基 粘液型菌落
细菌的生长表现
菌落：细菌在固体培养基上定点繁殖时，形成孤立的、肉 眼可见的堆积物。 表现：大小、形态、透明度、隆起度、度、湿润度，表面 光滑、粗糙、有无光泽。 菌苔：许多菌落融合成一片。
培养基的基本要求
1、有丰富的营养物质 2、PH、水分 3、均匀透明，易于观察。 4、经过灭菌和无菌检验
破伤风梭菌
猪丹毒杆菌G+
能力单元一（ 1-3）
细菌的人养基是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖 或积累代谢产物营养基质。
根据培养基的用途来分
基础培养基：满足一般微生物生长繁殖所需要的营养物质。 牛肉膏蛋白胨培养基是最常用的基础培养基。
营养培养基:在自然界中各种微生物通常是混杂在一起的， 了解了某一些微生物的营养要求，配制适合这种微生物生长 而不适合其他微生物生长的培养基，就达到了从自然界中分 离这种微生物的目的，这种培养基就称为营养培养基。一般 常加入血、血清或动植物提取液等。－－－－“投其所好”
细菌的接种与培养方法操作规程
细菌的接种与培养方法操作规程一、细菌的接种根据待检标本的来源、培养目的及所用培养基的性状，采用不同的接种方法。
l、平板画线分离法（1）、连续画线分离法此法主要用于杂菌不多的标本。
用接种环取标本少许，于平板l/5处密集涂布，然后回来作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。
（2）、分区画线分离法此法适用于杂菌较多的标本。
先将标本均匀涂布于平板边缘一小区(约占平板1/5)，再在二、三区依次连续画线，每画线一区均将接种针灭菌一次。
每一区的划线均接触上一区的接种线1～2次。
以获得单个菌落。
2、斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养。
用灭菌接种针取菌少许，从培养基斜面底部向上划一直线，然后从底部向上作连续曲线画线。
一直画到斜面顶端。
3、液体接种法多用于一些液体生化试验管的接种。
用灭菌接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨，使细菌混合于液体中。
4、穿刺接种法主要用于半固体培养基、明胶及双糖铁的接种。
用接种针取菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针原路退出。
5、倾注平板法临床上主要用于尿液等标本的细菌计数。
将标本经适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，倾入已经溶化并冷却至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。
6、涂布接种法常用于纸片药物敏感性测定，也可用于被检标本的细菌计数。
加定量的被检菌液于琼脂平板表面，然后用灭菌的棉签反复涂布几次，使被检菌均匀分布在琼脂平板表面。
然后贴上药敏纸片培养，或直接培养观察结果。
二、细菌培养方法根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同的环境进行培养。
常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。
1、需氧培养法本法是临床细菌室常用的培养方法，即将已经接种好的平板、斜面和液体培养基等。
置于35℃温箱中孵育18～24小时。
2、二氧化碳培养法本室用CO2孵箱将已接种好的培养基置于CO2孵箱内培养。
菌种划线平板标准操作规程
菌种划线平板标准操作规程菌种划线平板是一种常用的微生物学实验方法，主要用于菌种的分离和纯化。
为了保证实验的准确性和结果的可靠性，需要按照一定的操作规程进行操作。
如果存在多个菌种，则需准备相应数量的平板。
2. 准备培养基：根据菌种的生长特性选择合适的培养基，并按照菌种需求配制。
常用的培养基包括营养琼脂、肉汤葡萄糖琼脂平板等。
3. 准备培养器具：清洁培养皿、培养管、移液器、吸球等，并对其进行高温高压灭菌处理，确保无菌。
4. 暴露培养器具：开盖的培养皿、培养管等暴露在空气中易被细菌污染，使用前需进行烧烤消毒。
5. 准备菌种：选择需要划线的菌种，将其提取到无菌环境下，用吸液器或移液器进行分装，分装至不同的培养皿中。
二、实验操作步骤1. 消毒操作台：将操作台表面擦拭，用75%酒精喷洒，待酒精挥发后进行紫外线照射消毒，照射时间约15-30分钟。
2. 划线操作：将已经配制好的培养基倒入无菌平板中，使其均匀分布，待其固化后（约15-30分钟），开始划线。
(1) 布置待划线的培养平板：将待划线的培养平板放在炉盘或搁板上，不要弄湿培养平板。
(2) 取菌种：取一支已分装好的菌种，用吸球或移液器吸取适量的菌液，然后轻轻地均匀涂抹于培养平板上。
(3) 用划线针划线：用消毒的划线针，在培养平板上进行划线操作。
先将划线针消毒，再从菌液中取菌，然后从培养皿的一个角划至另一个角，最后将划线针消毒。
(4) 过程控制：整个划线操作应迅速、准确，并且尽量避免划重叠线。
3. 清理操作台：划线操作完成后，用75%酒精擦拭操作台表面，然后喷洒消毒液，待其挥发后，注意再次使用紫外线照射消毒。
三、实验后的处理工作1. 培养平板的封存：将培养平板进行密封，避免外界细菌的污染。
可使用透明胶带或锡纸进行包裹。
2. 培养平板的保存条件：将密封好的培养平板放入恒温培养箱中，设定适当的温度（如37℃），使其进行培养。
3. 培养结果的观察和分析：经过一定时间的培养后，观察培养平板上的菌落情况，分析并鉴定相应的菌种。
2平板划线法分离菌种与斜面接种培养
H.塞管塞 取出接种环，灼烧试管口， 并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时勿用 试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入 不洁空气。 I.灼烧接种环 放下接种环，再旋紧棉花塞。 （4）培养
双管移植法
双管移植法
五. 注意事项：
1. 划线时，环口与平板间的夹角不宜太大，动作要轻 巧，以防划破平板。 2. 用于划线的平板，在倒平板的时候不能倒得太薄，最 好在使用前一天倒好。为防止平板表面产生冷凝水， 倒平板时，培养基温度不要太高。 3. 分段划线时，在每次划线后，都需将接种环进行灼 烧，待冷却后再进行下一次划线。 4. 接种前，务必核对菌种和菌株名，防止混淆或错接菌 种。 5. 接种环自菌种管移至待接斜面过程中，切莫接触其他 物品，以免斜面接种污染。 6. 接种环在接种前需用酒精灯进行灼烧，灼烧后必须等 接种环完全冷却后，才能进行接种，以防止所接菌种 失活。
E.待接种环冷却 将灼烧过 的接种环伸入菌种管，先使 环接触没有长菌的培养基部 分，使其冷却。
F.取菌 接种环冷却后，轻轻 沾取少量菌体或胞子，然后 将接种环移出菌种管，注意 不要使接种环的部分碰到管 壁，取出后不可使带菌接种 环通过火焰。
G.接种 火焰旁将沾有菌种的接种环伸 入另一支待接斜面。从斜面培养基底部 向上作“Z”形密集划线，勿划破培养基, 也可用接种针在斜面培养基的中央拉一 条直线作斜面接种，直线接种可观察不 同菌种的生长特点。
b用接种环以无菌操作挑取样品一环先在平板培养基的一边作第一次平行划线34条再转动培养皿约70角并将接种环上剩余物烧掉待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线划线完毕后盖上皿盖倒置于适温培养
试验二 平板划线分离菌种与斜面接 种培养
细菌培养的实验报告
1. 学习并掌握细菌培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握平板划线法分离纯种细菌的方法。
3. 观察细菌菌落特征，初步判断细菌种类。
二、实验原理细菌培养是研究微生物的基本方法之一。
通过提供适宜的生长条件，使微生物在人工控制的条件下生长繁殖，从而观察其形态、生理和生化特性。
本实验采用平板划线法分离纯种细菌，通过观察菌落特征，初步判断细菌种类。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌剪刀、无菌镊子、酒精灯、培养箱等。
四、实验步骤1. 准备工作：将牛肉膏蛋白胨培养基倒入培养皿中，待其凝固后倒置放置。
2. 接种：用无菌棉签蘸取金黄色葡萄球菌，轻轻划线于平板表面，重复此操作，直至平板表面划有多个交叉的线条。
3. 培养与观察：将接种后的平板倒置放入37℃培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。
4. 记录与分析：观察菌落特征，如颜色、形状、大小、边缘等，初步判断细菌种类。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌：菌落呈金黄色，圆形，光滑，边缘整齐，中间隆起。
2. 大肠杆菌：菌落呈乳白色，圆形，光滑，边缘整齐，中间稍凹。
3. 枯草芽孢杆菌：菌落呈白色，圆形，表面有细小绒毛，边缘不整齐。
根据菌落特征，可以初步判断金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，大肠杆菌为革兰氏阴性菌，枯草芽孢杆菌为革兰氏阳性菌。
通过本次实验，我们掌握了细菌培养的基本原理和操作步骤，学会了平板划线法分离纯种细菌的方法，并初步掌握了观察细菌菌落特征、判断细菌种类的技能。
在实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。
七、注意事项1. 操作过程中应保持无菌状态，避免污染。
2. 划线时应轻柔，避免菌落相互混合。
3. 观察菌落特征时，应注意颜色、形状、大小、边缘等方面的变化。
4. 实验过程中，如出现疑问，应及时与老师沟通。
八、实验拓展1. 探究不同温度、pH值、营养物质对细菌生长的影响。
细菌的人工培养技术操作方法
细菌的人工培养技术操作方法
细菌的人工培养技术操作方法一般包括以下步骤：
1. 准备培养基：选择适当的培养基，如琼脂培养基、液体培养基等，并根据需要添加适当的营养物质和抗生素。
2. 无菌操作：在无菌条件下进行操作，使用无菌工具和无菌培养器具，并对培养瓶、试管等容器进行高压蒸汽灭菌或通过过滤器灭菌。
3. 接种菌液：将需要培养的细菌菌株接入培养基中，可以通过接种环、接种棒等工具在培养基表面均匀涂抹或在培养液中加入适量菌液。
4. 培养条件控制：根据所培养菌株的需求，调整适当的培养条件，如温度、氧气浓度、光照周期等。
5. 培养时间控制：根据所培养菌株的生长速度和特性，确定适当的培养时间，通常在培养基上培养24小时以上。
6. 观察生长情况：定期观察培养物的生长情况，可以通过肉眼观察或借助显微镜观察细菌的数量和形态。
7. 存储和分离：根据需要，可以对培养物进行分离纯化，并采用液氮或低温冷
冻保存细菌菌株。
注意事项：
- 严格遵守无菌操作规范，防止外界的细菌污染。
- 对于不同的细菌菌株，根据其生长特性和需要，进行适当的培养条件的调整。
- 定期清理培养器具和培养环境，防止细菌过度生长或污染。
- 在操作培养菌液时要小心避免产生溅射和气溶胶，防止细菌感染。
- 对于属于生物安全级别2以上的病原菌，应遵守相关的安全操作规范和实验室条件。
《医学微生物学》细菌的人工培养实验
《医学微生物学》细菌的人工培养实验[目的]1．掌握平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等各种接种方法。
2．掌握接种细菌用具、接种细菌的环境要求和无菌操作要领。
3．熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。
4．熟悉细菌和二氧化碳培养方法。
5．熟悉常用的厌氧菌培养技术。
6．了解培养基制备的基本过程。
[内容]（一）、培养基制备技术[材料]1．试剂：牛肉膏、氯化钠、蛋白胨、琼脂粉、抗凝绵羊血、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、葡萄糖、乳糖、甘露醇、柠檬酸钠、硫酸镁、磷酸二氢铵、硝酸钾、硫代硫酸钠、柠檬酸铁、硫酸。
亚铁、尿素、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中性红、酚红、lmol ／L NaOH、lmol／L HCl。
2．器材：500ml锥形瓶、500ml量筒、10ml、5ml和lml吸管、精密pH试纸、华氏试管、硅胶塞、天平、高压蒸气器、血清凝固器、脱脂棉、滤纸、漏斗、无菌平皿。
[方法]1．培养基制备的基本过程包括调配成分、溶解、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、质量检查和保存。
（1）调配成分：按培养基组成准确称取各成份用量，放入锥形瓶或大容量烧瓶中，加一定量蒸馏水，使其充分混合。
应注意染料、胆盐和指示剂等应在矫正pH后加入。
（2）溶解：将调配好的混合物在沸水浴或流动蒸气灭菌器中，使其完全溶解。
不可将培养基装在铜铁容器中加热，因培养基中含铜量超过0.3mg／L时，细菌不易生长；含铁量超过0.14mg／L时可抑制细菌毒素的产生。
（3）矫正pH：一般将培养基的pH调至7.2～7.6左右。
经高压灭菌后其pH可发生0.1～0.2变动。
若用NaOH矫正，高压灭菌后pH下降0.1～0.2；若用Na2CO3矫正，高压灭菌后pH升高0.1～0.2。
（4）滤过澄清：自配的培养基通常有一些混浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。
液体或半固体培养基常用滤纸过滤；固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。
（5）分装：①基础培养基：一般分装于锥形瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等；②琼脂斜面：通常在熔化后分装于试管，量约为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3，且保持试管下端1cm柱高；③半固体培养基：分装量为试管量的1/4-1/3，加塞灭菌后趁热直立凝固④琼脂高层培养基：分装量为管长的2/3(接种厌氧菌用)，灭菌后趁热直立凝固；⑤琼脂平板无菌分注：先将灭菌琼脂熔化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内(内径90mm的平皿约13～15min)，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。
细菌的人工培养方法及意义(平板划线)
精品课件
高压蒸 汽灭菌
培养基的分类：
按 固体培养基
物
理
状 半固体培养基 态
不
同
划 分液体培养基来自在液体培养基中加入一定量凝固剂，使 其成为固体状态，琼脂含量一般为 1.5%-2.0%
固体培养基常用来进行微生物的分离、 鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴定及 噬菌体效价滴定
第三单元 细菌的人工培 养
主讲人：齐雪茹 廊坊职业技术学院动物科学系
精品课件
精品课件
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。 在工农业生产中的应用：细菌在培养过程产生多种代谢
产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、有 机溶剂、酒、酱油、味精等产品。
在基因工程中的应用：制备出胰岛素和干扰素等生物制
不加任何凝固剂
用于增菌，大规模工业生产及在实验 室进行微生物的研究
精品课件
固体培养基
半固体培养基
精品课件
液体培养基
基础培养基 按 营养培养基 用 途 不 选择培养基 同 划 分 鉴别培养基
特殊培养基
含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。 比如 肉汤培养基。
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一 类营养丰富的培养基。如血琼脂培养基。
在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学 物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于 所需微生物的生长。用来将某种或某类微生物 从混杂的微生物群体中分离出来。如SS琼脂培 养基。
利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应 不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼 脂培养基。
如厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。
菌种的分离纯化技术——平板划线法
态结构等特征的子细胞的群落。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每 个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养
温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
菌苔：细菌在固体培养基接种线上由母细胞繁 殖长成的一片密集的、具有一定形态结构特征 的细菌群落，是许多菌落连成一片形成的 细菌在斜面培养基接种线上长成的一片密集的 细菌群落，不同属种细菌的菌苔形态是不同的
3.划线方法
⑴用接种环以无菌操作挑取悬液一环，先在平板培养基的一边作第 一次平行划线3-4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩
余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再
用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次 平行划线部分作第四次平行划线A)。划线完毕后，盖上皿盖，倒
通过本次实验你学到了什么技术?请
列举出来并把它的技术要点写出来.
讨论
培养皿为什么要倒置培养?
斜线划线为什么要在变换角度时灼烧接种环?
曲线划线为基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手 将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰； 然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可 将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。 如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞 则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打 开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养 皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面 上，待凝后即为平板。
置于温室培养。
(2)将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连 续划线(图)。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温 室培养。
实验二 细菌的人工培养 最后
本次实验课结束
作业看结果后由组长收齐交上来，值日同学留 下 再见！
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理
高压蒸 汽灭菌
培养基的分类：
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基
在液体培养基中加入一定量凝固剂，使 其成为固体状态，琼脂含量一般为 1.5%-2.0% 固体培养基常用来进行微生物的分离、 鉴定、活菌计数及菌种保藏
1.熟悉培养基的成分、类型和作用; 2.掌握细菌平板划线分离法的原理、 步骤及结果; 3.掌握细菌在液体培养基的三种生长 状态; 4.了解细菌的自然界分布.
细菌的人工培养
一、培养基
概念: 培养基是用人工方法将多种营养物质按 照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。 任何培养基都应该具备微生物生长所需要六 大营养要素：
细菌在正常人体的分布
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。
在工农业生产中的应用：细菌在培养过程产生多种代谢
产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、
有机溶剂、酒、酱油、味精等产品。
在基因工程中的应用：制备出胰岛素和干扰素等生物制
剂。
问题与讨论
1.培养基按物理性状分为几种？决定相应物理性状的物 质是什么？不同物理性状的培养基主要用途如何？ 2.什么是菌落？分离培养时，如何识别琼脂平板上的目 的菌，还是污染的杂菌菌落？ 3.液体培养基中细菌的生长状态有哪几种？各举一例说 明。
在液体培养基中加入一定量凝固剂使其成为固体状态琼脂含量一般为1520固体培养基常用来进行微生物的分离鉴定活菌计数及菌种保藏琼脂含量一般为0305观察微生物的运动特征分类鉴定及噬菌体效价滴定不加任何凝固剂用于增菌大规模工业生产及在实验室进行微生物的研究培养基的分类
微生物平板划线法
平板划线法——接种方法
（三）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液 的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试 管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中， 取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管 管口及试管塞再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管 塞，放至原来的位置。
2
培养基
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植 物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若 要研究其中某种细菌，就必须将各种细菌进行 分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当 细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养 基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌 需要不同的培养基进行培养。
培养基的种类
按其物理性状分为： 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 按用途分为： 基础培养基、加富培养基、选择培 养基、鉴别培养基
3
细菌接种方法
常见的几种细菌的培养和基接种方法举例
平板划线接种 法 菌种 培养 基 葡萄球菌和大 肠杆菌的混合 菌液 普通琼脂平板
斜面培养基 接种法
液体培养基 接种法 大肠杆菌培养 物枯草杆菌培 养物 普通肉汤 培养基
平板划线法——接种方法
（2）旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以 杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面 以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行 划线（约占平板1/5），此视为二区。
平板划线法——接种方法
（3）旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并 使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（ 约占平板1/4），此为三区。 （4）旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌 ，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此 视为四区。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐 渐稀释的目的。
微生物接种方法划线法接种及注意事项平板划线接种.pptx
主讲：王娟
目录页
食品营养与检测专业教学资源库
划线法接种定义 试管斜面划线法接种
平板划线法接种
— 1—
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划
• 一、划线接种法定义
线
接 种
定义：
法
及
将微生物的纯种或含菌材料用接种环或接种针挑取，然后在固
注
体培养基表面画直线或曲线，达到接种的作用。斜面接种和平
项
— 1—
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种
2.工作过程与标准要求
法 及 注 意
（1）制备平板 采用无菌操作，在准备好的无菌培养皿中倾入熔化培养基，将培养皿 放在桌面上轻轻前后左右晃动，静止冷凝成平板。
事
项
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划
• 三、平板划线接种
线 接 种 法 及 注 意
注
意
事
项
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种 法 及
2.工作过程与标准要求
（3）灼烧试管口 让试管口缓缓过火灭菌2~3次(切勿烧得过烫)。
注
意
事
项
— 1—
食品营养与检测专业教学资源库划Leabharlann • 三、平板划线接种线
接 种 法 及 注 意
2.工作过程与标准要求
（4）取菌 将灼烧过的接种环伸入试管，先使环接触管内壁，使其冷却。 将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。 将试管口通过火焰，并塞上棉塞。
2.工作过程与标准要求
（2）取菌 ①手持试管，灼烧接种环
细菌的人工培养
材
工具：接种环、接种针
料
菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 培养基：
普通平板培养基、斜面培养基、半固体培养基
12
材
料
接种环、接种针
13
材
料
普通平板培养基
斜面培养基 (2-3%琼脂)
半固体培养基 14 (0.2-0.5%琼脂 )
材 料 分 配
分组 菌种 两人一组 一位取金葡菌，另一位取大肠杆菌 一块普通平板/每人 培养基
过滤澄清
质量检 查和保存
灭菌
分装
7
细菌培养方法
需氧培养法 二氧化碳培养法
厌氧培养法
8
细菌培养方法
电热恒温培养箱
二氧化碳培养箱
9
细菌培养方法
烛缸二氧化碳培养法
厌氧袋
10
操 作 内 容 *
操作内容 平板分区划线 斜面纯培养 半固体培养 目 的 分离细菌 增菌及菌种保存 观察动力和菌种保存
实验二
细菌的人工培养
1
目
的
1.掌握接种细菌用具、接种细菌的环境要求 和无菌操作要领。 2.掌握平板划线法、斜面和半固体培养基等 各种接种方法。 3.熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。 4.了解培养基制备的基本过程。
2
细菌人工培养目的
感染性疾病的病原学诊断
鉴定细菌，指导临床用药。
细菌学研究
一支斜面培养基/每人 一支半固体培养基/每人
15
实 验 流 程
领取菌种 及培养基
分别进行平板、 斜面及半固体培 养基接种，然后 贴上标签。
37度恒温 箱培养 18～24小 时后观察 结果。
16
实 验 方 法 及 结 果
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固体斜面培养基接种
液体培养基接种
细菌的人工培养
三、细菌生长结果观察
固体琼脂平板上
菌落 菌苔
EMB琼脂平板上大肠菌 SS琼脂平板上大肠
菌落具有金属光泽
杆菌为粉红菌落
➢半固体培养基观察细菌动力
无运动性 有运动性
表面生长 混浊生长 沉淀生长
➢液体培养基上生长现象
复习思考题：
1、培养基按用途分有哪些种类？麦糠凯琼 脂、SS琼脂分别属于哪类?分别用于那些菌 的分离培养？
•
9、一个人即使已登上顶峰，也仍要自 强不息 。上午 9时9分 46秒上 午9时9 分09:0 9:4620. 12.11
• 10、你要做多大的事情，就该承受多大的压力。12/11/
2020 9:09:46 AM09:09:462020/12/11
• 11、自己要先看得起自己，别人才会看得起你。12/11/
剂。
细菌的人工培养
一、培养基 二、细菌接种技术 三、细菌生长结果观察
细菌的人工培养
一、培养基
概念: 培养基是用人工方法将多种营养物质按 照各类微生物生长的需要而合成的一种混合养料。
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大 营养要素：
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理
（2）右手拿接种 环，在火焰上烧灼 灭菌，特别是箍处。
（3）火焰边取下 两个棉塞，不能放 下；烧灼管口一周。
（4）将接种环伸 入试管内，冷却后， 轻轻挑取少量菌体， 立即将接种环抽出。
（5）火焰旁将沾有 菌种的接种环迅速伸 到斜面培养基的底部， 由里向外画蛇形细线， 线要画得细些。
（6）抽出接种环后， 烧管口，塞棉塞，接 种环灭菌。
•
3、越是没有本领的就越加自命不凡。 20.12.1 109:09: 4609:0 9Dec-20 11-Dec-20
•
4、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的 错儿。 09:09:4 609:09: 4609:0 9Friday , December 11, 2020
•
5、知人者智，自知者明。胜人者有力 ，自胜 者强。 20.12.1 120.12. 1109:0 9:4609: 09:46D ecembe r 11, 2020
不加任何凝固剂
用于增菌，大规模工业生产及在实验 室进行微生物的研究
固体培养基
半固体培养基
液体培养基
按用途不同划分
基础培养基 营养培养基 选择培养基 鉴别培养基 特殊培养基
含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养 物。比如 肉汤培养基。
在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一 类营养丰富的培养基。如血琼脂培养基。
谢 谢 大 家 2020 9:09 AM12/11/2020 9:09 AM20.12.1120.12.11
• 12、这一秒不放弃，下一秒就会有希望。11-Dec-2011 December 202020.12.11
• 13、无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异 纸上画饼充饥，无补于事。Friday, December 11, 202011
2、增菌培养用什么类型培养基？分离细菌 用什么类型培养基？
3、什么是菌落？分离菌落的意义？ 4、人工培养细菌的意义？
•
1、有时候读书是一种巧妙地避开思考 的方法 。20.1 2.1120. 12.11Fr iday, December 11, 2020
•
2、阅读一切好书如同和过去最杰出的 人谈话 。09:0 9:4609: 09:4609 :0912/ 11/2020 9:09:46 AM
在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学 物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于 所需微生物的生长。用来将某种或某类微生物 从混杂的微生物群体中分离出来。如SS琼脂培 养基。
利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应 不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼 脂培养基。
如厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。
细菌的人工培养
第三单元 细菌的人工培养
主讲人：齐雪茹 廊坊职业技术学院动物科学系
人工培养细菌的意义
在医学中的应用：诊断；细菌鉴定；生物制品。 在工农业生产中的应用：细菌在培养过程产生多种代谢
产物，经过加工处理，可制成抗生素、维生素、氨基酸、有 机溶剂、酒、酱油、味精等产品。
在基因工程中的应用：制备出胰岛素和干扰素等生物制
高压蒸 汽灭菌
按物理状态不同划分
培养基的分类：
固体培养基 半固体培养基
液体培养基
在液体培养基中加入一定量凝固剂，使 其成为固体状态，琼脂含量一般为 1.5%-2.0%
固体培养基常用来进行微生物的分离、 鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴定及 噬菌体效价滴定
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6、意志坚强的人能把世界放在手中像 泥块一 样任意 揉捏。 2020年 12月11 日星期 五上午 9时9分 46秒09 :09:462 0.12.11
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7、最具挑战性的挑战莫过于提升自我 。。20 20年12 月上午 9时9分 20.12.1 109:09 December 11, 2020
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8、业余生活要有意义，不要越轨。20 20年12 月11日 星期五 9时9分 46秒09 :09:461 1 December 2020
-Dec-2020.12.11
• 14、我只是自己不放过自己而已，现在我不会再逼自 己眷恋了。20.12.1109:09:4611 December 202009:09
培养基的制备：
细菌的人工培养
二、细菌的接种技术
分离培养接种法——平板划线法、平行划线法 纯种细菌接种法 ——固体斜面培养基接种法
液体培养基接种法 半固体培养基接种法
细菌的人工培养
➢平板划线分离培养法
菌落平行划线法来自固体斜面接种法（1）用左手大姆 指、食指和无名指 夹住菌种试管和待 接种和斜面试管， 右手拧松棉塞、不 取下。