抗核抗体谱的检测及意义简介

ANA谱17项（免疫印迹法）
疾病
项目名称
抗双链DNA抗体IgG抗体
抗核小体抗体
系统性红斑狼疮
常
抗组蛋白抗体 抗Sm抗体
见
抗增殖细胞核抗原抗体（PCNA)
抗核糖体P蛋白（PO）
的
抗SS-A/R060抗体
自
干燥综合征/系统性红斑狼疮
抗SSA/R052抗体
身
抗SSB/La抗体
抗
系统性硬化
抗着丝点B抗体（CENP-B） 抗Scl-70抗体（Scl-70）
39
系统性血管炎的分类(Chapel Hill)
• 大血管 Takayasu动脉炎（大动脉炎） 巨细胞动脉炎（颞动脉炎）
白塞氏病
• 中血管 结节性多动脉炎
Kawasaki病 • 小血管
韦格纳肉芽肿
Churg-Strauss 综合症 显微镜下多血管炎
过敏性紫癜
冷球蛋白血症性血管炎
皮肤白细胞破碎性血管炎
➢ 在原发性干燥综合征时，此抗体阳性率为60%。 ➢ 约40%SLE患者此抗体为阳性。 ➢ RA及SSc等继发干燥综合征时此抗体为阳性。 ➢ 在亚急性皮肤型红斑狼疮（SCLE）时，此抗体阳
性率可高达75%而ANA可阴性。
抗SSB/La抗体
现已证实1975年命名抗SSB抗体与1974年发现的抗La 抗体为同一抗体，简称抗SSB抗体。其临床意义如下： ➢ 原发性干燥综合征，此抗体阳性率为40%。 ➢ 抗SSB抗体阳性对诊断SS比抗SSA抗体阳性更具特异性， 故可认为抗SSB抗体是SS的标记性抗体。 ➢ 抗SSB抗体阳性时，抗SSA抗体肯定阳性，但抗SSA抗体 阳性时，抗SSB抗体可以阴性。
SSc: 30%
SS:
10%
抗核小体抗体（AnuA）
▪ 核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白 以特殊的方式相连而组成，在SLE的诱导和致病中起重要 作用
▪ 对SLE的早期诊断有重要意义 • 比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现 • 阳性率：50%~90% • 特异性﹥98%
抗核糖体抗体（抗Rib抗体）
Arthritis Rheum. 2013 Jan;65(1):1-11.
ANCA
• ANCA代表一组抗中性粒细胞胞浆特定的成分为靶抗原的抗 体谱；
• 其靶抗原成分包括：丝氨酸蛋白酶3（PR-3）、髓过氧化物 酶（MPO）、杀菌/通透性增高蛋白（BPI）、丝氨酸蛋白 酶、人白细胞弹性蛋白酶（HLE）、乳铁蛋白（LF）、组织 蛋白酶G（CG）、β葡萄糖醛酸酶、溶菌酶等。
ANCA相关性血管炎
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冷球蛋白血症性血管炎（CV） IgA的血管炎（过敏性紫癜）（IgAV） 低补体血症荨麻疹性血管炎（抗C1q血管炎）（HUV）
结节性多动脉炎（PAN） 川崎病（KD）
抗肾小球基底膜（抗-GBM）病
大动脉炎(TAK) 巨细胞性血管炎（GCA)
显微镜下多血管炎（MPA） 肉芽肿性多血管炎（ Wegener’s）（GPA） 嗜酸性肉芽肿性多血管炎（Churg-Strauss）（EGPA)
值得注意的是：
➢ 抗Sm抗体阳性时，抗U1RNP抗体肯定阳性； ➢ 抗U1RNP抗体阳性时，抗Sm抗体可阴性； ➢ 即SLE时，抗Sm抗体阳性时，抗U1RNP抗体肯定是
阳性。而MCTD时，抗U1RNP抗体阳性而抗Sm抗体 却阴性。
SS-A (Ro-60), Ro-52 和SS-B
功能: 调控RNA翻译
• 临床上常用的ANCA检测方法主要有间接免疫荧光法（IIF） 和酶联免疫吸附法（ELISA）。
• 在显微镜下观察，常见到两种结合类型 – C-ANCA：胞浆中细颗粒类型，主要靶抗原为PR-3； – P-ANCA：核周染色。其靶抗原主要为MPO； – A-ANCA或X-ANCA：前两者的混合物，非典型ANCA。
体
混合性结缔组织病（MCTD） 抗nRNP抗体（U1-snRNP）
原发性胆汁性肝硬化
抗线粒体抗体M2型（AMA-M2）
抗JO-1抗体（JO-1）
多发性肌炎、皮肌炎
抗PM-Scl抗体 抗Mi抗体（Mi-2）
抗Ku抗体（Ku)
抗中性粒细胞胞质抗体
（Antineutrophil Cytoplasmic Antibody, ANCA）
功能:RNA聚合酶III辅助蛋白
Anti-SS-A (60 kDa)
干燥综合征.: 40-95%
SLE:
20-60%
新生儿狼疮:
96%
X
Anti-Ro-52 (52 kDa) 非特异
Anti-SS-B
干燥综合征.: 40-95%
SLE:10-Leabharlann 0%新生儿狼疮:78%
抗SSA/Ro抗体
50年代末首先在干燥综合征（Sjögren syndrome，SS) 患者血清中发现这种抗体，称为抗SSA抗体。60年代 中期又在名为Ro的SLE患者血清中也发现了抗SSA抗 体。曾称名抗Ro抗体。现已证实SSA和Ro抗原是同一 物质，故称为抗SSA抗体（或抗SSA/Ro抗体）
抗着丝点（ACA）抗体
▪ 抗原：动粒中的4种蛋白：A (17 kDa)、 B (80 kDa)、C(140 kDa）、D (50 kDa)。
着丝点蛋白 B为主要的靶抗原
▪ 功能：分裂期纺垂体的附着点
▪ 相关疾病: 硬化症:
18%
局限型:
80% - 95%
(CREST综合征)
▪
PBC
染色体结构示意图
抗体梯度稀释 起始稀释：1:40 梯度稀释（稀释因子2） 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 …直至抗体转阴
ANA荧光滴度判读举例
各稀释度的反应性
1:80 阳性+ 阳性++ 阳性++ 阳性+++ 阳性+++ 阳性++++
1:640 — — 弱+ 阳性+ 阳性++ 阳性+++
均质型——与AHA、抗DNA有关，引起LE形成 主要见于SLE、药物性狼疮
斑点型——与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体 核仁型——多见于硬皮病 着丝点型——多见于CREST综合征
ANA阳性的临床意义
1、是结缔组织病（CTD）的筛选试验 见于 SLE、SS、SSc、MCTD等。
2、肝脏病 如PBC、AIH等。 3、肺疾患 原发性肺纤维化（IPF）、原发性
▪ 超过70%抗Jo-1抗体阳性的患者出现肺间质纤维化，部分 出现多关节炎。因此，抗Jo-1抗体被认为是肺病相关肌炎 的标记性抗体。
抗Jo-1抗体综合征
抗Jo-1抗体阳性的PM/DM患者，除肌无力外， 尚有发热、白细胞增高、间质性肺炎、关节炎、 雷诺现象和“技械工人手”（指双手外侧掌面皮 肤出现角化、皲裂伴色素沉着）。
抗核抗体谱的检测和意义简介
• 自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分 的抗体
• 分类 器官特异性的 非器官特异性的
检测方法：间接免疫荧光、免疫双扩散、对流免疫 电泳、免疫印迹及ELISA法等
• ANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶） 的抗体。ANA存在一个谱。
• ANA新概念：抗核酸（Nucleic acid）和核蛋白 （Nucleoprotein）抗体的总称
• 某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富
ANA检测的意义
• 有助于疾病的诊断，如抗Sm是SLE标记抗体；抗 ScL-70 是SD的标记抗体，抗Jo-1是PM/DM的标记 抗体
• 观察疾病活动度和治疗反应 • 研究发病机理
抗核抗体谱分类
抗核抗体谱分为四类：
Ⅰ类：抗DNA抗体：抗双链DNA抗体 抗单链DNA抗体
肺动脉高压、石棉肺等。 4、血液病 淋巴瘤、骨髓瘤、ITP等。 5、慢性感染 如肺结核、麻风、血吸虫病等。
U1-nRNP 和 Sm抗原
SLE: 15-40% MCTD: 95-100%
功能:参与mRNA前体的剪切
SLE: 5-30%
抗U1RNP抗体
• 核糖核蛋白（RNP）富含尿嘧啶（Uridine), 主要存在于U族小分子RNP的第一组分中，故称为 U1RNP，其抗体简称抗U1RNP抗体。
• 高滴度的抗U1RNP抗体是MCTD的必备指标。 • 低滴度的抗U1RNP抗体尚可见于SLE和SSc。
抗Sm抗体
• 在名为Smith的SLE患者血清中发现该抗体，简称 为抗Sm抗体。
• 该抗体在SLE患者的阳性率为25～30%。 • 是SLE的标记抗体，但与病情活动无关。 • 此抗体阳性的SLE患者易患狼疮性脑病。
Ⅱ类：抗组蛋白抗体（AHA） Ⅲ类：抗非组蛋白抗体：抗ENA抗体
抗着丝点抗体（ACA） Ⅳ类：抗核仁抗体
间接免疫荧光法检测ANA—基本原理
FITC标记的抗人IgG抗体
间接免疫荧光法
样本中ANA-IgG 包被HEp-2细胞的基质玻片
荧光强弱及血清稀释度
荧光强弱判读 观察标本的特异性荧光强度一般用“+”号表示。 “—”为无或仅见极微弱荧光； “+”为荧光较弱但清楚可见； “++”为荧光明亮； “+++”为耀眼的强荧光。 临床上根据特异性荧光强度达“+”以上判定为阳性
▪ 抗核糖体抗体全称为抗核糖体核糖核蛋白抗体，也简称为 抗rRNP抗体。
▪ 多在SLE活动期存在，不会随病情缓解立即消失，持续1-2 年后才会转阴
▪ 此抗体阳性的SLE，易合并狼疮性脑病。 ▪ 此抗体阳性而ANA阴性的患者，数年后终将发展成典型的
SLE。
小结
抗核抗体（ANA）—— CTD筛选试验 抗ds-DNA抗体 —— SLE标记性抗体 抗ENA抗体，其中包括： ➢ 抗Sm抗体 —— SLE标记性抗体 ➢ 抗U1RNP抗体——MCTD标记性抗体 ➢ 抗SSA抗体——SS的抗体 ➢ 抗SSB抗体——SS标记性抗体 ➢ 抗Scl-70抗体——硬皮病标记性抗体 ➢ 抗Jo-1抗体——PM/DM标记性抗体 ➢ 抗Rib抗体——SLE标记性抗体
▪ 抗原: 几种多肽复合物(分子量间于20-
100kDa)，主要的靶抗原为100 kDa
▪ 相关疾病:
硬皮病:
2% - 5%
肌炎:
8%
重叠综合征: 24%
抗Jo-1抗体
▪ 由于抗Jo-1抗体的相应抗原只位于胞浆，此抗体在ANA抗 体中较为独特。Jo-1自身抗原为组氨酰tRNA合成酶。
▪ 此抗体尤见于自发性炎症性肌炎。它的检出率在原发性多 肌炎为33%，原发性皮肌炎为25%。
Scl-70 (DNA-拓扑异构酶I)
功能: 在DNA复制和转录过程中完成双链解螺旋
疾病: 系统性硬化: 50% - 75%
抗Scl-70 抗体
▪ 局限型和弥散型硬化症病中的阳性率分别为10% 和 48%。
▪ 抗Scl-70抗体阳性的患者通常病情发展快、预后差、 多器官累及。
抗PM-Scl抗体
均质型
与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关， 引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮
核膜型
与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
斑点型
与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体
核仁型
多见于硬皮病
着丝点型
多见于CREST综合征
ANA常见五种核型及临床意义
核膜型——与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
抗体滴度
临床意义
1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560
阳性，需结合临床表现综合判断 阳性，提示可能存在相关疾病 明确阳性，提示可能存在相关疾病 中等阳性，提示可能存在相关疾病 强阳性，高度提示存在相关疾病 极强的阳性，高度提示存在相关疾病。
几个相对常见且重要的荧光核型
均质型
粗颗粒型
着丝点型
核仁型
核膜型.
核点型
核糖体P蛋白
线粒体型
肌动蛋白
常见且重要核型的标准 核型表现相对典型 阳性率相对较高 靶抗原相对明确
荧光显微镜下ANA的染色型别
• 均质型：与抗组蛋白和抗DNA有关，见于SLE、药 物性SLE
• 斑点型：与抗ENA有关 • 核膜型：与抗dsDNA有关 • 核仁型：多见于硬皮病 • 着丝点型：在SD及CREST中出现
染色体
DNA
核小体
染色质
组蛋白
抗ds-DNA抗体
▪ 抗原：双链DNA，天然DNA(脱氧核糖核酸骨架) ▪ 相关疾病：
dsDNA: 为SLE的诊断标准之一，阳性率为60-90%，不同 的检测方法诊断特异性差别较大。抗体滴度与疾病的活动 性、狼疮肾炎的发病风险具有相关性。 ▪ 在免疫治疗过程中，dsDNA抗体的滴度水平可大大降低， 相反，病情恶化则伴随着dsDNA抗体的增加。因此检测 dsDNA抗体浓度对于预测和治疗SLE有辅助作用。
抗组蛋白抗体（AHA）
▪ 抗原:
H1, H2A, H2B, H3, H4，H2A-H2B，H3-H4 (主要的靶抗原为H1和H2B)
▪ 相关疾病:
▪ 药物诱导性 LE: 100%(抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体)。
特异性低，抗组蛋白抗体对于药物诱导的和自发性狼疮的诊断极
为重要。
各种结缔组织病： SLE: 30-80%