721型分光光度计的使用.

实训721型分光光度计的使用
一、实训目的
正确使用与维护721分光光度计。

二、仪器与试剂
仪器：721型分光光度计，容量瓶，吸耳球等
试剂：参比溶液，待测溶液等
三、实训原理
光是一种电磁波,具有一定的波长和频率。

可见光的波长范围在400~760nm，紫外光为200~400nm，红外光为760~500000nm。

可见光因波长不同呈现不同颜色，这些波长在一定范围内呈现不同颜色的光称单色光。

太阳或钨丝等发出的白光是复合光，是各种单色光的混合光。

利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光，即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等，这就是光谱。

有色物质溶液可选择性地吸收一部分可见光的能量而呈现不同颜色，而某些无色物质能特征性地选择紫外光或红外光的能量。

物质吸收由光源发出的某些波长的光可形成吸收光谱，由于物质的分子结构不同，对光的吸收能力不同，因此每种物质都有特定的吸收光谱，而且在一定条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比，分光光度法就是利用物质的这种吸收特征对不同物质进行定性或定量分析的方法。

在比色分析中，有色物质溶液颜色的深度决定于入射光的强度、有色物质溶液的浓度及液层的厚度。

当一束单色光照射溶液时，入射光强度愈强，溶液浓度愈大，液层厚度愈厚，溶液对光的吸收愈多，它们之间的关系，符合物质对光吸收的定量定律，即Lambert-Bear 定律。

这就是分光光度法用于物质定量分析的理论依据。

四、实训内容
1.检查仪器各调节钮的起始位置是否正确，接通电源开关，打开样品室暗箱盖，使电表指针处于“0”位，预热20min后，再选择须用的单色光波长和相应的放大灵敏度档，用调“0”电位器调整电表为T=0%。

2.盖上样品室盖使光电管受光，推动试样架拉手，使参比溶液池（溶液装入4/5高度，置第一格）置于光路上，调节100%透射比调节器，使电表指针指T=100%。

3.重复进行打开样品室盖，调0，盖上样品室盖，调透射比为100%的操作至
仪器稳定。

4.盖上样品室盖，推动试样架拉手，使样品溶液池置于光路上，读出吸光度值。

读数后应立即打开样品室盖。

5.测量完毕，取出比色皿，洗净后倒置于滤纸上晾干。

各旋钮置于原来位置，电源开关置于“关”，拔下电源插头。

6.放大器各档的灵敏度为：“l” ×1倍；“2”×10倍；“3”×20倍，灵敏度依次增大。

由于单色光波长不同时，光能量不同，需选不同的灵敏度档。

选择原则是在能使参比溶液调到T= 100%处时，尽量使用灵敏度较低的档，以提高仪器的稳定性。

改变灵敏度档后，应重新调“0”和“100”。

【注意事项】
1.在使用分光光度计进行测量过程中，为避免光电管因受光连续照射而疲劳，只有在测量时才将比色皿暗箱的箱盖放下。

2.取用比色皿时，应捏持比色皿的两侧磨砂玻璃面，手不得触及其透光面，以免沾上油污或磨损，影响其吸光度的测定。

在用去离子水洗净比色皿后，还需用待测溶液淋洗数次，再注入待测溶液。

随后用滤纸（或吸水纸）将沾附于比色皿外壁和底部的溶液吸干，不能留有水迹。

应将比色皿垂直地放入比色皿框中（位置要妥帖），否则会由于光透过液层厚度的不同而导致测量误差。

沧州医学高等专科学校和亚楠。