医学微生物学 ppt课件

三、微生物学检查法
1.病原体检测 发病10天内取血液;1周后取尿液;有脑膜刺激者取脑脊液 • 直接镜检（Fontana镀银染色法，暗视野查活菌）
•分离与鉴定 接种至Korthof培养基，置28℃孵育。
阳性标本在2周内可见培养液呈轻度混浊→暗视野显微 镜检查→有→则用已知诊断血清鉴定其血清群和血清型。
4
一 螺旋体
(spirochete )
概念：螺旋体是一类细长、柔软、一端或两端弯曲 成螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。基本结 构与细菌相似，例如有细胞壁、原始核质，以二分 裂方式繁殖和对抗生素等药物敏感等
主要类型：
疏螺旋体属：
回归热螺旋体 伯氏螺旋体
密螺旋体属：
梅毒螺旋体
钩端螺旋体属：
钩端螺旋体
阴性标本:分离培养应连续观察4个月，仍无生长者。
•动物接种
幼龄豚鼠或金地鼠腹腔 •分子生物学方法
2.血清学诊断
• 病初和发病后第3~4周各采血清一次。有脑膜刺激 症状者采取脑脊液
• 方法:
显微镜凝集试验(MAT) 间接凝集试验
以乳胶 (聚苯乙烯)或活性炭微粒为载体， 吸附钩端螺旋体可溶性抗原作为指示物
• 培养：不能在无生命的人工培 养基上生长繁殖，但可用棉尾
兔上皮细胞或接种家兔培养 。
镀银染色法染色的梅毒 螺旋体
致病性与免疫性
致病物质： 荚膜样物质、黏附因子、透明质酸酶
▲ 致病过程及临床特征： 获得性梅毒和先天性梅毒
• 获得性梅毒病程及特征：
- I 期 梅 毒 ： 外 生 殖 器 硬 下 疳 （ hard chancre），传染性强。
二、解脲脲原体
也称溶脲脲原体，是1954年Shepard首先从非 淋菌性尿道炎(NGU)患者的尿道分泌物中分离 获得，因其分解尿素的特性命名为解脲脲原体。 在分类学上属人支原体科脲原体属。是人类泌 尿生殖道最常见的寄生菌之一，近年来研究发 现，它与多种疾病有关，故引起国内外有关学 者的广泛重视。
- II 期 梅 毒 ： 皮 肤 及 粘 膜 梅 毒 疹 （syphilid），传染性强、组织破坏小。
- III期梅毒：动脉瘤、脊髓痨或全身麻 痹，传染性小，组织破坏大。
外
梅毒疹
生
殖
器
硬
下
疳
心 内 梅 毒 瘤
• 先天性梅毒：
流产、早产或死胎，新生儿皮肤病变、马鞍鼻、 锯齿牙、骨软骨炎、先天性耳聋等体征，俗称梅 毒儿。
四、防治原则
• 防：
• 防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜的管理。 • 在常年流行地区，对易感人群和与疫水接触者宜接
种包含当地流行株在内的多价钩端螺旋体疫苗。
• 治：首选青霉素
梅毒螺旋体
• 形状：两端尖直。
• 结构：与钩端螺旋体相同。
• 动力：移行、滚动等方式运动。
• 染色法：与钩端螺旋体相同。
暗视野显微镜下的梅毒 螺旋体
医学微生物学
1
四体
立克次体 衣原体 螺旋体
精品资料
四体
• 你怎么称呼老师？ • 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你
是否会认为老师的教学方法需要改进？ • 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
（1）传染源：患者（唯一传染源） （2）传播媒介：人虱 （3）所致疾病：流行性斑疹伤寒（虱传型斑疹伤寒） （4）传播途径：
病人 人虱
粪便
另一人
（抓破的伤口进入体内）
流行性斑疹伤寒
2 斑疹伤寒立克次体：
（1）传染源：患鼠，患者 （2）传播媒介：鼠虱，鼠蚤 （3）所致疾病：地方性斑疹伤寒（鼠传型斑疹伤寒） （4）传播途径：
三 立克次体
(rickettsia)
共同特点
多形态，革兰染色阴性，大小介于细菌和病毒之间 专性寄生(活细胞内寄生，似病毒）、二分裂繁殖
（似细菌） DNA、RNA及复杂酶系统，对多种抗生素敏感（似
细菌） 与节肢动物关系密切，寄生在吸血节肢动物体内，或
为寄生宿主、或为储存宿主、或同时为传播媒介 大多是人兽共患病的病原体
(4)CF试验
CF试验原来是立克次体病血清学诊断的经典试 验，虽然敏感性不如IFA和 ELISA，但非常特异。 一般在立克次体病发病一周内，血清中即有CF抗 体出现，以后逐渐上升，至第3周达最高峰，然后 逐渐降至较低的效价，并可保持几年不消失，但 也有在病后几周即转阴性者。病人恢复期血清与 斑疹伤寒群及斑点热群立克次体可溶性抗原试验 的阳性结果，只能说明该群立克次体的感染 。
鼠粪中立克次体
破损皮肤，口， 鼻眼黏膜
体 内
地方性斑疹伤寒
(三)微生物检验
1.标本采集 (1)病人血液标本：发热期均有立克次体血症，
在急性期较易检出立克次体。争取在用抗生 素前采血，立即床侧接种。 (2)活检或尸检材料：肺、肝、脾、淋巴结、心 瓣膜等标本。
2.标本直接检查
(1)免疫荧光检测 用于脏器检查。制备标 本片薄而均匀，组织结构清晰，固定后 用荧光抗体染色, 常见脾、肺及心瓣膜中 有立克次体，也可居泌尿生殖道，传播途径为性接触和母婴传播。 致病机制与侵袭性酶有关。吸附后产生磷脂酶分 解胞膜中的磷脂，脲酶分解尿素产氨，影响宿主 细胞生物合成。产生IgA蛋白酶，破坏IgA的局部 抗感染作用，有利于粘附和致病。
2.引起非淋菌性尿道炎(NGU) ，上行感染，可引起 前列腺炎或附睾炎；阴道炎和宫颈炎，并可导致 流产。因为与人精子膜有共同抗原，对精子可造 成免疫损伤而致不育。
是唯一能够人工培养的致病性螺旋体
镀银染色法染色 的钩端螺旋体
营养要求复杂，常用Korthof培养基
适宜生长温度为28~30℃
生长缓慢，需氧或微需氧，5－7天半 透明云雾状生长（液面1cm处最丰富）
二、致病性与免疫性
•传染源
鼠和猪
•传播途径
经粘膜或破损皮肤进入; 经胎盘垂直传播
致病物质---类似细菌内毒素与外毒素
培养
营养要求比一般细菌高 在pH7.8~8.0间生长，低于7.0则死亡（溶脲脲原
体pH6.0~6.5） 生长缓慢 典型的菌落呈荷包蛋样 液体培养基澄清（以颜色改变作为生长现象）
抵抗力
无细胞壁，对理化因素比较敏感 对青霉素等耐药（无细胞壁） 对干扰蛋白质合成抗生素敏感（红霉素等）
致病性
致病性
支原体 肺炎支原体 人型支原体 生殖器支原体 穿透支原体 溶脲脲原体 发酵支原体
致病性 （儿童）原发性非典型肺炎、支气管炎 泌尿生殖道感染 泌尿生殖道感染 多见于艾滋病 泌尿生殖道感染，垂直传播 关节炎
表面感染 表面感染 表面感染
入血 表面感染 表面感染
一、肺炎支原体
感染呈全球性分布，主要侵犯呼吸系统,借滑行运 动穿过粘膜上皮细胞纤毛屏障，主要粘附因子为一 类对胰酶敏感的表面蛋白，称Pl蛋白。
(1)外斐反应
除Q热、立克次体痘及罗沙利马体感染为阴性 外，其他为阳性。 患者OX凝集素上升较晚，在病程2周左右方出 现阳性，病程中双份血清试验，若效价有4倍 增长，方有诊断意义。
(2)IFA试验
为现在诊断立克次体病常用的方法。用已知 立克次体抗原(感染鸡胚卵黄囊或细胞培养 悬液)制片，以低稀释度的病人血清初筛， 有呈典型立克次体形态的明亮荧光颗粒者， 判为阳性。再将病程早期及晚期血清分别作 双倍或4倍稀释以测效价，如呈4—8倍增长 者可明确诊断。
(2)核酸检测 PCR敏感性高，所需样品量 只需ELISA实验的1／5。以编码17kD蛋 白的基因和编码普氏和莫氏立克次体 169kD蛋白的基因作为扩增靶区。
3．分离培养
(1)动物接种 选用健康雄性豚鼠接种以便观察阴囊肿胀现 象。每日测体温，至40℃发热时采血或脏器 悬液、接种鸡胚卵黄囊或细胞培养以分离立 克次体； 感染莫氏立克次体豚鼠在发热1—2日内出现 阴囊红肿，解剖可见腹股沟淋巴结肿大、充 血、脾大2-3倍，有腹水；有阴囊反应者，睾 丸有小出血点，鞘膜充血并有浆液性渗出物 等。鞘膜涂片可查到立克次体。
(3)ELISA
检测IgM抗体对早期诊断有价值。 立克次体抗原吸附于载体。泛影葡胺梯度离心纯化
抗原为优，检出血清的抗体效价高，纸上ELISA测 定抗体，方法简便。将感染卵黄囊悬液加于玻片 (经氯仿·甲醇洗净)上，凉干、固定，加稀释血清 于抗原点上，每张玻片上包括阳性和阴性对照，加 酶标兔抗人IgM/G于抗原·血清点作用后，将浸透新 鲜配制的底物无灰滤纸覆盖在玻片上约4-6min，可 见滤纸条上阳性对照点位置显紫棕色，取下滤纸条 (即终止反应)，观察是否显色，与对照比较判定结 果。此法简便，并可保存实验记录。
3 恙虫病立克次体：
（1）传染源：携带病原体野鼠，家鼠 （2）传播媒介：恙螨 （3）所致疾病：恙虫病 （4）传播途径：
恙螨幼虫叮咬
带菌鼠
人体
局部红色丘疹
全身淋巴结肿大，肺，肝，水疱，中央溃疡，形成黑
脾，脑损害
色焦痂
四 衣原体
一、生物学性状 形态与染色
多形态性，球杆状或杆状 柯克斯体更小，多形性更明显
革兰染色阴性，但不易着色 姬姆萨染色（紫色）
结构与组成
细胞壁：外膜、肽聚糖、蛋白脂质多糖 粘液层、微荚膜 宿主细胞内排列不规则
培养特性
动物接种、鸡胚接种、细胞培养
贝纳柯克斯体在小鼠脾细胞空泡内繁殖
1 普氏立克次体：
致病类别
肺炎支原体（M.pneumoniae) 人型支原体(M.hominis) 生殖器支原体(M.genitalium) 穿透支原体(M.penetraus) 溶脲脲原体(U.urealyticum) 发酵支原体（F. pneumoniae)
生物学性状
形态与结构 最小，0.2~0.3μm 多形性：球形，双球状，丝状（无细胞壁） 细胞膜含有大量固醇 特殊结构：荚膜，顶端结构，微丝 繁殖方式：二分裂，出芽等 染色方法：Giemsa染色 淡紫色 革兰染色阴性
、钩端螺旋体 （Leptospira）
生物学性状
• 形状： 一端或两端弯曲成钩状，菌
体常呈问号状或C、S形。 • 结构： 柱形原生质体、内鞭毛、外
膜（由内至外）。 • 动力： 常用暗视野显微镜观察，呈
旋转式活泼运动。
暗视野显微 镜下的钩端螺
旋体
• 染色法： 常用镀银染色法，菌体呈
金黄色或棕褐色。
(2)鉴定
用免疫荧光法鉴定感染动物脏器、鸡胚卵 黄囊、细胞培养物中的特异性抗原以已知 抗原测定动物恢复期血清中的相应抗体。 必要时用补体结合试验、微量凝集试验等， 作群和种的鉴定。
(3)分离株繁殖及保存
①鸡胚卵黄囊培养 收获卵黄囊，经涂片 染色镜检, 含立克次体较多而又未发现细 菌的卵黄囊膜，或将其作成适当浓度的 悬液置-70℃冰箱保存，或冰冻干燥保藏；
②细胞培养：选鸡胚、成纤维、人羊膜、 HeLa等细胞，接种培养、鉴定后将立克 次体大量繁殖的感染细胞置-70℃储存。
4．抗体检测
立克次体病常用的血清学诊断方法除外斐 反应、间接免疫荧光(IFA )试验、酶联免 疫吸附试验(ELISA)外，还有补体结合(CF) 试验、微量凝集(MA)试验、间接血凝(IHA) 试验、胶乳凝集(LA)试验等 。
▲ 防治原则
- 预防：加强性卫生教育和性卫生，但目前尚无疫苗。 - 治疗：青霉素类药物长程治疗。
二 支原体
(mycoplasma)
没有细胞壁的原核细胞型微生物，多形性 细胞膜含固醇 能通过0.45m滤菌器 二分裂繁殖，含DNA与RNA 能在无生命培养基中繁殖的最小原核细胞型
微生物
概念：是一类无细胞壁，形态高度多形性， 能通过细菌滤器，能在无生命培养基上生长 的最小原核细胞型微生物
•1．内毒素样物质(ELS)或称脂多糖样物质(LLS)
•2．溶血素
•3．细胞毒性因子(CTF)
•4. 细胞致病作用(CPE)物质
•所致疾病
钩端螺旋体病------一种人畜共患传染病
•疾病特点 起病急、高热、乏力、全身酸痛、眼结 膜充血、腓肠肌压痛、浅表淋巴结肿大
•免疫性
疾病后可获得抗同型钩体的持久免疫力， 体液免疫为主
锯齿牙
骨软骨炎
▲ 免疫性：
传染性免疫，以迟发型超敏反应为主的 细胞免疫抗感染作用较大。
微生物学检查及防治原则
▲ 微生物学检查
- 病原学检查：（一期）硬下疳、（二期）梅毒疹渗出 液，用暗视野显微镜、直接免疫荧光法或ELISA检查。
- 血清学检查：RPR或TRUST初筛，TPHA或TPPA确 诊。