灭菌注射用水无菌检查方法适用性

灭菌注射用水无菌检查方法适用性编号:SOP-VM-02-075
版本号:00
陕西同康药业有限公司
灭菌注射用水无菌检查方法
适用性试验方案
起草人日期年月日
化验室: 日期年月日会审
质量管理处: 日期年月日批准人日期年月日
目录
1 试验描述...................................................................... ..................................................
2 2 试验依据...................................................................... .................................................. 2
3 试验项目组成员及职责...................................................................... .......................... 2
4 试验内容...................................................................... .................................................. 2
5 试验前准备...................................................................... .............................................. 3
6 试验过程......................................................................
.................................................. 4 7 偏差处理...................................................................... .................................................. 8 8 变更控制...................................................................... .................................................. 9 9 最终评价及建议...................................................................... ...................................... 9 10 试验周期...................................................................... (9)
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陕西同康药业有限公司
灭菌注射用水无菌检查方法
适用性试验方案
1 试验描述:
本分析方法为本公司的《灭菌注射用水检验标准操作规程》(下称SOP)，该SOP
制定依据《中华人民共和国药典》2015年版二部的方法。

为确保其检测结果准确，
本公司实验室对该品种无菌检查方法适用性是否适合进行试验。

2 试验依据: 《中华人民共和国药典》2015年版四部分析方法指导原则《中华人民共和国
药典》2015年版二部
《灭菌注射用水检验标准操作规程》SOP-QC-01-001 《无菌检查标准操作规程》SOP-QC-07-018
《灭菌注射用水质量标准》
3 试验项目组成员及职责:
部门成员职责 QC 报告起草 QC 方法实施 QA QA监督质量部分析方法审核
4 试验内容:
序列号试验测试项目可接受标准 1 灭菌注射用水无菌检查方法该检查方法适用于灭菌注射用水的无菌
检查适用性试验
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5 试验前准备:
5.1 人员培训:
根据试验方案已对本次试验相关人员进行培训(见附表1)。

序号参加试验人员名单是否参加培训培训考核结果 1 口是口否口符合规定口不符合规定 2 口是口否口符合规定口不符合规定 3 口是口否口符合规定口不符合规定 4 口是口否口符合规定口不符合规定 5 口是口否口符合规定口不符合规定 6 口是口否口符合规定口不符合规定 7 口是口否口符合规定口不符合规定 8 口是口否口符合规定口不符合规定 9 口是口否口符合规定口不符合规定 10 口是口否口符合规定口不符合规定 11 口是口否口符合规定口不符合规定 12 口是口否口符合规定口不符合规定
5.2 仪器设备、标准品和试剂:
5.2.1 仪器设备
仪器名称编号设备操作规程
万分之一天平
pH计
集菌仪
蒸汽灭菌器
生化培养箱
霉菌培养箱
生物安全柜
快速振荡器
5.2.2 标准品和试剂
名称厂家批号
硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆胨液体培养基(TSB培养基) 沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA培养基)
0.9%无菌氯化钠溶液
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5.2.3 指导文件
文件名称编号存放地点
无菌检查标准操作规程 SOP-QC-07-018 质量管理处
5.2.4 样品
名称厂家规格批号灭菌注射用水本公司 5ml
6 试验过程
6.1培养基的适用性检查
对配制好的硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基无菌性及灵敏度检查均符合《中国药典》2015年版无菌检查法(通则1101)要求。

6.2菌种及菌液制备
6.2.1、菌种:金黄色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis〔)CMCC(B)63 501〕，生孢梭菌
( Clostridium sporogenes〔)CMCC(B) 64 941〕，大肠埃希菌菌(Escherichia coli)〔CMCC(B) 44 102〕，白色念珠菌( Candida albicans)〔CMCC(F) 98
001〕，黑曲霉( Aspergillus niger)〔CMCC(F) 98 003〕，上述标准菌株均源自中国食品药品检定研究院，工作用菌株为第三代。

6.2.2、菌液制备:
6.2.2.1 接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基(TSB培养基)中，30,35?培养18,24h培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小
于100cfu的混悬液。

6.2.2.2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基(+琼脂)中，
30,35?培养18,24h培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu 的混悬液。

6.2.2.3 接种大肠埃希菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基(TSB培养基)中，30,35?培养18,24h培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的混悬液。

6.2.2.4 接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基(TSB培养基)中，30,35?培养18,24h培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的混悬液。

6.2.2.5 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基(SDB培养基)
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中，20,25?培养24,48h培养后，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小
于100cfu的混悬液。

6.2.2.6 接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基(SDA培养基)上，20,25?培养5,7d，加入含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶
液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用
0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu
的孢子悬液。

上述6株菌制得菌悬液含量(每1ml含菌数)结果见表1。

表1 菌液制备计数结果
菌液接菌量计数结果cfu/皿均值试验菌株代数 cfu/ml 稀释度 ml/皿平皿1 平皿2 大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
生孢梭菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
6.3方法适用性试验
6.3.1 供试液制备:按照《中国药典》2015年版“无菌检查法(通则1101)”，取供试品120支/每次，按无菌操作法处理，以薄膜过滤法进行试验。

6.3.2 试验过程:
6.3.2.1 试验管取供试品20支，导入集菌过滤器内(单联)，按薄膜过滤法过滤。

用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗，每次100ml，共冲洗2次，在最后一次冲洗液中分别加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌，加入硫乙醇酸盐培养基;枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、大肠埃希菌菌、白色念珠菌、黑曲霉等试验菌，同法操作，加入相应培养基。

6.3.2.2 对照管不加入供试液，按试验管方法同法试验。

6.3.2.3 培养硫乙醇酸盐流体培养基置30~35?培养，胰酪大豆胨液体培养基培养基置20~25?培养。

培养不得超过5天。

6.3.2.4 结果判断与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。

如含供试品的任一容器中的
试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑
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菌作用，并重新进行方法适用性试验。

6.3.2.5 阴性对照阴性对照试验同时进行，不得有菌生长。

6.3.3 方法适用性试验结果
6.3.3.1第一次结果
试验时间: 年月日
培养温度:硫乙醇酸盐流体培养基置35?;胰酪大豆胨液体培养基置25?。

试验结果见表2。

表2 无菌检查方法适用性第一次试验结果
硫乙醇酸盐流体培养基观察结果培养对象试验菌
培养时间 1 2 3 4 5
试验管大肠埃希菌对照管
金黄色试验管
葡萄球菌对照管
试验管生孢梭菌对照管
阴性对照硫乙醇酸盐流体培养基( , )
胰酪大豆胨液体培养基观察结果
培养对象试验菌培养时间 1 2 3 4 5
试验管枯草芽孢杆菌对照管
试验管白色念珠菌对照管
试验管黑曲霉对照管
阴性对照胰酪大豆胨液体培养基( , )
备注: “+”表示混浊;“-” 表示澄清;“+/-”表示生长微弱试验结果评价: 本次试验小组组长对检验方法进行试验及评价。

评价人: 日期: 年月日 6.3.3.2 第二次试验结果
试验时间: 年月日
培养温度:硫乙醇酸盐流体培养基置35?;胰酪大豆胨液体培养基置25?。

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试验结果见表3。

表3 无菌检查方法适用性第二次试验结果
硫乙醇酸盐流体培养基观察结果培养对象试验菌
培养时间 1 2 3 4 5
试验管大肠埃希菌对照管
金黄色试验管
葡萄球菌对照管
试验管生孢梭菌对照管
阴性对照硫乙醇酸盐流体培养基( , )
培养时间胰酪大豆胨液体培养基观察结果
试验菌 1 2 3 4 5 培养对象
试验管枯草芽孢杆菌对照管
试验管白色念珠菌对照管
试验管黑曲霉对照管
阴性对照胰酪大豆胨液体培养基( , )
备注: “+”表示混浊;“-” 表示澄清;“+/-”表示生长微弱试验结果评价: 本次试验小组组长对检验方法进行试验及评价。

评价人: 日期: 年月日 6.3.3.3 第三次试验结果
试验时间: 年月日
培养温度:硫乙醇酸盐流体培养基置35?;胰酪大豆胨液体培养基置25?。

试验结果见表4。

表4 无菌检查方法适用性第三次试验结果
硫乙醇酸盐流体培养基观察结果培养对象试验菌培养时间 1 2 3 4 5 试验管大肠埃希菌菌对照管
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试验管金黄色
葡萄球菌对照管
试验管生孢梭菌对照管
阴性对照硫乙醇酸盐流体培养基( , )
胰酪大豆胨液体培养基观察结果
培养对象试验菌
1 2 3 4 5 培养时间
试验管枯草芽孢杆菌对照管
试验管白色念珠菌对照管
试验管黑曲霉对照管
阴性对照胰酪大豆胨液体培养基( , )
备注: “+”表示混浊;“-” 表示澄清;“+/-”表示生长微弱试验结果评价本次试验小组组长对检验方法进行试验及评价。

评价人: 日期: 年月日 6.3.4 灭菌注射用水无菌检查方法适用性试验结论本次试验小组组长对试验结果进行试验及评价。

评价人: 日期: 年月日 6.4 无菌检查方法
取供试品60支，采用薄膜过滤法，以0.9%无菌氯化钠溶液为冲洗液(冲洗
量:200ml/膜，100ml/次)按照《中国药典》2015年版四部无菌检查法，以相应溶
剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照;以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。

6.5 结果判断
阳性对照应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。

否则，试验无效。

若供试
品管均澄清，或虽显浑浊但均确证无菌生长，判供试品符合规定;若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。

当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效:
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(1)无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。

(2)回顾无菌实验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。

(3)供试品中污染的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和(或)无菌操作技术不当引起的。

试验若经确认无效，应重试。

重试时，重新取同量供试品，依法检查，若无菌生长，判供试品符合规定;若有菌生长，判供试品不符合规定。

7 偏差处理
方案执行过程中如有偏差产生，根据《偏差处理管理规定》处理，并填写偏差处理记录最终报告包括偏差列表(见附表3)和以下信息。

处理措施偏差编号发生工序产生原因处理情况处理结果
8 变更控制
方案执行过程中如有对原系统进行变更，提出的变更应遵循，《变更控制管理规程》，并要求填写变更申请控制表，最终报告应包括变更控制列表(见附表4)和以下信息
变更控制号变更内容变更原因处理情况变更结果
9 最终评价及建议
验证委员会主任对本次试验进行评价。

9.1 本次试验人员培训效果是否达到预期。

9.2 本次试验的先决条件的试验是否满足设计要求。

评价人: 日期: 年月日
10 试验周期
当质量标准有变更，需对相关项目进行再试验。

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编号:SOP-VM-02-035-00-01
版本号:00 附表1
验证方案培训签到表
《中华人民共和国药典》2015年版四部分析方法指导原则
《中华人民共和国药典》2015年版二部
《灭菌注射用水检验标准操作规程》培训内容
《灭菌注射用水质量标准》
《无菌检查标准操作规程》
培训老师单位是否外聘老师 ,是 ,否职称或职务培训开始时间培训结束时间序号受培训人签到序号受培训人签到 1 10
2 11
3 12
4 13
5 14
6 15
7 16
8 17
9 18
应到人数实到人数授课人意见(培训是否达到效果、对下次培训有何建议，等等):
授课人签名:
年月日。