岛津LC-10AD型高效液相色谱仪操作与维护保养规程

岛津LC-10AD型高效液相色谱仪标准操作与维护保养规程目的：制定岛津LC-10AD型高效液相色谱仪的标准操作与维护保养规程
范围：适用于岛津LC-10AD型高效液相色谱仪的操作
职责：QC检验员对本规程实施负责
规程
1 操作前的准备：
1.1 流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。

对规定PH值的流动相，应使用精密PH计进行调节。

配制好的流动相应通过0.45μm的滤膜滤过，用前必须脱气。

应配制足量的流动相及时待用。

1.2 供试溶液的配制：供试品用规定溶剂配制成试溶液。

定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。

供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm的滤膜滤过。

必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色变系统产生污染。

1.3 检查上次使用记录和仪器状态：检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的PH值与该色谱柱是否相应适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。

2 操作须知
2.1 泵的操作：
2.1.1 用流动相冲洗吸滤器，再把吸滤器浸入流动相中，启动泵。

打开泵的排液阀，
用专用注射器从阀口抽出流动相，再用冲洗键A泵、B泵废液出口处流动相无气泡溢出并呈连续液流后，才停止冲洗，并关闭排放阀。

此过程可能需重复几次，视具体情况而定。

直至无气泡溢出。

2.1.2 将流速逐渐调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏。

初始平衡时间一般约需30分钟，如为梯度洗脱，应在程序器上设置梯度状态，用初始化比例的流动相对色谱柱进行平衡。

2.2 紫外可见光检测器与色谱工作站的操作。

2.2.1 开启检测器电源开关，机器自检合格后。

选择光源(氘灯或钨灯)，选定检测波长，待稳定后，设置吸收度方式和检测响应时间(一般不大于1秒)，设置满刻度吸收值(适用于色谱工作站)。

2.2.2 进行检测器回零操作，检查色谱工作站的电平(LEVEL)，应符合要求，或检查色谱工作站应处在设定的起始位置，如有变动，可继续回零操作直至符合要求。

2.2.3 记录基线，待稳定后，进行色谱工作站斜率测试符合要求方能进行操作。

2.3 进样操作(六通阀式进样器)
2.3.1 把进样器手柄放在载样位置(LOAD)
2.3.2 用供试溶液清洗配套的注射器，再抽取适量，用定量环(LOOP)载样。

注射器抽取量应不少于定量环容积的5倍，在排除气泡后方能向进样器中注入供试溶液。

2.3.3 把注射器的平针直插至进样器的底部，注入供试溶液，除另有规定外，注射器不应取下。

2.3.4 把手柄转到注样位置(INJECT)，定量环内供试溶液即被流动相带入流路。

2.4 色谱数据的收集和处理
2.4.1 注样的同时启动色谱工作站，开始采信和处理色谱信息。

2.4.2 最后一峰出完后，应继续走一段基线，确认再无组分流出。

才能结束记录。

2.4.3 含量测定的对照溶液和样品供试液每份至少注样2次，由全部注样结果(n≥4)求得平均值，相对标准偏差(RSD)应不大于1.5%。

2.4.4 色谱系统适用性试验应符合中国药典的要求，如按指定峰计算的理论板数(n)和拖尾因子(T)，分离度(R)以及重复性。

计算公式为：
t
R
(1) n=5.54( )2
W
h/2
其中：t
R 为保留时间；W
h/2
为半高峰宽，取相同单位。

W
0.05
(2)T=
2d
1
其中：W
0.05为离基线5%峰高处的峰宽，d
1
为峰上升边离5%峰高处的距离。

1.18(t
R2
-t
R1
)
(3) R=2(t
R2-t
R1
)/(W
1
+W
2
)=
W
1
h/2+W
2
h/2
其中：t
R1和t
R2
分别为相邻前后二峰的保留时间；W
1
和W
2
则分别为其峰的底宽，t和W
取相同单位；W
1h/2和W
2
h/2为峰1，2的半高峰宽。

(4) 重复性：各取品种项下对照溶液，连续进行进样5次，除另有规定外，其峰面积测定值的相对标准偏差应不大于2.0%。

也可按各品种校正因子项下，配制相当于80%、100%、120%的对照品溶液，加入规定量的内标准溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差也应不大于2.0%
2.5 测定结果处理：
2.5.1 峰面积是一法，按药品标准有关项下进行峰面积是一法求组分含量的按下式计算：
百分含量［C%］=［∑ai/∑A］×100%
其中∑ai被测含量组分峰面积，∑A为参与计算的全部峰面积之和。

2.5.2 内标法，用含对照品和内标物质的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式算出校正因子(f)
As/m
f=
Ar/mr
其中：As和Ar分别为内标物质和对照品的峰面积或峰品，ms和mr分别为加入内标物质和对照品的量。

再根据含内标物质的供试品溶液色谱响应值，计算含量(mi)
Ai
Mi=f×
As/ms
其中：Ai和As分别为供试品和内标物质的峰面积成峰高，ms为加入内标物质的量。

2.5.3 外标法：用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值，按下计算比值(r)：r=Cr/Ar 其中：Cr和Ar分别为对照品的浓度和相应的峰面积或峰高。

再根据供试品溶液的色谱峰响应值，计算供试品中补测成品的浓度(Ci)：Ci=r×Ar其中：Ai为供试品溶液中被测成分的峰面积或峰高。

3 日常维护与保养：
3.1 分析完毕后，先关检测器和色谱工作站，再用适当经滤过和脱气的溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水洗，然后用甲醇—水冲洗，冲洗前先按2.1.1与2.1.2操作，再用分析流速冲洗，各冲洗溶剂一般冲洗15—30分钟上，特殊情况应延长冲洗时间。

3.2 冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。

3.3 关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压、使用小时数、仪器完好状态等。

3.4 保持仪器放置于适宜的环境中：温度：18～28；湿度：45%～75%；无腐蚀性气体，若环境温湿度超出规定范围，需开启空调调节。

4 注意事项：
4.1 色谱柱与进样器及其出口端与检测器间应无死体积连接，以免试样扩散影响分离。

4.2 新柱或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口端与检测器脱开，避免污染。

4.3 使用的流动相应与仪器原保存溶剂能互溶，否则先取下上次的色谱柱，照2.1.1与2.1.2的方法用异丙醇冲洗过渡，过渡完毕后，接上相应的色谱柱，换上本次使用的流动相，再按2.1.1顺序操作。

4.4 压力表无压力显示或压力波动太大时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除，各连接处有无漏液，排除故障后方能进行操作。

如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞，可小心卸开柱的进口端螺帽，挖出被污染填冲剂后，补入同类填充剂，仔细安装好，再进行操作。

4.5 发现记录基线波动，出现毛刺等现象，首先应检查检测器流通池引起，可等待氘灯稳定，同时检查仪器的接地是否良好，必要时换上新的氘灯。

仪器稳定后方能进行操作。

4.6 进样前，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，如系统适用性并不符合规定，或填充剂已损坏，则应更换新的同类色谱柱进行分析，由于同类填充剂的化学键合相的键合度及性能等存在一定差异，往往依法操作达不到预定的分离时，可更换另一牌号的同类色谱柱进行试验。

4.7 以硅胶作载体的化学键合相填充剂的稳定性受流动相PH值的影响使用时，应详细参阅说明书，在规定的PH值范围内选用流动相，一般PH范围为(2.5—7.5)。

使用高PH 值流动相时，可在泵与进样器之间连接一硅胶短柱，以饱和流动相，保护分析柱，并尽可能缩短在高PH值下的使用时间，用后立即冲洗。

4.8 各色谱柱的使用应登记，以方便选择和更新。

4.9 色谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱到检测流通池，在分析完毕后，均应按3.1充分冲洗，特别是用过含盐流动相的，更注意先用水，再用甲醇—水，充分冲洗。

如发现泵漏液等较严重的情况，应请有经验的维修人员进行检查、维修。

5 操作程序
5.1 仪器组成及电源：
5.1.1 仪器组成：本仪器由LC——10AD泵、SPA—10A紫外检测器和威玛色谱工作站组成。

5.1.2 电源：LC—10AD泵为220V稳压电源，SPA—10A检测器为220V稳压电源，威玛色谱工作站为220V稳压电源
5.2 泵的操作
5.2.1 设定泵的最高压力、最低压力和流量。

打开电源开关，放开排液阀，将选择钮旋到PURGE处，按泵的开关，用适宜溶剂进行冲洗泵的操作，待无气泡逸出后，关阀泵开关和排液阀，将选择钮旋到FLOW位置处，打开泵开关，用适宜流动相平衡色谱柱约30分钟。

5.3 检测器的操作：手动设定所用波长。

5.3.1 开启电源开关，待LAMP处指示灯亮后，等待数分钟仪器自检后。

按使用说明
灯能量。

书检查D
2
5.4 色谱工作站的操作：
5.4.1 双击wmsp快捷图标，进入wmsp界面。

5.4.2 进入工作画面。

5.4.3 分析方法的建立：输入相关参数(采样频率、运行时间、积分方式、报告及打印方法等)，并保存。

5.5 测定操作系统处于稳定状态后，按LOAD
位置，将供试品溶液注入进样阀。

进样阀后柄转到INJECT位置，同时点击工作站
键，分析开始，并采集数据。

分析进行到设置的Run time值时，仪器自动停止采集以谱
数据，或点击
5.5.1 用鼠标点击Exit位置退出操作系统。

5.6 关机操作：全部测完毕后，按规定用适当溶剂照5.2.1 项冲洗泵、进样阀、色谱柱和检测器。

5.6.1 关闭检测器、泵及其它部件电源并拔下各插头，作好使用登记。

6 威玛色谱工作站具体操作方法参见其操作手册。