猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及N基因序列分析

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ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０２２０６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｉｔｗａｓａｉｍｅｄｔｏｄｉｇｏｕｔｗｈｅｔｈｅｒｔｈｅｐｏｒｃｉｎｅｅｐｉｄｅｍｉｃｄｉａｒｒｈｅａｖｉｒｕｓｉｓａｖａｒｉａｎｔｓｔｒａｉｎ，ｗｈｉｃｈｃａｕｓｅｄｔｈｅｓｗｉｎｅｅｐｉｄｅｍｉｃｄｉａｒｒｈｅａ．［Ｍｅｔｈｏｄｓ］Ｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｓｆｒｏｍｄｅａｄｄｉａｒｒｈｅａｌｐｉｇｌｅｔｓｉｎｐｉｇ
病毒传代次数的增加，细胞病变逐渐稳定，进行ＲＴ — ＰＣＲ检测、间接免疫荧光检测以及动物回归实验，最终确
定分离株符合ＰＥＤＶ特征，并命名为ＢＪ２０１５，测定毒株的ＴＣＩＤ。为１Ｏ／ｏ．１ｍＩ。基因测序结果显示，Ｎ基因
ＬＩＵＸｉｈｏｎｇ，ＭＥＮＧＱｉｎｇｙｕ，Ⅵ ＮＧＪｉａｎｆａｎｇ，ＺＨＡＮＧＹｏｎｇｈｏｎｇ，ＣＵＩＤｅｆｅｎｇ，ＬＩＪｉａ，ＬＩＵＦｅｎｇｈｕａ
（ＢｅｉｊｉｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
的猪场采集死亡仔猪的肠黏膜及其内容物，将病料常规处理后接种ＶＥＲＯ细胞，采用维持培养液加１０／ｘｇ／ｍＬ的胰酶的方法分离培养。用ＲＴ — ＰＣＲ、间接免疫荧光、动物回归实验以及部分序列分析等方法对分离株进行鉴定。【结果】病料在接人细胞第一代即出现病变，细胞肿胀变圆，形成合胞体，逐渐脱落，细胞病变明显。随着
（兽医学（中医药）北京市重点实验室／北京农学院动物科学技术学院，北京１０２２０６）
摘要：【目的】了解引起仔猪腹泻的猪流行性腹泻病毒是否为变异株。【方法】从疑似猪流行性腹泻病毒感染
中图分类号：Ｓ８５２．６５９．２文章编号：１００２ — ３１８６（２０１６）０４００４６ — ０６文献标志码：Ａ
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ０ｎｏｆｐｏｒｃｉｎｅｅｐｉｄｅｍｉｃｄｉａｒｒｈｅａｖｉｒｕｓａｎｄｉｔｓｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＮｇｅｎｅ
北京农学院学报
２０１６，３１（４）：４６ — ５１
ｈｔｔｐ：／／ｂｎｘｂ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ
ｄｏｉ：１０．１３４７３／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ．１００２ — ３１８６．２０１６．０４１０
长ｌ３２９ｂｐ，编码４４２个氨基酸。与参考株Ｎ基因核苷酸序列比对及遗传进化分析表明，ＢＪ２０１５与传统株
ｃｖ７７７亲缘关系较远；与流行变异株ＢＪ一２０１卜１Ｎ基因在进化树的同一个分支上，二者的核苷酸和氨基酸同源性分别为９９．６、９９．５，表明ＢＪ２０１５与ＢＪ２０１ｌ — ｌ亲缘关系较近。【结论】结果表明ＢＪ２Ｏ１５为ＰＥＤＶ流行性变异毒株。关键词：猪流行性腹泻病毒；分离鉴定；Ｎ基因；序列分析
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌ的分离鉴定及Ｎ基因序列分析
刘希红，孟庆玉，王建舫，张永红，崔德凤，李佳，刘风华