准入证培训：遗传工程鼠繁殖管理 20200723

雄性
雌
性别鉴定方法
性
3、小鼠年龄的鉴定方法
➢ 第3天 ➢ 第4天 ➢ 第8天 ➢ 第9-11天 ➢ 第13-15天 ➢ 第21天 ➢ 第35天
耳壳脱出表皮 脐带脱落 四肢发育，能到处爬行 听觉长成，全身长毛 眼睛睁开，能跑跳 可以断奶分笼 雌性小鼠阴道张开
刚出生小仔的形态特征
新生小仔全身 没有毛，皮肤赤 红，两眼不睁， 耳廓和皮肤粘连， 头大尾短，可发 出声音，有触觉、 嗅觉与味觉。 新 出生小仔胃里 没 有奶块，如是 凌 晨出生小仔， 胃 里奶块较小。
繁殖鼠的合笼要求
小鼠的一般寿命为1-2年，生育期为1年。 随着年龄的增长，其繁殖能力将逐渐下降。而且有的雌鼠
会出现难产、食仔、幼仔畸形等情况。 繁殖鼠的年龄为8-10个月，超过10个月时应淘汰。
并根据实验计划合理安排小鼠繁殖笼的数量。
提醒：繁育期的计算是从小鼠出生日开始，而不是从合笼 日期开始。
救济，需由课题负责人向学校动管会书面申请。
关于接受鼠
必须学生到现场
小鼠基本知识
小鼠基本知识
内容
小鼠的生 物学特性
小鼠基本 的操作方 法简介
1、一般特性
• 体型小，易于饲养管理 • 毛色多种 • 昼伏夜出：傍晚和黎明前最活跃，采食、交 配 与分娩多在此时，喜欢群居于较黑暗的环 境。 • 性情温顺，易于捕捉，对外来刺激敏感。 • 对环境适应性差，对疾病抵抗力低。 • 不耐饥饿，不耐热，是杂食性动物。
产后口渴在舔食胎盘时引发吃仔。 母鼠以维持种群的正常生存。对出生后不健康、畸形的幼仔
会产生吃仔的习惯，。 刚产仔的母鼠受到惊吓感到危险也会吃仔。包括噪音、光照
和人为经常性的观察等。 有些繁育鼠是首次产仔，不知道如何处理自生幼仔，吃仔是
正常的。第二次产仔就不会发生此现象。
针对吃仔问题的解决方法：
2、解剖学特点
• 门齿终生不断生长，喜欢啃咬。
• 雌鼠子宫为双子宫，呈Y型。乳腺发达，有5对 乳 腺，3对位于胸部，2对位于腹部。 • 雄鼠：幼年时睾丸藏于腹腔，性成熟后下降到 阴 囊。雄鼠生殖器官中有凝固腺，在交配后分 泌物可 凝固于雌鼠阴道和子宫颈内形成阴道栓。 • 淋巴系统特别发达 • 性成熟时胸腺最大，35-80日龄渐渐退化。
实验动物中心 李建民
实验鼠繁育、保种 操作规则及管理要求
高校实验动物设施的特点
动物种类多，90%为基因工程小鼠 兼顾教学、科研和实验，实验计划性差 研究人员主要是学生，数量多，基础参差不
齐 与动物实验研究相关的配套设备分散，监管
困难 空调系统维护要求高，专业性强 ，现有动
物管理人员很难完成掌握，平时故障不少 收费困难
泌乳好的受孕鼠放一笼代养。 要控制噪音或有震动等不利的
环境影响。
小鼠繁育、保种 的基本规则和注意事项
（二）
繁殖笼的管理要求及操作方法
标签（挂牌）是小鼠的身份 证。在填写繁殖笼标签时， 应仔细核查标签内容，做到 万无一失。
标签的主要内容包括： 品系名称、脚趾编号、基因 型、性别及代数；每笼繁殖 鼠的出生日期、合笼日期、 负责人姓名、所属实验室、 手机号。
获得PI的广泛支持
认识实验动物科学的重要性 要树立服务理念 了解PI和同学们的需求，尽量满足 培训学生如何管理和动物实验技能和节省经费 创造学生满意 PI满意 领导支持的良性循环
建立良好的培训机制
学生与PI
强化、反复、长期培训 如何繁殖遗传工程小鼠
员工
动物操作 洁净维持
建立SOP，严格管理
关于加强表型与影像分析实验动物 信息审核的通知
4、非饲养在有证实验动物设施的表型与影像分析申请一 律不予接受。
5、在南医大动物中心江宁本部设施饲养的实验动物内部 转运除外，其他送动物中心进行表型与影像分析的实验动 物，必须按照实验动物运输包装的要求进行规范包装，不 得直接以普通饲养笼盒转运实验动物，以减小室外高温或 低温、污染等外环境对实验动物的影响和防止运输过程中 实验动物意外逃逸。
6、本通知自2019年11月11日开始执行。
关于重申及时缴纳实验动物饲养费的通知
2、拖欠饲养费禁入措施。
对于没有按时缴纳饲养费的课题组，从次月1日起，则 被纳入拖欠饲养费名单，动物中心饲养部将禁止该课题 组所有研究人员进入实验动物设施，直至结清拖欠费用 。
课题组应该在10日内结清拖欠饲养费。 禁入措施的救济，需由课题负责人向动物中心书面申请
除了年龄、体重以外还要查看小 鼠的生殖器官发育是否正常，尤 其要检查雌鼠是否为双阴道，为 防止交配受阻，发现双阴道雌鼠 应淘汰。
繁殖鼠的合笼操作
合笼后，应经常观察雌 鼠的产仔情况。正常为 合笼后19至 20天产仔。
如发现2个月后仍未产 仔，要根据情况考虑更 新淘汰
繁殖鼠的合笼操作
小鼠有的症状往往是品系本 身的固有特征。这类品系的 鼠年龄到6周后表型特征会 越来越明显。所以，实验人 员或保种员要注意在观察中 不应把固有特征的小鼠作为 异常鼠淘汰。
合笼时要先将雄鼠放入笼内，再按1:2或1:1的比例将 雌鼠放置雄鼠笼内。如果将雄鼠放入雌鼠笼内配繁， 雄鼠会显得胆小畏缩，有时还会发生雌鼠追咬雄鼠的 情况，影响繁育的进行。
在配繁殖笼操作中要注意雌雄鼠的放入顺序。
图示：雄鼠因放入顺 序不当被雌 鼠追咬 致伤
图示：雄鼠因学生操作不 当造成二雄打架斗殴所致
关于重申及时缴纳实验动物饲养费的通知
1、实验动物饲养费按月结算。 医药实验动物中心会在每月15日前告知各课题组上个月 实际发生的饲养笼位及费用， 如有疑问请及时到动物中心相关部门核对。 课题组必须在每月月底前结清上个月的饲养费。 对于饲养笼位数量较大，数额超过5万元的课题组，按 照财务规定需要另行签订协议，或改为每半个月结算一 次。
繁殖笼更换标准
合笼合后的周数 6 9 12 18 21
预期窝数 ≥1
≥2 , “Chapter 3: Animal Production and Breeding Methods” The UFAW Handbook on the Care and Management of Laboratory Animals
第六到七天小仔形态特征
浅色毛小鼠颜色变化明显，多色毛小鼠已经能分出毛色，可 以到处游走。根据动物福利，为了降低动物的痛苦，我们要 在七天内剪号标记。
第九到十一天小仔形态特征
第9-11天 全身长毛，眼睛 还没有睁开。
第十二到十三天小仔形态特征
第12-13天小鼠睁眼，开食，能跑跳。
第十九到二十一天小仔形态特征
如何保证我的实验中获得足够基因 型小鼠实验？
小鼠繁育、保种的规则
繁殖鼠的合笼要求及操作 分笼和预留鼠的管理 初生鼠的代乳操作方法 工程基因鼠检栓交配方法
各种品系的繁育特点和 工作经验
C57BL/6J B6.V-Lepob/J
BALB/c-Nu
CBA/CaJ
职业道德与动物福利
小鼠繁育、保种的基本规则和操作方法（一）
国家41部门联合出手，科研失 信将遭43项联合惩戒！
研领域失信行为责任主体将面临43项联合惩戒 ，包括一定期限内或终身取消中国科学院、中 国工程院院士提名(推荐)资格、院士被提名(推 荐)资格。依法限制招录(聘)为公务员或事业单 位工作人员。
关于加强表型与影像分析实验动物 信息审核的通知
1、在动物中心（包括峨嵋岭分部）饲养的实验 动物，在申请表型与影像分析时，需提供动物 中心饲养部的取出动物证明材料。
2、在校内其他有证实验动物设施饲养的实验动 物，在申请表型与影像分析时，需要提供实验 项目伦理批准号、有证实验动物设施取出动物 证明材料、实验动物使用许可证号。
关于加强表型与影像分析实验 动物信息审核的通知
3、校外单位申请表型与影响分析时，需要提供 实验项目伦理批准文件首页复印件、实验动物 使用许可证号、有证实验动物设施取出动物证 明材料并由设施负责人签字，加盖实验动物机 构公章。
出生第二天小仔形态特征
这是出生 第二天的小鼠， 从它出生到拍 照这段时间为 整一天，小仔 颜色变淡，其 它没有变化。 B6毛色为黑， 所以在一天后 小仔皮肤颜色 已发暗。
出生第三天小仔形态特征
第三天时，有色鼠开始变色
第四到五天小仔形态特征
脐带脱落，两耳张开，但小鼠的脚趾还未完全张开，不宜 剪趾，以防辨别不清。
Speed Congenics
3 markers per chromosome with an average genetic distance between markers of 20 centiMorgans.
Nat Rev Immunol. 2003 Mar;3(3):243-52.
如何管理我的繁殖笼？
对产仔胎数多的母鼠在怀孕期间食物中要适当增加葵花籽或 花生给孕鼠补充营养。
对当天出生的幼仔尽量避免用手触摸，不要打扰母鼠哺乳， 母鼠产仔的三天内不要换笼，要保持原有的气味。
要及时分出离乳小仔，防止母鼠超量哺乳而丧失母性行为。 要处理和淘汰年龄大、习惯性吃仔的母鼠。 可以将无泌乳能力的孕鼠提前与母性好、
免疫缺陷的Scid品系，繁殖能力差，产仔率低，产仔3胎后繁殖鼠的 体质就逐步下降。
这类品系繁育期较短，因此繁殖笼数量应较大，并且要定期 更新繁殖笼。
繁殖鼠的合笼操作
双图阴示道：雌鼠
合笼的繁殖鼠年龄不宜过小或过 大,但如果超过4个月才合笼，其 繁殖能力会明显下降。
繁殖鼠以两月龄、体重25克左右 为宜；不能用瘦小或肥胖鼠、掉 毛的鼠配繁殖笼。
尤其注意不能选择繁殖能力 强，体格健壮的鼠配繁殖笼。 要防止将原有的特定基因丢 失。
小鼠本身的
固有表型 特 征
小鼠吃仔的原因及解决方法
小仔被吃的原因：
母鼠在怀孕和哺乳期间营养不良、窝产仔数量多，导致泌乳 量相对不足时会使其吞食幼仔。
孕鼠年龄偏大且无泌乳能力，为维持自己的体力而食仔。 产前产后缺水。孕鼠在生产过程中要消耗大量的体液和能量，
。
关于重申及时缴纳实验动物饲养费的通知
3、逾期不清欠失信名单。
如果课题组下月10日内仍然没有结清拖欠饲养费，则被 动物中心列入失信名单，
将对涉及的实验动物当作无主动物处理， 一年内不再接受该课题组的饲养申请，并进一步通过财
务处和审计法务处追缴欠款， 对科研造成的不利后果由课题组自行承担。失信处理的
为小鼠分笼日龄，又称幼鼠离乳，是将母鼠和她哺育的 小仔 分开单独饲养，小仔断奶后体重约9-11g。
基因工程小鼠回交策略
♂ 129
需要注意XX之 间重排的情 况！
♀ C57B6
♀
♂
F1
♂
♀
N2
♂
♀
N3
♂
N4
♂
N5
To fix Y To fix X
♀
基因工程小鼠回交策略1
N10 Consomic/Conplastic strains
“规范化管理都是讲讲的，你们 别太当真！”
一篇论文署名权引发的悲剧：华人学者被美国 机构开除！
在给谢晓琪的开除信中，他们指出，谢晓琪 工作“不够有效”，并且“严重违反动物伦 理”—— 1 今年5月到8月间，谢晓琪5次没能及时安 乐死她用于研究黑色素瘤的小鼠，多达20来 只！ 2 信中还指责她和老板开会缺席三次。
繁殖鼠的合笼要求
在制定繁育计划时，应根据品系的繁殖特点配置繁殖笼数
例如，通过繁殖OB、DB发现获取纯合子后代出生几率较低，是通过杂 合子互配的方式繁育的（纯合子不育），后代出现纯合子的几率为 1/4，而出现纯合子雄鼠的几率为1/8。
BALB/c-Nu获得纯合子的几率为1/2，出现纯合子雄鼠的几率 为1/4 。
图示：小鼠因年龄偏大抵抗力下降，造成皮肤严重溃烂
图示：鼠龄为2015年4月 ~ 2017年2月
子宫脱垂小鼠
肛门脱垂小鼠
图示：鼠龄为2016年4月 ~ 2017年5月
图示：繁殖笼内的肿瘤鼠 图示：患老年白内障鼠
繁殖鼠的合笼操作
合笼前首先要明确繁殖鼠的遗传背景，品系名称以及 基因型和代数，不可混淆。
如何管理我的繁殖笼？
种鼠退役标准 （连续生产）
有效的繁殖寿命
种群每月退役百分数（%）
5个月
20
6个月
16.7
7个月
14.3
8个月
12.5
9个月
11.1
10个月
10
Adapted from Guidelines for the Care and Use of Mammals in Neuroscience and Behavioral Research