高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》课件8 浙科版选修1
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划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残 留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再 进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什 么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始 处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少， 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
培养基（culture media）
按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出的供其生长繁殖的营养基质。
提供微生物生长的条件： 合适的温度：25-37℃ 合适的pH：细菌 6.5-7.5 中性偏碱
真菌 5.0-6.0 中性偏酸 营养成分：含有碳源、氮源、生长因子、水
和无机盐。
LB培养基的配方
培养基成分 蛋白胨
消毒与灭菌
（1）消毒： 利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生
物的过程。
（2）灭菌：
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括 所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到 完全无菌的过程。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最 普通也是最重要的技术。
消毒的方法
1、100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法
经过一番研究，法国科学家巴斯德发现，
导致生产失败的根源在于发酵物中混入了
杂菌。
保持培养物纯净，
保证无杂菌污染很
重要！
大肠杆菌的培养与分 离
一、大肠杆菌（E. coli）
兼性厌氧的肠道内的共生菌群
合成维生素B和维生素K，供机体利用； 产生大肠杆菌素，抑制肠道致病菌和 腐生菌滋生。
革兰氏阴性菌
作为一种工程菌， 在基因工程技术中被广泛采用。 例：大规模生产治疗糖尿病的药物——胰岛素
二是存留在划破处的单个细胞无法 形成规矩的菌落，菌落会沿着划破 处生长，会形成一个条状的菌落。
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之 前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然 需要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能 存在的微生物污染培养物；
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后， 接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌 种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增 加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
4. 进行恒温培养时，为什么要将平板倒置？
答：恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸 气的形式蒸发，如果正放培养皿，则水分形成的 水滴会落入培养基表面且扩散开。若培养基中一 行成菌落，则菌落中的菌会随水扩散开，菌落间 相互影响，很难再分离成单菌落，答不到分离目 的。
因此，倒置培养皿可以防止皿盖上的水珠 落入培养基，造成污染。
涂布分离法
菌种的保存
1、临时保藏： 接种到固体斜面培 养基，菌落长成后 置于4℃冰箱保存。
2、长期保存： 甘油冷冻管藏法
液体LB培养基的配方
培养基成分 各成分的量
蛋白胨 酵母提取物
0.5g 0.25g
NaCl
0.5g
H2O
加至50ml
固体LB培养基
每100ml 液体LB培养基中加入2g琼脂，摇匀，灭 菌。
灭菌
培养皿壁上 不能沾有培 养皿，否则 容易污染。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 ……
灭菌的方法
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌 160-170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌 100kPa、121 ℃下 维持15-30min。
灭菌锅
• 检查水位 • 设定高压温度及时间，
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可 以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物 污染培养基。
微生物在自然界中呈混杂状态存在， 要获得所需菌种，必须从中进行分离。在 保藏菌种时不慎污染时也需予以分离。
怎样纯化分离我们需要的大肠杆菌呢？
微生物(microorganism)
• 结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或 没有细胞结构的低等生物。
• 例：酵母、霉菌、细菌、放线菌、病毒和 小型原生动物等等
微生物的利用： 抗生素；酒；腐乳；污水治理……
历史小资料
19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿
造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过
程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。
怎样确保大规模培养繁殖起来的细菌是 一个纯种群体呢？
将待分离样品进行一定的稀释，并使微 生物的细胞尽量以分散状态存在，然后使其长 成一个个纯种单菌落。
大肠肝菌的分离
微生物的分离技术： 稀释 平板划线分离法 涂布分离法
稀释法
平板划线分离法
一旦划破，会造成划线不均匀，难 以达到分离单菌落的目的；
固体培养基：菌落
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
半固体培养基：
无动力
有动力(弥散)
2.培养基的用途
液体培养基：增菌、工业生产 固体培养基：纯化（分离），鉴定、活菌计数、 保藏菌种 半固体培养基：动力检测
无菌技术
获得纯净培养物的关键是防止 外来杂菌的入侵，无菌技术围绕着
如何避免杂菌的污染展开。
酵母提取物
各成分的量 0.5g 0.25g
NaCl
的配制：每50ml 液体培养基添加1g 琼脂
培养基种类
培养基（培养液）是由人工方法配制 而成的，专供微生物生长繁殖使用的混 合营养液。
1.培养基的类型
（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养 基、半固体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分分：天然培养基和合成培养基。
应酒在精灯火焰附近 进行。
4、实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具 与周围的物品相接触。 ……
微生物实验室培养的基本操作程序
培养基配制
准备
器具和培养基灭菌
阶段
倒平板
微生物接种（斜面→液体）
培养 阶段
恒温箱中培养 分离纯化（液体→ 平板划线）
培养，菌种的保存（斜面）
称量
酵母提取物
蛋白胨
NaCl
121℃ 20min • 放入待灭菌物品 • 加热， 并打开放气阀排
冷空气 • 关闭放气阀继续升温升压 • 待温度降低至80℃以下开
盖，取出物品烘干
无菌技术操作要点
1、实验操作空间,操作者的衣着和手 ——清洁和消毒 2、微生物培养的器皿用具和培养基等 —灭—菌 3、为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再 进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什 么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始 处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少， 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
培养基（culture media）
按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出的供其生长繁殖的营养基质。
提供微生物生长的条件： 合适的温度：25-37℃ 合适的pH：细菌 6.5-7.5 中性偏碱
真菌 5.0-6.0 中性偏酸 营养成分：含有碳源、氮源、生长因子、水
和无机盐。
LB培养基的配方
培养基成分 蛋白胨
消毒与灭菌
（1）消毒： 利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生
物的过程。
（2）灭菌：
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括 所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到 完全无菌的过程。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最 普通也是最重要的技术。
消毒的方法
1、100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法
经过一番研究，法国科学家巴斯德发现，
导致生产失败的根源在于发酵物中混入了
杂菌。
保持培养物纯净，
保证无杂菌污染很
重要！
大肠杆菌的培养与分 离
一、大肠杆菌（E. coli）
兼性厌氧的肠道内的共生菌群
合成维生素B和维生素K，供机体利用； 产生大肠杆菌素，抑制肠道致病菌和 腐生菌滋生。
革兰氏阴性菌
作为一种工程菌， 在基因工程技术中被广泛采用。 例：大规模生产治疗糖尿病的药物——胰岛素
二是存留在划破处的单个细胞无法 形成规矩的菌落，菌落会沿着划破 处生长，会形成一个条状的菌落。
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之 前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然 需要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能 存在的微生物污染培养物；
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后， 接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌 种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增 加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
4. 进行恒温培养时，为什么要将平板倒置？
答：恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸 气的形式蒸发，如果正放培养皿，则水分形成的 水滴会落入培养基表面且扩散开。若培养基中一 行成菌落，则菌落中的菌会随水扩散开，菌落间 相互影响，很难再分离成单菌落，答不到分离目 的。
因此，倒置培养皿可以防止皿盖上的水珠 落入培养基，造成污染。
涂布分离法
菌种的保存
1、临时保藏： 接种到固体斜面培 养基，菌落长成后 置于4℃冰箱保存。
2、长期保存： 甘油冷冻管藏法
液体LB培养基的配方
培养基成分 各成分的量
蛋白胨 酵母提取物
0.5g 0.25g
NaCl
0.5g
H2O
加至50ml
固体LB培养基
每100ml 液体LB培养基中加入2g琼脂，摇匀，灭 菌。
灭菌
培养皿壁上 不能沾有培 养皿，否则 容易污染。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 ……
灭菌的方法
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌 160-170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌 100kPa、121 ℃下 维持15-30min。
灭菌锅
• 检查水位 • 设定高压温度及时间，
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可 以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物 污染培养基。
微生物在自然界中呈混杂状态存在， 要获得所需菌种，必须从中进行分离。在 保藏菌种时不慎污染时也需予以分离。
怎样纯化分离我们需要的大肠杆菌呢？
微生物(microorganism)
• 结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或 没有细胞结构的低等生物。
• 例：酵母、霉菌、细菌、放线菌、病毒和 小型原生动物等等
微生物的利用： 抗生素；酒；腐乳；污水治理……
历史小资料
19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿
造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过
程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。
怎样确保大规模培养繁殖起来的细菌是 一个纯种群体呢？
将待分离样品进行一定的稀释，并使微 生物的细胞尽量以分散状态存在，然后使其长 成一个个纯种单菌落。
大肠肝菌的分离
微生物的分离技术： 稀释 平板划线分离法 涂布分离法
稀释法
平板划线分离法
一旦划破，会造成划线不均匀，难 以达到分离单菌落的目的；
固体培养基：菌落
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
半固体培养基：
无动力
有动力(弥散)
2.培养基的用途
液体培养基：增菌、工业生产 固体培养基：纯化（分离），鉴定、活菌计数、 保藏菌种 半固体培养基：动力检测
无菌技术
获得纯净培养物的关键是防止 外来杂菌的入侵，无菌技术围绕着
如何避免杂菌的污染展开。
酵母提取物
各成分的量 0.5g 0.25g
NaCl
的配制：每50ml 液体培养基添加1g 琼脂
培养基种类
培养基（培养液）是由人工方法配制 而成的，专供微生物生长繁殖使用的混 合营养液。
1.培养基的类型
（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养 基、半固体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分分：天然培养基和合成培养基。
应酒在精灯火焰附近 进行。
4、实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具 与周围的物品相接触。 ……
微生物实验室培养的基本操作程序
培养基配制
准备
器具和培养基灭菌
阶段
倒平板
微生物接种（斜面→液体）
培养 阶段
恒温箱中培养 分离纯化（液体→ 平板划线）
培养，菌种的保存（斜面）
称量
酵母提取物
蛋白胨
NaCl
121℃ 20min • 放入待灭菌物品 • 加热， 并打开放气阀排
冷空气 • 关闭放气阀继续升温升压 • 待温度降低至80℃以下开
盖，取出物品烘干
无菌技术操作要点
1、实验操作空间,操作者的衣着和手 ——清洁和消毒 2、微生物培养的器皿用具和培养基等 —灭—菌 3、为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作