法医学----生物性检材的个人识别

结果评价
阴性：不是精斑； 阳性：有可能是精斑； 灵敏度高（1/20万），但特异性低； 其它促苯酚氧化的物质也呈阳性反应； 如男性成人的尿液、内裤。
确证试验
精子检出法；
免疫学试验； 锌元素检验；
生物化学检验；
精子检出法
藻红染色法：检材用盐水浸软，分离纤维； 晾干后加固定液（氯化汞的无水乙醇液）； 再加染液（藻红、氨液） 干燥后镜检； 精子头部被染成红色。 酸性复红美蓝染色法： 检材盐水浸软，分离纤维； 晾干后加固定液； 用水轻洗后加染液（酸性复红液、美蓝液 盐酸）； 盐酸洗涤后干燥后镜检； 头部被染成红色，尾部染成蓝色。
毛发的损伤

钝器和锐器损伤
自然脱落与暴力拔除 烧伤及热作用损害


毛发的个人识别

性别


血型
11.5骨骼的法医学鉴定



是否骨骼 是人骨还是动物骨骼 是一人骨还是多人骨 是男性骨骼还是女性骨骼 死者的身高体重 复原面容或颅像重合 血型 损伤
骨骼的确定

肉眼观
显微镜检查：骨板、哈佛管、骨单位 其它：烧灼、酸处理
联苯胺试验 原理：血痕中血红蛋白或正铁血红素具有过氧化 酶活性，可以使过氧化氢分解成水及新生 态氧，后者使加入的化学物质（无色的联苯胺） 呈显色反应（联苯胺蓝）。 试剂：冰醋酸、联苯胺的无水酒精饱和液、3%过氧化氢。 方法：检材-----冰醋酸----联苯胺无水乙醇液---等1、2分钟----3%过氧化氢
11.3.3混合斑的检验
不同个体的同种斑迹混合，如混合血斑；
不同个体的不同斑迹混合，如精液-阴道液；血液-唾液；
最常见的为混合血斑和混合精斑。
混合斑的鉴定
混合斑的确定：
混合斑成分的确定： 血痕、精斑、阴道液斑、尿液斑 汗斑 混合斑的个人识别：
11.4 毛发的检验
毛发的寻找：衣着上、凶器上、身上或身边； 注意取对照； 毛发的认定：显微镜观察、燃烧法； 种属认定：显微镜观察； 毛发来源部位：头发、胡须、阴毛、腋毛、鼻毛等； 毛发损伤检验：暴力拔拉、热作用、自然脱落； 个人识别：血型、性别、年龄、种族、职业等；
人体体液、分泌物、排泄物； 在他物上形成的生物性斑痕；
物证与生物学检材的关系

与案件有关，能够证明犯罪的物品和痕迹称为 物证； 物证的对象是与人体有关的生物学检材；
广义的物证还包括非生物学检材；



法医物证的发现
法医物证的提取 法医物证的包装 法医物证的送检



11.2 血痕检验
目的 是否血液； 是否人血； 血痕的种属鉴定、个人识别； 出血的量、部位、时间等。
11.2.3确证试验
目的：证明检材是血痕 要求：特异性高；
方法：血色原试验； 氯化血红素结晶试验； 显微分光镜检查；
血色原结晶试验 原理：血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红蛋白， 和变性珠蛋白，在还原剂作用下，正铁血红素 还原为血红素，后者与变性的珠蛋白或其它含 氮化合物结合，形成血色原结晶。 试剂：又称高山试剂 吡啶 3ml；10%氢氧化钠3ml；30%葡萄糖10ml 混合后，置棕色瓶第二天使用 方法：检材置于玻片上，将血痂压碎，加上试剂， 盖上玻片，显微镜下观察，可见桃红色针状 或菊花状结晶。


人骨还是动物骨

大体解剖学
组织学鉴定 生物学鉴定


一人骨还是多人骨

大体解剖学

血型测定
骨骼的性别鉴定

骨盆
骨骼的身高推断

加5厘米

Y=a+bx
骨骼的年龄推断

骨的形态变化
骨化中心 耻骨联合面


颅相重合技术
面相复原技术
注意事项：试剂容易失效；
结果判断：1、阳性可以确认是血，因其特异性高。 2、阴性不能排除是血，因其灵敏性低，只有 1/2000。也有可能是细菌污染、洗涤、日 晒后的血痕。
11.2.4种属鉴定 目的：确定是否人血；
方法：免疫学方法；（沉淀反应；酶免疫反应） 分子生物学方法；（DNA测序）
沉淀反应：环状沉淀、琼脂单、双向扩散、对流免疫电泳
11.2.5血痕的个人识别
测定血痕中的遗传标记物
分子水平（基因表达产物）----血型 基因水平（DNA测序）
血型识别个体的理论依据


血型终生不变； 血型遵循孟德尔遗传规律； 血型的多样性（23种，共有4.4х10 ）
14
但实际案例材料多为斑迹、陈旧或腐败，多数 抗原被破坏，无法分型，能利用仅十余种
结果判断
见到一个完整精子可确证；
见到数个精子的头部可确证；
免疫试验
特异性高； 适于输精管结扎术和精子缺乏症的人； 方法：抗人血清与检材结合，用作沉淀反应； 抗人血清的选择（p30）； p30 是成人男性精液中一类糖蛋白， 分子量为30000，有高度种属及器官特异性， 且性质稳定。
种属鉴定
区别是人的精斑还是动物的精斑；
抗p30血清；
精斑的个人识别
血型测定
DNA分析
11.3.2阴道液斑检验

阴道液成分 阴道壁粘膜、子宫、输卵管等分泌物与脱 落上皮细胞、及阴道正常菌群代谢产物
预试验

嗜碘试验 阴道上皮细胞含有大量糖原，可被碘染成 红色或深黄色。
确证试验


细胞学检查 发射光谱元素分析 免疫学检验 阴道肽酶检出法
精 斑
部位： 衣服、被褥、草席、手巾、纸类、木板、皮肤 提取： 阴道拭子，宫颈刮片；
11.3.1精斑检验
目的：是否精斑； 是否人的精斑； 是何人的精斑；
步骤：肉眼观察； 预试验； 确证试验； 种属试验、个人识别
肉眼检查
因附着物的不同呈现不同外观
有色布上，精斑浓厚时呈灰白斑痕，稀薄时不易发现；
白布上呈黄白色地图状，边缘较中央明显，触之有硬感； 用放大镜检查可见黄白色小鳞片。
血痕的大小 （出血量）
血量=干血量×1000/211
11.2.6出血的部位 月经血的检测：子宫内皮细胞及阴道上皮细胞 纤溶酶活性高； 纤维蛋白降解产物检出； 乳酸脱氢酶检出；
消化道出血
肺出血 内脏出血
11.2.7血痕性别
Y染色体的检验 X染色体的检验 性激素测定
11.3 精斑检验
精液
乳白色浓稠液体，pH7.4~7.5，一次排精3~5ml，30~60分钟 后液化。 主要成分为精子，90%是水，10%是无机盐、蛋白质、氨基酸 酶类等。 精子呈蝌蚪状，长约50~70um，分头部、中间部及尾部。 射精后4~5分钟达子宫颈、30分钟达宫体、60分钟达输卵管。 在女性生殖道内生存时间为36小时，最多为3天。



11.1.3个人识别的鉴定技术

利用人类遗传标记分型 人体生物学检材 利用人类学理论和方法 骨骼、牙齿、毛发

根据人类遗传标记检测识别个体

蛋白水平标记（血型） 红细胞型、白细胞型、血小板型、酶型、血清 蛋白型
分子水平标记（DNA） DNA长度多态性、DNA序列多态性

人体生物学检材
人体的构成成分；
预试验
要求；方法简单、灵敏度高；
方法：紫外线； 结晶试验（碘化碘钾、苦味酸）； 酸性磷酸酯酶试验（磷酸苯二钠、琼脂扩散法 电泳法）； 薄层色谱法； 马铃薯汁凝集抑制法；
紫外线
在紫外线下精斑呈银白色，周围深，带紫蓝色边缘；
水洗后的精斑在紫外线下仍可见荧光；
但其它如阴道分泌物、唾液、乳汁、鼻涕等也可发荧光。
毛发的种类

终毛：头发、胡须、腋毛、阴毛
刚毛：眉毛、睫毛、鼻毛 毳毛：


毛发与纤维的鉴别

毛小皮纹理和主髓质
捻搓法 10%NaOH溶液3~5ml，加热煮沸，毛发溶解；


人毛和兽毛的区别

毛皮质结构：
毛髓质结构： 毛小皮结构：


人头发
猪毛
人阴毛
兔毛
人毛部位的确定



头发 胡须 阴毛 腋毛 眉毛 鼻毛 毳毛
环状沉淀反应： 原理----可溶性抗原与相应抗体相遇且比例合适 形成抗原抗体复合物，在其交界界面处， 肉眼可见白色沉淀环。 方法----制备血痕浸出液（A）； 准备已知抗人血清或抗人血红蛋白血清（B）； 在沉淀管中先加入B，再沿管壁加入A 温箱中出现沉淀环者为阳性。 优点----简便、快捷、灵敏
酶联免疫吸附试验（ELISA） 原理：免疫组化方法 方法：血痕浸出液点样（抗原） 加入过氧化氢酶标记的鼠抗人Igg 加入酶促底物显色 优点：特异性好，结果容易保存
卡尔· 兰德斯坦纳（Karl· Landsteiner）是奥地利著名医学家。 他因发现了A、B、O、AB四种血型中的前三种， 而于1930年获得诺贝尔医学及生理学奖。
血 型
红细胞血型：ABO、MN、Rh、Kell 白细胞血型：HLA-A、-B、-C、-D、-DP、-DQ、-DR 血清型： 红细胞酶型： 唾液型： 血小板型：
程序



肉眼观察； 预试验； 确证试验； 种属鉴定； 个人识别； 出血量、部位、时间。
11.2.1血痕的形状
肉眼不能观察时，可喷洒苯巴比妥试剂检查血痕荧光。
11.2.2预试验 目的：从大量可疑血痕中排除不是血痕的检材。
要求：简便易行； 灵敏度高；（阴性结果可否定） 特异性不作要求；（阳性结果可能含血） 方法：联苯胺试验 酚肽试验 无色孔雀绿试验 氨基比林试验 化学发光试验
第十一章
生物检材的个人识别
11.1概述
11.1.1个人识别的概念
通过分析生物性检材以揭示个体身份的工 作，称个人识别 应用法医学、人类学的理论和技术检测分 析，确定现场物证、无名尸体的身源，称个人 识别
11.1.2个人识别的意义

刑事案件排查嫌疑人；
民事案件确定身份； 灾害事故判明身份； 无名尸体判明身份；
通过分析生物性检材以揭示个体身份的工作称个人识别应用法医学人类学的理论和技术检测分析确定现场物证无名尸体的身源称个人识别利用人类遗传标记分型人体生物学检材利用人类学理论和方法骨骼牙齿毛发蛋白水平标记血型红细胞型白细胞型血小板型酶型血清蛋白型分子水平标记dnadna长度多态性dna序列多态性人体生物学检材与案件有关能够证明犯罪的物品和痕迹称为物证
加热后已知抗体解离； 用已知指示红细胞检测解离液中的抗体种类；


MN血型 红细胞MN血型物质对热及干燥抵抗力强 Kell血型 在血痕中能长久保存 Rh血型 在阳光下抗原活性很快消失，室内可保存数月
血痕重复检验的意义
血痕的颜色 （时间）
新鲜血痕呈鲜红色；后呈暗红色（Hb— 正铁血红蛋白）、红褐色（正铁血红素）、 褐色（含铁血黄素、胆红素、橙色血晶）、 绿褐色（胆绿素）以至灰褐色。 干血量=（检材—对照）×（总面积与 剪下面积的比值）
注意事项：1、 不能直接滴加在衣服、凶器的血痕上， 应取材，因其可直接破坏血痕； 2、 试剂滴加顺序不能颠倒，因其它化学氧化 剂也可将联苯胺氧化成朕苯胺蓝； 3、 有一定致癌作用，试验时应小心防护；
结果判断：1、阴性可排除是血痕；因该试验灵敏度高达 1/50万。 2、阳性可能是血痕；因该试验特异性不高， 其它具有氧化作用的物质也可使该试验呈 阳性反应。
磷酸苯二钠试验
原理：精液中的酸性磷酸酶可分解磷酸苯二钠， 产生萘酚，后者经铁氰化钾作用与氨基安替比林 结合，产生红色醌类化合物。
方法： 可疑斑痕少许，加缓冲液（枸橼酸、氢氧化钠、 磷酸苯二钠、氨基安替比林、水）； 室温静置5~7分钟； 加入显色剂（氢氧化钠、碳酸氢钠、铁氰化钾、 水）； 出现红色为阳性反应；
ABO血型
首选：抗原密度高，抗原性强，节约检材； 抗原决定簇是糖链，对环境因素影响有较强 抵抗力； 抗原分布广泛，在人体各器官中也存在，提供 了广泛的检材来源； 方法：吸收试验、解离试验、红细胞粘连试验
吸收试验（吸收抑制试验）
原理：血痕与抗A、抗B血清作用； 抗A、抗B被相应的血型物质（抗原）吸收； 加入相应红细胞不再出现凝集，从而判定血型； 操作：取被检血痕一小块，分成两等份； 剪碎置于凹玻片的两凹中； 加入16~32倍抗A、抗B血清； 室温静置1小时后取上清液； 加入1%A、B红细胞混匀； 室温静置1小时观察结果；
吸收试验结果判定
抗A+A红细胞
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32
抗B+B红细胞
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32
血型
-
-
-
-
-
+3 +2 +2 + +
A B AB O
+3 +2 +2 + + -
-
-
-
-
-
+3 +2 +2 + +
+3 +2 +2 + +
解离试验

待测血痕的血型抗原与相应的抗体特异性结合；