液相色谱仪检定方法

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液相色谱仪检定－检定方法
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有吸光值显示的检测器，改变波长可直接读出吸光值，其最大 最小吸光值对应的波长与标准溶液的波长之差为波长示值误差。
•换档误差只适用于使用积分仪和数据处理机时
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液相色谱仪检定－检定标准
4）整机性能检定标准
仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示 ①定性测量重复性（6次测量）RSD6：不超过1.5% （保留时间 的偏差） ②定量测定重复性（6次测量）RSD6：不超过3.0% （峰面积 的偏差）
岛津液相色谱方法开发与应用
---液相色谱仪检定
岛津国际贸易（上海）有限公司
分析仪器事业部 分析中心
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液相色谱仪检定
一、液相色谱仪性能检测包括：
1.计量性能要求 1）输液系统 2）柱温箱 3）检测器 4）整机性能
线性范围
换档误差
4 整机：定性定量重复性
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
－
＋
－
－
＋
－
－
＋
＋
＋
注： ①“＋”表示应检定项目，“－”表示可不检项目 ②无梯度洗脱装置和无柱温箱的仪器，次项目可不检定 ③紫外－可见光、二极管阵列和荧光检测器检定此项目，示差折光检测器不检定此项目
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液相色谱仪检定－检定项目
检定项目分布表
序号 检定项目
泵耐压检定 泵流量设定值误差 1 泵流量稳定性误差 梯度误差②
首次检定
＋① ＋ ＋ ＋
后续检定
－① ＋ ＋ ＋
使用中检定
－ ＋ ＋ －
柱箱温度设定误差△T② 2 柱箱温度稳定性T ②
＋
＋
－
＋
＋
－
检测器：基线噪声
基线漂移
最小检测浓度
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波长示值误差和重复性③
有波长扫描功能的的检测器可画出标准溶液的光谱图，其波峰 或波谷对应的波长与标准溶液波长之差为波长示值误差。
对改变波长有自动回零功能的检测器，可采用连续进样的方法 检测。具体做法是，不接色谱柱，用一节空管代替色谱柱将液路 连通，以水作流动相，流量为0.5-1.0mL/min，每2min改变1nm， 用注射器注入紫外吸收标准溶液5-10mL，这样得到一组不同波长 的色谱峰，最高或最低的色谱峰对应的波长与标准溶液波长之差， 即为波长示值误差。
仪器的电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋 纽、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清晰。
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计量器具控制包括： 首次检定 后续检定 使用中检验
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2.通用技术要求 1）仪器外观 2）仪器电路系统
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1）输液系统性能检定标准
①输液管路接口紧密，在规定的压力范围内无泄漏
②流量设定误差Ss和流量稳定性误差SR符合表1的要求 ③梯度误差Gc不超过±3％
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4、1） 紫外－可见光检测器和二极管阵列检测器的检定 ①波长示值误差和重复性的检定
检测器和记录仪连接好，通电预热稳定后，用注射器将紫外波长 标准溶液（标准波长为235nm，257nm，313nm和350nm）从检测器入 口注入样品池中清洗，并将池充满。将检测器波长调到低于检测波长 5nm处，记录仪纸速调到2－4cm/min，记录笔调到记录纸中间，启动 记录仪，记录笔将画出一条直线。调节检测器波长，每5－10s改变 1nm，记录仪上将画出如图所示的折线。折线的最高点或最低点对应 的波长与标准溶液波长之差为波长示值误差。每个波长重复测量3次， 其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。
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1、通用技术要求的检查 目视、手动检查，参考第七页ppt。
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2、输液系统的检定
1）泵的耐压性检定
将仪器各部分连接好，以百分之百甲醇为流动相，流量为1mL/min， 按说明书启动仪器，压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路接口处， 应无湿迹。卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下，使压力达到 最大允许值的90％，保持5min无泄漏。
2）泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差的检定SR的检定
按表1的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事 先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表1规定时间 流出的流动相，在分析天平上称重，
按以下方程式式计算SS和SR
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3）检测器检定标准
检测器 紫外－可见光检测器
项目
二极管阵列检测器
*基线噪声
不超过5×10－4AU
荧光检测器 不超过5×110－7 RIU
*基线漂移 不超过5×10－3 AU/h 不超过5×10－3 FU/h 不超过5×10－4 RIU/h
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2、通用技术要求
1）仪器外观 仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品
系列号、出厂日期等内容的标牌，国产仪器应有制造计 量器具许可证MC标志（measure certification） 2）仪器电路系统
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3）梯度误差的检定
由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶 剂为含0.1％丙酮的水溶液，B经由5各阶梯从0变到100％，如下图 所示。
将输液泵和检测器连接（不接色谱柱）开机后以A溶剂冲洗系 统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。求出A,B 溶剂不同比列式的输出信号值（或记录仪读数），重复测量2次， 计算平均值。从B溶剂的含量及对应的输出信号值（或记录仪读 数），按式（3）计算梯度误差Gci，取Gci最大者作为仪器梯度误 差。
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SS (Fm Fs) / Fs 100 %
SR (F max F min) / Fm 100 %
•Fm：Fm=(W2-W1)/(ρ•t),流量实测值，mL/min; •W2：容量瓶＋流动相的质量，g; •W1：容F量m 瓶的质量，g; •ρ：实验温度下流动相的密度，g/cm3 •T：收集流动相的时间，min; •Fm ：同一组测量的算术平均值，mL/min; •Fs：流量设定值，mL/min; •Fmax：同一组测量中流量最大值，mL/min. •Fmin：同一组测量中流量最小值，mL/min.
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②基线噪声和基线漂移的检定
选用C18柱，以100％的甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，波长选择 254nm，检测器灵敏度调到最灵敏档，记录纸速调至5－10mm/min。开机 预热，待仪器稳定后记录基线30min，由检测器的衰减倍数和测得的基线 峰－峰高对应的记录仪标度，计算基线噪声，用检测器自身的物理量AU 作单位表示。
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②基线噪声和基线漂移的检定 ③最小检测浓度的检定 ④线性范围的检定 ⑤灵敏度换档误差的检定 3）示差检测器的检定 ①基线噪声和基线漂移的检定 ②最小检测浓度的检定 ③线性范围的检定 ④灵敏度换档误差的检定
5、整机性能的检定
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2）柱温箱检定标准
①柱温箱温度设定误差△TC不超过± 2℃ ②温度稳定性TC不超过1℃
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3、柱温箱温度设定值误差△Ts和控温稳定性误差Tc的检 定
将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45 ℃（也可根 据用户使用温度设定）进行检定，按仪器说明书操作，通电，升温， 待温度稳定后，记下温度读数值，并开始计时，以后每隔10min记录 一次读数，共7次，求出平均值。平均值与设定值之差为温度设定值 误差△Ts ，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc 。
*最小检测浓度
波长示值误差 波长重复性
不超过5×10－7 g/mL 萘/甲醇溶液
不超过± 2nm 优于2nm
不超过5×10－9 g/mL 硫酸奎宁/高氯酸水溶液
不超过± 5nm 优于2nm
不超过5×10－6 g/mL 丙三醇/水溶液
线性范围
优于103
优于103
优于103
换档误差
优于2％
优于2％
优于2％
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1）紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器的检定 ①波长示值误差和重复性检定 ②基线噪声和基线漂移的检定 ③最小检测浓度的检定 ④线性范围的检定 ⑤灵敏度换档误差的检定
2）荧光检测器性能的检定 ①波长示值误差和重复性检定
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在②的色谱条件下，用微量注射器从进样口注入10～20mL
1×10-7 g/mL的萘/甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰 －峰高，按式（5）计算最小检测浓度cL（按20mL进样量计算）。
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二、液相色谱检定的方法
1、通用技术要求的检定 2、输液系统的检定
1）泵耐压的检定 2）泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定 3）梯度误差的检定
3、柱温箱设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定 4、检测器的检定
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Nd＝KB 式中：Nd－检测器基线噪声；
K－衰减倍数； B－测得的基线峰－峰高对应的记录仪标度，AU。 基线漂移用1h内基线偏离原点的值AU/h表示
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液相色谱仪检定－检定方法
③最小检测浓度的检定
GCi (Li Lm) / Lm 100 %
式中：GCi－第i段梯度误差（％）； Li －第i段输出信号值（或记录仪读数）平均值； Lm －各段输出信号（或记录仪读数）平均值的平均值。
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流量设定值/（mL/min)
0.5
1.0
2.0
测量次数
3
3
3
流动相收集时间
10
5
5
Ss 允许误差
SR
± 5％ 3％
± 3％ 2％
± 2% 2%
注：⑴最大流量设定值可根据用户的使用情况而定
⑵对特殊的、流量小的仪器，流量的设定可根据用户的使用情况选大、中、小
三个流量，流动相的收集时间则根据情况适当缩短或延长