降纤冲剂对肝纤维化大鼠HA、PCⅢ、及IFN—γ的影响

降纤冲剂对肝纤维化大鼠HA、PCⅢ、及IFN—γ的影响
目的探讨降纤冲剂对复合因素导致的大鼠肝纤维化的防治作用及机理。

方法采用CCL4合并高脂乳剂及酒精等复合因素建立大鼠肝纤维化模型，以易善复为阳性对照，采用光镜观察组织学改变，检测干扰素-γ（IFN-γ）的表达及血清Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）的含量。

结果降纤冲剂组可减轻肝损伤和纤维化变性程度，降低血清中HA、PCⅢ的含量，提高肝组织中干扰素-γ水平。

结论降纤冲剂对实验性大鼠肝纤维化具有抑制作用。

标签：降纤冲剂；肝纤维化；干扰素-γ
随着我国人民生活饮食结构的变化以及临床诊断技术的不断提高，各种诱因所致的脂肪肝在我国的诊断率逐年增加。

其肝纤维化的发生率约高达25%，且约1.5%～8.0%患者可进展为肝硬化[1]，故积极防治脂肪肝对阻止慢性肝病的进展和改善愈后十分重要。

目前西医尚缺乏理想的针对性治疗药物。

相比而言，中医药具有疗效稳定、持久、无副作用、价廉等优势，因此深入进行中医药治疗脂肪肝、预防肝纤维化的临床及实验研究是有其现实意义的。

脂肪性肝纤维化多由饮酒过度，或嗜食肥甘厚味，酒食内伤，滋生痰浊所致。

因湿浊内停、痰浊阻滞，形成气机郁滞、血脉瘀阻，致气、血、痰浊互相搏结、聚滞为积。

总治则应以泻实为主，予祛痰浊、消积滞。

降纤冲剂是在长期临床实践中摸索创立的经验效方，具有祛瘀化浊，消导行滞，疏理解郁之效。

本课题旨在通过降纤冲剂对肝纤维化大鼠HA、PCⅢ及IFN-γ影响的实验研究，进一步探讨降纤冲剂防治肝纤维化的有效性、可靠性及部分作用机理。

1资料与方法
1.1雄性Wistar大鼠48只，清洁级，体重（150±20）g左右。

1.2药品和主要试剂降纤冲剂江苏省镇江市中医院中药制剂室制备，临用前用蒸馏水稀释至所需浓度；易善复胶囊等。

1.3方法
1.3.1分组将Wistar大鼠适应性喂养1w后，按体重随机分成四组，即：正常对照组、降纤冲剂组、易善复组及模型组各12只。

1.3.2造模与实验每天上午给模型组、降纤冲剂组、易善复组每只按1ml/100g 体重灌服乳剂（按配方：3号胆盐10g，胆固醇40g，猪油80g，吐温-80 40ml，丙二醇40ml，蔗糖80g，加30°酒精至600ml），正常组灌服等量蒸馏水，并每间隔2d按每只0.2ml/100g体重腹腔注射25% CCL4油液一次，正常组注射同样生理盐水。

每天下午按1ml/100g体重给降纤冲剂组灌服药物，按1ml/100g体重给易善复灌服药物，模型组和正常组灌服蒸馏水，连续8w。

并于第8w末次给药
后禁食。

1.4观察指标
1.4.1血清肝纤维化指标的测定采用放射性免疫实验方法，按试剂盒说明书要求在放射免疫计数器上测定各组大鼠血清透明质酸（HA）、Ⅲ型胶原（PCⅢ）。

1.4.2肝组织病理学观察将10%甲醛溶液固定后的肝大叶常规石蜡切片，HE 染色，置显微镜下观察肝细胞变性情况，依据六版内科学教材分级标准，将肝炎病变依炎症活动度及纤维化程度分别分为1～4级和1～4期，前者又将汇管区周围炎症（界面炎）与小叶内炎症分为两项，分别按程度定级，当两项的程度不一致时，总的炎症活动度以高者为准。

1.4.3血清细胞因子的测定将大鼠肝组织石蜡包块4um连续切片，采用免疫组化染色法，按试剂盒操作说明进行。

结果评定的分级标准[2]：阳性染色者在细胞浆或（和）细胞膜呈现淡黄、棕黄、棕褐色颗粒沉着。

根据染色程度及染色细胞百分率进行分析评定：基本不着色者为0分，着色淡黄者为1分，棕黄色者为2分，棕褐色者为3分；着色细胞占计数细胞百分率：5%以下为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%以上为3分。

将每张切片染色程度与染色细胞百分率得分各自相乘，0分为（-）、1～3分为（+）、4～6分为（++）、7～9分为（+++）。

1.5统计方法采用PEMS3.1软件包进行统计。

计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较用方差分析，等级资料采用秩和检验。

以P＜0.05为差异有显著性，P＜0.01为差异有极显著性。

2结果
2.1实验大鼠一般状况实验过程中正常对照组大鼠精神良好，行动灵敏，毛发光泽，饮食、二便正常，体重增加较快。

实验初大鼠注射CCl4表现为烦躁、易激惹。

约3w后，所有造模动物均趋于平静、皮毛晦暗无光泽甚至脱毛、活动及饮食减少、粪便稀薄、体重增长缓慢。

与模型对照组相比，易善复组与调脂积组症状较轻。

实验第3w末，由于技术原因，在灌胃过程中，降纤冲剂组出现1只死亡大鼠。

在第6w末于模型组中随机抽取一只大鼠，处死后取肝脏做病理切片，显示少量纤维细胞增生，变性明显，无坏死，无假小叶样结构。

于第8w的第3d，再次从模型组中随机抽取一只大鼠，处死后取其肝脏做病理切片，显示肝脏细胞部分变性坏死，汇管区纤维细胞增生，伴少量淋巴细胞浸润，部分中央静脉偏位，假小叶样结构形成。

提示造模成功。

故于第8w末处死全部大鼠。

2.2实验大鼠肝纤维化指标改变，见表1。

2.3肝脏肉眼观察和组织病理变化肉眼观察结果：正常对照组大鼠肝脏色泽
均匀，暗红，质软，表面光滑，边缘锐利，肝脏与腹膜之间无粘连，叶与叶之间分叶清楚；模型对照组大鼠肝脏体积普遍增大，色泽不均匀，暗黄，质韧，表面欠光滑，略呈颗粒状，边缘较钝，肝脏与腹膜之间、肝叶与叶间均有粘连；降纤冲剂组和易善复组大鼠均可见肝脏色泽均匀，暗红，体积略增大，表面尚光滑，边缘略钝，肝脏与腹膜之间、肝叶之间少量粘连。

光镜：正常对照组肝小叶结构完整，肝细胞索排列整齐，肝细胞无明显变性坏死，汇管区无扩大，未见纤维组织增生及炎性细胞浸润。

模型对照组肝细胞弥漫变性，以空泡变性和嗜酸性变为主，坏死以小灶性坏死、桥接坏死为主，中央静脉和汇管区炎性细胞浸润，纤维间隔及假小叶形成，小叶结构紊乱。

降纤冲剂组和易善复组肝小叶结构尚存，少数切片可见不完整假小叶形成，多数未见明显假小叶结构，肝细胞变性以少量空泡变性为主，散在小坏死灶，汇管区少量炎细胞浸润，以淋巴细胞为主，纤维组织增生不明显，见表2，表3。