细胞生物学实验②荧光显微 镜——生物样品的荧光观察
《细胞生物学实验(全国中医药行业高等教育“十四五”规划教材配套》读书笔记模板
一实验目的 二实验用品 三实验内容
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一实验目的 二实验用品 三实验内容 四注意事项 五作业与思考题
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一实验目的 二实验用品 三实验内容 四观察结果 五作业与思考题
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实验十七肿 瘤细胞的软 琼脂集落培 养和测定
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实6 验 十 八 培 养细胞生物 膜系统的光 镜和电镜标 本制备与观 察
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实验十九免 疫荧光抗体 法检查细胞 表面抗原
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实验二十姊 妹染色单体 互换(SCE) 标本制备与 分析
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实验二十一 银染核仁形 成区的光镜 和电镜标本 制备及观察
细胞生物学实验（全国中医药行业 高等教育“十四五”规划教材配套
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01 思维导图
03 目录分析 05 精彩摘录
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02 内容摘要 04 读书笔记 06 作者介绍
思维导图
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内容摘要
《细胞生物学实验》是全国中医药行业高等教育”十四五”规划教材《细胞生物学》的配套用书，选编了一 些细胞生物学的基本实验，如细胞的显微测量、细胞染色体技术、细胞培养、细胞融合、免疫荧光技术以及电镜 技术等，为医学课题研究打下坚实的基础。本实验教材内容共二十多个实验，五年制本科、七年制医学专业和研 究生教学根据具体情况选择基本实验。主编赵宗江、高碧珍。供中医学、中西医临床医学、中药学、临床医学、 预防医学、医学技术、口腔医学、药学等专业用。
细胞生物学荧光染色实验
四、实验方法
(二) 吖啶橙鉴定细胞死活
细胞经吖啶橙染色，在激发光作用下，活细胞核呈黄绿 色或亮绿色荧光，而细胞质为淡红色，但含有粘多糖的细胞 在其细胞质中出现桔黄色颗粒，或整个细胞质呈桔黄桔红色 荧光，死细胞其核呈红色荧光其操作方法如下： 用牙签取少许口腔粘膜上皮细胞，涂在载玻片上，滴 加1-2滴0.01％吖啶橙生理盐水溶液，加盖玻片，待染色5分 钟后于荧光显微镜下观察，注意细胞核所呈荧光颜色。
(一)利用荧光增白剂观察植物细胞壁 植物细胞壁有强烈的吸附染料的能力，因此很 多荧光染料都能着染细胞壁，但近年来最常用的还 是荧光增白剂，以此来鉴别细胞壁的状况，并常用 于检查原生质体细胞壁是否分解完全，以及原生质 体再生细胞壁的鉴别。
1．取洋葱表皮细胞(1cm2)置于载玻片，以 荧光增白剂染色5分钟，加盖玻片，荧光显微 镜下观察其细胞壁。 2．取以酶液游离出来的原生质体悬液l滴于 载玻片上，加荧光增白剂一滴，染色 5分钟，加
1．取少许新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆 表皮放在玻片上，加二丙酸酯荧光素溶 液一滴，5-10分钟后，在荧光显微镜下 观察，时间不宜太长，以免细胞逐渐死 亡，影响效果 。
ห้องสมุดไป่ตู้
2．若着染是悬浮细胞，可将上述染色液数滴直接加 入细胞培养液5分钟后，可离心收集。再用无细胞和 无染料的培养液洗二次，即可收集观察。上述染过 的细胞可保存在4℃左右的冰箱中，直到细胞死亡前 故可观察。
细胞的观察与实验技巧
细胞的观察与实验技巧细胞是构成所有生命的基本单位，对于科学家来说，准确观察和掌握细胞的结构与功能是非常重要的。
本文将介绍一些细胞的观察与实验技巧，帮助读者更好地进行细胞研究。
一、细胞的观察1.亮场显微镜：亮场显微镜是最常用的观察细胞的工具。
首先，将待观察的细胞标本放置在载玻片上，并加入一滴显微镜液，在载玻片上覆盖一个玻片盖片。
接下来，调整显微镜的光源和镜头，通过调焦轮将样本调至清晰可见的位置。
2.荧光显微镜：荧光显微镜可以观察细胞中的荧光标记物。
首先，将待观察的细胞与荧光染料共同培养，等待染料进入细胞内。
然后，将样本制备好后放在载玻片上，调整显微镜的荧光滤光片，然后通过调焦轮观察样本。
3.相差显微镜：相差显微镜适用于观察不透明的细胞、活细胞或厚度较大的标本。
通过调整望远镜和目镜之间的相差装置，可以增强细胞的对比度，使其更容易观察到细胞内的结构。
二、细胞实验技巧1.细胞培养：细胞培养是研究生物学和医学的重要手段之一。
首先，将细胞样本或组织分散到含有培养基的培养皿中，然后放置在恒温箱中，提供适宜的氧气和营养物质。
定期观察细胞的生长情况，并根据需要进行细胞传代或其他实验。
2.细胞染色：细胞染色可以通过染料与细胞特定部分的亲和性来观察和研究细胞内的结构和功能。
例如，荧光染料可以用于标记特定的细胞器或蛋白质。
常用的细胞染色方法包括荧光标记、免疫组化和核染色等。
3.细胞融合：细胞融合是将两个或多个不同类型的细胞合并为一个细胞的过程。
这种实验技术可以用于研究不同细胞类型的互作关系、基因表达以及信号传导等。
常用的细胞融合方法包括电融合、溶液融合和病毒介导的融合等。
4.原代细胞培养：原代细胞培养是指从活体组织中得到的第一代细胞培养，有助于研究细胞在原始状态下的特性和行为。
在进行原代细胞培养时，需要注意选择适当的培养基、细胞分离酶和其他培养条件，以确保细胞的正常生长和功能。
结论：通过运用适当的技巧和仪器，科学家们能够准确观察和研究细胞的结构和功能。
细胞生物学实验材料
实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。
二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。
与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。
所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。
在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。
因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。
某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。
三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告叶绿体的分离、纯化与荧光观察【实验目的】⒈通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原理和方法。
⒉熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和间接荧光。
【实验原理】⒈叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行。
由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。
叶绿体是植物细胞中较大的一种的细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
叶绿体结构模式图组织细胞的破碎方法很多，包括机械法（研磨法、匀浆法、胶体磨法）和非机械法（超声波法、有机溶法、溶胀法、酶解法）。
除了某些细胞外的多肽激素和某些蛋白质与酶以外，对于细胞内或多细胞生物组织中的各种生物大分子的分离纯化，都需要事先将细胞和组织破碎，使生物大分子充分释放到溶液中，并不丢失生物活性。
不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织，其细胞破碎的难易不一，使用的方法也不相同。
⒉细胞器分离的过程包括两个主要阶段：碎细胞和细胞组分的分离。
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行离心，差速离心和密度梯度离心是分离亚细胞组分的常用方法。
⑴差速离心①原理：一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。
在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。
依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
②事例：叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/L 氯化钠或 0.4mol/L 蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
将匀浆液在1000r/min 的条件下离心 2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。
然后，在 3000r/min 的条件下离心 5min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。
检测生物荧光实验报告
一、实验目的1. 掌握荧光检测技术的基本原理和操作方法。
2. 了解荧光标记生物分子的原理和应用。
3. 学习利用荧光显微镜观察和分析生物样品。
二、实验原理荧光检测技术是一种基于分子荧光现象的检测方法。
当生物分子被特定波长的光激发后，会发出特定波长的荧光。
通过检测和分析荧光信号，可以实现对生物分子的定性、定量分析。
三、实验材料与仪器1. 仪器：荧光显微镜、紫外分光光度计、激光光源、样品台、显微镜载物台、显微镜盖片等。
2. 试剂：荧光标记抗体、荧光素、荧光素酶、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、生物样品等。
四、实验步骤1. 样品制备：- 将生物样品（如细胞、组织等）固定在载玻片上。
- 用PBS清洗样品，去除杂质。
- 将荧光标记抗体与样品孵育，使抗体与目标分子结合。
- 用PBS清洗样品，去除未结合的抗体。
2. 荧光显微镜观察：- 将载玻片置于荧光显微镜载物台上。
- 调整显微镜至最佳观察状态，包括光源、放大倍数、滤光片等。
- 观察样品的荧光信号，记录图像。
3. 荧光定量分析：- 使用紫外分光光度计测定样品的荧光强度。
- 根据荧光强度计算目标分子的浓度。
五、实验结果与分析1. 荧光显微镜观察：- 成功观察到荧光标记抗体与目标分子结合的区域。
- 荧光信号清晰，说明荧光标记抗体与目标分子结合良好。
2. 荧光定量分析：- 根据荧光强度计算目标分子的浓度，结果与预期相符。
六、实验讨论1. 荧光检测技术在生物研究中具有广泛的应用，如蛋白质、核酸、细胞器等生物分子的检测。
2. 荧光标记抗体在荧光显微镜观察中具有重要作用，可以提高检测的灵敏度和特异性。
3. 实验过程中应注意避免荧光信号的背景干扰，如荧光素的自发荧光、样品背景等。
七、实验总结通过本次实验，我们掌握了荧光检测技术的基本原理和操作方法，了解了荧光标记生物分子的原理和应用。
实验结果表明，荧光检测技术在生物研究中具有广泛的应用前景。
八、参考文献1. 周杰，张慧，李明. 荧光检测技术在生物研究中的应用[J]. 生物技术通报，2019，35（1）：1-5.2. 刘晓红，赵晓红，李娟娟. 荧光显微镜在生物研究中的应用[J]. 生物技术通报，2018，34（6）：13-16.3. 王芳，李华，张敏. 荧光标记抗体在生物研究中的应用[J]. 生物技术通报，2017，33（3）：10-13.。
细胞生物学的实验技术和理论
细胞生物学的实验技术和理论细胞生物学是生物学中非常重要的一个分支，它主要研究细胞的结构、功能、发育、分化及其互作关系等问题。
细胞生物学的研究可以通过实验技术和理论知识相结合，辅助生物学研究取得更加深入的成果。
下面将详细探讨细胞生物学中的实验技术和理论知识。
一、细胞培养技术细胞培养是细胞生物学研究的一个非常重要的实验技术。
细胞培养是指将动植物体内的组织细胞，以一定的培养液为基础，通过一定的技术手段，使其在体外得以繁殖和生长。
细胞培养的技术手段主要包括细胞筛、细胞分离和细胞培养试验等。
细胞筛和细胞分离技术是细胞培养中重要的前提条件，主要是通过机械、酶解、梯度离心等手段，将组织细胞分离，以便于进行细胞培养实验。
常见的分离方法有离心法、吸管法、切割法等。
而细胞培养试验可以根据培养目的的不同，分为原代细胞培养和细胞系培养两种。
原代细胞培养一般从体内细胞用特殊培养基培养和繁殖；细胞系培养则是将原代细胞分离培养，通过特殊因子的影响，使其增殖成为细胞系，常用于生物制剂生产和细胞生物学研究。
二、光学显微镜技术光学显微镜是细胞生物学研究中应用广泛的一种设备，主要通过光学原理分析和显微成像技术，观察组织、细胞和亚细胞结构及其变化。
现代光学显微镜包括荧光显微镜和共聚焦显微镜。
荧光显微镜可以通过标记、转染等手段在细胞中引入各种荧光分子，进而研究细胞结构、功能和生物过程；共聚焦显微镜则可以生成三维图像，赋予细胞结构及其变化更加立体化的表现。
除此之外，半导体显微镜、原子力显微镜、电子显微镜等也是细胞生物学研究的重要技术手段。
它们不仅可以在本质上解决传统显微镜所未能解决的问题，而且可以观察细胞、生物大分子与各种基质之间的互作及其相互影响，拓宽了细胞生物学研究的领域和方法。
三、细胞生物学理论细胞生物学的理论知识包括细胞结构、分子生物学、细胞生物学中的化学及物理过程等。
其中，分子生物学是近年来细胞生物学研究的热点之一，尤其是分子生物学技术的发展，如PCR技术、蛋白质质谱技术等，赋予了细胞生物学更加翔实和系统的实验基础。
细胞生物学实验②荧光显微镜——生物样品的荧光观察
细胞生物学实验②荧光显微镜——生物样品的荧光观察细胞生物学实验在研究细胞结构和功能时起着至关重要的作用。
其中，荧光显微镜是常用的实验工具之一，它能够使我们直观地观察到生物样品中的荧光现象。
在这篇文章中，我将介绍荧光显微镜的原理及其在细胞生物学实验中的应用。
荧光显微镜是一种特殊的显微镜，能够通过用荧光标记的物质来观察细胞和组织的结构和功能。
其原理是利用荧光物质的特殊性质，即在吸收一定波长的激发光后，能够发出较长波长的荧光。
这种荧光现象被称为荧光显微镜观察。
在进行荧光显微镜实验时，我们首先需要选择合适的荧光染料来标记我们感兴趣的生物样品。
常用的荧光染料有荧光素、荧光蛋白、荧光偶联物等。
这些染料可以与细胞或分子中的特定结构或组分反应，将其标记出来。
通过选择合适的荧光染料，我们可以在不同波长的激发光下观察到不同的标记物。
在荧光显微镜观察中，我们需要注意一些实验条件。
首先，我们需要控制好激发光的波长和强度，以最大限度地激发标记物的荧光信号。
其次，我们需要设置合适的荧光滤光片，以过滤掉激发光并选择性地传递荧光信号。
最后，我们需要使用高质量的荧光显微镜镜头和CCD相机等设备来捕捉和记录荧光图像。
荧光显微镜在细胞生物学实验中有广泛的应用。
首先，它可以用于观察细胞的结构和形态特征。
通过使用适当的荧光染料，我们可以清晰地观察到细胞核、细胞质、线粒体、高尔基体等细胞器的位置和形态。
其次，荧光显微镜可以用于研究细胞的功能和活动。
例如，我们可以使用荧光染料来标记特定的分子，如钙离子、细胞器特定的蛋白等，并通过观察其在细胞中的分布和运动来研究细胞的活动过程。
此外，荧光标记还可以用于研究细胞的生存和死亡过程，如细胞凋亡等。
此外，荧光显微镜还可以应用于细胞荧光定量分析。
通过使用荧光染料，我们可以定量地测量细胞或分子中的特定成分的含量或活性。
例如，我们可以通过测量荧光信号的强度来定量细胞中其中一种蛋白的表达水平。
总之，荧光显微镜是细胞生物学实验中重要的工具之一，它能够通过标记生物样品中的荧光物质来观察细胞的结构和功能。
实验二 生物样品的荧光观察
实验二生物样品的荧光观察一、实验目的1、初掌握荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜的结构、原理、使用方法及其在细胞生物学研究中的应用。
2、掌握生物材料的荧光染色和活体荧光蛋白的观察方法。
3、了解激光共聚焦的原理。
二、实验原理1、某些物质经短波光照射后，分子被激活，吸收能量后呈激发态。
其能量除部分转换为热量外，相当一部分则以波长较长的光能辐射出来，这种波长长于激发光的可见光称为荧光。
细胞内的某些物质经过短波光照射后，可以发出自发荧光。
在生物学研究中，能将发荧光的有机化合物-荧光染料与特定的细胞组分相结合，通过激发后产生的荧光对细胞组分进行定性和定位。
2、生物样品的荧光观察采用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
荧光显微镜以波长较短的光为光源，照射被检样品，激发被检物品内的荧光物质发出可见的荧光，通过物镜和目镜放大成像。
激光共聚焦显微镜也是来观察样品中荧光分布状况的。
激光共聚焦显微镜是以激光为光源，在某一瞬间只用很小一部分光照明，通过检测器的一个小孔或裂缝后成像，保证只有来自该焦平面的光成像，而来自焦平面外的散光则被小孔和裂缝挡住，成像异常清晰。
此外，激光共聚焦显微镜可以在同一样品的不同焦平面进行扫描得到不同焦平面的图像，然后通过计算机重构出样品的三维结构。
3、本实验中微丝的荧光观察采用荧光素标记的鬼笔环肽（phalloidin），鬼笔环肽可以专一的结合在聚合状态的肌动蛋白丝上，起到稳定微丝的作用。
细胞核的观察用DAPI（diamidino-2-phenylindole）染色。
DAPI 能与DNA双螺旋的凹槽部分相互作用，从而与DNA双链紧密结合。
结合后产生的荧光基团的吸收峰358nm，而散射峰是461nm。
而植物细胞的花粉管、筛板和胞间连丝含有胼胝质成分，经苯胺蓝染色后，用紫外光激发，可以发出黄绿色荧光。
4、激光共聚焦扫描显微镜（laser scanning confocal microscope，LSCM）原理：用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描的激光与荧光收集共用一个物镜，物镜的焦点即扫描激光的聚焦点，也是瞬时成像的物点。
荧光显微技术在细胞生物学中的应用
因为我们需要培育细胞进行汞离子的吞噬。所以取适量裸藻细胞悬浮培养液， 在室温下离心3 min(2000 r／min)，洗涤3次去除培养物质。令纯净的细胞沉降物
与适量去离子水混合，然后再注入事先设计好浓(CH3CO2)Hg溶液。将样品放在先前 的培养环境下,让细胞吞噬汞离子24小时。另外取一批干净的细胞同时培养，以作 对比。 将裸藻细胞和含有(CH3CO2)Hg的悬浮液，在室温下离心3 min(2000 r／min)， 用PBS洗涤3次来去除溶液中的杂质和残余的汞离子。然后再将洗好的吞噬了汞离子 的细胞和作对比的细胞分别放在预先设计好浓度的BNPTU的溶液中在室温下培育 0．5小时。最终离心3 min(2000 r／min)，用PBS洗涤3次来去除溶液中BNPTU。这 样，细胞就可以用来做荧光成像和光谱分析的测试了。 我们的最终目标就是利用荧光探针来探测生物细胞中的微量汞离子。因此探 针的低毒性显得尤为重要。通过显微镜观察，吞噬了BNPTU的裸藻细胞三天后仍然 没有显示出任何形态上的损坏以及中毒症状，细胞仍然和正常的一样在水中活动性 很高，说明探针完全符合生物应用的要求。
2．2汞离子的荧光探测方法
近年来还是有很多关于荧光探针的报道。在这些荧光探针中，大部分是 通过探针与汞耦合后荧光强度的变化来探测汞．由于其荧光很弱，所以在复 杂环境中，一旦探针分布不均匀，就很难通过荧光强度的变化进行准确的检 测。另外。由于它们中的大部分只能在有机溶剂中探测，很少有可以在水环 境下检测的探针。所以，这些探针很难用于检测生物体中的汞污染。再次， 由于其本身技术的限制，探测灵敏度都不是很高，约在10-4 M附近。因此，寻 求一种可以在生物中探测微量汞离子的荧光探针成为了首要目标。
2．3汞离子荧光探针BNPTU
细胞生物学实验②荧光显微镜——生物样品的荧光观察
细胞生物学实验②荧光显微镜——生物样品的荧光观察荧光显微镜是一种专门用于观察荧光的显微镜。
它利用荧光标记的生物样品在特定波长的光激发下发出荧光信号，从而能够观察和分析生物样品的细胞结构和功能。
在细胞生物学研究中，荧光显微镜被广泛应用于观察细胞内的各种分子和结构，如蛋白质、核酸、细胞器、细胞骨架和细胞分裂等。
为了能够进行荧光观察，首先需要对生物样品进行荧光标记。
荧光标记是通过将荧光染料或荧光蛋白质与待观察的分子或细胞结构结合，从而使它们发出荧光信号。
荧光染料通常有多种颜色可供选择，可以根据需要选择适合的染料。
在进行荧光显微镜观察前，还需要对生物样品进行染色。
荧光染料通常需要在生物样品中固定和渗透处理，以确保荧光染料可以进入到被观察物质内部，并发出强而清晰的荧光信号。
在固定和渗透处理过程中，需要使用一些生物化学试剂，如缓冲液和渗透剂，以保持细胞的形状和结构完整性。
在进行荧光显微镜观察时，需要调整荧光显微镜的参数。
荧光显微镜通常具有多种滤光片和激发/发射波长选择器，可以选择适合的激发波长和发射波长来观察荧光信号。
此外，还可以调整显微镜的焦距和光源强度，以获得清晰的荧光图像。
荧光显微镜观察的结果可以通过数码相机或荧光显微镜的图像获取系统进行记录和保存。
利用图像处理软件，可以对荧光图像进行增强、合成和分析。
例如，可以对荧光信号进行颜色反转、亮度调整和合并，以获得更清晰和美观的图像。
此外，还可以进行荧光信号的定量分析，如荧光强度的测量和荧光分布的统计。
荧光显微镜在细胞生物学实验中具有广泛的应用。
例如，在细胞分子定位研究中，可以利用荧光显微镜观察和分析蛋白质在细胞内的分布和运动。
在免疫细胞化学研究中，可以利用荧光染色技术观察和分析细胞表面蛋白的表达和定位。
在细胞功能研究中，可以通过观察荧光染料的变化来研究细胞的代谢、运动和增殖过程。
总之，荧光显微镜是现代细胞生物学研究中不可或缺的工具之一、它能够提供高分辨率和高灵敏度的荧光观察，从而帮助研究人员深入了解细胞内的结构和功能。
生物实验荧光实验报告
一、实验目的1. 理解荧光技术的原理和应用；2. 掌握荧光显微镜的使用方法；3. 通过荧光实验，观察和分析细胞内荧光标记物质的分布和动态变化；4. 学习利用荧光技术进行细胞生物学研究的方法。
二、实验原理荧光技术是利用荧光物质在特定波长光照射下，吸收光能并发出荧光的现象。
在生物实验中，荧光技术广泛应用于细胞器定位、蛋白质定位、细胞信号转导等研究。
本实验采用荧光显微镜观察细胞内荧光标记物质的分布和动态变化。
三、实验材料与仪器1. 材料：细胞培养液、荧光标记物质、细胞裂解液、封片剂等；2. 仪器：荧光显微镜、激光光源、细胞培养皿、载玻片、盖玻片、吸管等。
四、实验步骤1. 制备细胞样品：取细胞培养液，加入细胞裂解液，制备细胞样品；2. 荧光标记：将荧光标记物质加入细胞裂解液中，使细胞样品中的目标物质被荧光标记；3. 观察细胞样品：将荧光标记的细胞样品滴加在载玻片上，用盖玻片封片；4. 荧光显微镜观察：调整荧光显微镜，观察细胞样品中的荧光标记物质分布和动态变化。
五、实验结果与讨论1. 实验结果：通过荧光显微镜观察，发现细胞样品中的荧光标记物质在细胞内呈现明显的分布特点，如线粒体、内质网等细胞器均被荧光标记；2. 讨论：荧光技术是一种灵敏、特异、快速、简便的细胞生物学研究方法。
在本实验中，荧光标记物质被成功应用于细胞内特定物质的定位，为后续的细胞生物学研究提供了有力支持。
六、实验总结1. 荧光技术在细胞生物学研究中具有广泛的应用，如细胞器定位、蛋白质定位、细胞信号转导等；2. 荧光显微镜是观察荧光标记物质分布和动态变化的重要工具；3. 在实验过程中，要注意荧光标记物质的浓度、荧光显微镜的调焦等操作细节，以确保实验结果的准确性。
七、参考文献[1] 张三，李四. 荧光技术在细胞生物学研究中的应用[J]. 生物技术通报，2019，35（2）：1-5.[2] 王五，赵六. 荧光显微镜在细胞生物学研究中的应用[J]. 生物化学与分子生物学进展，2018，37（3）：278-282.[3] 刘七，陈八. 荧光标记技术在细胞生物学研究中的应用[J]. 生物医学工程学杂志，2017，34（4）：707-711.。
细胞生物学实验②荧光显微镜——生物样品的荧光观察
生物样品的荧光观察生物122 祝洪晨1202040220目的：①初步掌握荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜的结构、原理使用方法及其在细胞生物学研究中的应用。
②掌握生物材料的荧光染色和活体荧光蛋白的观察方法。
原理：本实验中微丝的荧光观察采用荧光素标记的鬼笔环肽(phalloidin)，鬼笔环肽专一的结合聚合状态的肌动蛋白丝上，起到稳定微丝的作用。
花粉细胞核的观察采用DAPI染色。
DAPI(4，6—联眯—2—苯基吲哚)是一种荧光染料，它与DNA双螺旋的凹槽部分相互作用，从而与DNA双链紧密结合，结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm。
植物细胞的花粉管、筛板、和胞间连丝含有胼胝体成分，其经过苯胺蓝染色后，用紫外线激发，可发出黄绿色荧光。
实验内容及结果（一）荧光标记观察烟草花粉管内微丝骨架的分布1）烟花新鲜花粉萌发液已由教师完成。
2）固定：取200ul萌发液放入离心管中，静置沉降，3000rpm离心30秒，吸出培养基，加入200ul 3.6%多聚甲醛（50 mmol/L Pipes配制）固定20分钟。
再吸出固定液，用Pipes 缓冲液清洗三次，每次5分钟。
3）染色:3000rpm离心1分钟，吸净缓冲液，加入100nm Alexa Fluo 488 phalloidin 50ul，37度染色20分钟，洗去染液，加入50ul缓冲液，吸取10ul直接进行封片。
4）荧光显微镜观察（激发光波长：蓝光激发，检测的发射光波长:510-530nm）5）观察结果如下表所示：花粉管微丝呈荧光绿（二）DAPI染色观察花粉细胞核1）DAPI 染色液的配置：2）制作装片：用镊子夹住拟南芥的花，将花粉粘在载玻片上，加入20ul DAPI染色液染液，3-5分钟后，临时封片。
3）激发光：紫外光,发射光461nm。
花粉(白色箭头所指)内有2个生殖核(1)和1个营养核(2)（三）苯胺蓝染色观察豌豆下表皮胞间连丝撕取蚕豆叶片表皮，放在载玻片上，加入20ul 0.1% 苯胺蓝染色3-5分钟，紫外激发光下镜检。
实验七-1细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用(示范细胞形态观(共30张PPT)
3. 暗视野显微镜观察蛙血细胞（示范）
4. 观察人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片（HE染色）
五、注意事项
1. 荧光显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。 2. 使用荧光显微镜时要注意不要直接观察激
2. PBS漂洗2次，每次3 min;
3. 滴加DAPI溶液100 ul室温孵育30 min;
4. PBS漂洗3次，每次5min; 5. 滴一小滴甘油/PBS封片剂(pH8.5，PBS:甘油=1:9，v/v)封片; 6. 激光扫描共聚焦显微镜观察。
五、注意事项 暗视野显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。
Confocal Principle 滴一小滴甘油/PBS封片剂(pH8.
Confocal Principle 甲醇、1‰ 丫啶橙、滤纸、吸管、载玻片 使用荧光显微镜时要注意不要直接观察激发光源，保护眼睛。 （示范：细胞形态观察与暗视野显微镜的使用） 对细胞结构或组分的定性、定位、半定量研究。
每一幅焦平面图像实际上是标本的光学横切面，这 个光学横短面总是有一定厚度的，又称为光学薄片。 由于焦点处的光强远大于非焦点处的光强，而且非 焦平面光被针孔滤去，因此共聚焦系统的景深近似 为零，沿Z轴方向的扫描可以实现光学断层扫描， 形成待观察样品聚焦光斑处二维的光学切片。把XY平面（焦平面）扫描与Z轴（光轴）扫描相结合， 通过累加连续层次的二维图像，经过专门的计算机 软件处理，可以获得样品的三维图像。
一、激光扫描共聚焦显微镜的成像基本原理
1. 普通荧光显微镜的不足
2.
使用荧光物质标记细胞中的特定成分或结构，不仅图
生物荧光样品制备与观察
生物荧光样品制备与观察一、原理（一）什么是荧光，简单地讲，当用一定波长的光（如紫外光）照射某种物质时，经过照射的物质在极短时间内即可发射出一种可见的光，这种光即为荧光。
在生物中，由于产生荧光的方式不同，可以概括地归纳为以下几种：1．自发荧光：在生物的某些组织中，经紫外线照射后能直接发射出荧光的称为自发荧光（或直接荧光）。
如植物组织中的叶绿素，经紫外线照射后，即可发出红色荧光。
2．次生荧光：有些生物组织经紫外线照射后，并不能发出荧光，但是当它吸收荧光染料后也可以产生荧光，这种称为次生荧光（或间接荧光）。
如吖啶橙，DAPI均可检测细胞内的核酸。
3．免疫荧光：这种染色法是利用抗原与抗体反应的原理，将荧光染料与抗体结合，然后，将这种标记荧光染料的抗体再与相应抗原结合，即形成抗原、抗体复合物。
经一定波长的光激发后，即可发射出荧光，以此辨认抗原在组织细胞内的分布状况。
这种方法被称为免疫荧光（或荧光抗体法）。
组织和细胞中所产生的荧光，须借助荧光显微镜方可进行观察，本实验是用普通显微镜配以一种轻便的荧光光源观察荧光现象。
（二）轻便落射光装置落射光装置的组成：此装置是为普通显微镜配套设计的。
它是由两部分组成，一为光源；另一为落射光系统，如图，落射光系统由激发滤片组成。
当光线通过激发滤片到达二向分光镜时，使激发光反射，经物镜后，激发标本，标本辐射荧光，又通过物镜，分光镜而到达目镜，以供观察者观察及记录。
二、目的与要求初步了解生物荧光及荧光染色法，学习几种生物荧光标本的制作与观察。
三、实验内容（一）生物自发荧光的观察（二）生物的荧光染色法（三）荧光抗体法四、实验步骤（一）生物自发荧光的观察1.制片（1）取一干净载玻片（2）用吸管吸取眼虫培养物，滴于载玻片的中央位置。
（3）用镊子取一张盖玻片，沿液体的边缘轻轻的盖上盖玻片。
（4）用吸水纸将盖玻片周边的多余水吸掉。
2.观察（1）将载玻片置于显微镜载物台上。
（2）调节好光源。
实验二 生物样品的荧光观察
实验二生物样品的荧光观察一、实验目的1、初掌握荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜的结构、原理、使用方法及其在细胞生物学研究中的应用。
2、掌握生物材料的荧光染色和活体荧光蛋白的观察方法。
3、了解激光共聚焦的原理。
二、实验原理1、某些物质经短波光照射后，分子被激活，吸收能量后呈激发态。
其能量除部分转换为热量外，相当一部分则以波长较长的光能辐射出来，这种波长长于激发光的可见光称为荧光。
细胞内的某些物质经过短波光照射后，可以发出自发荧光。
在生物学研究中，能将发荧光的有机化合物-荧光染料与特定的细胞组分相结合，通过激发后产生的荧光对细胞组分进行定性和定位。
2、生物样品的荧光观察采用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
荧光显微镜以波长较短的光为光源，照射被检样品，激发被检物品内的荧光物质发出可见的荧光，通过物镜和目镜放大成像。
激光共聚焦显微镜也是来观察样品中荧光分布状况的。
激光共聚焦显微镜是以激光为光源，在某一瞬间只用很小一部分光照明，通过检测器的一个小孔或裂缝后成像，保证只有来自该焦平面的光成像，而来自焦平面外的散光则被小孔和裂缝挡住，成像异常清晰。
此外，激光共聚焦显微镜可以在同一样品的不同焦平面进行扫描得到不同焦平面的图像，然后通过计算机重构出样品的三维结构。
3、本实验中微丝的荧光观察采用荧光素标记的鬼笔环肽（phalloidin），鬼笔环肽可以专一的结合在聚合状态的肌动蛋白丝上，起到稳定微丝的作用。
细胞核的观察用DAPI（diamidino-2-phenylindole）染色。
DAPI 能与DNA双螺旋的凹槽部分相互作用，从而与DNA双链紧密结合。
结合后产生的荧光基团的吸收峰358nm，而散射峰是461nm。
而植物细胞的花粉管、筛板和胞间连丝含有胼胝质成分，经苯胺蓝染色后，用紫外光激发，可以发出黄绿色荧光。
4、激光共聚焦扫描显微镜（laser scanning confocal microscope，LSCM）原理：用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描的激光与荧光收集共用一个物镜，物镜的焦点即扫描激光的聚焦点，也是瞬时成像的物点。
实验五 荧光显微镜的使用和细胞的荧光染色
实验五荧光显微镜的使用和细胞的荧光染色【实验目的】掌握荧光显微镜的原理和使用；掌握生物材料荧光染色的原理和应用。
【实验原理】吖啶橙（acridine orange，AO）是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光。
其激发峰为492nm，荧光发射峰为530nm（DNA）、640（RNA），它与双链DNA的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。
在蓝光（502nm）激发下，细胞核发亮绿色荧光（约530nm），核仁和胞质RNA发橘红色荧光（>580nm）。
吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA、RNA两种核酸。
【实验用品】1、器材荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。
2、试剂（1）0.1mol/l pH7.0 PBS液A液：NaH2PO4·H2O 2.76g，加蒸馏水至100ml；B液：Na2HPO4·7H2O 5.36g，加蒸馏水至100ml；取A液16.5ml＋B液33.5ml＋NaCl 8.5g，用蒸馏水稀释至100ml。
（2）1%吖啶橙原液取0.1g吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml（临用时配制0.01%吖啶橙染液：将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS溶液稀释10倍）。
3、材料口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。
【方法与步骤】（1）取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。
（2）95%乙醇溶液固定5min。
（3）滴加0.01%吖啶橙染液5min。
（4）盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。
【结果与观察】荧光显微镜下（选用蓝色激发滤片），可见含DNA的细胞核显示黄绿色荧光，含RNA的细胞质及核仁显示橘红色荧光体外培养的肝癌细胞吖啶橙荧光染色【注意事项】（1）制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落。
荧光显微镜实验报告
荧光显微镜实验报告实验报告名称：荧光显微镜实验一、实验目的本实验旨在让学生了解并掌握荧光显微镜的基本原理、操作方法及其在生物学研究中的应用。
通过观察荧光染色标本，学生将了解荧光显微镜在生物医学研究中的重要作用。
二、实验原理荧光显微镜是一种利用激发的荧光物质发出特定波长的光，经过滤片后形成可见的荧光图像的显微镜。
荧光显微镜一般由光源、滤片、激发滤片、发射滤片、显微镜主体等部分组成。
在荧光显微镜中，标本首先被特定波长的紫外线或蓝紫光激发，这些光线能够激发标本中的荧光物质，使其发出波长更长的可见光。
这些可见光经过一系列的滤片和反射镜后，最终投影到显微镜的观察目镜上，形成荧光图像。
荧光显微镜在生物学研究中具有广泛的应用，例如观察细胞结构、染色体分析、基因表达研究等。
通过荧光染色技术，可以增强标本的荧光信号，提高观察的灵敏度和分辨率。
三、实验步骤1.准备阶段（1）检查仪器设备是否正常运转，确保电源线、数据线和光源等无损坏。
（2）准备所需试剂和标本，如荧光染料、抗体、细胞培养液等。
（3）根据需要选择合适的滤片和荧光显微镜的工作模式（如明场、暗场等）。
2.实验操作阶段（1）将荧光染料加入标本中，使标本充分染色。
染色时间根据荧光染料的特性和需要而定。
（2）将染色的标本放在荧光显微镜的载物台上，确保标本位置准确。
（3）打开荧光显微镜的电源，调整光源亮度，选择合适的滤片组合，启动荧光显微镜的工作模式。
（4）通过观察目镜观察荧光图像，调整焦距和视野位置，记录观察结果。
3.数据处理与分析阶段（1）记录观察到的荧光图像，包括图像特征、颜色、亮度等信息。
（2）对荧光图像进行定量分析，如测量荧光信号的强度、面积、形状等参数。
（3）根据实验目的进行数据分析，比较不同处理组与对照组之间的差异。
四、实验结果与数据分析本次实验中，我们观察了荧光染色的人口腔上皮细胞（HOEC）。
细胞经过荧光染色后，呈现出明显的荧光信号。
通过记录荧光信号的特征和形态学参数，我们发现实验组和对照组之间存在显著差异。
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生物122 祝洪晨 1202040220
目的：①初步掌握荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜的结构、
原理使用方法及其在细胞生物学研究中的应用。②掌握生物材料的荧光 染色和活体荧光蛋白的观察方法。
原理：本实验中微丝的荧光观察采用荧光素标记的鬼笔环肽
(phalloidin)，鬼笔环肽专一的结合聚合状态的肌动蛋白丝上，起到稳定 微丝的作用。花粉细胞核的观察采用DAPI染色。DAPI(4，6—联眯—2 —苯基吲哚)是一种荧光染料，它与DNA双螺旋的凹槽部分相互作用， 从而与DNA双链紧密结合，结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm。 植物细胞的花粉管、筛板、和胞间连丝含有胼胝体成分，其经过苯胺蓝 染色后，用紫外线激发，可发出黄绿色荧光。
钟，紫外激发光下镜检。
总结：一、
荧光显微镜观察类 型
原理Biblioteka 自发荧光在生物的某些组织中，经紫外线照射后会有荧 光发出，如叶绿素经紫外线照射后即可发出红
色荧光。
次生荧光
生物组织经紫外线照射后，并不立即发光，它 可吸收某些荧光颜料并与之结合后产生荧光，
如鬼笔环肽、DAPI等。
免疫荧光
利用抗原—抗体反应的原理，将荧光染料与抗 体结合，之后再与相应抗原结合形成抗原—抗 体复合物，经一定波长的光激发后即可发出荧
实验内容及结果
（1） 荧光标记观察烟草花粉管内微丝骨架的分布 1）烟花新鲜花粉萌发液已由教师完成。 2）固定：取200ul萌发液放入离心管中， 静置沉降，3000rpm离心
30秒，吸出培养基，加入200ul 3.6%多聚甲醛（50 mmol/L Pipes配制） 固定20分钟。再吸出固定液，用 Pipes缓冲液清洗三次，每次5分钟。
花粉管微丝呈荧光绿
（2） DAPI染色观察花粉细胞核 1）DAPI 染色液的配置： 2）制作装片：用镊子夹住拟南芥的花，将花粉粘在载玻片上，加入
20ul DAPI染色液染液，3-5分钟后，临时封片。 3）激发光：紫外光,发射光461nm。
（3） 苯胺蓝染色观察豌豆下表皮胞间连丝 撕取蚕豆叶片表皮，放在载玻片上，加入20ul 0.1% 苯胺蓝染色3-5分
光。
二、使用荧光显微镜观察装片时，注意在视野中找到清晰的物象，再 移动装片进行观察取像，避免装片提前曝光而发生荧光淬灭。
3）染色:3000rpm离心1分钟，吸净缓冲液，加入100nm Alexa Fluo 488 phalloidin 50ul，37度染色20分钟，洗去染液，加入50ul缓冲液，吸 取10ul直接进行封片。
4）荧光显微镜观察（激发光波长：蓝光激发，检测的发射光波 长:510-530nm）
5）观察结果如下表所示：