线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
线粒体复合体Ⅳ试剂盒说明书
货号: QS3303 规格：25管/24样线粒体复合体Ⅳ试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并最终把电子传递给氧，生成水。
测定原理：还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：试剂一：25mL×1瓶，-20℃保存；试剂二： 5mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：0.5 mL×1瓶，-20℃保存；试剂四：液体10mL×2瓶，4℃保存；试剂五：粉剂×2支，-20℃保存；试剂六：粉剂×2支，-20℃保存；样本的前处理：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：①准确称取0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做）。
⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅳ酶活性测定。
测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（1）工作液的配制：临用前取试剂四、试剂五、试剂六各一支，将试剂五和试剂六依次转移到试剂四中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2）将工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；（3）在1mL玻璃比色皿中加入80μL样本和800μL工作液，混匀，记录550nm处初始吸光值A1和 37℃反应30min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒
1． 本产品为 20 次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 孵育时，须避免光照 4． 建议染色完成后，即刻进行荧光分析 5． 本公司提供膜电位依赖性活性氧检测试剂产品 6． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定荧光清晰
产品内容
缓冲液（Reagent A） 选择液（Reagent B） 补充液（Reagent C） 染色液（ Reagent D） 产品说明书
毫升 微升 毫升 微升 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，染色液（Reagent D），严格避免光照； 有：用于染色孵育 （共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光线粒体 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于测定线粒体荧光强度
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基 （hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷 氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-） 次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等 细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二 氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是 取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种完全 自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧 化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定线粒体活性氧族的浓度。三氟甲氧基苯腙羧基氰化物（carbonyl cyanide 4-trifluoromethoxy henylhydrazone；FCCP）使线粒体膜化学离子梯度消失。
人癌细胞线粒体呼吸链复合物I酶联免疫分析
人癌细胞线粒体呼吸链复合物I酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中线粒体呼吸链复合物I的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人癌细胞线粒体呼吸链复合物I水平。
用纯化的人癌细胞线粒体呼吸链复合物I抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入癌细胞线粒体呼吸链复合物I，再与HRP标记的癌细胞线粒体呼吸链复合物I抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的癌细胞线粒体呼吸链复合物I呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人癌细胞线粒体呼吸链复合物I浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书范文(中文版)
GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书范文(中文版)GMS10015v.A主要用途GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂是一种旨在通过一种毒性较小的碱性染料特异性地使具有活性功能的线粒体呈现蓝绿色，从而判断线粒体功能的完整性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）制备物的功能检测。
产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。
线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌、肝、肾等器官和组织的细胞中。
大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取，或从组织培养细胞中提取。
在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。
詹纳斯绿B（JanugreenB），是一种毒性较小的碱性染料。
它可以对活细胞进行直接染色，在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体的线粒体。
线粒体所以能显示出蓝绿色，是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统，它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。
产品内容毫升毫升毫升份保存方式保存在－20℃冰箱里；GENMED染色液(ReagentB)，避免光照；有效保证6月用户自备毫升离心管：用于线粒体染色的容器光学显微镜：用于线粒体染色观察分析实验步骤实验开始前，将℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（ReagentB）置于冰槽里融化，并放在暗室里。
然后进行下列操作。
一、纯化线粒体染色1．从纯化的线粒体样品中移出至微升（含细胞中提取的线粒体）到新的预冷的毫升离心管，置于冰槽里（注意：线粒体须均匀分布，没有聚集成团）2．加入等量微升的GENMED染色液（ReagentB），轻柔混匀3．放进暗室里，在室温下孵育1分钟4．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片5．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色圆形或椭圆形颗粒（注意：可见蓝绿色渐渐变淡现象）6．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失二、活体细胞染色1．将待测细胞（某细胞）移入到1.5毫升离心管2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为500g（或2000RPM；例如eppendorf5415）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED清理液（ReagentC）或GENMED保存液（ReagentA）5．加入微升GENMED染色液（ReagentB），充分混匀6．放进暗室里，在冰槽里孵育分钟7．即刻移取微升到载玻片上，放上盖玻片8．在光学显微镜油镜下进行观察：功能完整的线粒体呈现蓝绿色线状或颗粒小体9．篮绿色强度显著减弱或呈现无色，表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失注意事项1．本产品为20次（活体细胞）或400次（纯化线粒体）操作2．所有操作均须无菌状态下进行3．线粒体样品操作须在低温下进行，且操作快速4．操作时，须戴手套5．建议染色完成后，即刻进行显微镜观察分析6．孵育时，须避免光照7．本公司提供系列线粒体试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定显色清晰使用承诺友情提醒IFITDOESN’TWORK，RECHECKYOURE某PERIMENTTOSEEWHATYOUDIDWRONG。
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书
4
GMS10016.6 GMS10016.7 GMS10016.8 GMS10067.1 GMS10067.2 GMS10067.3 GMS10111.1 GMS10111.2 GMS10104.1 GMS10104.2
GMS10104.3
GMS10104.4
GMS10104.5
GMS10104.6
3． 移取
微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的 1 毫升比色杯
4． 加入
微升 GENMED 稀释液（Reagent C）
5． 放入分光光度仪，置零
6． 取出比色杯，加入
微升含有 GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 稳定液（Reagent D）的 GENMED
11．上下倾倒数次，混匀
12．放入分光光度仪，置零
13．取出比色杯，加入
微升含有 GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 稳定液（Reagent D）的 GENMED
反应工作液
14．即刻上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
15．即刻放入分光光度仪检测，此为样品读数（0 秒读数－60 秒读数），通常活性读数差值为正数
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A
GMS10014.2 v.A
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过测定纯化的可溶性完整线粒体样品 中的细胞色素 C 氧化酶的活性，即采用比色法测定受到细胞色素 C 氧化酶催化的氧化反应的权威而经典的 技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、 昆虫等）细胞色素 C 氧化酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。
辅酶Q10检测试剂盒(比色法)
辅酶Q 10(Co10)检测试剂盒(比色法)简介：辅酶Q 类广泛存在于生物界，故又称泛醌，他们与线粒体内膜相结合，是呼吸链中重要的递氢体，广泛参与体内的生物代谢过程，对多种酶有激活作用，是细胞代谢和细胞呼吸激活剂，辅酶Q 10(Coenzyme Q 10)是的重要成员之一。
不同生物体的n 值不同，人体的n 值为10。
Leagene 辅酶Q 10(CoQ 10)检测试剂盒(比色法)其检测原理是待测样品在碱性条件下，EC 取代了CoQ 10上的甲氰基，形成蓝色的化合物，通过分光光度计检测620处吸光度，根据标准曲线即可测出辅酶Q 10含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 稀释标准品：用EC buffer CoQ 10标准(5mg/ml)至0.1、0.3、0.5、1.0、2.0mg/ml ，-20℃保存，备用。
2、 准备样品：取新鲜动物心脏或肝脏等样品，采用醇碱皂化法、溶剂皂化法等提取适量的CoQ 10提取液。
3、 CoQ 10检测：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
编号 名称TE1011 50T Storage试剂(A): CoQ 10标准(5mg/ml) 1ml -20℃ 避光 试剂(B): EC solution 25ml RT 试剂(C): EC buffer50ml RT 试剂(D): CoQ 10 Assay buffer 25ml4℃ 避光 使用说明书1份空白管 标准管 测定管 EC buffer 2ml 1.75ml 1.75ml CoQ 10标准 — 0.25ml — 待测样品(提取液) — — 0.25ml EC solution0.5ml0.5ml0.5mlCoQ10 Assay buffer 0.5ml 0.5ml 0.5ml4、盖紧盖子，混匀，室温避光孵育。
MPT比色法检测试剂盒说明书
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 GMS10095.3 GMS10095.3A GMS10095.3B GMS10095.3C GMS10095.1 GMS10095.2 GMS10095.2 GMS12226
规格 10/50 次 10/50 次
10 次 50 次 50 次 10 次 100 次 20 次 20 次 10 次
3
GMS10014.1 GMS10014.2 GMS10014.3 GMS10014.4 GMS10014.5 GMS10014.6
GMS10015 GMS10016.1 GMS10016.2 GMS10016.3
吸光值比值降低，表明膜通道孔活性（MPTP）增强
9． 构建膜通道孔诱导开放曲线：纵座标（Y）为吸光值比值（A540/Initial A540），横座标（X）为时间（秒）
注意事项
1． 本产品为 20 次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 使用时，避免污染母液，尤其是 GENMED 缓冲液（Reagent A） 4． 线粒体样品中忌用磷酸盐、EDTA、钙镁离子等处理 5． 建议使用未经诱导或抑制处理的样品作为阴性对照 6． 建议孵育完成后，即刻进行检测分析 7． 可以使用 540nm 波长的滤波器或者 440nm 波长的滤波器 8． 可以使用分光光度仪检测，0.2 毫升比色皿替代酶标板 9． 540nm 波长的 0 分钟读数通常 0.8 为理想状态；而 540nm 波长的 0 分钟读数通常 0.2 为理想状态 10．样本测定 1 分钟或其它检测时间读数低于 0 分钟读数表明膜通道孔开放 11．如果膜通道孔为瞬时开放（transient），则吸光读数缓慢降低 12．GENMED 诱导液（Reagent B）含有氯化钙，用户可以使用其它诱导剂替代，例如磷酸盐，二氧化钾
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。
其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。
产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。
其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。
复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。
基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。
NAD-NADH比率检测试剂盒说明书
NAD/NADH比率检测试剂盒关键词：NADH，NAD+，Nicotinamide adenine dinucleotide，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原态，还原型辅酶Ⅰ。
N指烟酰胺，A指腺嘌呤，D 是二核苷酸。
葡萄糖代谢时直接经代谢所产生的ATP是十分的少的，而代谢产生的NADH 或FADH2经由一个电子传递与氧化磷酸反应可产生大量的ATP。
NADH分子是线粒体中能量产生链中的控制标志物。
NADH水平的上升指示代谢失衡的出现。
监视NAD/NADH的氧化还原状态是表征活体内线粒体功能的最佳参数。
紫外光可以在线粒体中激发NADH产生荧光，用来监测线粒体功能。
一般来说，涉及到氧化还原的反应都用得到，比如呼吸作用，光合作用，等等氨会抑制呼吸过程中的电子传递系统，尤其是NADH。
因此NAD/NADH水平的监控是能量传递、细胞核组织氧化还原态等研究的主要兴趣点。
有没有一款可以同时检测，NAD+,NADH，以及NAD+/NADH比率，这三个指标的试剂盒呢？艾美捷科技特向您推荐，已被广泛使用，发布文章不计其数的高品质试剂盒。
*样品通过NAD萃取，同时检测（NAD+NADH）与（NAD）的结果，相减计算得出NADH 含量，以及NAD/NADH的比率。
原理：Amplite 比色法NAD/NADH 比率试剂盒，提供一个比色法原理的检测培养细胞的总NAD/NADH，和NAD/NADH ratio的方法。
在这个实验中，裂解液中NAD可以被NAD萃取液提取，通过酶反应被转化为NADH，然后利用NADH探针反应，产生黄色染料，此染料可以在460nm处测吸收峰，或者加入增强剂后，可以检测635nm吸收峰。
染料产生颜色与细胞裂解液中NAD 或者NADH的浓度呈正比。
《卓越的标准曲线》《发表文章结果：Ren, T., et al. Oncogene 36.42(2017).》引用文献Norisoboldine, a natural AhR agonist, promotes Treg differentiation and attenuates colitis via targeting glycolysis and subsequent NAD+/SIRT1/SUV39H1/H3K9me3 signaling pathwayAuthors: Qi Lv, Kai Wang, SimiaoQiao, Ling Yang, Yirong Xin, Yue Dai, Zhifeng WeiJournal: Cell death & disease (2018): 258Stochastic expression of lactate dehydrogenase A induces Escherichia coli persister formationAuthors: Naoki Yamamoto, RinoIsshiki, Yuto Kawai, Daiki Tanaka, TetsushiSekiguchi, Shinya Matsumoto, Satoshi TsunedaJournal: Journal of Bioscience and Bioengineering (2018)Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun WangJournal: European Journal of Pharmacology (2017): 124--133Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine FermentationAuthors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L InglisJournal: Fermentation (2017): 61Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing YeJournal: Cell & Bioscience (2017): 27MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cellsAuthors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H YangJournal: Oncogene (2017)Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, MitsuguAkagawaJournal: Biochemistry (2017)Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratioAuthors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping HaoJournal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL,AND MECHANISTIC ASPECTSAuthors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, GaganPaudel, Elena Tarakhovskaya, NadezhdaFrolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain TissierJournal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621--7636AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevationAuthors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie ZhangJournal: Aging cell (2016): 416—427艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系，目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理，主要包括：Abbkine、Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、Caisson Labs等，可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。
线粒体复合体Ⅲ试剂盒说明书
货号: QS3302 规格：25管/24样线粒体复合体Ⅲ试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：线粒体复合体Ⅲ（EC 1.10.2.2）又称CoQ-细胞色素C还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责把还原型CoQ的氢传递给细胞色素C，生成还原型细胞色素C。
测定原理：与氧化型细胞色素C不同，还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：试剂一：25mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：5mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：0.5 mL×1支，-20℃保存；试剂四：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；试剂六：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；样本的前处理：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：①准确称取0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ（此步可选做）。
⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅲ酶活性测定。
测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（1）工作液的配制：临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
纯化线粒体呼吸控制率RCR定量检测试剂盒说明书
植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
活体细胞线粒体跟踪试剂盒 活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒
全血线粒体 DNA 萃取试剂盒 纯化线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织基因组/线粒体 DNA 同步萃取试剂盒 动物血小板线粒体 DNA 萃取试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体 DNA 萃取试剂盒 植物线粒体 DNA 萃取试剂盒 动物硬组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 非突触体脑组织线粒体分离试剂盒 植物线粒体粗提分离试剂盒 植物活性线粒体分离试剂盒 植物高质纯化线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒 真菌/酵母细胞活性线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞高质纯化线粒体分离试剂盒 细胞 ATP 生物发光法定量检测试剂盒 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 动物血小板线粒体粗提分离试剂盒 动物血小板活性线粒体分离试剂盒 动物血小板高质纯化线粒体分离试剂盒 动物全血线粒体粗提分离试剂盒 动物全血活性线粒体分离试剂盒 动物全血高质纯化线粒体分离试剂盒 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒 线粒体超氧化物歧化酶（Mn/Fe SOD）分离试剂盒 超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 细胞/组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 植物线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 全血线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒
技术背景
线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。线粒体结构完 整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其 耗氧率大，为III态呼吸。ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。 呼 吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP） 的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
组织肉毒碱棕榈酰转移酶I活性比色法定量检测试剂盒产品说明
组织肉毒碱棕榈酰转移酶I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途组织肉毒碱棕榈酰转移酶I（CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE I）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过肉碱和脂酰辅酶A以及特定抑制剂反应系统中释放出巯基辅酶A，使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体等）肉毒碱棕榈酰转移酶I的特异活性检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景脂肪酸β氧化过程（β-oxidation）在动物组织的线粒体发生的脂肪酸代谢通路，可概括为活化、转移、β氧化及最后经三羧酸循环被彻底氧化生成CO2和H2O，并释放能量等四个阶段。
大于10个碳（C10）的活化型长链脂酰辅酶A是不能直接透过线粒体内膜，需要借助肉碱（camitine），即L-3羟-4-三甲基铵丁酸，而被转运入线粒体内，在线粒体内膜的外侧及内侧分别有肉碱脂酰转移酶（carnitine palmitoyl transferase；CPT；EC2.3.1.21）I和Ⅱ。
位于内膜外侧的酶Ⅰ，促进脂酰CoA转化为脂酰肉碱，后者可借助线粒体内膜上的转位酶（或载体），转运到内膜内侧，然后，在酶Ⅱ催化下脂酰肉碱释放肉碱到胞浆，留下脂酰CoA。
由此位于胞浆的活化脂肪酸―脂酰CoA穿过线粒体内膜进入基质而被氧化分解。
肉碱脂酰转移酶缺失症导致机体无法代谢脂肪酸。
基于肉碱和脂酰辅酶A在丙二酰辅酶A（malonyl CoA）存在与否的条件下，通过肉碱脂酰转移酶的作用，产生脂酰肉碱，并释放出巯基辅酶A（CoA-SH），与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析丙二酰辅酶A敏感性肉碱脂酰转移酶I的特异活性。
线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0510规格：25T/24S50T/48S产品内容：提取液：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入2mL丙酮试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；溶于1mL丙酮，可分装后-20℃保存。
临用前再用丙酮100倍稀释后使用，现用现配。
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入2mL蒸馏水，现配现用；工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三1:1混合，现配现用。
产品说明：复合体Ⅰ（EC1.6.5.3）又称NADH-CoQ还原酶或NADH脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。
该酶催化一对电子从NADH传递给CoQ，同时可使还原生成O2-，是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。
测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）O2状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。
复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+，在340nm下测定NADH的氧化速率计算出该酶活性的大小。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、丙酮、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、复合体的提取：(1)称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0mL提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。
(2)4℃600g离心10min。
(3)将上清液移至另一离心管中，4℃11000g离心15min。
(4)上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
(5)在沉淀中加入400μL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅰ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。
五种线粒体呼吸链复合体活性检测工具
五种线粒体呼吸链复合体活性检测工具一、线粒体呼吸链简介：线粒体呼吸链，在生物细胞中，接受代谢物上脱下的氢（或电子）的载体有三种——NAD+、NADP+和FAD。
其中NADPH不进入呼吸链合成ATP，而是作为生物合成的还原剂；只有NADH 和FADH2进入呼吸链。
二、线粒体呼吸链传递体顺序呼吸链中的电子传递有着严格的方向和顺序，即电子从氧化还原电位较低的传递体依次通过氧化还原电位较高的传递体逐步流向氧分子递氢体与电化学梯度的建立。
三、线粒体呼吸链复合体呼吸作用是生物体内最基础的能量代谢活动之一，是由位于线粒体内膜上的四种呼吸链蛋白复合物分步完成的，这四种蛋白复合物分别为复合物I（NADH 脱氢酶）、复合物II（琥珀酸-辅酶Q 还原酶）、复合物III（细胞色素c 还原酶）和复合物IV（细胞色素c 氧化酶）。
四、线粒体呼吸链复合体的生物学意义据统计，约有30-40%线粒体病是由于线粒体呼吸链酶复合体缺陷所致，通常采用线粒体基因组分析与线粒体呼吸链酶活性检测相结合的方式予以确诊。
帕金森病（Parkinson’s disease, PD）、亨廷顿舞蹈病（Huntington's disease，HD）等神经退行性疾病的线粒体功能障碍和能量代谢异常已成为当今共识的早期病理现象, Cardellach研究表明PD患者线粒体复合体I、IV酶活性功能受损；Lambert MP研究证明线粒体机能障碍在HD发病机制中扮演着重要角色，其线粒体复合体II酶活性丢失，铁硫中心和FAD两个亚基表达降低。
线粒体呼吸链复合体I/II/III/IV/V的结构和功能已被广泛研究。
目前临床上以营养支持对症治疗复合体缺陷或酶活性异常，从而改善患者症状及延缓病情发展，然而其确切的发病机制和特异性治疗方法仍亟待解决。
五、Abbkine 电子传递链相关研究工具CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅰ-Ⅴ活性检测试剂盒（比色法）提供了一种更细致准确的复合体Ⅰ-Ⅴ活性检测方法，可以兼容检测多种类型的样本。
五种线粒体呼吸链复合体研究工具
五种线粒体呼吸链复合体研究工具今天咱们就来聊一聊关于线粒体呼吸链复合体的五种研究工具，先“上菜”：CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒（比色法）KTB1850CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒（比色法）KTB1860CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒（比色法）KTB1870CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性检测试剂盒（比色法）KTB1880CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性检测试剂盒（比色法）KTB1890线粒体呼吸链上所有进行电子传递的辅基包括：NADH、FAD、FMN、铁硫中心、泛醌、铜中心以及细胞色素α、α3、bH、bL、c、c1。
相应的酶类和辅基并非单独发挥作用，而是相互结合在一起，形成功能相对独立的呼吸链蛋白复合物，即呼吸链复合物Ⅰ（NADH 脱氢酶），呼吸链复合物Ⅱ（琥珀酸脱氢酶），呼吸链复合物Ⅲ（细胞色素 c 还原酶）和呼吸链复合物Ⅳ（细胞色素c 氧化酶），呼吸链复合物Ⅳ，呼吸链复合物V。
一、呼吸链复合体Ⅰ线粒体中大多数的ATP都是复合体Ⅰ。
呼吸链复合体Ⅰ是最复杂的复合物单体，由45个蛋白亚基、8个铁硫中心和1个FMN 分子组成，并且可以结合NADH、NADPH 和辅酶Q。
呼吸链复合体Ⅰ由跨膜臂和伸入线粒体基质的亲水臂两部分组成，亲水臂和跨膜臂连接呈L 形。
亲水臂完成NADH 的氧化并将电子传递至两臂连接的区域；跨膜臂完成辅酶Q 的还原和质子的转运。
两臂之间功能的协调由一系列蛋白亚基的相互作用和构象变化来完成。
二、呼吸链复合体Ⅱ复合体Ⅱ由琥珀酸脱氢酶和一种铁硫蛋白组成，将从琥珀酸得到的电子传递给辅酶Q。
细胞色素类都以血红素为辅基，红色或褐色。
将电子从辅酶Q传递到氧。
呼吸链复合体Ⅱ从FADH 中获得电子，并将电子传递给氧化态泛醌Q 生成还原态泛醌QH2，整个过程没有发生质子的跨膜转运。
呼吸链复合体Ⅱ的蛋白结构相对简单，由4个蛋白亚基组成。
GENMED活体细胞线粒体损伤 氧化荧光测定试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10017.1 v.A GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂是一种旨在通过特异性染色剂分析线粒体膜心磷脂的变化来定性或定量测定线粒体内含质量以及自由基、氧化物等对细胞线粒体的毒性与损伤作用的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景心磷脂（Cardiolipin）是线粒体膜上的主要成分之一。
它对细胞氧化特别敏感。
线粒体脂类分解，致使心磷脂显著减少，最终造成线粒体的严重损害。
Nonyl-Acrydine Orange是一种可自由通过细胞膜的染色剂，特异性地染色线粒体上的心磷脂，并发出荧光。
一旦线粒体膜质量减少或受到损害以及被氧化，其荧光显著减弱。
产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）微升GENMED稀释液（Reagent C）毫升GENMED保存液（Reagent D） 毫升产品说明书 1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免光照，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证12月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器毫升离心管：用于细胞染色的容器血细胞计数仪：用于细胞计数台式离心机：用于沉淀细胞细胞流式仪：用于细胞荧光分析比色杯：用于细胞荧光分析的容器荧光显微镜：用于观察荧光细胞荧光分光光度仪或酶标仪：用于细胞荧光定量分析实验步骤一、 脱离或悬浮细胞分析实验开始前，将 ℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，GENMED稀释液（Reagent C）放进 ℃恒温水槽里预热。
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。
其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。
产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。
其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。
复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。
基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。
线粒体提取试剂盒说明书
线粒体提取试剂盒说明书货号：SM0020规格：50T/100T保存：四周内使用可2-8℃储存，长期保存请置于-20℃。
产品内容：组份SM0020-50T SM0020-100T Lysis Buffer50mL 100mL Mito-Wash Buffer25mL 50mL Store Buffer 5mL 10mL产品简介：线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。
适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。
其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
操作步骤（仅供参考）：1.样本处理a.组织匀浆：称取100~200mg 新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS 或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。
加入1.0mL 冰预冷的Lysis Buffer ，0℃冰浴上下研磨组织20次；b.培养细胞匀浆：消化细胞，PBS 洗涤，800g 离心5~10min 收集细胞，计数。
每次提取需要5×107个细胞，加入1.0mL 冰预冷的Lysis Buffer 重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次。
2.将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g 离心5min 。
3.取上清，转移至新的离心管中，4℃，1000g 再次离心5min 。
4.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g 离心10min 。
离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。
将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
5.往线粒体沉淀中加入0.5mL Wash Buffer 重悬线粒体沉淀，4℃，1000g 离心5min 。
6.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g 离心10min 。
弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底。
7.用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。
电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。
线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。
ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。
呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。
正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
产品内容介质液（Reagent A）毫升态底物液（Reagent B）微升态底物液（Reagent C）微升产品说明书 1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。
然后进行下列操作。
1．加入xx毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入xx微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加5％）6．持续记录1分钟后，注射加入xx微升态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降）（8．继续注射加入xx微升态底物液（Reagent C注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用GENMED线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注态底物液（Reagent B）和态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
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线粒体呼吸链复合物活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
线粒体呼吸链复合物（－辅酶还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（）－辅酶还原酶的特异性活性检测。
其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。
产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景
线粒体呼吸链复合物，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶还原酶（；），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（；），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有至多个多肽结构。
其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的－辅酶还原酶（）。
复合物催化线粒体内电子由供体传递到内膜上辅酶受体（泛醌；）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。
基于辅酶底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过－辅酶还原酶的催化，转化成还原型泛醌（），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（；）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（；），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（波长），由此定量测定－辅酶还原酶的特异活性。
其反应系统是：
产品内容
缓冲液（）毫升
反应液（）毫升
阴性液（）毫升
底物液（）微升
专性液（）微升
产品说明书份
保存方式
保存在－℃冰箱里，避免反复冻融；反应液（）含有毒性物质，避免直接用手接触；反应液（）和底物液（），避免光照，有效保证月
用户自备
比色皿：用于比色分析的容器
双波长分光光度仪：用于比色分析
培养箱：用于孵育反应物
实验步骤
实验开始前，将－℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；缓冲液（）室温预热；反应液（）和底物液（）注意避光。
然后进行下列操作。
一、测定准备
1．准备好待测样品（例如纯化线粒体样品等），置于冰槽里（注意：检测前溶解线粒体；参见注意事项）2．设定好双波长分光光度仪（温度为℃）：波长分别为和，间隔秒，读数次（共分钟），并置零（注意：参见注意事项）
二、背景对照测定
1．移取微升缓冲液（）到新的比色皿
2．加入微升反应液（）
3．加入微升底物液（）
4．放进℃培养箱里静置分钟
5．加入微升阴性液（）
6．上下倾倒数次，混匀（限定在秒之内）
7．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：
（波长读数－波长读数）分钟－（波长读数－波长读数）分钟或分钟
三、样品总活性测定
1．移取微升缓冲液（）到新的比色皿
2．加入微升反应液（）
3．加入微升底物液（）
4．放进℃培养箱里静置分钟
5．加入微升待测样品（注意：微克总线粒体蛋白；样品须溶解；参见注意事项）
6．上下倾倒数次，混匀（限定在秒之内）
7．即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：
（波长读数－波长读数）分钟－（波长读数－波长读数）分钟或分钟
四、样品非特异活性测定
1．移取微升缓冲液（）到新的比色皿
2．加入微升反应液（）
3．加入微升专性液（）
4．加入微升底物液（）
5．放进℃培养箱里静置分钟
6．加入微升待测样品（注意：微克总线粒体蛋白；样品须溶解；参见注意事项）
7．上下倾倒数次，混匀（限定在秒之内）
8．即刻放进分光光度仪检测，此为样品非特异活性读数：
（波长读数－波长读数）分钟－（波长读数－波长读数）分钟或分钟
五、计算样品活性
）样品活性（总活性或非特异活性）
）样品特异活性
注意事项
1．本产品为次（个样本）操作，包括背景对照测定
2．操作时，须戴手套
3．系统操作过程中，背景测定只需次
4．线粒体样品检测前，须溶解；建议冻存融解（－℃至℃）循环次或使用线粒体溶解试剂盒－
5．加入样品启动反应后秒内即刻比色测定
6．通常反应分钟后比色测定值趋于稳定；测定值由高到低变化；测定可以持续分钟
7．测定值由高到低变化，即分钟测定读数低于分钟测定读数，表明有酶活性
8．比色测定后，比色皿须清洗彻底
9．通常比色测定的起始读数为理想状态
10．如果用户没有双波长同步测定分光光度仪，可以使用单波长替代，注意活性计算时，毫摩尔吸光系数变成
11．建议待测样本线粒体蛋白浓度为微克微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；
注意计算公式的调整（本公司提供线粒体溶解试剂盒为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和蛋白质浓度定量试剂盒）
12．如果使用细胞或组织裂解悬液，则蛋白浓度为微克微升
13．样品特异活性是指鱼藤酮敏感的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸－辅酶还原酶，去除其它干扰因素（例如复合物等）
14．如果用户需要研究线粒体呼吸链复合物总活性包括鱼藤酮敏感和抗性之和，请咨询技术顾问，另购补充反应液（）
15．线粒体呼吸链复合物（－辅酶还原酶）单位活性定义为：在℃，条件下，每分钟内能够氧化微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（）所需的酶量作为一个活性单位
16．本公司提供系列线粒体及其酶类技术产品
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测准确。