不同生长年限白及的多糖组织化学定位研究

2019年32卷3期 Vol. 32 No. 3
西"表$%&
Southwest China Journal of Agricultural Sciences511
文章编号：1001 -4829(2019)3-0511-05D O I：10. 16213/j. c n k i. s c ja s.2019. 3.009不同生长年限白及的多糖组织化学定位研究
朱新焰1，字淑慧2，唐宇2，张智慧1，杨竹雅3，石亚娜1，
钱均祥1，孙信梅4，王家金1，季鹏章1!
(1.云南省农业科学院药用植物研究所，云南昆明650205$2.云南农业大学，云南昆明650201$3.云南中医药大学，云南昆明
650500$4.彝良县农业技术推广中心，云南彝良657600)
摘要：【目的】对不同生长年限的白及进行多糖组织化学定位研究，明确白及多糖的分布和积累特征&为探索和扩大白及资源的
药用部位提供科学依据。

【方法】采用徒手切片和冰冻切片方法制作白及根、假鳞茎、茎和叶片横切片，利用组织化学定位方法对
白及多糖进行定位分析。

【结果】徒手切片法比冰冻切片法更适用于白及多糖的组织化学定位研究，白及多糖主要分布在假鳞茎、
叶及根的皮层薄壁细胞、茎的维管束附近的薄壁细胞和叶片薄壁细胞中。

发现叶片多糖分布较多，仅次于假鳞茎，根和茎中分布
较少。

【结论】不同生长年限白及的不同器官及组织中，多糖的含量存在显著差异。

组织化学定位方法是一种研究和分析白及多
糖的快速简便的技术和方法，白及叶片的多糖分布较多，开发潜力很大&研究结果可为白及资源的综合利用提供依据。

关键词！白及；多糖；组织化学；定位
中图分类号:S567 文献标识码! A
Histochemistry Localization of Polysaccharides of
Bletilla striata in Different Growth Years
ZHU X in-yan1%ZI Shu-hui2 %TANG Yu2%ZHANG Zhi-liui1%YANG Zhu-ya3%SHI Y a-na1%
Q IA N Jun-xiang1%S U N X in-m ei4 %S A N G J ia-jin1%JI Peng-zhang1 !
(1 • Institute of M edicinal P la n t, Yunnan Academy of Agricultural S ciences, Yunnan Kunming 650205 , C h in a；2. Yunnan Agricultural Uni­
versity ,Yunnan Kunming 650201, C h in a；3. Yunnan University of Chinese M edicine, Yunnan Kunming 650500, C hina; 4. Agricultural
Technology Extension Center of Yiliang C ounty, Yunnan Yiliang 657600, China)
A b s tr a c t:' O bjective】Histochemical localization of OR8R polysaccharides in different growth years was studied to de
trilDution and accumulation characteristics and to provi(de a scientific basis for the development of B cross sections of root, pseudobulb, stem and leaf of B R N ia ：L a t were peri-fromed by means of freehand and frozen section m ethods, and
the polysacchari(des of Bletilla striata were analyzed by histochemistry localization. [R e su lt】Freehand section w stiady of histochemistry localization for Bletilla striata polysaccharides than frozen section. The accumulation sites of polysaccharides were
mainly distributed in the cortex parenchym a cells of pseudobulb, leaf and ro o t, surrounding vascular bundle of stem. The polysaccharides
were mainly distributed in pseudobulb, followed by leaves, and the polysaccharides of root and stem were the least. [ Conclusion 】The contents of
polysaccharides in different organs and tissues of Bletilla striata in different growth years were significantly diferent. Histochemistry localization is
a rapid and simple method for analyzing the polysaccharides of B l i a ：L a t The content of polysaccharides in
it has a widely development future. This study can provide a basis for the comprehensive u K ey w o rd s ：Bletilla striata；Polysaccharide ；Histochemistry ；Localization
【研究意义】白及）B l i a s i a t(Thunb.)
收稿日（:2018 -07-12
基金项目：国家自然科学基金（31760347);云南省级环境保护 专项资金项目（2014B I006";云南省科技计划项目（2015FB161 + 2017A B002+2018Z F010-1);云南省技术创新人才培养项目(2018H B085)资助
作者简介:朱新焰（1984 -)，男，安徽宿松人，生药学硕士，主要 从事中药资源的开发利用及中药材质量标准的研究与制订工作，E-m ail:153042910@qq. c m，！为通讯作者，E-m ail:466192110@ qq. com〇R e i c hb.f.]为兰科白及属多年生草本植物。

现为 《中国药典》（2015年版）收载的常用中药[1]。

白及 具有理肺、止血消肿等功效，主要用于治疗肺结核及 咳血、吐血和外伤肿痛及胃溃疡病等症[2]。

多糖是 白及的主要有效成分，目前，白及以新鲜或干燥的假 鳞茎入药，叶、茎、根等部位则是弃而不用，造成了资 源的严重浪费。

同时，白及也是一种药用价值高、需 求量大、野生资源稀缺甚至濒危，并且参伪十分严重
512
西"表$ % &
32卷
的重要药 物。

的
得深人研究，挖掘
，以减少资源
效成分的浪费。

【人研究进展】组
学 技术在中药材
学成分分
累规 研究有着重要 [34]。

的研究主要 在资源分假鳞茎多糖成分提取分
[7_w ]。

目，尚
本
物多糖的组 学
的研究报道;而兰科 物的组
学 研究的[11#12]。

【本研究切入点】
物显微的组
学，研究不同生 限
的多糖分累
，发掘
糖蕴藏量，拓展资源
范围。

【拟解决的关键问题】 种 '
进行多糖定性定量分析，揭示不同生 限的药材多糖分布场所 ，为
药
物的叶、茎、
根
的综合开发
供科学的参考依据。

1
材料与方法
l .i
供试材料
一年生、两年生和三年生白及的根、假鳞茎、茎、 自云南省农业科学院药
物研究所药材种
植基地。

1+药品与仪器
、
、品红、亚硫酸氢钠、甲醇、乙醇、偏
重 为分 试 试剂。

主要仪器有：Nikon 80i 显微镜，Nikon E 100 显微镜，FA 1004 电子分 。

1+方法
1.3.1染色试剂的配制将碱性品红溶于热蒸馏 水中，使之充分溶解，
50 °C
滤，再
25 °C
加入
，放置暗处，
24 h 后，加活性炭摇荡，过滤
存
备用，呈浅黄色。

1.3.2 、固定净选不同生长年限白及的进行 切片，选取 组 、完整
的切 。

将组切 75 %乙醇 进行固
定，比不 的效果。

1.3.3 的组织切片放入1.0 % HI 0$
水 理5 ~ 10 @n 后，蒸馏水清洗3遍。

再将不 的切片分别放人2种Schiff 试剂
内进行，
， 的
进行实验。

，
重
洗 次。

在显 进行观 。

1.3.4
随机选取不 品的9 ~ 12张切片，在显
进行观统计， 切
取3 不 观 ;根 不 ，观
为4x 10$ ~12 x 104!m 2;统计分析各视野中的多糖数
量，取。

根
着
粒物的
|
分 依次分为5 ，从低到高分别用1
个“+”到5 “+”表示。

2
结果与分析
2.1
多糖组织化学定位方法
结果
2.1.1 通 切 75 %乙醇溶液进
行不同时间的固定后发现，25 ~30 m in
内，固效果 ，选取25 min 对切片进行
，条件优
果 表1， 1。

2.1.2
不同染色时间的实验结果显示，
染色25 ~ 40 m in 时， 组着
，层次清
，糖物质显示明显。

考 限生
的
组织发育情况，所 取
为25 min ，染色时
间优
果见表2,图2。

a :固定 20 min (40 x );
b :固定 25 min (40 X "
a ： Fixed time
of 20
min
(40 X "； b ：
Fixed
time
of 25
min
图1 固定时间效果比较
Fig. 1 Comparison results of different fixed
time
3期朱新焰等:不同生长年限白及的多糖组织化学定位研究
513
表1
固定时间的优化结果
Table 1
Optimization results of fixed time
( m in)
Fixed time
粒状多糖数量
Polysaccharide quantity
( m in)
Fixed time
粒状 糖 量
Polysaccharide quantity
5m 30m m m m m 15m m m 40m m m m
20m m m m 60m m 25
m m m m m
120
-
表2
染色时间的优化结果
Table 2
Optimization results of dyeing time
(m in)
组织着 深 粒状多糖数量
( m in)
组 着 深粒状 糖 量
D yeingtim e
Relative color grade
Polysaccharide quantity
D yeingtim e
Relative color grade Polysaccharide quantity
5m m m 35m m m m m m m m m m 10m m m m m 40m m m m m m m m m m 15m m m m m m 45m m m m m m m m m 20m m m m m m m m 50m m m m m m m m 25m m m m m m m m m m 60m m m m m m m 30
m m m m m
m m m m m
90
m m m m m
m
2.2白及根、假鳞茎、茎、叶内多糖的分布及定量分析
在不 限的 根中，多糖分布在维管束及
皮层
，
深，其
它 量分布。

3 生的根 糖分
，1年生及2年生的 ，见表3、图3。

在 假鳞茎内，多糖主要在皮层
组织、维管
， 粒状或小团块;皮层薄、皮、木质 维管
的
、
质
深。

该
糖数量随生长年限的增
，表3、 4。

茎中的多糖主要分布在皮层薄壁组织及细
内、维管 的 质中，呈小粒状，总体呈现分 ，数量
生 限
加 的 ，见表3、 5。

糖主要分 在 ， 维管
分布。

该
糖数量仅次于假鳞茎，
小团块 粒状；
，粒随着生
限大。

见表3、6。

合生
限及4种不同器官分析，含糖量最
的是假鳞茎，其次为 ，根茎 。

4
糖的数量范围为观察3 (12 X 104 !@2)的不
的
；
展示的是该年限各器官
a :染色 15 min (40 X ";
b # 染色 25 min (40 X "
a ： Dyeing time of 15 min (40 X )；
b ： Dyeing time of 25 min (40 X )
图2
染色时 果比较
Fig. 2
Comparison results of different dyeing
time
514
西"表$ 学板
32卷
1:薄壁细胞;2:多糖;a :1年生根;b :2年生根;.3年生根
1 # Parenchyma cells;
2 : Polysaccharide; a : The root of 1 year o ld ; b : The root of 2 years o ld ; c : The root of
3 years old
图E 白及根中多糖分布情况
Fig. 3 Distribution of polysaccharide in the roots of
1:薄壁细胞;2 :多糖;a : 1年生假鳞茎;b :2年生假鳞茎;c :3年生假鳞茎
1: Parenchyma cells; 2: Polysaccharide; a : The pseudobulb o f* 1 year old; b : The pseudobulb o f* 2 years old; c: The pseudobulb o f* 3 years old
图4
白及假鱗茎中多糖分布情况
Fig. 4
Distribution of polysaccharide in the pseudobulbs of
、a 丨
b ,
c
1:薄壁细胞;2:多糖;3:维管束;4:维管束鞘细胞;a :1年生茎;b :2年生茎;c :3年生茎 1: Parenchyma cells; 2 : Polysaccharide; 3 : Vascular bundles; 4:Bundle sheatli cells; a : The
stem
of 1
year
old;
b :
The
stem of 2 years
old;
c :
图5
白及茎中多糖分布情况
Fig. 5
Distribution of polysaccharide in the stems
of
3期朱新焰等:不同生长年限白及的多糖组织化学定位研究515
1:薄壁细胞;&#多糖;a:l年生叶;b:2年生叶$.3年生叶
1:P a re n c h y m a c e lls；2 ：P o ly sa c c h a3d e$a:T h e le a f o f1y e a r o ld$b:T h e leaf o f2 y e a rs o ld$c:Theleaf o f3y e a rs o ld
图6白及叶中多糖分布情况
F ig.6D is tr ib u tio n o f p o ly s a c c h a rid e in t h e le a v e s o f O R8R
R E白及各组织器官的多糖定量分析
T a b le3Q u a n tita tiv e a n a ly sis o f p o ly sa c c h a rid e s in d iffe r e n t tis s u e s o f B le tilla s tria ta
生限糖量（个）P o ly sa c c h a rid e q u a n tity
G r o w th y e a rs根假鳞茎茎叶
17-10280g4055—7143g172
213g17433g48015g18180-235
326g33520g56623g27268g310 3讨论
通 不同生 限的 根、假茎、”
的多糖组 学 量分析，每种 观察9 ~ 12张切片，在显 进行观察统计，各
切 取3个不观域发现，4种 '糖分布，主要分布在皮层 ，韧皮维管 组 分布，，组织的 、质着 深。

在育.培 ，以假茎的数量 |作为一个重要指标，具一定的指导意义[13]。

一生 限的 作比较，除一年生的根部糖含量略 茎外，4种 糖含量 依次为:假鳞茎、、茎、根。

不生限的同一比，假 茎、茎、的糖含量 生
限增加 。

在实 ，收3年生白及的假鳞茎人药是合理的。

实验果表明：、茎、根 糖分布，是 糖含量 $分品与假鳞茎 糖含量 。

与 表面大，在进行光合作 合 的糖类物质。

另外，在 的总生物量中，茎 30 %，但在 的常规 ，是 弃不用。

，资源遭 挖，导致野生资源 $需求量在 ，使药材 不攀升，品药材充斥市场。

在实际生产中要重 的开发 ，寻找新的药 ，减少资源的浪费，资源的综合 效率。

4结论
不 生 限 不 组 ，糖的含量差异显著。

组织化学 揭示、分糖的分布场所 量。

多糖主要分布在皮层、皮 的，维管 量分 $
3 生 的糖含量 。

研究 果 为
糖的 种质资源 育提供 依据。

不
，糖 量 次 假 茎。

在观 为12x10$!m2下，含糖；
量（3 生）达268 ~310 ，与假鳞茎（520 ~
566 )比，量的 51 % ~54 %。

因，加大 上分的发掘，要重 片
的综合开发与。

研究结果可为寻找替代资源或
新的药 供参考依据。

参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[s].—部.北京：中国医
药科技出版社,2015.
[2] 明•李时珍.本草纲目草部（第十二卷）[M].北京:人民卫生出
版社，1999.
[3]正海.药用植物的结构+发育及其主要药用成分积累的关系
[J].中草药,2009,40(S1):14-17.
[4] 李玉萍，雪，祥，等.蛇根木根部生物碱积累的组织化学
研究[J].中南林业科技大学学报,2010,30(9):157 -161. [5] 周明明，，刘洋，等.青钱柳解黄酮+三萜
糖的组学观察[J].植物资源与环境学报，2017,26
(2) :107-109.
[6] 郭巧生，王长林，厉彦森，等.明党参干物质积累及多糖含量的动
态研究[J]•中国中药杂志，2007,32(1): 24.
[7]仙，英•云南野生药品现状调查[J]•安
徽农业科学，2014,42(32):11279 -11281.
[8] 任风鸣，刘艳，李滢，等.白及属药用植物的资源分布及繁育
[J]•中草药，2016,24(470):4478 -4486.
[9] 刘斌，黄忠，黄长干，等•白及多糖提取工艺的研究[J]•中国
现代应用药学杂志，2007,24(4):289 -291.
[10]翟萌+品+伪品的生药学对比研究[D]•成都：
医药大学，2012.
[11]包英华，白音，石海英.金钗石斛多糖的组织化学定位研究
[J].时珍国医国药，2012,23(12):3026 -3028.
[12] 吕，郭卫东，罗文姬，等.2种石斛属植物和小叶石仙桃多
糖的组学[J].中山大学学报（自然科学版），2007, 46
(3):79.
[13] 张裕舒，杨天天，李梦烁，等.西瓜果实中果糖含量分析与评价
[J].西南农业学报，2018,31(4):786 -795•
(责任编辑王家银
)。