C18色谱柱去除3-氯-1,2-丙二醇酯测定中的干扰组分

关键词:3 - 氯 - 1，2 - 丙二醇酯;C18 色谱柱;干扰组分;HＰLC
中图分类号:ＴS201． 6;ＴQ646
文献标志码:Ａ 文章编号:1003 - 7969(2014)06 - 0085 - 07
Ｒｅｍoｖaｌ oｆ inｔｅrｆｅring ｃoｍｐonｅnｔｓ ｂy C１8 ｃoｌｕｍn in ｄｅｔｅrｍinaｔion oｆ
Waters 1525 高效液相色谱仪( 带有蒸发光散射 检测器) 、Waters MＡLDI SYＮＡＰＴ Q - ＴOF MS 液相 色谱串联四级杆飞行时间质谱、Milli - Q SＰ 超纯水 系统、Ａcquity C18 色 谱 柱 ( 5 cｍ × 2． 1 ｍｍ, 1． 7 μｍ) 、SunFireＴM C18 色谱柱 (4． 6 ｍｍ × 150 ｍｍ, 5 μｍ) ：美国 Waters 公司;GH - SＰE - ODS17 C18 固相 萃取柱(500 ｍg,6 ｍL) 、CLEＡＮ - UＰ® 二醇基固相 萃取柱(500 ｍg,6 ｍL) 、CUSIL15ZZ 硅胶固相萃取 柱(500 ｍg,10 ｍL) ： 北京 绿 百 草 科 技 发 展 有 限 公 司;ＰＴ 系列硅胶固相萃取柱(500 ｍg,6 ｍL) ：河北省 津杨滤材厂;Licｈrospｈer C18 色谱柱(4． 0 ｍｍ × 250 ｍｍ, 5 μｍ) ：江苏汉邦科技有限公司。 1． 2 试验方法 1． 2． 1 大豆油乙腈提取液中极 组分含量线 范 围的确定
分别称取 40、70、140、220、350、500、700、1 000、 1 500、2 000 ｍg 和 3 000 ｍg 大豆油于 10 ｍL 玻璃离心 管中,各添加 2 ｍL 乙腈,旋涡振荡混匀,10 000 r ／ ｍin 离心 10 ｍin,移取上清 500 μL,得到不同梯度的大豆 油乙腈提取液,按 1． 2． 6． 2 HＰLC 条件测定该大豆 油乙腈提取液中极 组分的峰面积,将峰面积对大 豆油质量( g) 与乙腈体积( ｍL) 比值作图,确定大豆 油乙腈提取液中极 组分的线 范围,以进一步确 定试验中所用大豆油的质量范围。 1． 2． 2 大豆油样品的分离 1． 2． 2． 1 C18 固相萃取柱分离
产生干扰。 因此,在进行油脂中 3 - MCＰDE 含量 测定前需对油脂样品进行前处理以去除这些干扰组 分。 目前已在山羊乳的中 脂质部分[1] 和各种食 用油[2] 中发现了 3 - MCＰDE。 最近的研究表明 3 MCＰDE 在体内一定条件下可能水解生成游离的3 MCＰD, 从 而 显 示 毒 。 [3 - 5] 建 立 方 便 实 用 的 3 - MCＰDE 检测方法,探明其形成规律,并有效降低 或消除油脂中的 3 - MCＰDE,已经成为食品安全的 研究热点之一[6 -7] 。
ration of oil saｍple were studied and coｍpared so as to reｍove tｈe interfering coｍponents froｍ oil by pre-
separation process in tｈe deterｍination of 3 - cｈloropropane - 1,2 - diol fatty acid esters (3 - MCＰDE) ． Ｔｈe results sｈowed tｈat tｈe acetonitrile extract of oil saｍple was separated by SunFireＴM C18 coluｍn
3 - 氯 - 1,2 - 丙二醇酯(3 - MCＰDE)是 3 - 氯 1,2 - 丙二醇(3 - MCＰD) 的一个或两个羟基分别与 脂肪酸发生酯化反应而生成的化合物,其与甘油酯结
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CHIＮＡ OILS ＡＮD FＡＴS
2014 Vol． 39 Ｎo． 6
构上的本质区别在于甘油骨架 sn - 3 位上的羟基被 氯取代。 根据 3 - MCＰD 发生酯化反应的羟基数目 及所在位置,3 - MCＰDE 可进一步划分为 3 - MCＰD 双酯、3 - MCＰD - 1 - 单酯和 3 - MCＰD - 2 - 单酯 3 种。 由于结构上的相似 ,3 - MCＰD 双酯与甘二酯 及中碳链甘三酯的极 相近,而 3 - MCＰD 单酯的 极 则与甘一酯相近。 在 3 - MCＰDE 的测定过程 中( 尤其是采用 HＰLC 进行检测时) ,甘二酯、中碳 链甘三酯和甘一酯的存在必然会对测定结果的准确
2014 年 第 39 卷 第 6 期
中国油脂
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检测分析
C１8 色谱柱去除 ３ － 氯 － １,２ － 丙二醇酯 测定中的干扰组分
周红茹，孙雪梅，周克茹，金青哲，王兴国，徐学兵
( 江南大学 食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，食品营养与安全协同创新中心，江苏 无锡 214122)
摘要:为了在油脂 3 - 氯 - 1，2 - 丙二醇酯含量测定中通过预分离过程去除干扰组分，研究对比了固相 萃取柱与硅胶柱层析对油样的分离效果。 结果表明:油样的乙腈提取液用 SunFireＴM C18 色谱柱(4． 6
1,2 - 二油酸酰 - 3 - 氯丙二醇(98% ) 、1 - 硬 脂酰 - 3 - 氯丙二醇(98% ) 标准品：加拿大 Ｔoronto Researcｈ Cｈeｍicals 公司;乙腈、正己烷、异丙醇、甲 醇( 色谱 纯) ： 北 京 J&K 百 灵 威 公 司; 试 验 用 水 为
Milli - Q 超纯水;无水氯化钠：国药化学试剂有限公 司;100 ~ 200 目、200 ~ 300 目柱层析硅胶：山东青岛 海洋化工有限公司;28 度棕榈油：无锡朝阳农贸市 场;大豆油( 福临门一级大豆油)：中粮东海粮油工 业( 张家港) 有限公司。 1． 1． 2 仪器与设备
ｍg ／ kg and 1 200 ｍg ／ kg of 3 - MCＰDE standards to self - ｍade oil saｍple respectively, tｈe recovery l - 3 - cｈloropropanediol and 1 - stearoyl - 3 - cｈloropropanediol were 86． 4% - 113． 7%
and 88． 4% - 105． 6% respectively,and tｈe relative standard deviations were less tｈan 15% ． Ｔｈerefore,
it was feasible for reｍoving tｈe interfering coｍponents froｍ oil saｍples in deterｍination of 3 - MCＰDE by
目前文献报道的 3 - MCＰDE 检测方法主要有 两大类：GC - MS[8 - 13] 方法和 LC - MS[9,14 - 15] 方法。 在这两类检测方法中,通常采用固相萃取柱萃取或 硅胶柱层析的方法进行油脂样品的前处理,以去除 油脂中的甘 二 酯、 中 碳 链 甘 三 酯、 甘 一 酯 等 干 扰 组 分。 但上述样品前处理方法均存在溶剂消耗大( 硅 胶柱层析法的耗用溶剂量甚至接近 500 ｍL) 、处理 周期长的缺点,不适于大量样本的前处理。 本文先 选用大豆油为研究对象,采用固相萃取柱进行预处 理以确定能否分开油脂中不同极 组分,在此基础 上选择 3 - MCＰDE 含量相对较高的棕榈油为原料 制备高 3 - MCＰDE 含量的自制油样,并以自制油样 为研究对象考察硅胶柱层析和 SunFireＴM C18 色谱 柱对不同 极 组 分 的 分 离 效 果, 优 选 出 SunFireＴM C18 色谱柱分离的方法用于油脂 3 - MCＰDE 测定过 程中干扰组分的去除。 试验结果表明该法耗用溶剂 量少( 耗 用 的 有 机 溶 剂 量 仅 为 2 ｍL) 且 周 期 较 短 (与硅胶柱层析法相比,处理时间大幅缩短至约 1 ｈ) ,可用于大量样本 3 - MCＰDE 测定中干扰组分的 去除。 １ 材料与方法 1． 1 试验材料 1． 1． 1 原料与试剂
teｍperature 30 ℃ and flow rate 1 ｍL ／ ｍin, tｈereby tｈe interfering coｍponents were reｍoved effectively
in tｈe deterｍination of 3 - MCＰDE． Ｔｈe recovery experiｍents were conducted by adding 800, 1 000
few solvent consuｍption and sｈort processing cycle． Kｅy ｗorｄｓ ： 3 - cｈloropropane - 1 , 2 - diol fatty acid esters;C18 coluｍn;interfering coｍponent;HＰLC
３ － ｃｈｌoroｐroｐanｅ － １,２ － ｄioｌ ｆaｔｔy aｃiｄ ｅｓｔｅrｓ
ZHOU Hongru, SUＮ Xueｍei, ZHOU Keru, JIＮ Qingｚｈe,
WＡＮG Xingguo,XU Xuebing
( Synergetic Innovation Center of Food Safety and Ｎutrition, State Key Laboratory of Food Science and
ｍｍ × 150 ｍｍ， 5 μｍ) 分离，以乙腈 - 异丙醇( 体积比 1 ： 1) 为流动相，等度洗脱，柱温 30 ℃ ，流速
1 ｍL ／ ｍin的 HＰLC 条件下，可以将不同极性的组分进行分离，从而有效去除 3 - 氯 - 1，2 - 丙二醇酯测
定中的干扰组分。 在自制油样中分别添加 800、1 000 ｍg ／ kg 和 1 200 ｍg ／ kg 的 3 - 氯 - 1，2 - 丙二醇
酯标准品进行加标回收试验，1，2 - 二油酸酰 - 3 - 氯丙二醇的加标回收率在 86． 4% ~ 113． 7% ，1 - 硬
脂酰 - 3 - 氯丙二醇的加标回收率在 88． 4% ~ 105． 6% ，相对标准偏差均在 15% 以内。 该法耗用溶剂
量少且周期较短，可用于大量样本 3 - 氯 - 1，2 - 丙二醇酯测定中干扰组分的去除。
(4． 6 ｍｍ × 150 ｍｍ, 5 μｍ) , tｈen different polar coｍponents in oil saｍple could be separated under tｈe
HＰLC conditions of ｍobile pｈase acetonitrile - isopropanol( voluｍe ratio 1： 1) , isocratic elution, coluｍn
C18 coluｍn and solid pｈase extraction ｍetｈod witｈ
收稿日期:2013 - 08 - 22;修回日期:2014 - 03 - 06 基金项 目: “ 十 二 五” 国 家 科 技 支 撑 计 划 ( 2012BＡK08B03, 2011BＡD02B03) ;中央高校基本科研业务费专项资金( JUD CF13003) ;江苏省普通高校研究生科研创新计划资助项目 ( CXZZ13 0763) 作者简介:周红茹(1980) ,女,在读博士,主要从事脂质科学 与技术研究工作( E-ｍail) ｚｈr1123@ 126． coｍ。 通信作者:金青哲,教授( E-ｍail) jqｚwuxi@ 163． coｍ。
Ｔecｈnology, Scｈool of Food Science and Ｔecｈnology, Jiangnan University, Wuxi 214122,Jiangsu, Cｈina)
Aｂｓｔraｃｔ：Ｔｈe effects of solid pｈase extraction coluｍn and sillca gel coluｍn cｈroｍatograpｈy on tｈe sepa-