稀释平板计数法

检测方法------稀释平板计数法一、原理稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。

计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。

经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。

此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。

二、器材1．活材料：菌剂。

2．培养基：酵母浸粉0.5%、蛋白胨1%、氯化钠1%、琼脂18%、PH7.0-7.2。

3．器材：90ml无菌水、99ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管（或移液枪）、天平、称样瓶、记号笔等。

三、实验方法1．样品稀释液的制备准确吸取待测样品l0ml（粉剂称取1g），放入装有90ml（粉剂99ml）无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，置摇床上振荡60 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管（或移液枪），吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，震荡60秒，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管(或枪头)吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也震荡器上震荡60秒，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。

通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-8稀释度，测粉剂取10-9。

2．平板接种培养利用混合平板培养法用无菌吸管按无菌操作要求分别吸取稀释液1ml 放入4个无菌平板中，然后分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基，轻轻晃动动平板30秒，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，以无菌水做空白对照，按相同方法操作，37℃培养。

稀释涂布平板法计数公式

“微生物数量测量”是2017年高考大纲中的新内容，也是教学中的重要难点。

稀释涂板法是计数微生物的常用方法，用于计数样品中活菌的数量。

当样品的稀释度足够高时，在培养基表面上生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。

通过计算平板上的菌落数，我们可以猜测样品中有多少种活细菌。

但是，菌落计数结果的处理常常成为学生容易出错的地方。

典型示例：在从土壤中分离产生脲酶的细菌的实验中，将10g土壤样品溶液进行梯度稀释，并将0.1mL稀释倍数为105的土壤样品溶液接种在三个中板上。

培养一段时间后，平板上的细菌菌落数分别为42、200和256。

1g土壤样品中的细菌数为。

在PEP高中生物学选修课“生物技术实践”中，有这样一条陈述：用稀释包被板法计数菌落：为了确保结果的准确性，菌落数在30到30之间通常选择300和300进行计数。

但是，如果我们理所当然地认为42、200和256个数据都在30〜300范围内，那么直接对它们求平均并乘以稀释倍数就可以得出错误的结果1.66×108。

这也是许多学生犯错误的原因。

实际上，教材中的相关表述仅说明了可计数菌落数的适当范围。

在一定稀释度下，三个平板中的菌落数不能简单地直接平均，应注意稀释度的设定和计数结果的允许差异。

为了确保准确确定有效活菌计数，必须设置三个稀释度并进行分级，并且每个梯度应设置三个重复。

为了确定土壤中细菌的数量，通常使用104、105和106倍的稀释剂进行平板培养。

为了确定放线菌的数量，通常使用103、104和105倍的稀释度。

为了确定真菌的数量，通常使用102、103和104倍的稀释度。

如果平板中的菌落数太少，必然会导致计数误差太大；相反，如果培养皿中的菌落太多，将导致计数困难。

因此，世界上菌落计数的基本原理是对稀释的平板进行计数，其中平板上有30〜300个菌落。

同时，相同稀释度重复3次的平板上菌落数的标准差应小于允许的差。

也就是说，在平板计数试验中，如果在相同稀释度下三个重复菌落的数量在30〜300之间，但是数据相差很大，则需要将其丢弃。

稀释培养和稀释平板测数法

稀释培养和稀释平板测数法稀释培养测数法一、实验目的通过对好气性自生固氮菌的计数，了解稀释培养计数（MPN）的原理和方法。

二、实验原理最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。

其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。

本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。

见附表23-1）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。

MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lm1）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。

根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。

具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。

培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度（即临界级数）中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表（见附录九）上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。

如某一细菌在稀释法中的生长情况如下；稀释度 lO-3 10-4 10-5 lO-6 10-7 10-8重复数 5 5 5 5 5 5出现生长的管数 5 5 5 4 1 0根据以上结果，在接种lO-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO-6稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8稀释液的试管全无生长。

由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数（10-5的稀释倍数为100 000）。

稀释涂布平板法计数公式

显微镜计数法即血球计数法，事先把菌液稀释到一定的倍数，然后通过血球计数板在显微镜下计数。

此法计数比较精准。

活菌计数法是将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml放入无菌平皿，再倒入适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放入适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5稀释涂布平板法是一种粗略的活菌计数法，即通过一定的稀释倍数，涂布到平板上，在适宜的条件下培养后，观察活菌数。

平板划线法是用来分离单菌落的一种方法，不是计数的方法。

如果只有一个稀释度的平均菌落数符合30~300这个范围
则以该稀释度平均菌落数除以涂布平板所用稀释液体积(0.1mL)，乘以稀释倍数作为该样品的细菌总数
如果有两个稀释度的平均菌落数符合要求
则按照两者菌落总数之比来决定
如果小于2，取两者的平均值
如果大于2，取较小的菌落总数
本题的46*10^3与295*10^2的比之为1.6
应取两者的平均值
（46*10^3+295*10^2)/0.1/2=3.775*10^5
相当于统计学里面的比较差异，
如果多比少大于2倍，则梯度浓度差异是10倍的情况下，其菌落是有很多重叠或者链接在一起的，这样就无法计算清楚是否为单菌落了，所以只有选择较小的菌落数。

来保证以上要求。

稀释平板计数法

实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。

统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。

因此平板菌落计数的结果往往偏低。

为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。

实验器材LB液体、固体培养基1m1移液器，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。

实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。

(2) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。

2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。

另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。

(2) 稀释用1m1移液器吸取0.5m1己充分混匀的菌悬液(待测样品)，至10-1的试管中，此即为10倍稀释。

将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。

用1m1移液器在10-1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。

吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸入管底，吹时离开液面。

混匀后吸取至10-2试管中，此即为100倍稀释。

……其余依次类推，整个过程如图所示。

3．平板接种培养平板接种培养有浇注平板培养法和涂布平板培养法两种方法。

稀释平板计数法的原理和方法

稀释平板计数法的原理和方法
嘿，朋友们，今儿咱们来聊聊那个“稀释平板计数法”是咋个回事儿。

这个啊，咱们四川人儿叫“平板计数法”，陕西的朋友可能直接就说“计数法”，而北京的哥们儿估计会叫得更正式些。

但不管咋叫，这法儿都是用来计算微生物数量的。

咱们先从原理说起。

这个“稀释平板计数法”的原理啊，就像咱们四川人做泡菜一样，得掌握好比例和条件。

简单来说，就是把微生物样本进行一系列稀释，然后分别涂布在培养基平板上，让微生物在适宜的条件下生长。

长得好的那些菌落，咱们就能数出来，从而推算出原样本中微生物的数量。

再来说说方法。

首先呢，得准备好培养基平板，这就像是咱们陕西人准备面团一样，得精心调配。

然后，把微生物样本进行稀释，这一步很关键，得稀释到合适的程度，才能让微生物在平板上分散开，长成单个菌落。

接着，就是把稀释后的样本涂布在平板上了，这个得涂得均匀，不能厚此薄彼。

最后，就是放在培养箱里培养，等微生物长出来，咱们就能数菌落了。

这法儿虽然看起来简单，但实际操作起来还是有不少讲究的。

比如稀释的倍数、培养的条件、计数的方法等等，都得根据具体情况来调整。

就像咱们北京人说的，“做事儿得讲究个精细”，这“稀释平板计数法”也是这么回事儿。

总之啊，这个“稀释平板计数法”是个挺实用的方法，能帮咱们了解微生物的数量和分布情况。

不管是四川的、陕西的还是北京的，咱们都得好好掌握这个方法，才能更好地研究微生物、保护咱们的健康和环境。

平板划线法与稀释涂布平板法的区别

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平板划线法与稀释涂布平板法地区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离地材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式地连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数地增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜地话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落.
用途：一般多用于从菌种地纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成地单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计地计数方法，即一个菌落代表一个单细胞.计数时，首先将待测样品制成均匀地系列稀释液，尽量使样品中地微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量地稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中地培养基内.经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中地含菌数.此法所计算地菌数是培养基上长出来地菌落数，故又称活菌计数.一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源地污染程度地检验.
用途：一般多用于筛选菌株.一般用于平板培养基地回收率计数.
优点：可以计数，可以观察菌落特征.
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延.如果菌液密度大地话，长不出单菌落.
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稀释涂布平板法计数公式

稀释涂布平板法计数公式
稀释涂布平板法计算公式是每克样品中的菌株数=(C÷V)×M，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。

稀释涂布平板法是微生物学实验中的一种操作方法。

由于将含菌材料现加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。

稀释平板计数法

稀释平板计数法实验目得学习稀释平板菌落计数得基本原理与方法。

实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。

实验原理平板菌落计数法就是将待测样品经适当稀释之后，其中得微生物充分分散成单个细胞，取一定量得稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见得菌落，即一个单菌落应代表原样品中得一个单细胞。

统计菌落数，根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中得含菌数。

但就是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成得一个单菌落也可能来自样品中得2—3或更多个细胞。

因此平板菌落计数得结果往往偏低。

为了清楚地阐述平板菌落计数得结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品得活菌含量。

平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素得影响，但就是，由于该计数方法得最大优点就是可以获得活菌得信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料与水〔包括水源水〕等得含菌指数或污染程度得检测。

实验器材酿酒酵母菌悬液马铃薯培养基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。

实验步骤1．无菌器材得准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。

(2) 无菌移液管得准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1、5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面得微生物吹入。

棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。

然后将移液管尖端放在4~5cm宽得长纸条一端呈45º角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。

(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4、5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。

2．样品稀释液得制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。

另取6支盛有4、5m1无菌水得试管，依次标就是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。

稀释涂布平板法计数例题

稀释涂布平板法计数例题摘要：一、稀释涂布平板法计数的基本概念和原理二、稀释涂布平板法计数例题的解析1.例题一2.例题二3.例题三三、总结与展望正文：一、稀释涂布平板法计数的基本概念和原理稀释涂布平板法计数是一种常用的微生物计数方法，它通过将待测样品进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的样品涂布在平板培养基上，通过统计菌落数量，从而推算出样品中的微生物数量。

该方法的原理是基于微生物在适宜的培养条件下，会生长繁殖形成菌落，而每一个菌落都来源于一个单一的微生物细胞。

二、稀释涂布平板法计数例题的解析例题一：某样品经稀释涂布平板法计数，得到了以下数据：平板一：稀释度1×10^4，菌落数15平板二：稀释度2×10^4，菌落数30平板三：稀释度4×10^4，菌落数50请计算该样品的微生物数量。

解析：根据稀释涂布平板法计数的原理，我们知道每个平板上的菌落数与样品中的微生物数量之间存在一定的比例关系。

通常情况下，我们可以假设这个比例关系为1:100（即一个菌落代表100个微生物），那么可以通过如下公式计算样品的微生物数量：微生物数量= （平板一菌落数× 稀释度一）÷ 100 + （平板二菌落数× 稀释度二）÷ 100 + （平板三菌落数× 稀释度三）÷ 100= （15 × 1×10^4）÷ 100 + （30 × 2×10^4）÷ 100 + （50 ×4×10^4）÷ 100= 150 + 600 + 2000= 3150所以该样品的微生物数量为3.15×10^6。

例题二：某样品经稀释涂布平板法计数，得到了以下数据：平板一：稀释度1×10^3，菌落数80平板二：稀释度2×10^3，菌落数120平板三：稀释度3×10^3，菌落数150请计算该样品的微生物数量。

稀释涂布平板法的计数原理

稀释涂布平板法的计数原理
稀释涂布平板法是古老而又先进的定量测定生物分子的一种技术。

它是通过制
作单个孔径不一的薄膜从而在相关孔径上形成涂布技术来研究某种生物物质的固有含量。

简要来说，稀释涂布平板是一种用来测量在两个或多个平面之间溶质的技术，囊括了病毒、细胞、生物体等生物物质在多种环境中的电荷极性及污染物的微粒的的浓度。

传统的稀释涂布平板法是溶入液体内，向薄膜上均匀分布液滴，并用不锈钢小
片轻轻压制，薄膜穿过微孔针平板封闭，从而测定出液滴中含有的某种溶质和污染物的微粒，并形象地画出分布液滴的稀释系数。

换句话说，可以得到信息，说明对象之间的溶质的浓度和污染物的微粒的浓度存在差异，帮助人们快速了解物质的分布特性。

稀释涂布平板法也可以通过数学计算来准确衡量平板上的生物物质或者污染物
的含量，结合一般的实验设计，可以降低实验者在测定过程中的不确定性。

此外，它把薄膜和裸眼观察两种检测技术整合在一起，从而增加了测量精度和减少了误差，同时大大降低了分析时间。

综上所述，稀释涂布平板法具有简便、高精度、准确性、可操作性等多种优点，是测定固有含量和污染物的微粒的极佳选择，同时也是空间探测，资源分配研究和相关网络建模研究的有效手段。

稀释涂布平板法计数公式

稀释涂布平板法
操作过程：
稀释操作：
1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌,并按10^1到10^6的顺序进行编号
2、用移液试管吸取1ml培养的菌夜,注入10^1倍稀释的试管中.用手指轻压移夜管上的橡皮,
吹吸三次,使菌液与水充分混匀.
3、从10^1倍稀释的试管中吸取1ml稀释液,注入10^2倍稀释的试管中,重复第二步的混匀
操作.以此类推,直到完成最后一支试管的稀释.
涂布操作：
1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中.
2、取少量菌夜（不超过0.1ml）滴加到培养基表面.
3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却8~10s.
4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面,涂布时可转动培养皿,使菌液分布均匀.
计算公式：
菌体数量cfu/g（mL）土样=同一稀释度重复的菌落平均数×稀释倍数。

稀释涂布平板法计数原理

稀释涂布平板法计数原理
稀释涂布平板法是一种常用于微生物计数的方法，它的计数原理如下：
1.准备稀释液：将待测样品按照一定比例与适当的缓冲液（如生理盐水或稀释液）混合，制备一系列稀释液，以稀释样品中的微生物数量，使其适合于后续的计数。

2.取样：从适当稀释的样品中取一定体积的样品（通常是0.1毫升或1毫升），并将其均匀地涂布在含有富养基的平板上。

3.平板孵育：将涂有样品的平板在适当的温度和环境条件下进行孵育，以促使样品中的微生物生长形成可见的菌落。

4.菌落计数：根据菌落的数量和分布，使用裸眼或放大镜对平板上的菌落进行计数。

通常，选择适当的稀释液，以确保每个平板上菌落的数量在可计数的范围内，不会太多或太少。

5.结果计算：将平板上的菌落数量乘以适当的稀释倍数，得到样品中微生物的浓度或数量。

根据需要，可以将结果报告为菌落形成单位（CFU）/毫升或其他适当的单位。

稀释涂布平板法的原理是通过将样品稀释到适当的范围，使得每个平板上菌落的数量处于可计数的范围内。

通过对菌落的计数，并根据稀释倍数进行修正，可以推算出样品中微生物的浓度或数量。

这种方法广泛应用于微生物学研究、食品卫生检验、药品生产等领域，用于评估样品中微生物的数量和质量。

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第二周稀释平板计数法

3
平均
1克样品总菌落数
• 样品稀释液的制备用手或置摇床上充分振荡，使微生物细胞分散
二、操作步骤
（1）土壤稀释液的制备：按“稀释平板测数法” 进行，按无菌操作法将土壤稀释至107即可。
（2）平板接种培养（混菌法）：吸10-４，10-５，10-６，10-７土壤悬液1ML 到灭菌平板内，再倒入冷却至50 ℃培养基。
平板接种培养
• （1）混合平板培养法 • （2）涂抹平板计数法
下一周做
（3）倒放置培养箱中培养，28oC培养 3~4天后，在有混浊半透明的胶状菌落出现，有的在后期会产生褐色的色素。
（４）观察菌落形态及计数
稀释平板计数法
• 将实验结果填入下表
稀释度菌落数
10-3

10-5
1
2
3
平均 1
2
3
平均 1
2
细菌数量大于放线菌，真菌量最少
稀释平板计数法对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。优点：传统计数方法。对设备要求不高。活菌计数
10-3
10-4
10-5
10-6
• 微生物得稀释平板记数使根据在固体培养基上所形成得一个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成，且肉眼可见得子细胞群体这一生理及培养特征进行得。
无菌操作三要点
静使无菌操作室空气流动尽可降低
关好门窗, 避免空气流动过快; 不宜四处走动; 操作者不讲话,他人也不要在操作处讲话.
快操作熟炼, 动作快速, 使接种器具暴露在
空气中的时间缩短.
轻打开或盖上瓶口的动作要轻;
接种操作动作要轻.
从土壤中分离自生固氮菌
• 一、实验原理微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。

稀释平板计数法要注意什么

稀释平板计数法要注意什么稀释平板计数法是化学实验中常用的一种计算方法，用于确定溶液中溶质的浓度。

在使用稀释平板计数法时需要注意以下几点：1. 定量稀释：稀释平板计数法是通过将溶液逐渐稀释来达到测定溶质浓度的目的。

因此，在进行计算之前，需要做好量取溶液和溶剂的准备工作，确保能够准确地配制出所需浓度的溶液。

2. 平板计数器的选择：平板计数器是稀释平板计数法中必不可少的工具。

在选择平板计数器时，需要考虑其精度、灵敏度、反应时间等因素。

只有选用合适的平板计数器，才能够准确地计数稀释液中的粒子。

3. 样品的准备：在进行稀释平板计数法时，需要将待测样品取适量加入溶剂中，形成一定的稀释倍数。

样品的准备过程中需要注意严格控制样品的量，确保溶液中粒子数量在一个适宜的范围内。

4. 校正因素的考虑：在使用稀释平板计数法时，还需要考虑一些校正因素。

例如，可能会存在某些粒子在稀释液中会聚、发生反应或沉淀等情况，从而影响最终的计数结果。

因此，在进行计算时，需要对这些校正因素进行修正，以得到准确的结果。

5. 数据分析：稀释平板计数法得到的结果一般为每个单位体积中的粒子数。

为了得到溶液中溶质的浓度，还需要对计数结果进行进一步的数据分析。

常见的数据分析方法包括绘制标准曲线、使用线性回归等。

6. 实验条件控制：在进行稀释平板计数法时，实验条件的控制也是十分重要的。

例如，在制备稀释液时，需要严格控制溶剂的纯度、质量以及溶液的pH值等。

此外，在使用平板计数器时，也需要注意环境的干净和稳定，以及合适的操作温度等。

7. 实验操作的重复性：为了得到准确可靠的结果，在使用稀释平板计数法时需要进行多次实验操作，并计算得出平均值和标准差。

通过多次实验的数据积累和平均处理，可以提高实验结果的可信度和可靠性。

总之，在使用稀释平板计数法时，需要严格控制实验条件，合理选择平板计数器，准确配制稀释液，并进行数据分析和实验操作的重复性验证。

只有在这些注意事项的指导下，才能够得到准确、可靠的结果，并为化学实验提供实际应用的参考价值。

稀释平板计数法

稀释平板计数法实验目得学习稀释平板菌落计数得基本原理与方法。

实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。

实验原理平板菌落计数法就是将待测样品经适当稀释之后，其中得微生物充分分散成单个细胞，取一定量得稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见得菌落，即一个单菌落应代表原样品中得一个单细胞。

统计菌落数，根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中得含菌数。

但就是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成得一个单菌落也可能来自样品中得2—3或更多个细胞。

因此平板菌落计数得结果往往偏低。

为了清楚地阐述平板菌落计数得结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品得活菌含量。

平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素得影响，但就是，由于该计数方法得最大优点就是可以获得活菌得信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料与水〔包括水源水〕等得含菌指数或污染程度得检测。

实验器材酿酒酵母菌悬液马铃薯培养基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。

实验步骤1．无菌器材得准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。

(2) 无菌移液管得准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1、5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面得微生物吹入。

棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。

然后将移液管尖端放在4~5cm宽得长纸条一端呈45º角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。

(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4、5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。

2．样品稀释液得制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。

另取6支盛有4、5m1无菌水得试管，依次标就是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。

稀释涂布平板法计数公式

稀释涂布平板法计数公式1问题的提出“微生物数量的测定”是2017年高考考纲中新增加的内容，同时也是教学的重难点。

稀释涂布平板法是对微生物计数的常用方法，用来统计样品中活菌的数目。

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。

但对菌落计数的结果处理往往成为学生的易错点。

经典例题：在从土壤中分离产脲酶细菌的实验中，将10g土壤样液梯度稀释，在3个培养基平板上均接种稀释倍数为105的土壤样液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为42、200、256。

则1g土壤样品中的细菌数量为▲个。

很多学生得出的答案为：1.66×108。

同时，学生对于42这个数据如何处理存在疑问：是否需要舍弃？如果需要舍弃，标准是什么？2菌落计数的基本原则2.1教材中的相关表述在人教版高中生物学选修1《生物技术实践》中，对于稀释涂布平板法计数菌落有如此的表述：为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

但是，若想当然地认为42、200、256三个数据均处于30~300范围之内，然后直接求平均值，再乘以稀释倍数，就会得出1.66×108的错误结果。

这也是很多学生产生错误的原因。

事实上，教材中的相关表述只是在说明可计数的菌落数量的适宜范围。

某一稀释度下的3个平板中菌落数并不能简单地直接求平均值，还应该关注稀释度的设置以及计数结果的允许差。

2.2稀释度的设置及计数原则为了确保有效活菌数的准确测定，在采用平板计数检测中，必须设3个稀释度且成梯度，每个梯度设3个重复。

测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释。

如果平板中菌落的数量太少，必然会导致计数误差太大；反之，如果平板中菌落数量过多，会造成计数上的困难。