五日生化需氧量的测定
五日生化需氧量(BOD5)的测定
五日生化需氧量（BOD 5）的测定1.用BOD 营养盐缓冲剂粉枕包2.选择样品体积。
详见样品容量3.用移液管轻轻搅匀样品。
向第4.向另一个BOD 瓶中加入稀释水。
这瓶就是稀释水空白。
准备稀释水。
详见稀释水准备。
选择。
一个BOD 瓶中加入最小采样量 注：如果最小采样量在3mL 左 的样品。
右，不需稀释直接测溶解氧。
再向另外4个BOD 瓶中加入不当测生活污水或沉降后的污水 同体积的样品。
做好标记，并等溶解氧浓度约为0mg/L 的样记录下每瓶水样的体积。
品时，这一步可以省略。
5.如果测试CBOD ，向每个瓶中6.向每个瓶中倒稀释水至瓶口7.小心地盖上瓶塞防止气泡。
按8.测试每个瓶中最初的溶解氧浓度。
使用电极、仪器或滴定 法。
若使用滴定法则需准备2套BOD 瓶。
记得测量稀释水空白的溶解氧 浓度。
加入2管硝化抑制剂（约 边缘，沿着瓶壁倒入以防产生 住瓶塞并上下颠倒瓶子数次以 0.16g ）。
阻止氮化合物的氧化， 气泡。
混匀液体。
结果是CBOD 。
9.小心地盖上瓶塞防止气泡。
10.在每个BOD 瓶上置一个塑 料盖。
将BOD 瓶置于20（±1）°C 的培养箱内培养5天。
11.5天后测每瓶中剩余溶解氧 12.计算BOD 值。
（详见计算方法——标准方法） 向每个 BOD 瓶内倒入稀释水作的浓度。
每瓶中剩余溶解氧的浓度至少 为水封。
应为1.0mg/L 。
稀释水准备•为了得到最好的结果，使用经过碱性高锰酸盐蒸馏的水。
•不要使用经离子交换柱所得的去离子水。
柱中的树脂(尤其是新柱)有时会释放有需氧量的有机物。
另外，细菌会在柱中滋生污染稀释水。
•在20°C条件下将蒸馏水储存在干净的容器里并放在培养箱中。
向容器中倒入蒸馏水至3/4体积，并摇晃容器使得空气进入水中饱和，或者较松地盖住容器并放置 24 小时或更久，以使氧气溶解。
•使用小型玻璃抽水泵或者气体压缩机使水中的空气饱和。
确保空气是经无菌过滤器过滤的。
五日生化需氧量(BOD5)的测定——压差法
五日生化需氧量（BOD5）的测定——压差法1 适用范围本方法适用于天然水、地表水、生活污水及工业废水中BOD5的测定，其测定范围是(0～1000)mg/L。
2 分析原理将仪器放入培养箱中，并按预先选择的量程范围，量好一定体积的水样倒入培养瓶中，并将培养瓶放在培养箱内仪器上连续搅拌。
培养箱内温度控制在20℃±1℃，水样恒温后进行五日培养。
培养瓶中必须保证足够的溶解氧。
样品中的有机物经过生物氧化作用，转变为氮、碳和硫的氧化物，在这一过程中，从水样中跑出来的为唯一气体二氧化碳被氢氧化钠（或氢氧化钾）吸收。
因此，瓶中空气压力减少量，相当于微生物所消耗的溶解氧量，这样，样品BOD5值与瓶中空气压力减少的程度成正比，通过测量空气压力的变化可以得到BOD5值。
增加或减少所取样品的量可以增加或降低压力减少值。
这样操作者无须繁杂的稀释步骤就能准确测量很宽范围的BOD5值。
3 试剂和仪器3.1 试剂3.1.1 1mol/L的NaOH溶液。
3.1.2 C（1/2H2SO4）＝1mol/L。
3.2 仪器3.2.1 880型数字式BOD5测定仪：附BOD培养瓶8个。
3.2.2 pH计，精度±0.1pH单位。
4 分析步骤4.1 培养箱温度的设置接通培养箱电源，将培养箱上温度开关拨至“设置”位置，调节温度电位器旋钮，使表头显示温度为20℃，再把温度开关拨至“测量”位置（培养温度允许±1℃的差值）。
4.2 水样pH的调节见表4-7（见下页）用C（1/2H2SO4）＝1mol/L的硫酸溶液和1mol/L的NaOH溶液调节待测水样的pH值为6.7～5。
4.3 待测水样量的确定预先估计被测样品的BOD5值范围，选择接近的量程。
如无法估计，可先测定该样品的COD值，然后根据该样品COD值来确定该样品的BOD5值，（通常BOD5值约为该样品COD值的0.8倍左右）。
若样品BOD5值在0mg/L～1000mg/L范围内，则样品不需稀释，若样品有足够的微生物，则样品不需要接种，按表1根据估算的样品BOD5值选择合适的量程，并使用干净的量杯，量取所需体积的水样倒入已清洗干净的培养瓶中。
五日生化需氧量的测定
五日生化需氧量的测定一、原理生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在于水中的某些可氧化物质，主要是有机物质所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。
分别测定水样培养前的溶解氧含量和在20±1℃培养五天后的溶解氧含量，二者之差即为五日生化过程所消耗的氧量（BOD5）。
二、仪器1．恒温培养箱。
2．5—20L细口玻璃瓶。
3．1000—2000mL量筒。
4．玻璃搅棒：棒长应比所用量筒高度长20cm。
在棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并带有几个小孔的硬橡胶板。
5．溶解氧瓶：200—300mL，带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口。
6．虹吸管：供分取水样和添加稀释水用。
三、试剂1．磷酸盐缓冲溶液：将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4），21.75g磷酸氢二钾(K2HPO4)，33.4g 磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化铵(NH4Cl)溶于水中，稀释至1000mL。
此溶液的pH 应为7.2。
2．硫酸镁溶液：将22.5g硫酸镁(MgSO4·7H2O) 溶于水中，稀释至1000mL。
3．氯化钙溶液：将27.5g无水氯化钙溶于水，稀释至1000mL。
4．氯化铁溶液：将0.25g氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于水，稀释至1000mL。
5．盐酸溶液(0.5mol/L):将40mL(ρ=1.18g/mL)盐酸溶于水中，稀释至100mL。
6．氢氧化钠溶液(0.5mol/L)：将20g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。
7．亚硫酸钠溶液(c1/2Na2SO3=0.025mol/L)：将1.575g亚硫酸钠溶于水，稀释至1000mL。
此溶液不稳定，需每天配制。
8．葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖(C6H12O6)和谷氨酸(HOOC－CH2－CH2－CHNH2－COOH)在103℃干燥1h，各称取150mg溶于水中，移入1000mL容量瓶内并稀释至标线,混合均匀。
此标准溶液临用前配制。
五日生化需氧量的测定
实验七五日生化需氧量的测定生化需氧量(BOD)是指在规定的条件下，微生物分解水中某些可氧化物质(主要是有机物)的生物化学过程中消耗溶解氧的量，用以间接表示水中可被微生物降解的有机类物质的含量，是反映有机物污染的重要类别指标之一。
测定BOD 的方法有稀释接种法、微生物传感器法、活性污泥曝气降解法、库仑滴定法、测压法等。
本实验采用稀释接种法测定污水的BOD。
该方法也称五天培养法(BOD5)，即取一定量水样或稀释水样，在20℃±1℃培养五天，分别测定水样培养前、后的溶解氧，二者之差为BOD5值，以氧的mg/L表示，其相关容参阅教材第二章第五节。
一、实验目的和要求1．掌握用稀释接种法测定BOD5的基本原理和操作技能。
2．复习第二章第五节中的相关容，提出为保证测定准确度，应当控制好哪些条件。
二、仪器1．恒温培养箱。
2．5～20L细口玻璃瓶。
3．1000～2000mL量筒。
4．玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长200mm，棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板。
5．溶解氧瓶：200～300mL，带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口。
6．虹吸管：供分取水样和添加稀释水用。
三、试剂1．磷酸盐缓冲溶液：将8.58磷酸二氢钾(KH2PO4)，2. 75g磷酸氢二钾(K2HPO4)，33.4g磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化铵(NH4C1)溶于水中，稀释至1000mL。
此溶液的pH 应为7.2。
2．硫酸镁溶液：将22.5g硫酸镁(MgSO4·7H2O)溶于水中，稀释至1000mL。
3．氯化钙溶液；将27.5g无水氯化钙溶于水，稀释至1000mL。
4，氯化铁溶液；将0.25g氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于水，稀释至1000mL。
5．盐酸溶液(0.5mol/L)：将40mL(ρ=1.18g/mL)盐酸溶于水，稀释至1000mL。
6．氢氧化钠溶液(0.5mol/L)：将20g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。
五日生化需氧量的测定分析
2.5.2
抑制硝化作用 水中有机物的生物氧化过程可分为两 个阶段，第一阶段主要是碳氢化合物被氧化， 称为碳化阶段，在20℃下约需20d才能完成， BOD测定的一般是该阶段的耗氧量。第二 阶段是含氮化合物及部分氨氧化为亚硝酸盐 及硝酸盐，称为硝化阶段，在20℃约需 100d 。对一般水样，测定BOD5时的硝化作 用并不显著。但对于生化处理的出水，因其 含有大量的硝化细菌，在测定BOD5时也包 括了部分含氮化合物的需氧量，因此需要加 入硝化抑制剂，抑制硝化作用对BOD5测定 的影响。可在每升稀释水样中加入2ml浓度 为500mg /L的丙烯基硫脲。
由高锰酸盐指数与一定的系数的乘积 求得的稀释倍数
高锰酸盐指数（mg/L）
＜5 5-10
系数
0.2 0.3
高锰酸盐指数（mg/L）
10-20 ＞20
系数
0.4、0.6 0.5、0.7、1.0
对地表水稀释倍数的确定，也同样如此。比如， 高锰酸盐指数的浓度为5-10mg/L之间时，我们可 以在系数0.2-0.3之间，再增加0.22，0.25，0.28等 几个系数。
2. 稀释接种法测定BOD5时需注意的问题
2.1 样品的采集及保存 采集样品时应充满并密封于瓶中，在0-4℃ 条件下进行保存，一般应在6h内进行分析。 若需要远距离转运，在任何情况下，贮存时 间不应超过24h。 2.2 时间的影响 样品中的BOD5浓度易随时间的变化而变化， 样品储存时间、测定过程时间和培养时间均 会对测定结果产生影响。这就要求我们在进 行BOD5的测定时需要严格控制培养时间和 样品储存时间。
上清液的接种量，按水样的性质确定。 啤酒厂： 接种量一般以7-8ml/L水为宜。 印染废水：上清液2ml/L,再加入7ml/L驯化接种液。 葡萄糖谷氨酸标准溶液：接种量一般以2-3ml/L水 为宜。
水质五日生化需氧量(bod5)的测定
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 505—2009代替GB/T 7488-1987水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法警告：丙烯基硫脲属于有毒化合物，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服；标准溶液的配制应在通风柜内进行操作；检测后的残渣残液应做妥善的安全处理。
1 适用范围本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD）的稀释与接种的方法。
本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD）的测定。
方法的检出限为L，方法的测定下限为2mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000mg/L。
2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 7489 水质溶解氧的测定碘量法GB/T 11913 水质溶解氧的测定电化学探头法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范3 方法原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。
通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h 或(2+5)d±4h(先在0～4℃的暗处培养2d，接着在(20±1)℃的暗处培养5d，即培养(2+5)d)，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD形式表示。
若样品中的有机物含量较多，BOD的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微1生物引入水样中进行接种。
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 505—2009代替GB/T 7488-1987水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法警告：丙烯基硫脲属于有毒化合物，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服；标准溶液的配制应在通风柜内进行操作；检测后的残渣残液应做妥善的安全处理。
1 适用范围本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD5）的稀释与接种的方法。
本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。
方法的检出限为0.5mg/L，方法的测定下限为2mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000mg/L。
2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 7489 水质溶解氧的测定碘量法GB/T 11913 水质溶解氧的测定电化学探头法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范3 方法原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。
通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h 或(2+5)d±4h(先在0～4℃的暗处培养2d，接着在(20±1)℃的暗处培养5d，即培养(2+5)d)，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD5 形式表示。
若样品中的有机物含量较多，BOD5 的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD5 时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微1生物引入水样中进行接种。
水质五日生化需氧量（BOD5）的测定
水质五日生化需氧量（BOD5）的测定中华人民共和国国家环境保护标准HJ 505—2009代替GB/T 7488-1987水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法警告：丙烯基硫脲属于有毒化合物，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服；标准溶液的配制应在通风柜内进行操作；检测后的残渣残液应做妥善的安全处理。
1 适用范围本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD5）的稀释与接种的方法。
本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。
方法的检出限为0.5mg/L，方法的测定下限为2mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000mg/L。
2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 7489 水质溶解氧的测定碘量法GB/T 11913 水质溶解氧的测定电化学探头法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范3 方法原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。
通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h 或(2+5)d±4h(先在0～4℃的暗处培养2d，接着在(20±1)℃的暗处培养5d，即培养(2+5)d)，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD5 形式表示。
若样品中的有机物含量较多，BOD5 的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD5 时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
五日生化需氧量的测定
实验七五日生化需氧量的测定生化需氧量(BＯD)就是指在规定的条件下,微生物分解水中某些可氧化物质(主要就是有机物)的生物化学过程中消耗溶解氧的量,用以间接表示水中可被微生物降解的有机类物质的含量,就是反映有机物污染的重要类别指标之一。
测定BOＤ的方法有稀释接种法、微生物传感器法、活性污泥曝气降解法、库仑滴定法、测压法等。
本实验采用稀释接种法测定污水的BOＤ。
该方法也称五天培养法(ＢＯD５),即取一定量水样或稀释水样,在20℃±1℃培养五天,分别测定水样培养前、后的溶解氧,二者之差为BOD5值,以氧的mg/L表示,其相关内容参阅教材第二章第五节。
一、实验目的与要求1.掌握用稀释接种法测定ＢOD5的基本原理与操作技能。
２.复习第二章第五节中的相关内容,提出为保证测定准确度,应当控制好哪些条件。
二、仪器1.恒温培养箱。
2、5～20L细口玻璃瓶。
３.1０00～2０00mL量筒。
4.玻璃搅拌棒:棒长应比所用量筒高度长２０0mm,棒的底端固定一个直径比量筒直径略小,并有几个小孔的硬橡胶板。
5、溶解氧瓶:２00～3０0ｍＬ,带有磨口玻璃塞,并具有供水封用的钟形口。
6、虹吸管:供分取水样与添加稀释水用。
三、试剂1.磷酸盐缓冲溶液:将8.５8磷酸二氢钾(KH2ＰO4),２、7５g磷酸氢二钾(K 2HPＯ4),33.4g磷酸氢二钠(Na2HPO４·7H２Ｏ)与1.7ｇ氯化铵(NH4C1)溶于水中,稀释至1０00mL。
此溶液的pH 应为7、2。
2、硫酸镁溶液:将22.5ｇ硫酸镁(ＭｇSO４·７H2O)溶于水中,稀释至100０mL。
3、氯化钙溶液;将2７．5g无水氯化钙溶于水,稀释至1000mＬ。
4,氯化铁溶液;将0.２5g氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于水,稀释至１００0mL。
5.盐酸溶液(0、5ｍol／Ｌ):将40mL(ρ=1.１8g/mＬ)盐酸溶于水,稀释至１0０0ｍL。
五日生化需氧量的测定
2.3. 温度的影响 温度与微生物的增长速率相关，直接影响 微生物的生长繁殖，进而影响BOD5的测定结 果。另外，温度的变化还会引起溶解氧的变 化。因此，应严格控制采样温度、样品储存 (chǔcún)温度、实验室温度及培养箱温度。
2.4 pH值的影响 水样的pH若超出6.5-7.5范围时，应加酸或碱 调节至此范围；稀释水和接种稀释水的pH值 应为7.2。
接种量一般以23mll水当废水中存在着难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时在其排污口的下游38km处取水样做为废水的驯化接种液同时加入适量表层土壤或生活污水使能适应该种废水的微生物大量繁殖
五日生化(shēnɡ huà)需氧量的 测定
稀释接种法
1.方法原理： 生化需氧量是指在规定(guīdìng)条件
精品资料
2.5.2 抑制硝化作用 水中有机物的生物氧化过程可分为两个阶段，
第一阶段主要是碳氢化合物被氧化，称为碳化阶段， 在20℃下约需20d才能完成，BOD测定(cèdìng)的 一般是该阶段的耗氧量。第二阶段是含氮化合物及 部分氨氧化为亚硝酸盐及硝酸盐，称为硝化阶段， 在20℃约需100d 。对一般水样，测定 (cèdìng)BOD5时的硝化作用并不显著。但对于生 化处理的出水，因其含有大量的硝化细菌，在测定 (cèdìng)BOD5时也包括了部分含氮化合物的需氧 量，因此需要加入硝化抑制剂，抑制硝化作用对 BOD5测定(cèdìng)的影响。可在每升稀释水样中 加入2ml浓度为500mg /L的丙烯基硫脲。
为宜。
精品资料
当废水中存在着难于被一Байду номын сангаас生活污水中的 微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物 质时，在其排污口的下游3-8km处取水样做为 废水的驯化接种液，同时加入适量表层 (biǎocéng)土壤或生活污水，使能适应该种废 水的微生物大量繁殖。
五日生化需氧量(BOD5)的测定
混匀搅拌及赶走气泡
虹吸装瓶
送去培养
六、计 算
1. 采用“水质法”计算BOD5值
BOD5(O2,mg/L)＝
(D1 − D2 ) − (B1 − B2 ) × f1 f2
2. 采用“标准法”计算BOD5值
(未接种时)BOD5(O2,mg/L)＝
D1 − D2 f2
个培养瓶中，至完全充满，盖好盖子，水封。此为第一种稀释倍 数的培养液(在整个操作过程应避免产生气泡)。其余的几种稀释 倍数培养液，亦按上法操作。
4. 用培养瓶装两瓶稀释水作为空白培养。
5. 检查瓶子的编号，每一种稀释倍数中取一瓶及一瓶空白 液测当天溶解氧，其余各瓶水封后送入20℃培养箱中培 养5d。3. 数据记录稀释 倍数(n)
取样量 ｍＬ
测定 时间
滴定前 mL
滴定后 mL
滴定数 mL
空白
当天 /
五天
当天
五天
当天
五天
当天
五天 平均值
ΔＤO mg/L
BOD5mg/L 水质法 标准法
/
/
七、注意事项
1. 在配稀释水时应用含20℃时的饱和氧浓度的蒸馏水进行 配制，同时也需注意营养盐及菌种。
2. 配制培养液时，在混匀搅拌的同时赶走空气泡，并用虹 吸管进行装瓶。
水样用稀释水稀释，确定合适的倍数非常重要。稀释倍 数太大或太小，则五天培养后剩余的溶解氧太多或太少，甚 至为零，都不能得到可靠的结果。稀释的程度应使五天培养 中所消耗的溶解氧大于2mg/L,而剩余溶解氧在1mg/L以上。 在此前提条件下，稀释倍数可以估算，也可以依据经验值法 来确定。
对于不含或少含微生物的废水，在测定BOD5时应进行 接种。
HJ505-2009 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法引言水是人类生活中不可或缺的重要资源，保持水体的水质良好对于人类的生存和健康至关重要。
五日生化需氧量(BOD5)是评估水体有机物含量和有机污染的重要指标之一。
本文将介绍HJ505-2009标准中所规定的水质五日生化需氧量的测定方法，主要包括稀释与接种法。
一、试剂和仪器（不含人名）1. 试剂：- 无菌蒸馏水- 稀释液- 接种物2. 仪器：- 恒温水浴器- 生化需氧量测定仪二、方法步骤1. 样品采集：在需要测定的水体中采集适量的水样，并尽快将其送至实验室。
2. 样品准备：- 如果水样中有悬浮物，需要通过过滤将其去除。
- 将样品的温度调整至适合接种的温度范围（一般为20℃-30℃）。
3. 稀释：- 将适量的水样取出，按照一定的比例用无菌蒸馏水稀释。
- 稀释液的浓度根据样品的预估BOD5值确定。
4. 接种：- 在稀释液中加入适量的接种物。
- 接种物的选择应根据样品的特性和预估BOD5值来确定。
5. 试管设置：- 取一定数量的试管，根据实验要求分别设置不同的对照组和样品组。
- 每个试管中加入相应的稀释液和接种物。
6. 水浴培养：- 将试管放置于恒温水浴器中，控制温度在指定的范围内。
- 培养时间一般为5天。
7. BOD5测定：- 利用生化需氧量测定仪测定试管中的BOD5值。
- 测定时注意保持试管的环境与空气隔绝，避免氧气对结果的影响。
8. 数据处理：- 计算每个样品组和对照组的BOD5值。
- 根据实验需要进行数据统计和分析。
三、实验注意事项1. 样品采集时要避免污染和外界干扰，尽量减少样品与空气接触的时间。
2. 实验过程要严格按照标准操作，避免操作失误对结果的影响。
3. 样品和试剂的操作要在无菌条件下进行，避免细菌污染。
4. 温度的控制是保证结果准确性的重要因素，要使用恒温水浴器进行控制。
HJ505-2009 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法1.引言五日生化需氧量(BOD5)是评价水体中有机污染程度的重要指标之一。
本方法是根据HJ505-2009标准，采用稀释与接种法来测定水样的BOD5。
2.仪器和试剂2.1 仪器BOD培养箱恒温槽p栓塞瓶或其它带塞密封较好的容器反应瓶（容量250 ml）毫升级量筒2.2 试剂含有碳源和养分的培养液水样3.样品处理3.1 采样根据标准规定的采样方法，采集待测水样，并用密封容器密封。
3.2 样品稀释将采样得到的水样，根据需求进行适当的稀释。
确保稀释后的水样符合测试条件。
4.实验步骤4.1 培养液接种将稀释后的水样接种到含有碳源和养分的培养液中。
培养液的配制按照标准规定进行。
4.2 反应瓶封闭将接种好的培养液倒入反应瓶中，并用塞子或其它密封物将其封闭。
4.3 反应瓶容器将封闭好的反应瓶放入恒温槽或BOD培养箱中，保持温度恒定。
按照标准规定的要求，设置好温度和时间。
4.4 反应结束在规定的反应时间后，取出反应瓶，进行测定。
根据标准中的步骤进行测定。
5.数据处理和计算根据标准中的数据处理和计算公式，将测定得到的数据进行处理，得到五日生化需氧量(BOD5)的结果。
6.结果表述按照标准要求，将测定得到的结果以适当的形式进行表述，如单位、精确度等。
7.根据测定结果，得出对水质BOD5的评价，按照标准规定的评价标准进行评定。
8.注意事项根据标准中的注意事项和操作规程，进行实验过程中的注意事项和保持操作的规范性。
以上即为HJ505-2009标准中关于水质BOD5测定的稀释与接种法的实验步骤和操作流程。
实验过程中请遵循相关的安全操作规程，并确保实验条件和操作准确性。
五日生化需氧量的测定（BOD5）
五日生化需氧量的测定（BOD5）生活污水与工业废水中含有大量各类有机物。
当其污染水域后，这些有机物在水体中，分解时要消耗大量溶解氧，从而破坏水体中氧的平衡，使水质恶化。
水体因缺氧造成鱼类及其他水生生物的死亡。
水体中水体中所含的有机物成分复杂；难以一一测定其成分。
人们常常利用水中有机物在一定条件下所消耗的氧，来间接表示水体中有机物的含量，生化需氧量即属于这类的一个重要指标。
生化需氧量的经典测定方法，是稀释接种法。
测定生化需氧量的水样，采集时应充满并密封于瓶中。
在0~4℃下进行保存。
一般应在6h内进行分析。
若需要远距离转运。
在任何情况下，贮存时间不应超过24h。
概述1.方法原理生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质、特别是有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。
此生物氧化全过程进行的时间很长，如在20℃培养时，完成此过程需100多天。
目前国内外普遍规定于20+1℃培养5d，分别测定样品培养前后的溶解氧，二者之差即为BOD5值，以氧的毫克/升（mg/L）表示。
对某些地面水及大多数工业废水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定；以降低其浓度和保证有充足的溶解氧。
稀释的程度应使培养中所消耗的溶解氧大于2mg/L，而剩余溶解氧在1mg/L以上。
为了保证水样稀释后有足够的溶解氧，稀释水通常要通入空气进行曝气（或通入氧气），使稀释水中溶解氧接近饱和。
稀释水中还应加入一定量的无机营养盐和缓冲物质（磷酸盐、钙、镁和铁盐等），以保证微生物生长的需要。
对于不含或少含微生物的工业废水，在测定BOD5时应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在着难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。
本方法适用于测定BOD5大于或等于2mg/L，最大不超过6000mg/L的水样。
当水样BOD5大于6000mg/L，会因稀释带来一定的误差。
五日生化需氧量(BOD5)的测定
• 在已知两个容积相同（其差<1mL）的溶解氧 瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀 释水）；
• 再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样 量；
• 然后用稀释水（或接种稀释水）使之刚好充 满后加塞。
• 注意不要将气泡留在瓶内。
直接稀释法实验步骤
根据 CODcr 值确 定稀 释倍 数
(NH4Cl)溶于水中，稀释至1000mL。此 溶液的pH应为7.2。
试剂
名称 氯化钙溶液 氯化铁溶液
(1+5)硫酸溶液
配制方法及浓度 将27.5g无水氯化钙溶于水， 稀释至1000mL。
将0.25g六水合氯化铁 （Fe3Cl ·6H2O）溶于水，稀 释至1000mL。
实验步骤
1. 水样预处理 2. 不稀释水样的测定 3．需经稀释水样的测定 4. 溶解氧(DO)的测定 5. BOD5测定结果计算 6. 硫代硫酸钠溶液标定 7．一般稀释水制备 8． 接种稀释液制备
调整 被测 水样 的pH
直接 稀释 法采 集稀 释水 2瓶
1瓶测溶解氧 1瓶放入培养箱
溶解氧(DO)的测定(碘量法)
• 用溶解氧瓶虹吸法采集2瓶空白水样；
• 用溶解氧瓶虹吸法采集2瓶被测水样， 分别测定当天的溶解氧和培养5天后的 溶解氧。
溶解氧的固定
虹吸法采集 水样转移到 溶解氧瓶
将移液管插
入液面下加 入1ml硫酸锰 溶液
0.02500mol/L。
试剂
名称
配制方法及浓度
氢氧化 将20g氢氧化钠溶于水,稀释至 钠溶液 1000 mL,浓度为0.5mol/L。
硫酸镁 将22.5g七水合硫酸镁(MgSO4.7H2O)溶 溶液 于水中，稀释至1000mL。
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实验七五日生化需氧量的测定
生化需氧量(BOD)是指在规定的条件下，微生物分解水中某些可氧化物质(主要是有机物)的生物化学过程中消耗溶解氧的量，用以间接表示水中可被微生物降解的有机类物质的含量，是反映有机物污染的重要类别指标之一。
测定BOD 的方法有稀释接种法、微生物传感器法、活性污泥曝气降解法、库仑滴定法、测压法等。
本实验采用稀释接种法测定污水的BOD。
该方法也称五天培养法(BOD5)，即取一定量水样或稀释水样，在20℃±1℃培养五天，分别测定水样培养前、后的溶解氧，二者之差为BOD5值，以氧的mg/L表示，其相关内容参阅教材第二章第五节。
一、实验目的和要求
1．掌握用稀释接种法测定BOD5的基本原理和操作技能。
2．复习第二章第五节中的相关内容，提出为保证测定准确度，应当控制好哪些条件。
二、仪器
1．恒温培养箱。
2．5～20L细口玻璃瓶。
3．1000～2000mL量筒。
4．玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长200mm，棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板。
5．溶解氧瓶：200～300mL，带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口。
6．虹吸管：供分取水样和添加稀释水用。
三、试剂
1．磷酸盐缓冲溶液：将8.58磷酸二氢钾(KH2PO4)，2. 75g磷酸氢二钾(K 2HPO4)，33.4g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化铵(NH4C1)溶于水中，稀释至1000mL。
此溶液的pH 应为7.2。
2．硫酸镁溶液：将22.5g硫酸镁(MgSO4·7H2O)溶于水中，稀释至1000mL。
3．氯化钙溶液；将27.5g无水氯化钙溶于水，稀释至1000mL。
4，氯化铁溶液；将0.25g氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于水，稀释至1000mL。
5．盐酸溶液(0.5mol/L)：将40mL(ρ=1.18g/mL)盐酸溶于水，稀释至1000mL。
6．氢氧化钠溶液(0.5mol/L)：将20g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。
7．亚硫酸钠溶液(1/2Na2SO3＝0.025mol/L)；将1.575g亚硫酸钠溶于水，稀释至1000mL。
此溶液不稳定，需每天配制。
8．葡萄糖-谷氨酸标准溶液；将葡萄糖(C6H12O6)和谷氨酸(HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH)在103℃干燥lh后，各称取150mg溶于水中，移入1000mL容量瓶内并稀释至标线，混合均匀。
此标准溶液临用前配制。
9．稀释水：在5～20L玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20℃左右。
然后用无油空气压缩机或薄膜泵，将此水曝气2～8h，使水中的溶解氧接近于饱和，也可以鼓入适量纯氧。
瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于
20℃培养箱中放置数小时，使水中溶解氧含量达8mg/L左右。
临用前于每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，并混合均匀。
稀释水的pH值应为7.2，其BOD5应小于0.2mg/L。
10．接种液：可选用以下任一方法获得适用的接种液。
(1) 城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上层清液供用。
(2) 表层土壤浸出液，取100g花园土壤或植物生长土壤，加入1L水，混合并静置10min，取上清溶液供用。
(3) 用含城市污水的河水或湖水。
(4) 污水处理厂的出水。
(5) 当分析含有难于降解物质的废水时，在排污口下游3～8km处取水样做为废水的驯化接种液。
如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。
当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用做接种液。
一般驯化过程需要3～8天。
11．接种稀释水；取适量接种液，加于稀释水中，混匀。
每升稀释水中接种液加入量为：生活污水1～10mL；表层土壤浸出液为20～30mL；河水、湖水为10～100mL。
接种稀释水的pH值应为7.2，BOD5值以在0.3～1.0mg/L 之间为宜。
接种稀释水配制后应立即使用。
四、测定步骤
1．水样的预处理
(1) 水样的pH值若超出6.5～7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节至近于7，但用量不要超过水样体积的0.5%。
若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸液进行中和。
(2) 水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数，降低毒物的浓度。
(3) 含有少量游离氯的水样，一般放置1～2h，游离氯即可消失。
对于游离氯在短时间不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，以除去之。
其加入量的计算方法是：取中和好的水样100mL，加入1+1乙酸10 mL，10％(m/V)碘化钾溶液l mL，混匀。
以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。
根据亚硫酸钠标准溶液消耗的体积及其浓度，计算水样中所需加亚硫酸钠溶液的量。
(4) 从水温较低的水域或富营养化的湖泊采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，充分振摇，以赶出过饱和的溶解氧。
从水温较高的水域废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。
2．水样的测定
(1) 不经稀释水样的测定；溶解氧含量较高、有机物含量较少的地面水，可不经稀释，而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转移至两个溶解氧瓶内，转移过程中应注意不使其产生气泡。
以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样后溢出少许，加塞水封。
瓶不应有气泡。
立即测定其中一瓶溶解氧。
将另一瓶放入培养箱中，在20±1℃培养5d后。
测其溶解氧。
(2) 需经稀释水样的测定：根据实践经验，稀释倍数用下述方法计算：地表水由测得的高锰酸盐指数乘以适当的系数求得(见下表)。
工业废水可由重铬酸钾法测得的COD值确定，通常需作三个稀释比，即使用稀释水时，由COD值分别乘以系数0.075、0.15、0.225，即获得三个稀释倍数；使用接种稀释水时，则分别乘以0.075、0.15和0.25，获得三个稀释倍数。
COD cr值可在测定水样COD过程中，加热回流至60min时，用由校核试验的邻苯二甲酸氢钾溶液按COD测定相同步骤制备的标准色列进行估测。
稀释倍数确定后按下法之一测定水样。
①一般稀释法：按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水(或接种稀释水)于1000mL量筒中，加入需要量的均匀水样，再引入稀释水(或接种稀释水)至800mL，用带胶板的玻璃棒小心上下搅匀。
搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面，防止产生气泡。
按不经稀释水样的测定步骤，进行装瓶，测定当天溶解氧和培养5d后的溶解氧含量。
另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水(或接种稀释水)作为空白，分别测定5d前、后的溶解氧含量。
②直接稀释法：直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。
在已知两个容积相同(其差小于lmL)的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水(或接种稀释水)，再
加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量，然后引入稀释水(或接种稀释水)至刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。
其余操作与上述稀释法相同。
在BOD5测定中，一般采用叠氮化钠修正法测定溶解氧。
如遇干扰物质，应根据具体情况采用其他测定法。
3．BOD5计算
不经稀释直接培养的水样：
BOD5(mg/L)=c1-c2
式中：c l—水样在培养前的溶解氧浓度(mg/L)；
c2—水样经5d培养后，剩余溶解氧浓度(mg/L)。
经稀释后培养的水样：
式中：B1—稀释水(或接种稀释水)在培养前的溶解氧浓度(mg/L)；
B2—稀释水(或接种稀释水)在培养后的溶解氧浓度(mg/L)；
—稀释水(或接种稀释水)在培养液中所占比例；
—水样在培养液中所占比例。
五、注意事项
1．水中有机物的生物氧化过程分为碳化阶段和硝化阶段，测定一般水样的BOD5时，硝化阶段不明显或根本不发生，但对于生物处理池的出水，因其中含有大量硝化细菌，因此，在测定BOD5时也包括了部分含氮化合物的需氧量。
对于这种水样，如只需测定有机物的需氧量，应加入硝化抑制剂，如丙稀基硫脲(ATU，C4H8N2S)等。
2．在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩余溶解氧大于lmg/L都有效，计算结果时，应取平均值。
3．为检查稀释水和接种液的质量，以及化验人员的操作技术，可将20mL 葡萄糖-谷氨酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000mL，测其BOD5，其结果应在180～230mg/L之间。
否则，应检查接种液、稀释水或操作技术是否存在问题。
六、结果处理
1．以表格形式列出稀释水样和稀释水(或接种稀释水样)在培养前后实测溶解氧数据，计算水样BOD5值。
2．根据实际控制实验条件和操作情况，分析影响测定准确度的因素。
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