高效液相色谱方法及应

③选择适当的或优化的分离操作条件，确 定流动相的组成、流速及洗脱方式。
④由获得的色谱图进行定性分析和定量分
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第一节 样品的性质及柱 分离模式的选择
一、样品的溶解度 二、样品的分子结构和分析特性 1．同系物的分离 2、同分异构体的分离 3、对映异构体的分离
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Chromatography） 5、亲和色谱（Affinity Chromatography）
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按分离过程物理化学原理分类的各种液相 色谱法的比较
吸附色谱 分配色谱 离子色谱 体积排阻 亲和色谱 色谱
固定相
全多孔固 固定液载 体吸附剂 带在固相
基体上
高效微粒 具有不同 离子交换 孔径的多
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第二节 高效液相色谱法的分类
按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类 1、吸附色谱（Adsorption Chromatography） 2、分配色谱（Partition Chromatography） 3、离子色谱（Ion Chromatography） 4 、 体 积 排 阻 色 谱 （ Size Exclusion
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第四章 建立高效液相色谱分 析方法的一般步骤
通常在确定被分析的样品以后，要建立一种 高效液相色谱分析方法必须解决以下问题：
①根据被分析样品的特性选择适用于样品 分析的一种高效液相色谱分析方法。
②选择一根适用的色谱柱，确定柱的规格 （柱内径及柱长）和选用固定相（粒径及孔
径）。
高效液相色谱方法 及应用
主讲人：王英特
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第一章 绪论
色谱分析法是分析化学中获得广泛应用 的一个重要分支，是一个具有强大生命 力的分离分析技术。
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第一节 高效液相色谱法的特点
一、与经典液相色谱法比较 二、与气相色谱法比较 三、高效液相色谱法的特点 1．分离效能高 2 ．选择性高 3 ．检测灵敏度高 4 ．分析速度快
剂 孔性凝胶
多种不同 性能的配 位体键联 在固相基 体上
流动相
不同极性 有机溶剂
不同极性 有机溶剂 和水
不同pH值 有机溶剂
的缓冲溶 或一定pH
液
值的缓冲
溶液
不同pH值 的缓冲溶 液，可加 入改性剂
分离原理
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吸附与解 吸
溶解与挥 发
可逆性的 离子交换
多孔凝胶 的渗透或 过滤
具有锁匙 结构络合 物的可逆 性离解 5
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第二节 分离操作条件的选择
一、容量因子和死时间的测量 二、样品组分保留值和容量因子的选择
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下列优良常规操作能够最大限度降 低维修费用：
（2）往复型泵
2．恒压泵：恒压泵又称气动放大泵， 是输出恒定压力的泵。
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二、输液系统的辅助设备 1．管道过滤器 2．脉动阻尼器 三、梯度洗脱装置 1．低压梯度（外梯度） 2．高压梯度（内梯度） 3．影响梯度洗脱的因素
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第三节 进样装置
一、停流进样装置 二、六通阀进样装置 三、自动进样器
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第四节 色谱柱
一、柱材料及规格 1．柱材料 2．柱规格 二、柱连接方式 三、柱温控制 四、柱填充技术
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第五节 检测器
常用的检测器为紫外吸收检测器 （UVD）、折光指数检测器（RID）、 电导检测器（ECD）和荧光检测器 （FD）。
近几年出现的蒸发激光散射检测器 （ELSD）有望成为高效液相色谱全新 的通用灵敏的质量检测器。
一、贮液罐 二、流动相脱气 （1）吹氦脱气法 （2）加热回流法 （3）抽真空脱气法 （4）超声波脱气法 （5）在线真空脱气法
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第二节 高压输液泵及梯度洗脱装置
一、高压输液泵
高压输液泵可以分为以下两类：
1．恒流泵：可输出恒定体积流量的流 动相。
（1）注射式泵（又称注射式螺杆泵）
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第三节 流动相
一、在键合相色谱中选择流动相的一般 原则
二、改善色谱分离选择性的方法
1．调节流动相的极性
2．向流动相中加入改性剂
（1）离子抑制法
（2）离子强度调节法
三、溶质保留值随溶剂极性变化的一般 保留规律
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第四节 离子对色谱法
一、分离原理 二、固定相、流动相和对离子 三、影响离子对色谱分离选择性的因素 1．溶剂极性的影响 2．离子强度的影响 3．pH值的影响 4．温度的影响 5．离子试剂的性质和浓度的影响
第三节 基本原理
一、色谱过程 二、分配系数与保留行为的关系 1．分配系数及容量因子 2．保留时间 3．tR与K的关系 4．分配系数不等是分离前提
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第二章 高效液相色谱仪简介
1.贮液瓶 2.高压输液泵 3.进样器 4.色谱柱 5.检测器 6.记录装置
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Hale Waihona Puke Baidu
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第一节 流动相及贮液罐
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第一节 分离原理
一、正相键合相色谱法的分离原理 二、反相键合相色谱法的分离原理 以下简述三种影响溶质保留值的因素： 1．溶质分子结构对保留值的影响 2．烷基键合固定相特性对保留值的影
响 3．流动相性质对保留值的影响
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第二节 固定相
使用键合固定相应注意的问题： 1．硅胶键合相的稳定性 2．键合相色谱分离的重现性 3．键合相色谱分离的选择性 4．键合相色谱柱的再生
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第三章 键合相色谱法
根据键合固定相与流动相相对极性的强 弱，可将键合相色谱法分为正相键合相 色谱法和反相键合相色谱法。在正相键 合相色谱法中，键合固定相的极性大于 流动相的极性；在反相键合相色谱法中， 键合固定相的极性小于流动相的极性， 其应用范围比正相键合相色谱法更广泛。
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一、检测器的性能指标 （1）噪声 （2）基线漂移 （3）灵敏度 （4）线性范围 （5）检测器的池体积
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二、紫外吸收检测器 1．固定波长紫外吸收检测器 2．可变波长紫外吸收检测器 3．光二极管阵列检测器 三、折光指数检测器 四、电导检测器 五、荧光检测器