自动生化分析仪试验参数设置

酶促反应过程
• 随着加入血清或底物启动反应后，在出现明显的变化前这一时期称为延迟期， 随着加入血清或底物启动反应后，在出现明显的变化前这一时期称为延迟期，此期从 几秒到几分钟，随后是底物和产物变化与时间成直线时期，形成产物的速率恒定， 几秒到几分钟，随后是底物和产物变化与时间成直线时期，形成产物的速率恒定，此 时期的速率为“反应初速度” 此期底物也下降，但实际上反应速度与底物浓度无关， 时期的速率为“反应初速度”。此期底物也下降，但实际上反应速度与底物浓度无关， 对底物浓度而言，这一时期的反应称为是零级反应，即产物增加的速度不变。 对底物浓度而言，这一时期的反应称为是零级反应，即产物增加的速度不变。在零级 反应区内，时间和吸光度的变化成线性，表现在反应曲线上，在一定的时间内， 反应区内，时间和吸光度的变化成线性，表现在反应曲线上，在一定的时间内，吸光 度的变化为一条直线。反应曲线的直线期时间长短相差很大。 度的变化为一条直线。反应曲线的直线期时间长短相差很大。紧跟着是反应速率持续 下降，进入速度依赖底物浓度的时期，这一时期称为一级反应期。在这一期中， 下降，进入速度依赖底物浓度的时期，这一时期称为一级反应期。在这一期中，底物 浓度下降，逆反应增加。抑制性产物积蓄，当底物耗尽或达到平衡时， 浓度下降，逆反应增加。抑制性产物积蓄，当底物耗尽或达到平衡时，反应停止
方法学 （ Method ）
• 概述：方法学决定于其所采用的测定方法 和校准模式，临床生化检验测定方法总的 来说可分为两大类：终点法和动力学法， 其中动力学法又可分为零级动力学法和一 级动力学法
• 表示方法：在不同仪器上分析方法有各种方式
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表示方法 COBAS Asaay HITACHI Assay code OLYMPUS Method BECKMAN Reaction type
试剂加入时间（Adding Time）
• 概念： COBAS和 HITACHI 第一试剂/第二试剂：试剂的成分的区别 R1/R2/R3/R4：试剂的加注时间，试剂一在样 本加入后即刻加入，试剂二可以在R2（1.5 分钟）或R3（5分钟）时加入
• 试剂加入方式及相应时间 分钟) 试剂加入方式及相应时间(分钟 分钟
理论测试数 按照R1计算= 4×50mL/200uL=1000Tests 按照R2计算= 2×50mL/100uL=1000Tests 实际测试数 按照R1计算= 4×50mL/（200+23）uL=896Tests 按照R2计算= 2×50mL/（100+16）uL=862Tests
结果：R1剩余，R3不足
试验名称（Test Name）： 以英文缩写表示
• 根据国际标准和习惯： ALT（GPT）；GSP（FRA）；CK（CPK） • 方法学不同时名称有区别： LDHIL/LDHL，反应原理不同，相应的参考范围不 同，室间质评报告结果时相差很大 GLUC2/GLUC3：200/800Tests 不同厂家的试剂不同： 如在BECKMAN CX/LX/DX系列应用名随厂家不同 而不同，CZALT/ZSALT等
常用选择项 Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point end Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point end RATE/FIXED/END RATE1/2/END1/2 Rate /Flex Rate/End
• ABBOTT
wenku.baidu.com
Reaction defintion
样本空白 (Sample Blank)
• 原因：溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本 身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本 身吸光度的测量，即样本空白，可以去除这方面 的影响 • 测量方法：按照正常测试的试剂和样本量，把试 剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量 • 终点法选YES 或NO • 影响速度：样本加空白试剂，要占用一个比色杯， 速度减慢
• 最大反应体积 最大反应体积：超过此体积，导致反应混合体系外 溢，仪器测定系统被污染损坏 • 实际分配体积 实际分配体积：大于设置体积，富余试剂的分配 目的：防止试剂被稀释；防止试剂间的交叉污染 实际分配体积大于设置的分配体积 R1：180（180+22），R3：60（60+12） 结果：R1剩余，R3不足
• 不同仪器波长的表示方式
主波长 COBAS HITACHI OLYMPUS BECKMAN ABBOTT Wave(Main/ Wave(Main/ Wavelength pri Primary Wavelength Wavelength Primary 次波长 Sub) Sub) Wavelength sec Secondary Wavelength Wavelenght Secondary
ALT的反应原理：
L-丙氨酸 + a-酮戊二酸 NADH + 丙酮酸 + H+ ALT LDH 丙酮酸 + L-谷氨酸 L-乳酸 + NAD+
ALT为降反应，其原理为通过监测NADH的消耗造成吸光度的降低速率，得到 ALT的含量。当ALT含量很高时，酶反应速度加快，NADH在30秒之内就可能 消耗完全，即底物耗尽
HITACHI P800 C501 OLYMPUS ABBOTT
可选择项
INC/DEC INC/DEC +/－ Positive/Negative Up/Down
• ABBOTT
样本量（Sample Volume ）
• Sample Volume （S.V）：可以选择的最 大和最小样本量，以微升（ul）计 • 样本量的递增数值：0.1、0.5、1ul，和仪 器的加样精确度有关 • 可以根据与试剂的比例增大或减少样本量
试剂量（Reagents Volume ）
最小反应体积 ：在仪器光度读数用于结果计算时，反应液液 面高度不低于光度计光径最小体积 ，保证仪器的正确读 数和计算，也是仪器测定精密度和经济性的指标之一 设定原则 在单试剂测定中：样本与试剂的总体积不得少于此参数 在双试剂测定中： R1与样本的反应读数不纳入结果计算：R1加液量可不考虑 此参数，如连续监测法； R1与样本的反应读数纳入结果计算：应考虑它对结果的影 响，用于两点终点法和带样本空白的速率法
反应时间(Reaction Time)
• 指仪器的一个分析周期中，试剂和样本混合最后一点测定 读数时间 • 选择原则：保证测定项目在该时间内能完成监测，如ALB、 TG、CK GLU时间不同 • 常见仪器可以选择的时间 COBAS P800 :1~10、15、22分钟 C501: 3~10分钟 HITACHI ：3、5、8、10、15、22分钟 OLYMPUS固定时间： 8.3分钟 ABBOTT固定时间：9.6 分钟 BECKMAN可达时间：975秒
• 样本与试剂的比例 样本与试剂的比例(SV：RV)即样本体积分数： 定义：样本体积与反应液总体积的比值(SV／TV) • 比例选择原则
待测物质含量高，生理波动范围小，样本用量小： ALB 1:200， GLU、TCH等，样本试剂多为1:1OO，测定 血UA或HDL-C，常为1:50 待测物质含量低，生理波动范围大，样本用量大，应在 1:10％以下，如酶ALT/AST活力为1:10 ，肌酐Jaffe氏法 监测时间短、吸光度值较低，样本试剂比例多为1:10
延迟时间(Delay Time)
• 概念：指试剂与样本混合后到监测开始之间的时 间 • 应用：连续监测法或两点速率法法用 • 原因：酶与底物混匀后需要一定的时间才被激活， 直到线性期的零级反应后才能开始监测；有的项 目需要用工具酶将内源性代谢产物耗尽后才能监 测 • 方式： 以S“秒”或P（Point）测定点设置 • 项目和方法学不同时差别很大:CHE/CREA/ALT/ALP/CK/TBA
反应监测时间 (Reaction Monitor Time)
• 用途：该时间内的测定读数要用于结果计算 • 一般反应时间10分钟左右，6-30秒读数一次，有的仪器在整个反应周期全 程读数，有的读取指定时间(点)吸光度
• 监测时间： 终点法：达到反应终点的时间 速率法：酶至少90～120Ｓ或不能少于4个读数点即3个吸光度的变化(3个△A)
• 2 从ALT的反应曲线分析：
仪器检测的正是底物耗尽后吸光度变化的平台期，造成了病人结果只有20U/L的现象，导致医疗纠纷的 产生，因此很有必要了解仪器和试验项目的参数设置的基本原理
试验代号（Test Code）
• 以数字表示 • 目的: 便于识别 为仪器通讯提供代码 注意事项：不能随意更改试验代号，原因： （1）：保证数据在LIMS中传输的正确性 （2）：保证结果显示时的顺序 （3）：保证试剂信息读取正确
• 设定量（uL） 20 50 • 余 量（uL） 11 13 • 消费量（uL） 31 63
100 150 16 19 116 169
200 23 223
250 26 276
270 27 297
上海复星长征公司生产的ALT试剂规格 R1：4×50mL，R2：2×50mL R1：R2：S设定量为：200：100：15uL
COBAS常用波长：12个波段,从紫外线到红外线340~800nm
反应方向(Reaction Direction )
在一定反应时间内，吸光度是增大还是下降
表示方法
• • • • COBAS HITACHI OLYMPUS BECKMAN INC/DEC INC/DEC Reaction Slope Reaction Direction Reaction Mode
温度（Tem）
• 三种温度可选: 30℃、37℃、25℃/固定37℃ • 控制反应温度的方法：水浴/空气浴 • 温度选择意义：方法学不同，结果的溯源性 不同，靶值不同
波长 （Wave Length ）
• 选择原则：正确选择有利于提高测定的灵敏度和减少测定 误差 待测物质在该波长下的光吸收最大； 其吸收峰宜较宽而钝，而不是处于尖峰或陡肩，一般不选光 谱中末端吸收峰，即该吸收峰处吸光度随波长变化较小； 常见干扰物在该波长下的光吸收最小 • 双波长测定 ：选择一个次波长，因单波长测定易受样本 溶血、黄疸、脂浊等因素干扰 双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的 峰形特征，选择两个波长，使干扰组分在这两个波长处的 吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光系数有显 著差别
注意事项：缩小试剂用量会降低线性范围，遇高浓 度样本会因酶量不足而使结果变低
稀释液量(Dilution Volume)
• 添加稀释液(水)：去离子水或指定的液体(0.9%NaCl) • 目的 一用于浓缩试剂的稀释：恢复原试剂浓度；避免试剂间的交叉 污染 二在样本加量小的时候用来冲洗样本探针内侧，洗出粘附在采 样针内壁上的微量血清，减少加样误差和避免交叉误差 注意：要把稀释水量纳入样本试剂比例和反应液总体积考虑
自动生化分析仪 分析参数设置
张孝永
您遇到过这样的医疗纠纷吗？ 您遇到过这样的医疗纠纷吗？
A医院的生化室使用全自动生化仪器，每天早上做两 医院的生化室使用全自动生化仪器， 医院的生化室使用全自动生化仪器 个水平的质控合格后才开始测试标本。某天， 个水平的质控合格后才开始测试标本。某天，检测了一例 病人标本ALT（丙氨酸氨基转移酶）结果为 病人标本 （丙氨酸氨基转移酶）结果为20U/L。生化 。 室的检验人员没有仔细检查其它项目就匆匆发了报告。 室的检验人员没有仔细检查其它项目就匆匆发了报告。 此人是一个严重的肝炎患者， 此人是一个严重的肝炎患者，当他拿到一个正常的 ALT结果的报告单，大为疑惑，于是第二天到另一家权威 结果的报告单， 结果的报告单 大为疑惑， 医院抽血化验，得到2500U/L的ALT报告，一场医疗纠纷 报告， 医院抽血化验，得到 的 报告 产生了!结果 结果……. 产生了 结果 检测人员很不理解，两个水平的质控都在靶值上， 检测人员很不理解，两个水平的质控都在靶值上，说 明试剂和仪器状态均正常， 明试剂和仪器状态均正常，为什么病人结果却相差如此悬 而且仪器也没有报警。 殊，而且仪器也没有报警。