二苯胺试剂鉴定DNA
二苯胺显色法测定DNA含量
离心机的使用
打开电源开关； 平衡放置离心管；盖上盖子。 调节时间旋钮至10min； 缓慢调节速度旋钮至9档，每5-10s上升1档； 离心完毕后机器自动停止，待完全停止后，打开盖子取出离心管。 离心管必须平衡后，才能启动离心机； 离心机的盖子必须盖紧；
离心过程中不要用重物撞击离心机；
兔肝脱氧核糖核酸（DNA）的提取和测定
实验目的 学习从动物组织中提取DNA及其含量、纯度测定的原 理和方法 掌握离心机的使用方法
实验原理
在0.15M的氯化钠溶液中脱氧核糖核蛋白的溶解度最低。 用0.15M氯化钠溶液洗涤可洗去其它物质。 沉淀用SDS处理，SDS使蛋白质与DNA解离，再用氯仿 －异丙醇抽提，将蛋白质沉淀除去，而DNA则溶解。 DNA溶液用乙醇沉淀析出。
加入15% SDS时要慢，边搅边滴加（两人配合）。
SDS的温度不能太低，易凝固。吸过SDS的吸管要及时清洗。
加入CHCl3/IAA液离心后，分为三层，由上到下为：无机相-蛋白
相-有机相。DNA溶解在无机相中，吸取无机相时动作要轻，不要
吸到蛋白相。
CHCl3/IAA会溶解有机玻璃，用完后不能竖直放置在试管架上，必
加 0.15M NaCl-0.1M Na2EDTA至4ml 轻搅 10min 加塞反复 倒置抽提 10min 重复 一次
DNA析出
逐滴加入0.5ml 15% SDS
用玻棒挑出
搅拌10min
去塞！离心
挑取DNA至一离 心管(小烧杯)用10ml 0.01N NaOH溶解
加1ml 5M NaCl
吸取上清液 勿吸到中间层！
要等离心机完全停止转动后再打开盖子。
二苯胺显色法测定DNA含量
DNA的定量测定(二苯胺法)实验报告
DNA的定量测定(二苯胺法)实验报告实验目的：本实验旨在掌握用二苯胺法定量测定DNA含量的基本原理和方法。
实验原理：在酸性环境中加热，DNA被水解为嘌呤、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸。
其中脱氧核糖在酸性条件下，脱水生成ω-羟基-y-酮基戊糖，后者与二苯胺作用呈现蓝色，在595nm处有最大光吸收。
当样品DNA的含量在40-400µg范围时，光密度与DNA的浓度成正比。
样品中含有少量RNA不影响测定结果，但是蛋白质、脱氧核糖、阿拉伯糖和芳香醛等能与二苯胺形成各种各样有色物质，干扰结果。
在反应中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。
试剂与仪器：DNA标准液、二苯胺试剂、样品溶液、试管与试管架、吸管与洗耳球、可见分光光度计。
DNA标准液曲线的制作与样品DNA含量的测定：取8支洁净干燥的试管，按表格操作。
混合后，于60度水浴中保温1小时，冷却至室温中，用分光光度计测定吸光值A595nm。
以DNA浓度为横坐标吸光值A595nm为纵坐标，绘制标准曲线，对照组标准曲线计算样品中DNA的含量。
实验结果与讨论：通过实验得出DNA标准曲线，y=0.0098x，求出X1=40.71µg/ml，X2=39.39µg/ml，平均DNA 浓度为40.05µg/ml，含量n%=40.05/100%=40.05%。
注意：文章中的一些数字和符号可能需要根据实际情况进行调整。
分析：本实验使用标准曲线求得的DNA浓度为40.05µg/ml。
在40-400µg范围内，光密度与DNA浓度成正比，因此使用标准曲线求得的浓度是准确的。
此外，DNA的标准曲线线性关系的R2为0.9966，证明DNA光密度的关系密切，因此求出的浓度也比较精确。
然而，本实验测得的DNA含量比整体水平偏低。
造成这种偏低的原因可能是以下几个方面：1.在吸取DNA溶液样品时，未充分摇匀，便吸取2.0mlDNA样液，造成DNA含量不均，从而导致实验存在误差。
DNA定量测定(二苯胺法)实验报告
DNA定量测定(二苯胺法)实验报告
实验目的：利用二苯胺法对DNA进行定量测定，获得DNA
的浓度信息。
实验原理：二苯胺法是一种常用的DNA定量测定方法。
其原
理是DNA与二苯胺反应生成发色产物，并在560 nm波长下
具有最大吸收量，通过测定吸光度来计算DNA的浓度。
在实
验中，先将待测的DNA样品与二苯胺溶液反应得到发色产物，然后通过比较其吸光度与已知浓度标准曲线的关系来计算待测样品的DNA浓度。
实验步骤：
1. 准备工作：将工作区域消毒，摆放实验所需仪器器材。
2. 制备标准曲线：依次稀释5 μg/mL的DNA溶液，得到一系
列不同浓度的DNA标准溶液。
将标准溶液与相同体积的二苯
胺溶液混合，反应10分钟。
然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度，并绘制标准曲线。
3. 处理待测样品：将待测样品与相同体积的二苯胺溶液混合，反应10分钟。
然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度。
4. 计算DNA浓度：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代
入计算公式，得到DNA的浓度。
实验结果：
标准曲线数据：（以吸光度为横坐标，DNA浓度为纵坐标）
吸光度（A） DNA浓度（μg/mL）
0.1 1
0.2 2
0.3 3
0.4 4
0.5 5
待测样品数据：
吸光度（A） = 0.25
根据标准曲线计算得到的DNA浓度为2.5 μg/mL
实验结论：根据二苯胺法对DNA的定量测定结果，待测样品的DNA浓度为2.5 μg/mL。
实验14 DNA的含量测定
五、注意事项
其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对 实验有干扰，测定前应尽可能除去。
六、思考题
1、 DNA含量测定的方法有哪些？各有何优 缺点？ 2、简述二苯胺法测DNA的基本原理。
实验十五
DNA的定量测定 DNA的定量测定
一、实验目的
学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。
二、原理
核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和 分别针对DNA和RNA的颜色反应方法。本实验采用 针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。在酸性溶液中， DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在 100℃ 595nm有最大吸收，在40～400µg/mL范围内其峰 蓝色物 NH 值与DNA含量成正比。 冰醋酸，少量硫酸
DNA +
三、试剂和器材
1. 试剂
200µg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂
2. 器材 可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平
四、操作步骤
1. 标准曲线的制作 取12只试管分成6组，按下表操作。取2管 的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐 标，绘制标准曲线。
试管
标准DNA/mL 标准DNA/mL 蒸馏水/mL 蒸馏水/mL 二苯胺试剂 /mL
0 0 2 4
1 0.4 1.6 .2 0.8 4
4 1.6 0.4 4
5 2.0 0 4
60℃恒温水浴中保温1h，冷却， 595nm波长处比色 60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色 1h 光密度值
2. 样品的测定
取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀， 60℃保温1h，然后在595nm波长出测定光密度值。 根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的 DNA的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。 DNA%＝ DNA%
二苯胺的使用
⼆苯胺的使⽤DNA的鉴定 本实验中鉴定DNA的⽅法为⼆苯胺法(配⽅见下述的“药品配制”)。
⼆苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸⽣成ω-羟基-γ酮基戊醛,它再和⼆苯胺作⽤⽽显现蓝⾊(溶液呈浅蓝⾊)。
鉴定时溶液蓝⾊的深浅,与溶液中DNA含量的多少有关。
⼆苯胺试剂的配制A液： 15 g⼆苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,⽤棕⾊瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使⽤。
B液： ⼄醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制： 将0.1 mL B液加⼊到10 mL A液中,现配现⽤。
DNA粗提取与鉴定的另⼀种⽅法1.材料⽤具新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。
塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏⽃,酒精灯,⽯棉⽹,三⾓架,⽕柴,⼑⽚,天平。
研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,⼆苯胺试剂,蒸馏⽔。
2.⽅法步骤(1)DNA的粗提取 ①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放⼊冰箱冷冻室,⾄少24 h。
②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 将碎菜花放⼊研钵中,倒⼊10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④过滤 在漏⽃中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤⼊烧杯中(有条件的学校可将滤液倒⼊塑料离⼼管中进⾏离⼼,⽤1000r/min的旋转频率,离⼼25 min,取上清液放⼊烧杯中)。
在4 ℃冰箱中放置⼏分后,再取上清液。
⑤加冷酒精 将⼀倍体积的上清液倒⼊两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并⽤玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。
沉淀35 min后,可见⽩⾊的DNA絮状物出现。
⽤玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定 ①配制⼆苯胺试剂 取0.1 mL B液,滴⼊到10 mL A液中,混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放⼊试管中,加⼊4 mL ⼆苯胺试剂,混匀后观察溶液颜⾊(不变蓝)。
⽤沸⽔浴(100 ℃)加热10 min 。
5-二苯胺显色法测定DNA含量ppt
实验操作
以0.01N NaOH 为空白管，在260nm和280nm波长处测定样品液的吸光度，求出样 品液的A260/A280比值和DNA浓度。
核酸紫外吸收光谱的测定
DNA和RNA都有吸收紫外光的性质，它们的吸收高峰在 260nm波长处。吸收紫外光的性质 是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质， 不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。 蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在 280nm波长 处，在260nm处的吸收值公为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中蛋白质含量较低时对 核酸的紫外测定影响不大。RNA的260nm与280nm吸收的比值在2.0以上；DNA的260nm与 280nm吸收的比值则在1.9左右。当样品中蛋白质含量较高时比值即下降。 A260/A280 ≈1.8 > 1.8 < 1.8 表示DNA纯 RNA含量高 蛋白含量高
一般性实验-5
二苯胺显色法测定DNA含量
Hale Waihona Puke 实验原理 DNA的α-脱氧核糖在酸性条件下转变成ω-羟基-r酮基戊醛，与二苯胺共热后 形成蓝色化合物，该化合物在595nm处最大吸收。 每ml含20－400µg范围内光密度与DNA的浓度成正比。反应液中加入少量乙 醛，可提高反应的灵敏度。
DNA
H＋
二苯胺 HO－CH2－C－CH2－CH2－CHO ＝ O 蓝色化合物
岛津UV-120分光光度计
双波长分光光度计，该种机采用两个光源，可在可见光和紫外区对物质进行 分析，钨丝灯发出光的适宜范围在360－1000nm，氘灯发出光的适宜范围在 150－400nm。 通过两种光源的切换，可以在两种波长范围内使用。 使用石英杯作为比色杯。
二苯胺试剂鉴定DNA的原理
二苯胺试剂鉴定DNA的原理二苯胺试剂鉴定DNA的原理一、定义二苯胺试剂（Diels-Alder Reagent）是一种有机化学试剂，用于识别DNA特定序列的定向性反应，也称为定向碱基异构酶（DBA）试剂。
该反应原理的应用有助于鉴定DNAsites的结构以及多段和复合份额的识别。
二、原理二苯胺试剂的反应受特定的DNA序列控制。
当两个特定的DNA序列（A和B）结合在一起时，二苯胺试剂不会发生反应。
当两个相邻的DNA同源片段（测序DNA被称为probe DNA）与目标DNA结合时，二苯胺试剂将发生化学反应，从而形成定向碱基异构化反应（DBAR）。
当两个DNA同源片段（A和B）以相反的方向连接在一起并且probe DNA与target连接在一起时，将发生相反的DBAR反应，从而允许研究人员确定多段复合份额结构和激活片段的位置。
三、步骤1. 准备试剂：用于鉴定DNA序列的二苯胺试剂主要包括：四氢三唑，苯胺试剂，deoxyuridine triphosphate（dUTP），十六烷基三甲基溴化氢，二硫代乙酸盐，硫酸铵，三氟异丙醇，氯化钠和氯仿。
2. 生物实验：首先，把一定量的DNA与二苯胺试剂，孵育物质以及制剂混合物一起混合搅拌，使其充分接触。
所得的混合物应放在微孔板的特定位置，经过30分钟的反应，可完成DNA的定向碱基异构化反应。
3. 检测结果：在用正片胶将实验测试物涂覆之后，用UV波长或紫外可见对应射线下照射，发现接受了二苯胺化学反应和定向碱基异构化反应的物质和连接物会吸收紫外线，通过经典的水滴检测法即可看到反应得到的结果。
四、应用二苯胺试剂技术可以用于鉴定DNA特定序列的结构，可以识别多复制份额DNA结构，可以用于对染色体进行谱系定向标记，可以用于精确的基因组生物学和染色体学研究。
二苯胺法测定DNA含量
实验12 二苯胺法测定DNA 含量一、目的学习和掌握测定DNA 的定糖法（二苯胺法）的原理和操作技术。
二、原理脱氧核糖核酸中的α—脱氧核糖在酸性环境中变成ω—羟基—γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在595nm 处有最大的吸收，在每毫升含DNA20~400微克范围内，光密度与DNA 的浓度成正比，在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。
除DNA 外，脱氧木糖，阿拉伯糖也有同样的反应。
HO CH 2C — CH 2 CHO 蓝色化合物 酸性条件 二苯胺 Oω—羟基—γ酮基戊醛三、材料、试剂和器具 （一）试剂1、DNA 标准溶液：取小牛胸腺DNA 用0.1N 氢氧化钠溶液配制成200微克/毫升的溶液。
2、DNA 样品液：（自己提取）控制其DNA 含量在50~100微克/毫升左右。
3、二苯胺试剂：称取1克结果的二苯胺试剂溶于100毫升分析纯的冰醋酸中，再加入10毫升过氯酸（A.R60%以上）或浓硫酸2.75毫升，混匀备用。
临用前加入1毫升1.6%乙醛溶液（乙醛溶液应保存于冰箱，一周内可使用）所配得的溶液应为无色。
（二）器具1、试管及试管架2、移液管（1，2，5毫升）3、恒温水浴4、可见光分光光度计四、操作步骤（一）DNA 标准曲线的制作==加毕，摇匀，于60℃恒温水浴中保温1小时，（或于沸水中煮沸15分钟，冷却测0.D 595nm 值。
）以光密度为纵坐标，DNA 含量（ug/ml ）为横坐标，绘制标准曲线。
（二）样品的测定取2支试管，各加0.2~0.5毫升的待测液（内含DNA 应在标准曲线可测范围之内）加蒸馏水稀释至2毫升，再加4毫升二苯胺试剂，摇匀，其操作步骤与标准曲线的制作相同。
根据测得的光密度值，从标准曲线上查出相当该光密度DNA 的含量，按下式计算出样品中DNA 的百分含量。
DNA 含量/毫升待测液=标准曲线查得值×稀释倍数10010)(/(%)6⨯⨯⨯=g DNA 新鲜鲜肝总体积毫升含量产率五、注意事项1、二茉胺法测定DNA 含量灵敏度不高，待测样品中DNA 含量低于50mg/L 即难以测定。
二苯胺试剂鉴定DNA
材料：活鸡或鲜血鸡血。
仪器:离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL,ｌ个),烧杯（10０mL，l个,50 mL、5０0mL各２个)，试管（２0 mL,2个）,漏斗,试管夹,纱布.
试剂:酒精得体积分数为95%得溶液（实验前置于冰箱内冷却24 h),蒸馏水,柠檬酸钠得质量浓度为0。1g/mＬ得溶液,氯化钠得物质得量浓度分别为2 mol/L与0．015mol/L得溶液，二苯胺试剂。
DNA不溶于９5％得酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得DNA。
DNA中含有脱氧核糖,能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此,二苯胺可以作为鉴定DNA得试剂。
目得要求
1、学会DNA得粗提取与鉴定得方法。
２、观察提取出来得DNA物质得颜色与形状。
７．提取含杂质较少得DNＡ
在上述滤过得溶液中，加入冷却得、酒精得体积分数为９５％得溶液50ｍＬ(使用冷却得酒精，对DNA得凝集效果较佳）,并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少得丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面得水分。这种丝状物得主要成分就就是DNA。注意观察丝状物就是什么颜色得.
8.ＤNA得鉴定
5.将ＤＮA得粘稠物再溶解
取１个5０mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠得物质得量浓度为2 mol／L得溶液２0ｍL。用钝头镊子将纱布上得粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。
６。过滤含有DNA得氯化钠溶液
取１个１00 mL烧杯，用放有两层纱布得漏斗过滤步骤5中得溶液。取其滤液,DＮＡ溶于滤液中。
结论
步骤８得2支试管中溶液颜色得变化说明了什么？将得出得结论填写在《实验报告册》上.
二苯胺试剂鉴定
二苯胺试剂的配制A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为%的溶液。
配制:将mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA的粗提取与鉴定实验原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液（5～10mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L和0．015 mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个，50 mL，500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100 mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min2．溶解DNA：3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4．过滤：取黏稠物5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。
3 min6．过滤：取滤液。
7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。
5 min8．DNA的鉴定：沸水浴5min【实验十二】DNA的粗提取与鉴定实验原理DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。
二苯胺鉴别dna的原理
二苯胺鉴别dna的原理二苯胺（o-Phenylenediamine，简称OPD）是一种常用的试剂，可用于鉴别和检测DNA。
其原理主要涉及化学反应和染色反应。
下面详细解释。
DNA是生物体内一个重要的遗传物质，其构成基本单元为核苷酸，由磷酸、五碳糖（脱氧核糖或核糖）和氮碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶）组成。
DNA具有独特的化学结构和物理特性，因此可以通过特殊的染色和鉴别方法来检测它的存在。
二苯胺作为一种有机化合物，具有极好的还原性。
当其与乙醛反应时，形成可见切的氧化产物，从而在DNA鉴别中起到重要作用。
具体原理如下：首先，需要提取待测样品中的DNA。
一般来说，可以通过加入一种缓冲液使细胞膜溶解并释放DNA。
接着，利用离心等方法去除细胞碎片和其他有机物。
提取得到的纯化DNA溶液中，加入二苯胺溶液。
此时，二苯胺会与乙醛反应生成化合物A。
这个反应的机理是二苯胺被氧化成为二苯亚胺离子，与乙醛生成戊二酚偶合物。
化合物A是一种无色化合物。
为了能够观察到该化合物的产生，还需加入过氧化氢（H2O2）。
H2O2的存在下，化合物A会被氧化为可见光的产物B。
产物B为棕色沉淀物，沉积在提取的DNA溶液中。
通过这种染色反应，能够明确地判断待测样品中是否含有DNA。
这种鉴别DNA的实验步骤相对简单，可靠性较高。
其灵敏度可达微克级别，甚至克级别的DNA也能检测到。
此外，这一方法所需试剂的成本较低，操作简便，适合于大量样品的快速鉴别。
需要注意的是，二苯胺法只是一种基本的DNA鉴别方法。
随着科学技术的不断发展，出现了更为先进和灵敏的DNA分析方法，如PCR（聚合酶链式反应），电泳等。
这些方法在法医学、生物学等领域都有广泛的应用。
二苯胺检测dna的原理
二苯胺检测dna的原理宝子们！今天咱们来唠唠二苯胺检测DNA的原理，可有趣啦！你知道吗？DNA在生物界那可是超级重要的存在，就像一个神秘的密码本，记录着生物的各种信息。
那咱怎么把它找出来，怎么知道它在那儿呢？这就轮到二苯胺出场啦。
DNA呢，它是由脱氧核糖核苷酸组成的。
这里面有个很关键的东西叫脱氧核糖。
而二苯胺这个小家伙啊，它就像是一个专门寻找脱氧核糖的小侦探。
当我们把含有DNA的样本拿出来，想知道有没有DNA的时候，就会请二苯胺来帮忙。
二苯胺它有自己独特的化学性质哦。
在酸性的环境下，二苯胺就开始行动啦。
它会和DNA中的脱氧核糖发生一种特殊的反应。
这种反应就像是两个人见面然后紧紧拥抱在一起一样。
当它们抱在一起的时候呢，就会产生一种颜色变化。
原本二苯胺可能是无色或者接近无色的，但是一旦和脱氧核糖发生反应后，就会变成蓝色。
哇，就像魔法一样，突然就变颜色了呢！你想啊，要是一个样本里有DNA，那里面的脱氧核糖就会和二苯胺反应，然后我们就能看到蓝色出现啦。
如果没有DNA，二苯胺就找不到它的“小伙伴”脱氧核糖，那就不会有这种颜色变化喽。
这就好像是二苯胺在说：“我找到DNA啦，看我变个蓝色给你看！”要是没找到呢，就只能默默地保持原样。
而且啊，这个反应还很灵敏呢。
就像一个超级敏感的小雷达，哪怕只有一点点的DNA存在，二苯胺都有可能发现它。
这在科学研究里可太有用啦。
比如说科学家们在研究一些古老的生物化石的时候，想要知道里面有没有残留的DNA，就可以用二苯胺来检测。
又或者是在一些刑侦案件里，如果在犯罪现场发现了一些可能含有生物组织的东西，二苯胺也能来帮忙看看里面有没有DNA，这对于找到犯罪嫌疑人可太关键了呢。
从微观的角度来看，二苯胺和脱氧核糖的反应其实是它们分子之间的一种相互作用。
就像是小齿轮之间的咬合，严丝合缝的。
这种分子间的相互作用是化学的奇妙之处，也是大自然的奥秘所在。
我们人类发现了这个奥秘，然后利用二苯胺来检测DNA，就像是破解了大自然的一个小密码一样。
dna与二苯胺反应原理
dna与二苯胺反应原理今天咱们来聊聊 DNA 和二苯胺之间那神奇的反应。
DNA 这玩意儿，就像是生命的密码本，藏着好多好多的秘密。
而二苯胺呢，就像是个神奇的小侦探，能帮我们发现 DNA 的存在。
先来说说 DNA 吧。
它就像是一条长长的、弯弯扭扭的链条，由好多好多小小的“零件”组成。
这些“零件”叫核苷酸，它们手拉手排好队，就形成了 DNA 这个大分子。
那二苯胺又是啥呢？它呀，是一种化学试剂，看起来普普通通的，可一旦和 DNA 碰上，那可就热闹啦！当二苯胺遇到 DNA ，就像是一场奇妙的舞蹈开始了。
二苯胺的分子会钻进 DNA 的结构里，然后发生一系列的变化。
这变化是怎么发生的呢？其实啊，DNA 里面有一种叫嘌呤碱基的东西，像是腺嘌呤和鸟嘌呤。
二苯胺就和这些嘌呤碱基特别“投缘”。
当二苯胺和嘌呤碱基亲密接触的时候，它们之间会发生一些化学反应。
就好像是两个人一握手，就传递了某种神秘的力量。
这种反应会让溶液的颜色发生改变。
原本没啥特别颜色的溶液，慢慢地会变成蓝色。
你想想，这多神奇啊！就靠着这么一个颜色的变化，我们就能知道有没有 DNA 存在。
这反应就像是一个暗号，告诉我们：“DNA 在这儿呢！”而且哦，这个反应的灵敏度还挺高的。
哪怕只有一点点的 DNA ，二苯胺都能察觉到，然后给我们发出信号。
所以啊，在实验室里，科学家们经常用这个反应来检测 DNA 。
比如说，从细胞里提取出的那些小小的 DNA 片段，用二苯胺一试，就能知道有没有成功提取出来。
这是不是特别有趣？DNA 和二苯胺的反应，就像是一场小小的魔法秀，让我们能窥探到生命的奥秘。
总之呢，DNA 和二苯胺的反应，虽然看起来有点复杂，但其实充满了趣味和神奇。
它让我们对生命的微观世界有了更多的了解，也为科学研究打开了一扇神奇的大门。
怎么样，朋友，现在你是不是对 DNA 和二苯胺的反应有了更清楚的认识啦？。
二苯胺与dna显色反应原理
二苯胺与dna显色反应原理今天咱们来聊聊一个超有趣的话题——二苯胺与 DNA 的显色反应。
这可真是个神奇的现象，就像是一场微观世界里的魔法秀！DNA 可是生命的密码本，藏着无数的秘密。
而二苯胺呢，就像是一把能解开这个密码本神秘面纱的小钥匙。
当二苯胺遇到 DNA 的时候，会发生一系列奇妙的变化，然后就出现了漂亮的颜色。
这颜色可不是随便来的，背后有着一套科学的原理呢！先来说说二苯胺这小家伙。
它本身是一种白白的粉末，看起来普普通通的，没啥特别。
但是，当它和 DNA 相遇，就像是遇到了命中注定的伙伴，一下子就变得不一样啦。
DNA 里面有一种叫做脱氧核糖的东西，这可是关键角色。
二苯胺在酸性条件下，会和脱氧核糖发生反应。
这个反应就像是一场热闹的派对，各种分子相互碰撞、结合。
在这个过程中，二苯胺的分子结构会发生改变，从而导致吸收光的特性也变了。
这就好比它换了一身新衣服，从原本的低调朴素变得鲜艳夺目。
你可能会好奇，到底变成了啥颜色？答案是蓝色！对，就是那种深邃又迷人的蓝色。
想象一下，在实验室的小瓶子里，原本透明的溶液，因为二苯胺和 DNA 的相遇，慢慢地变成了蓝色，是不是感觉特别神奇？这种显色反应，可不仅仅是好看那么简单。
它对于我们了解 DNA 有着重要的意义。
比如说，在科学研究中，我们可以通过这个反应来检测 DNA 的存在和含量。
就好像是一个侦探，通过这个蓝色的线索，来追踪 DNA 的踪迹。
如果蓝色深，那就说明 DNA 多；蓝色浅，DNA 就少。
这可太有用啦，能帮助科学家们解开好多关于生命的谜题。
而且哦，这个显色反应还能让我们更直观地感受到 DNA 的神奇。
平时 DNA 看不见摸不着的，通过这个反应，一下子就变得清晰可见了。
有时候我就在想，这小小的二苯胺和 DNA 之间的互动，就像是宇宙中两颗星星的相遇，绽放出绚烂的光芒。
怎么样，是不是觉得这个二苯胺与 DNA 的显色反应特别有趣？科学的世界就是这么充满惊喜，总是有各种各样神奇的事情等着我们去发现。
实验八DNA的定量测定
姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍学号：12050011012实验八DNA的定量测定-二苯胺法一、实验目的学习和掌握二苯胺测定DNA含量的原理和方法。
二、实验原理DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。
在一定波长范围，DNA浓度为20~200μg/ml范围内，化合物蓝色的深浅与DNA的含量成比例关系，即吸光度与DNA浓度呈正比，可用比色法测定。
三、实验仪器1、试管2、移液管3、7220分光光度计4、恒温水浴锅5、锥形瓶6、电炉四、实验试剂1、DNA标准液（200μg /ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。
2、二苯胺试剂：A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。
贮于棕色瓶中。
B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可。
3、DNA样液：将DNA粗品用蒸馏水溶解，控制其DNA含量在100μg/ml左右。
五、实验步骤1、标准曲线的绘制取干燥的试管6支，编号，按下表加入试剂：加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。
2、样品测定吸取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0 ml，加入二苯胺溶液4.0ml, 加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量(μg)。
分光光度计的使用方法：1、连接仪器电源线，确定仪器供电电源有良好的接地性能。
2、接通电源，使仪器预热20分钟。
用<MODE>键设置测试方式：投射比（T），吸光度（A），已知标准样品浓度值方式（C）和已知标准样品斜率（F）方式。
3、用波长选择旋钮设置所需的分析波长（500nm）。
二苯胺鉴定dna
二苯胺鉴定dna实验原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
-DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解，产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊酸，后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物，其反应如下图。
蓝色化合物在595nm处有最大吸收，且DNA在40µg ~400µg范围内时，吸光度与DNA浓度成正比。
在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。
-甲基绿能把DNA染成绿色，为什么在DNA粗提取与鉴定试验中则用二苯胺鉴定?带着这个问题我上网查资料，经过我反复的思考，哈哈.....终于想明白了。
我们在观察DNA、RNA的分布实验中用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂染色，由于甲基绿和吡罗红与DNA、RNA的亲和力不一样，呈绿色的是DNA，呈红色的是RNA，我们很容易用显微镜观察到DNA、RNA主要分布在那里?里面强调的是用甲基绿和吡罗红混合染色剂，所以隐含的意思是不能单独使用一种染色剂，要是单独用甲基绿染色就会把RNA染成绿色。
DNA粗提取与鉴定这个实验，DNA鉴定则换成用二苯胺，在这个DNA粗提取过程中，用改变氯化钠浓度办法将蛋白质与DNA分开，用冷酒精处理进一步将DNA 与RNA、蛋白质分开。
一系列的操作就是要获得纯度较高的DNA，最后获得的纯度较高的DNA不能排除有RNA，所以此时用甲基绿鉴定DNA、RNA都被染成绿色，所以不能说绿色一定是DNA拍卖公司而改用二苯胺就不一样了，DNA和二苯胺反应的产物成蓝色，RNA则没有这种颜色反应。
DNA的定量测定-二苯胺法
DNA的定量测定-二苯胺法一、目的学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。
二、原理DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成-羟基-a-酮基戊糖，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物，在一定波长范围内，化合物蓝色的深浅与DNA的含量成比例关系，可用比色法测定。
三、实验仪器(1)试管(2)移液管(3)7220分光光度计四、实验试剂1、DNA标准液（200ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。
2、二苯胺试剂：A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。
贮于棕色瓶中。
B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可五、实验步骤1.标准曲线的绘制取干燥的试管6支，编号，按下表加入试剂：加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。
2.样品测定吸取DNA样液1ml，加入二苯胺溶液2.0ml, 加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。
六、实验结果1 2 3 4 5 样液吸光度0.008 0.023 0.07 0.096 0.111 0.095曲线绘制如下：DNA标准液浓度200ug/ml所以据图得到样液中DNA155.379微克。
七、实验分析1、此方法测定DNA 含量灵敏度不高,若是DNA含量低于50ug/ml, 则难以测定。
2、样品中少量的RNA并不影响测定, 但是蛋白质, 多糖及其衍生物, 芳香醛, 羟基醛等能与二苯胺反应成有机物,干扰DNA的定量。
3、实验中加入乙醛的作用是什么，请详细说明？可以提高二苯胺法中DNA的发色量.减少脱氧木糖和阿拉伯糖的干扰，提高灵敏度.。
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二苯胺试剂鉴定D N A Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
二苯胺试剂:鉴定DNA。
二苯胺试剂的配制
A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为%的溶液。
配制:将 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA的粗提取与鉴定
实验原理
1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为 mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。
注意事项
1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具
鸡血细胞液（5～10 mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为 g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L和0．015 mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个， 50 mL， 500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100 mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：
1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：
1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min
2．溶解DNA：
3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢
4．过滤：取黏稠物
5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。
3 min
6．过滤：取滤液。
7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。
5 min
8．DNA的鉴定：沸水浴5min
【实验十二】DNA的粗提取与鉴定
实验原理
DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。
当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
DNA中含有脱氧核糖，能与二苯胺（沸水浴）反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
目的要求
1. 学会DNA的粗提取和鉴定的方法。
2. 观察提取出来的DNA物质的颜色和形状。
材料用具
材料：活鸡或鲜血鸡血。
仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL，l个），烧杯（100 mL，l个，50 mL、500 mL各 2个），试管（20 mL，2个），漏斗，试管夹，纱布。
试剂：酒精的体积分数为95％的溶液（实验前置于冰箱内冷却24 h），蒸馏水，柠檬酸钠的质量浓度为 0．1g／mL的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为 2 mol／L和0．015 mol/L的溶液，二苯胺试剂。
方法步骤
实验前需要制备鸡血细胞液（由教师完成），制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为 0．1 g／mL的溶液（抗凝剂）100 mL，置于500 mL 烧杯中。
将宰杀活鸡流出的鸡血（约180 mL）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。
然后，将血液倒入离心管内，用 1000 r／min的离心机离。
2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。
实验时，用吸管除去离。
心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。
1．提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。
然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。
取其滤液。
2．溶解细胞核内的DNA
将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40mL加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。
3．析出含DNA的粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。
继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。
当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于 mol／L）。
4．滤取含DNA的粘稠物
用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布上。
5．将DNA的粘稠物再溶解
取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol ／L的溶液 20mL。
用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。
6．过滤含有DNA的氯化钠溶液
取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。
取其滤液，DNA溶于滤液中。
7．提取含杂质较少的DNA
在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95％的溶液50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。
用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。
这种丝状物的主要成分就是DNA 。
注意观察丝状物是什么颜色的。
8．DNA的鉴定
取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol ／L的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。
然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。
将观察的结果填写在《实验报告册》上。
结论
步骤8的2支试管中溶液颜色的变化说明了什么将得出的结论填写在《实验报告册》上。
讨论
1．提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液
2．步骤回和步骤3中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗为什么
3．DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小。