实验4 杀虫剂毒力测定

主要内容
触杀毒力测定； 胃毒毒力测定； 熏蒸毒力测定； 内吸毒力测定。
触杀毒力测定
杀虫剂的触杀作用是使药剂经昆虫表皮、感觉器及爪垫进入体 内而产生的毒杀作用。杀虫剂触杀作用测定时应尽量避免药剂 经口、气门等途径进入体内。
由于目前使用的杀虫剂大多数具有较强的触杀作用，因此杀虫 剂的触杀毒力测定应用非常普遍。
点滴法实验步骤
预备试验：将配好的原药丙酮液，用毛细管微量点滴器点滴0.04 微升药液于3龄棉铃虫幼虫胸部背面，每组处理2-3个浓度（参照 已知同类杀虫剂，用丙酮配制低浓度和高浓度的药液，找出活 虫组剂量和死虫组剂量）。
每浓度处理10头幼虫，经24～28小时（昆虫生长调节剂类药剂如 虫酰肼所需时间还应长些）观察记载幼虫死、活情况。同时取 50头昆虫点滴丙酮液作空白对照试验。
浸液法最为简单，但易产生胃毒毒力，对水生昆虫如孑孓以及水 蚤等较为适宜。
1. 点滴法（Topical application）
点滴法是在每头虫体的一定部位，点滴一 定浓度及一定量的药液，用毛细管微量点 滴器进行，适用于体型较小的昆虫如鳞翅 目幼虫、蚜虫等。
手动微量点滴仪/全自动微量点滴仪
毛细管微量点滴器 构造示意图
杀虫剂毒力测定主要内容：一是初步毒力测定，二是精密毒力测 定;
初步毒力测定一般只判断药剂是否具有杀虫活性，不能确定化合 物的毒力大小，也不能区分毒杀作用方式。
精密毒力测定是指在特定条件下衡量某种杀虫剂对某种昆虫毒力 程度的一种作用方式。
测定方法的选择
不同的杀虫剂对不同种类的害虫毒力程度各异，致毒 作用方式也不相同，所以测定方法也各不相同； 杀虫剂的作用方式主要有：触杀、胃毒、内吸、熏蒸 、驱避、引诱、拒食生长发育调节等； 一般说来，一种试验方法往往只局限杀虫作用方式的 一个方面，因此在测定的方法的选择上也应根据杀 虫剂的作用方式进行设计。
立即将喷过药的棉铃虫放在干净培养皿中，喂以人工饲料饲养，于 2、24、48小时后记录棉铃虫死亡情况。
胃毒毒力测定
胃毒毒力测定指通过试虫吞食带药食料，引起消化道中毒致死的 反应，以测定胃毒毒力杀虫剂生物测定方法。
杀虫剂对昆虫的胃毒毒力测定方法因靶标昆虫的种类和杀虫剂的 剂型不同而有所不同。
根据目标昆虫取食量及习性的差异可分为：无限取食法和定量取 食法。
每浓度点10头，重复3次， 共30头，以丙酮为对照， 处理幼虫 饲养条件：温度27±1℃， 光照周期16∶8 (L∶D) h。
数据计量与分析
处理后幼虫单独饲养，分别记录处理剂量，根据 处理剂量和毛细管点滴器的体积计算出每头幼 虫的受药量(微克/头)。（字幕 配音、放置培养 箱视频）
整理试验结果，算出该药剂对供试昆虫的致死中 量（LD50）。
触杀毒力的大小通常以LD50 、 LC50或KT50表示。 测定方法可分为整体处理法和局部处理法，常用的有点滴法，
浸液法、药膜法、喷雾法、喷粉法及铜丝圈法等。
点滴法：因其施药量比较准确，易于操作而运用最为普遍。但点 滴法一般要求供试昆虫数量较多，另外点滴部位及每头虫体点滴 药液的体积和点滴散布面积要求相同，否则有明显影响；
（二）喷雾法和喷粉法
用Potter喷雾塔直接对昆虫喷洒也是常用的触杀毒力测定方法。
药液管
1 通气管 2 药液管
载物台
Potter喷雾塔构造
Potter喷雾塔是一个文氏管（Venturi tube）形的筒，即两端 大中间细，雾点是直接往下喷的 。喷筒采用文氏管形是为了沉 降雾点的压力一致，使喷洒物表面沉积的药液量更为均匀，喷筒 下面有一个平台，可放被喷洒物，此平台可上下调节，使喷筒下 沿与平台间保持适当的距离（距离过大，液滴大部分四散；距离 过小，造成返回气流）。整个装置放在一个大玻璃橱内，以保持 温度和喷雾出口处的雾点不受外部气流的影响。喷雾采用有雾化 器的喷头（靠气流雾化），在一定压力下，喷出的雾点可相当均 匀稳定。
无限取食法：饲料混药喂虫法、培养基混药法、土壤混药法 定量取食法：叶片夹毒法、 液点食喂法、口腔注射法
毒饲料喂虫法
将称好的药粉同谷物等饲料混合均匀，或将药剂溶于有机溶剂中 （如丙酮），再将一定量的药液同食物混匀，待溶剂挥发后供 试。
Potter喷雾塔喷雾步骤
取培养皿18套，每套放3龄期大小相同的棉铃虫幼虫10头。 将配制好一定浓度的药液用吸管准确吸取2mL放入小瓶内。 将盛棉铃虫的培养皿放在喷雾台玻璃罩中心。
开动马达让药液在规定时间内（约30秒钟）将小瓶内药液全部喷出 （试验前予先调节好压缩泵之压力达到1 kg/cm2，并使每次喷药时 压力保持一致）。
实验四
杀虫剂毒力测定
吴顺凡
农药科学系 杀虫剂毒理与害虫抗药性监测课题组
邮箱：wusf@njau.edu.cn；办公室：理科楼B828
2014-4-18
基本概念
杀虫剂的生物测定：是度量杀虫剂对昆虫及螨类产生效应大小的 农药生物测定方法。广义的说，就是利用生物（昆虫、螨）对 杀虫剂的反应来鉴别某一种农药或化合物的生物活性的一种基 本方法;
毛细管微量点滴器
橡皮头
支撑和固定部分 毛细管
毛细管微量点滴器由毛细管 和1mL移液枪枪头两个部分 构成
毛细管为细钢管，内径约80 微米，长0.5厘米。
1mL移液枪枪头将毛细管固定。 在枪头的另一端配上顶端有 小孔的橡皮头，作为压出或 吹出药液之用，毛细管容积 可用同位素稀释法或快速薄 层扫描仪（CS-920）来测定， 点滴的药量一般在百分之几 微升。
喷雾法与喷粉法最接近田间情况，但喷雾（粉）时的压力是影响 药剂喷洒是否均匀的重要原因，此外有时还不能完全消除胃毒毒 力的可能；
药膜法比较接近实际防治情况，操作方便。多用来比较触杀速率， 常用来测定药剂的击倒作用。以击倒中时（KT50）即击倒50%供 试昆虫所需时间（分钟）来表示或测定杀虫剂对虫体很小（如蓟 马、赤眼蜂等）的昆虫的毒力；
根பைடு நூலகம்预备试验的结果，配制系列梯度浓度（等比系列）的药液， 包括从最低浓度（活虫组的剂量）开始，到最高浓度（死亡组 的剂量）止。
点
将标准测试幼虫挑入具 半人工饲料的培养皿
滴 （直径为5cm）中，每
法 皿5或6头
操
作 药剂用丙酮配制成等比
系列浓度
用0.04µl毛细管点滴器
将药液滴于幼虫胸部 背面
点滴法操作