药学专业药物分析第十三章生化药物和基因工程药物分析概念优秀课件
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
药学专业药物分析第十三章生 化药物和基因工程药物分析概
念
基本要求
1．掌握本类药物质量检验的基本程序与 方法类型。
2．掌握HPLC法和酶活力测定法在本类 药物测定中的应用。
3．熟悉本类药物的范围、种类、质量控 制的要点。
4．了解本类药物含量测定的其他方法。
返回
第一节 概 述
一、防病、治 病的三大药源
2. 生产过程中杂质的检查
（三）安全性试验
热源试验 异常毒性试验 :急性毒性物质 过敏试验：异性蛋白 降压物质试验：导致血压降低的杂质、组
胺、类组胺
无菌试验：活菌 基因工程药物中可能杂质与污染物检查
来源于宿主细胞的残留DNA，外源性杂质 致突变试验 生殖毒性试验
（wenku.baidu.com）含量测定
生化药物和基因药物的含量表示方法： 百分含量：适用于结构明确的小分子药
电泳法
生物检定法
返回
第三节 常用定量分析方法及其应用
1．电化学分析法
药物膜电极
生物组织膜电极
药物电极 微生物电极
离子选择性电极法
免疫电极
免疫场效应管
酶电极
2. HPLC法
1）RP-HPLC：柱前衍生化自动测定氨基酸 柱：RP—18， 柱温：48℃ 流动相：A--0.05% TFA；B--乙腈-异丙醇（4：1） 梯度洗脱 荧光检测器：ex=280nm～340nm,em=430nm
（二）杂质检查
一般杂质检查 特殊杂质检查：原料药纯度分析
生产过程中杂质的检查
1. 原料药纯度分析：
多糖类-----低聚糖、核酸、蛋白质 酶类药物-----酶催化反应基本产物的分析，
具有一定活性的其他有关酶的检查。
例：胰蛋白酶中糜蛋白酶的检查 选用N-乙酰-L-酪氨酸乙酯作底物进行糜蛋白
酶的限度检查。糜蛋白酶的限度为2500个胰蛋 白酶单位中不得大于50单位，按每1mg胰蛋白 酶为2500个单位和每1mg糜蛋白酶为1000单 位，折算成重量，则糜蛋白酶的限度为5% （g/g）。 1:1000=x:50 x=0.05（mg） L=0.05/1=5%
1.化学鉴别法： 药 物 + 试 剂
颜 色 现 象
沉 淀
例：溶菌酶 - CONH- +Cu2+ 络合显 色
2.紫外分光光度法
溶剂：0.01mol/L盐酸 例：三磷酸腺苷二钠 浓度：20μg/ml
判断： λmax：257±1nm A250/A260：0.17～0.27。
3. HPLC法：
利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留
重组
内切酶 载
的遗
合成的核 连接酶 体
传物
转
苷酸序列
质
移
目的 分离纯化 宿主
到
产物
细胞
增殖、表达
二、种类
氨基酸、多肽与蛋白质类
酶类与辅酶类
1．生化药物 多糖类
脂质类 核酸及其降解物和衍生物 类药物
2．基因工程药物的种类 1）激素类及神经递质类药物： 人生长激素释放抑制因子、人胰岛素、
人生长激素 2）细胞因子类药物： 人干扰素人白细胞介素、集落刺激因
物或经水解后变成小分子的 药物。 生物效价或酶活力单位：适用于酶类、
蛋白质类药物。
含量测定方法：
理化分析法：
化学分析法：重量测定法、滴定分析法
电化学分析法
光谱分析法：比色法、紫外分光、荧光分光光法
色谱分析法：HPLC法：RP-HPLC、 HPIEC 、
HPGFC、
灌注色谱法、HPCE法
酶法：酶活力测定法、酶分析法
返回
第二节 质量检验的基本程序与方法
生化药物和基因药物质量控制的项目：
来源与种类
纯度
性状
干燥失重或水分
鉴别
炽灼残渣
氨酸组分分析 生物活性
肽图
热源试验
糖含量
含量分析
一、鉴别
理化鉴别法：化学鉴别法 紫外分光光度法 HPLC法
生化鉴别法：酶法 电泳法 等电聚焦法
生物鉴别法：家兔惊厥试验
（一）理化鉴别法
测定：
样品---肽
样品水解：5.7mol/L盐酸，0.1%苯酚、通
N2，
110℃，20h ～24h。
样品干燥：真空
样品的衍生化：丹酰氯
水解剩余的衍生化试剂：0.4mol/L NaOH
进样测定
N(C3H )2
SO2Cl
+ R-N2H
N(C3H )2 SO2NHR
2）HPIEC
测定对象：蛋白质，多肽 柱：离子交换键合相 流动相：0.3mol/L～1.0mol/L的盐的缓冲液。 梯度洗脱：盐的浓度增大。尽量避免使用卤
生 物 -化 学 半 合 成 现 代 生 物 技 术
衍 生 物 降 解 物 大 分 子 的 结 构 修 饰 物
例：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。
2. 基因工程药物：
以DNA重组技术生产的蛋白质、多肽、 酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长 因子类药物。
DNA重组技术（基因工程）：生产过程为
天然基因
5. 电泳法：以肝素鉴别为例。
O CO-O
CH 2OS3O O
O O OH
O
OS3O -
HNS3- O
与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。
6. 生物法：
利用生物体进行试验来鉴别药物。 例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。
利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂 量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注 50%GS，惊厥停止。
时间和肽图谱的一致性进行鉴别。
4.酶法：
例：尿激酶的鉴别---气泡上升法
原理：
尿激酶
牛纤维蛋白溶酶原
牛凝血酶
牛纤维蛋白原
蛋白结块 结块溶解：气泡上升
方法：
取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维 蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、 牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃ 恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内 凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块 溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以 0.9%氯化钠作空白，同法 操作，凝结块在2小 时内不溶。
药物
化学药物 生物药物
生化药物 生物技术药物
biopharmaceutics or biopharmaceuticals
生物制品 中药
biochemical drugs
biotechnology drugs
biological products
1．生化药物：
动 物
提 取
生 命 基 本 物 质 及
植 物 微 生 物
子、促红细胞生成素 3）酶类及凝血因子类药物
三、特点
1. 生物体的基本生化成分 2. 分子量大: 分子量测定 3. 结构难确证 4. 全过程的质量控制：原料、生产过程、
最终产品 5. 生物活性检查
6. 安全性检查 7. 效价（含量）测定：
理化法：有效成分的含量 效价测定和酶活力测定：有效成分
的生物活性
念
基本要求
1．掌握本类药物质量检验的基本程序与 方法类型。
2．掌握HPLC法和酶活力测定法在本类 药物测定中的应用。
3．熟悉本类药物的范围、种类、质量控 制的要点。
4．了解本类药物含量测定的其他方法。
返回
第一节 概 述
一、防病、治 病的三大药源
2. 生产过程中杂质的检查
（三）安全性试验
热源试验 异常毒性试验 :急性毒性物质 过敏试验：异性蛋白 降压物质试验：导致血压降低的杂质、组
胺、类组胺
无菌试验：活菌 基因工程药物中可能杂质与污染物检查
来源于宿主细胞的残留DNA，外源性杂质 致突变试验 生殖毒性试验
（wenku.baidu.com）含量测定
生化药物和基因药物的含量表示方法： 百分含量：适用于结构明确的小分子药
电泳法
生物检定法
返回
第三节 常用定量分析方法及其应用
1．电化学分析法
药物膜电极
生物组织膜电极
药物电极 微生物电极
离子选择性电极法
免疫电极
免疫场效应管
酶电极
2. HPLC法
1）RP-HPLC：柱前衍生化自动测定氨基酸 柱：RP—18， 柱温：48℃ 流动相：A--0.05% TFA；B--乙腈-异丙醇（4：1） 梯度洗脱 荧光检测器：ex=280nm～340nm,em=430nm
（二）杂质检查
一般杂质检查 特殊杂质检查：原料药纯度分析
生产过程中杂质的检查
1. 原料药纯度分析：
多糖类-----低聚糖、核酸、蛋白质 酶类药物-----酶催化反应基本产物的分析，
具有一定活性的其他有关酶的检查。
例：胰蛋白酶中糜蛋白酶的检查 选用N-乙酰-L-酪氨酸乙酯作底物进行糜蛋白
酶的限度检查。糜蛋白酶的限度为2500个胰蛋 白酶单位中不得大于50单位，按每1mg胰蛋白 酶为2500个单位和每1mg糜蛋白酶为1000单 位，折算成重量，则糜蛋白酶的限度为5% （g/g）。 1:1000=x:50 x=0.05（mg） L=0.05/1=5%
1.化学鉴别法： 药 物 + 试 剂
颜 色 现 象
沉 淀
例：溶菌酶 - CONH- +Cu2+ 络合显 色
2.紫外分光光度法
溶剂：0.01mol/L盐酸 例：三磷酸腺苷二钠 浓度：20μg/ml
判断： λmax：257±1nm A250/A260：0.17～0.27。
3. HPLC法：
利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留
重组
内切酶 载
的遗
合成的核 连接酶 体
传物
转
苷酸序列
质
移
目的 分离纯化 宿主
到
产物
细胞
增殖、表达
二、种类
氨基酸、多肽与蛋白质类
酶类与辅酶类
1．生化药物 多糖类
脂质类 核酸及其降解物和衍生物 类药物
2．基因工程药物的种类 1）激素类及神经递质类药物： 人生长激素释放抑制因子、人胰岛素、
人生长激素 2）细胞因子类药物： 人干扰素人白细胞介素、集落刺激因
物或经水解后变成小分子的 药物。 生物效价或酶活力单位：适用于酶类、
蛋白质类药物。
含量测定方法：
理化分析法：
化学分析法：重量测定法、滴定分析法
电化学分析法
光谱分析法：比色法、紫外分光、荧光分光光法
色谱分析法：HPLC法：RP-HPLC、 HPIEC 、
HPGFC、
灌注色谱法、HPCE法
酶法：酶活力测定法、酶分析法
返回
第二节 质量检验的基本程序与方法
生化药物和基因药物质量控制的项目：
来源与种类
纯度
性状
干燥失重或水分
鉴别
炽灼残渣
氨酸组分分析 生物活性
肽图
热源试验
糖含量
含量分析
一、鉴别
理化鉴别法：化学鉴别法 紫外分光光度法 HPLC法
生化鉴别法：酶法 电泳法 等电聚焦法
生物鉴别法：家兔惊厥试验
（一）理化鉴别法
测定：
样品---肽
样品水解：5.7mol/L盐酸，0.1%苯酚、通
N2，
110℃，20h ～24h。
样品干燥：真空
样品的衍生化：丹酰氯
水解剩余的衍生化试剂：0.4mol/L NaOH
进样测定
N(C3H )2
SO2Cl
+ R-N2H
N(C3H )2 SO2NHR
2）HPIEC
测定对象：蛋白质，多肽 柱：离子交换键合相 流动相：0.3mol/L～1.0mol/L的盐的缓冲液。 梯度洗脱：盐的浓度增大。尽量避免使用卤
生 物 -化 学 半 合 成 现 代 生 物 技 术
衍 生 物 降 解 物 大 分 子 的 结 构 修 饰 物
例：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。
2. 基因工程药物：
以DNA重组技术生产的蛋白质、多肽、 酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长 因子类药物。
DNA重组技术（基因工程）：生产过程为
天然基因
5. 电泳法：以肝素鉴别为例。
O CO-O
CH 2OS3O O
O O OH
O
OS3O -
HNS3- O
与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。
6. 生物法：
利用生物体进行试验来鉴别药物。 例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。
利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂 量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注 50%GS，惊厥停止。
时间和肽图谱的一致性进行鉴别。
4.酶法：
例：尿激酶的鉴别---气泡上升法
原理：
尿激酶
牛纤维蛋白溶酶原
牛凝血酶
牛纤维蛋白原
蛋白结块 结块溶解：气泡上升
方法：
取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维 蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、 牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃ 恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内 凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块 溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以 0.9%氯化钠作空白，同法 操作，凝结块在2小 时内不溶。
药物
化学药物 生物药物
生化药物 生物技术药物
biopharmaceutics or biopharmaceuticals
生物制品 中药
biochemical drugs
biotechnology drugs
biological products
1．生化药物：
动 物
提 取
生 命 基 本 物 质 及
植 物 微 生 物
子、促红细胞生成素 3）酶类及凝血因子类药物
三、特点
1. 生物体的基本生化成分 2. 分子量大: 分子量测定 3. 结构难确证 4. 全过程的质量控制：原料、生产过程、
最终产品 5. 生物活性检查
6. 安全性检查 7. 效价（含量）测定：
理化法：有效成分的含量 效价测定和酶活力测定：有效成分
的生物活性