关于细胞污染的一些总结和心得
浅谈细胞培养中微生物污染与防控措施
生长 可证 明该 细胞受 到 了细菌 的污 染 。 １２ 支原 体 污 染 ． 支 原 体 污 染 不 能 用 肉眼 或 光 学显 微镜 检查 细胞观 察 出来 ， 带有 一 定的 隐蔽 性 ， 易被 人们忽 视 。 当细胞 被支 原体 污染 后 ， 细胞营 养 液可 能毫无 变 化 ，短 期 内细胞 没 有 明显 的病理 变
性 作用 ，因此 特 别要注 意不 同的细胞 培养 的特 点
培养 基上培 养 ， 如果见 到培养 基上 有霉 菌 生长 ， 也 可 以判 断该 细胞 受到霉 菌污 染 。霉 菌 污染 可 以使
细胞变 形 、 脱落 。霉菌孢 子对 环境 的耐 受 力很强 ，
和 对抗 生素 耐受程 度 的不 同。在对 具 体 的细胞选
种 营养 成分 隐性污 染细菌 没有 被检 测 出来所 造 成 的。 即使在 细胞培 养液 中加 入 了抗菌 素 ， 得细 菌 使
繁殖 处于 抑制状 态 ， 细胞 生长 不受 明显 影 响， 易 不
即淘汰 该细 胞和 培养 液 。 外 ， 此 支原 体污 染还可 用
荧光 染色法 ［ 和相 差显 微镜 观察 法 ［ 检测方 法 。 ｓ 等 １３ 霉菌 污染 ． 霉 菌污 染和 细 菌污 染 比较 相似 ， 都 可 以 由无 菌操 作环 境差 或者 器材 等 消毒 不彻底 造 成 。霉菌 污染 经 常发 生在潮 湿 的季节 或 者潮湿 的操 作环境 。可 以通 过 肉眼观 察细 胞 生长和 培养 基 培养 的方 法来检 测 霉菌 污染 。霉 菌短 期 内不会 引起 营 养液 的浑浊 ，但 是在 细胞 瓶壁 可 以见 到 明
广 东畜牧兽 医科技
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经验交流 ・９ ４・
细胞常见污染情况分析报告
细胞培养常见污染的判别及应对措施2011-01-02 10:19:04| 分类：实验| 标签：污染无菌细胞培养基灭菌|字号大中小订阅一、避免细胞培养污染的措施：污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是可以避免的：1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再用酒精擦台面，紫外照20分！2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）。
5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。
6. 操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。
7. 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。
二、常见的细胞培养污染：下面是几种细胞培养过程中常见的污染：1. 支原体污染：传说中的黑焦虫，长得暴快。
24小时就满视野都是了。
污染源大多数情况下是培养用血清。
图1 支原体污染的光镜检测（圆圈所示，×10倍）图2 支原体污染的光镜检测（×20倍）图3 支原体污染的荧光检测图4 支原体污染的电镜检测（×30k，煎蛋状和其他形状）图5 支原体污染的电镜检测2. 念珠菌污染：似乎无处不在，而且顽固得很。
长得暴快（12h就能在细胞上面密布）。
培养液澄清。
低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。
图6 念珠菌污染的光镜检测（低倍镜）图7 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图8 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图9 念珠菌污染的检测（革兰氏染色阳性）这么大面积的污染，你可以看看是不是操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。
细胞培养中的污染问题与对策
细胞培养中的污染问题与对策细胞培养是一种常见的实验室技术，用于研究细胞的生长、分化和功能。
然而，在进行细胞培养的过程中，污染是一个不可忽视的问题。
污染源可以来自外部环境、工作环境或实验操作不当。
对于细胞培养的研究结果的准确性和有效性而言，解决污染问题的对策至关重要。
首先，污染问题可能来自实验室环境以及操作者自身。
实验室环境中存在的微生物污染可能会导致细胞培养的受损。
因此，保持实验室环境的清洁是非常重要的。
定期进行实验室卫生和表面消毒是降低微生物污染的有效措施。
此外，操作者在进行细胞培养时需要严格遵守无菌操作规程，以减少自身的污染对细胞的影响。
操作者需要穿戴合适的实验室清洁工作服、手套和口罩，并在操作过程中注意避免直接接触细胞培养物。
其次，细胞培养中使用的培养基和试剂也是潜在的污染源。
为了避免污染，选择高纯度的培养基和试剂是至关重要的。
购买来自可靠供应商的培养基和试剂，严格遵循使用说明书的指导，可以减少产品本身的污染。
此外，在实验进行过程中，避免将培养基和试剂暴露在不洁的环境中，并妥善保存这些试剂，以防止其受到污染。
另外，细胞培养过程中的传代也是容易导致污染的环节。
细胞传代是保持细胞生长的关键步骤，但传代时的细胞污染可能会导致细胞功能和表型的变化。
为了避免细胞污染，应该定期对细胞进行鉴定和检测，特别是使用发展中的分子标识技术。
这些技术可以帮助确定细胞是否保持纯种，以及是否受到污染。
此外，定期保存冻存品库并且用来传代的细胞不要超过特定的传代次数，以保持细胞的良好生长状态。
另一个需要关注的污染问题是培养器具的污染。
培养器具包括培养皿、培养瓶、移液器等。
这些器具在使用之前需要经过高温高压灭菌处理，以确保其无菌状态。
在使用过程中，需要注意避免直接接触器具内外部分，以减少污染的可能性。
同时，定期更换使用的培养器具也是非常重要的，以防止积累污染物。
最后，除了以上提到的对策，培养载体选择也可以在一定程度上减少细胞培养时的污染问题。
细胞培养中常见的污染的处理
细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。
细胞培养中的微生物污染预防与处理
细胞培养中的微生物污染预防与处理细胞培养作为一种重要的实验手段，在生物医学研究领域中得到广泛应用。
然而，在细胞培养的过程中，微生物污染往往成为一个严重的问题，可能对实验结果产生不良影响甚至导致实验结果的无效化。
因此，预防和处理细胞培养中的微生物污染是细胞培养实验中不可或缺的一环。
首先，预防细胞培养中的微生物污染至关重要。
以下是一些有效的预防措施：1. 严格执行无菌操作：细胞培养实验中，无菌操作是最基本也是最重要的环节。
在进行培养操作前，实验人员应该经过相关的培训和指导，了解无菌操作的正确步骤和技巧。
例如，在实验操作前经常更换手套、使用经过有效消毒的培养器具和培养基等。
2. 经常清洁和消毒实验环境：实验室环境和设备的清洁和消毒是预防微生物污染的另一个重要方面。
实验室的工作台面、实验室衣物、培养箱、孵化器等都需要经常进行清洁和消毒，以减少微生物的存在和传播。
3. 控制空气中的微生物：空气中的微生物往往是细胞培养中的污染源之一。
为了降低空气污染带来的风险，实验室应该配备高效过滤器的实验室通风设备，定期更换过滤器。
此外，实验室应该设置限制进出实验室的措施，例如，安装空气帘或者设置冲洗区域。
4. 识别和处理污染源：在细胞培养中排查和识别潜在的污染源是很重要的。
实验人员应经常检查培养器具、培养基和试剂等是否存在污染，一旦发现污染，应及时处理。
处理污染源的方法包括更换受污染的培养器具、重新配制新的培养基或试剂等。
其次，当细胞培养中发生微生物污染时，采取适当的处理方法也是至关重要的。
1. 立即停止受污染的实验：一旦发现细胞培养被污染，实验人员应立即停止受污染的实验，并将受污染的培养器具和培养基等隔离处理，以防止污染的进一步传播。
2. 进行污染源检查：在处理微生物污染的同时，必须找出污染源，并加以处理。
通过对培养器具、培养基和试剂等进行检查，可以找到导致污染的原因，进而采取相应的措施。
3. 清洁和消毒工作环境：在处理污染源的同时，必须对实验室的工作环境进行清洁和消毒。
细胞污染原因和处理
养成良好的无菌操作的习惯拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。
就不再会发生细菌污染。
决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！我发现在提取需要组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！还有，做到绝对无菌，那不可能！但我们可以做到最大限度的减少含菌量！使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。
1.滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
2.凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
3.初学者一般可以用培养瓶养细胞，个人认为瓶污染的机率要比皿小。
4.注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。
2. 1.注意喷酒精装置的应用：制作很简单，用过的化妆品，理发店理发前往头发上喷水的瓶子及其他一些有喷水功能的瓶子，经过处理装上百分之75的酒精就可以了（我不知道有没有实验专用喷洒酒精的瓶子，如果有那就更好了）。
我用的是师姐留下来的一种护肤品的瓶子。
常常往超净台台面，手上喷洒酒精，效果很好。
2。
我进入细胞培养室就戴上PE手套（一次性塑料薄膜手套），当在超净台操作时戴上一次性橡胶手套。
3。
培养箱内水盘里的水，用灭菌的超净水，每周更换一次（至少也要两周换一次）。
换水前要用百分之75酒精消毒。
水浴箱也要定期消毒（用百分之75酒精）换双蒸水。
4。
从培养箱内取东西前手一定要喷酒精，动作要快，可以先看好了，要取的东西在那里，然后快取。
细胞培养技术中常见污染问题的解决方法
细胞培养技术中常见污染问题的解决方法细胞培养技术在生物医学研究领域扮演着重要的角色。
然而，细胞培养过程中常常会出现一些污染问题，严重影响实验结果的可靠性和重复性。
本文将探讨细胞培养技术中常见污染问题的解决方法。
一、细菌污染在细胞培养过程中，细胞培养器皿、培养基和实验室环境中都可能存在细菌污染的问题。
为了解决这个问题，可以采取一些预防措施。
首先，必须定期清洗和消毒培养器皿，以确保其表面的无菌。
其次，使用高品质和无菌的培养基是防止细菌污染的关键。
培养基应在严格无菌条件下配制，并在每次使用前进行相关的质检。
此外，实验室环境的洁净度也需要保持，经常进行清洁和消毒，减少细菌的滋生和传播。
二、真菌污染真菌污染是细胞培养中常见的问题之一，尤其在湿度高的环境下更容易发生。
为了避免真菌污染，可以在实验室中合理控制湿度，并保持培养器皿和培养基的干燥。
此外，使用抗真菌剂可以有效地减少真菌感染的风险。
对于一些特定的细胞系，可以对细胞培养器皿进行预处理，如用乙醇或己硝酸等消毒剂进行表面处理，以提高培养器皿的抗真菌能力。
三、交叉污染细胞系的交叉污染是实验室中常见的问题。
它可能是由于不慎携带其他细胞系的污染物，或是在培养中不同细胞系之间的相互感染所致。
为了防止交叉污染，可以采取一些措施。
首先，实验人员在操作细胞系之前必须养成良好的个人卫生习惯，包括洗手、戴手套等。
其次，不同细胞系之间要严格分开培养，避免接触。
此外，可以对新获得的细胞系进行鉴定，使用PCR等方法进行验证，确保其纯度。
四、内源性污染内源性污染是指细胞系自身产生的污染物。
它可能是由细胞自身分泌的代谢产物、去胎氧核糖核酸或细胞死亡引起的。
为了解决这个问题，可以采取以下措施。
首先，要定期更换培养基和培养器皿，及时清除废液和死细胞。
其次，对细胞进行经常性的鉴定，确保其活性和稳定性。
同时，培养温度、培养时间等因素也需要加以调整，以减少内源性污染的发生。
综上所述，细胞培养技术中常见的污染问题是可以通过一系列的控制措施来解决的。
细胞培养中常见污染
最近看到不少问有关细胞培养污染的事，正好我看到了一个有关这方面的总结，很全很好很强大，跟大家分享下细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
培育技术中常见的细胞污染处理方法
培育技术中常见的细胞污染处理方法细胞污染是培育技术过程中一个常见而严重的问题。
细胞污染指的是外源性的微生物、真菌、细菌或其他细胞种类在细胞培养中的存在。
细胞污染会对实验结果产生不可预测的影响，甚至使实验失效。
因此，对于细胞污染的处理方法和预防措施的研究非常重要。
本文将介绍一些在细胞培养中常见的细胞污染处理方法。
一、消毒剂处理消毒剂处理是最常见的细胞污染处理方法之一。
消毒剂可以有效杀灭微生物和其他细胞种类，以减少污染。
常见的消毒剂有乙醇、过氧化氢和氯化物等。
在使用消毒剂处理细胞污染时，应选择适当的浓度和处理时间，并确保消毒剂不会对目标细胞产生不良影响。
二、培养基更换培养基更换是另一种常见的细胞污染处理方法。
培养基中添加抗生素可以有效抑制污染微生物的生长。
常用的抗生素包括青霉素、链霉素和庆大霉素等。
更换含有抗生素的培养基可以杀灭或抑制细菌和真菌等微生物的生长，从而有效处理细胞污染。
三、细胞分离细胞分离是一种通过分离感染的细胞来处理细胞污染的方法。
这可以通过细胞离心、细胞分选或免疫磁珠分离等技术来实现。
通过分离感染的细胞，可以有效减少细胞污染，同时保留无污染的细胞进行后续实验。
四、细胞冻存细胞冻存是另一种有效处理细胞污染的方法。
将无污染的细胞分装入液氮等低温环境中冻存，可以有效抑制细菌、真菌和其他细胞种类的生长。
在需要时，可以从冻存样品中恢复细胞，以继续实验。
然而，细胞冻存也存在一定的风险，如细胞冻存过程中可能引起的细胞损伤等问题需要注意。
五、污染原因的分析和改进污染原因的分析和改进是细胞污染处理的重要环节。
通过分析细胞污染的原因，可以采取相应的改进措施来预防细胞污染的再次发生。
污染原因的分析可以包括对实验设备、试剂和操作流程等的检查和评估。
通过对可能存在的问题进行改进，可以有效提高细胞培养的纯度和可靠性。
细胞污染是培育技术中一个常见且严重的问题。
为了有效处理细胞污染，研究并应用适当的处理方法和预防措施是非常重要的。
细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法
细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
细胞核污染
细胞核污染
细胞核污染指的是细胞核内的污染物质对细胞核的影响和伤害。
这种污染可能来自于环境中的化学物质、放射性物质、细菌或病毒等。
细胞核是细胞内的重要结构，控制着细胞的生理功能和遗传信息的传递。
因此，细胞核的污染可能导致细胞的功能异常、突变和死亡。
细胞核污染可能对个体和环境产生严重的影响。
在个体层面，细胞核污染可能导致细胞的DNA损伤和突变，进而影响细胞
的正常功能和增殖。
这可能导致各种疾病的发生，如癌症、遗传性疾病等。
在环境层面，细胞核污染可能通过污染物传递给后代细胞，影响整个生态系统的稳定性和可持续性。
为了减少和防止细胞核污染，需要采取一系列的预防和控制措施。
例如，对细胞核污染源进行监测和管控，加强环境污染治理措施，提高公众对细胞核污染的认识和重视，推广环境友好型的生产方式和生活方式等。
此外，也需要加强科学研究，深入了解细胞核污染对生物体的影响和防护机制，为制定更有效的防治策略提供科学依据。
细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法
细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法细胞培养是生物学研究中经常使用的一种重要技术手段。
然而，随着研究的深入，细胞培养中常常会遇到细胞污染的问题，这给实验结果的可靠性和准确性带来了很大的影响。
细胞污染主要包括细菌、真菌、酵母、病毒以及其他的微生物污染。
在细胞培养中，如何及时发现和处理细胞污染问题，是每个实验室都需要面对的重要课题。
细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。
造成细菌污染的原因有很多，比如培养器具不洁净、操作不规范等。
当出现细菌污染时，可以通过观察培养物的外观变化来初步判断是否受到污染，比如培养物颜色的改变、气泡的形成等。
如果存在细菌污染的症状，可以通过将培养物进行细菌培养或细菌PCR检测以确认。
一旦确认细菌污染，需要立即更换培养器具，重做培养基，并对培养箱等设备进行彻底清洁和消毒。
真菌和酵母的污染在细胞培养中也是相对较常见的问题。
真菌和酵母污染一般表现为培养物的颜色变化、膜片上出现菌丝等。
当怀疑存在真菌和酵母的污染时，可以将培养物进行不同培养基上的转接和形态学观察，也可以通过真菌和酵母的特异性培养基进行检测确认。
处理真菌和酵母污染的方法包括体外灭菌、常规抗生素处理、加入抗真菌和酵母的药物等。
另外，病毒是一种较为严重的细胞污染问题。
病毒感染可以导致细胞凋亡、细胞功能紊乱甚至细胞死亡。
常见的病毒污染有常见冷感冒病毒、乙肝病毒等。
病毒污染的判断往往需要通过病毒培养、PCR或ELISA等技术进行鉴定。
处理病毒污染可以采用病毒灭活剂或直接更换细胞系等方法。
除了微生物污染外，还存在一些其他的细胞污染问题。
比如，细胞交叉污染是指来自其他细胞系的细胞误将自己的培养物中。
为了避免细胞交叉污染，可以采用细胞系的DNA指纹鉴定技术，或者使用经过认证的培养物，同时加强无菌操作的培养。
总结起来，细胞培养中的细胞污染问题多种多样，但我们可以通过细心观察培养物的变化、培养基的转接和不同培养基的形态学观察、特异性培养基的检测以及分子生物学方法的应用等，及时发现和处理细胞污染问题，确保实验的可靠性和准确性。
关于细胞培养中的污染
关于细胞培养中的污染细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌，假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄菌等比较常见。
一旦发生细胞污染交易发现，多数情况下培养液短期内颜色变黄；表明有大量的酸性物质产生，，出现明显的混浊现象，有的静止的培养液液体初看不混浊，但稍加振荡，就有很多混浊物漂起。
细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
细胞实验报告反思总结(3篇)
第1篇一、前言细胞实验作为生物学研究的重要手段，在揭示生命现象、探索疾病机制、开发新型药物等方面发挥着至关重要的作用。
本次实验报告针对我所参与的细胞实验进行反思总结，旨在提高实验技能、优化实验设计、提升实验结果的可信度。
二、实验目的本次实验旨在：1. 掌握细胞培养的基本操作技能，包括细胞传代、细胞接种、细胞计数等。
2. 熟悉细胞实验所需的器材和试剂，了解其作用和用途。
3. 分析实验结果，探讨实验现象背后的生物学机制。
三、实验过程1. 细胞传代：在实验过程中，我们严格按照细胞传代操作规程进行，确保细胞在适宜的培养条件下生长。
通过观察细胞生长状态、调整传代比例，保证了细胞的活力和数量。
2. 细胞接种：在细胞接种过程中，我们遵循无菌操作原则，确保细胞在无菌条件下生长。
同时，根据实验需求调整接种密度，为后续实验提供充足细胞资源。
3. 细胞计数：在细胞计数实验中，我们熟练运用血球计数板进行细胞计数，并对计数结果进行统计分析。
通过对比不同处理组的细胞数量，分析实验现象背后的生物学机制。
4. 实验数据分析：在实验数据分析过程中，我们运用统计学方法对实验数据进行分析，探讨实验现象背后的生物学机制。
同时，对实验结果进行合理的解释和推断。
四、实验反思1. 实验操作方面：（1）在细胞传代过程中，我们应严格按照操作规程进行，避免细胞污染和传代失败。
（2）在细胞接种过程中，应注意无菌操作，防止细胞污染。
（3）在细胞计数过程中，应保证计数准确，避免人为误差。
2. 实验设计方面：（1）在实验设计过程中，应充分考虑实验目的和实验条件，确保实验结果具有可重复性和可靠性。
（2）在实验过程中，应密切关注实验现象，及时调整实验参数，优化实验设计。
（3）在实验结果分析过程中，应运用多种统计学方法，提高实验结果的可信度。
3. 实验结果分析方面：（1）在实验结果分析过程中，应充分挖掘实验数据，探讨实验现象背后的生物学机制。
（2）在实验结果解释过程中，应结合相关文献，对实验结果进行合理的解释和推断。
细胞培养的污染问题十分重要
细胞培养的污染问题十分重要，一旦发生污染，将导致前功尽弃。
所以细胞培养一定要建立无菌观念。
遇到培养污染要分析原因，及时处理。
凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性细胞污染的分类物理污染化学污染生物污染（支原体污染）控制污染掌握良好的无菌操作技术建立细胞库合理应用抗生素保持工作区清洁建立良好的规章制度检测细胞污染一、污染途径空气：每立方米含菌数不应超过1－5个器材：操作：血清：组织样本：二、对细胞的影响生长缓慢，分裂相减少，细胞变粗糙，轮廓增强，胞浆多颗粒状物。
重者细胞增殖停止，分裂相消失，胞质中出现大量堆积物，细胞变圆或崩解，从瓶壁脱落。
细胞污染的种类和判定细胞培养中常见的污染物有细菌、酵母菌、真菌、支原体和病毒等。
在出现以下情况时培养的细胞可能有污染：培养液的酸碱度发生异常的改变。
培养液出现混浊。
光镜观察到菌丝和颗粒。
细胞出现死亡或增殖缓慢等。
三、污染物的检测1. 真菌污染常见真菌种类：多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等真菌污染判断：肉眼可见培养液中见白色或黄色漂浮物，倒置镜下见细胞间纵横交错，丝状、管状、树枝悬浮飘荡的菌丝或形态呈卵形，散在细胞周边和细胞之间生长，培养液多不混浊。
白色念珠菌111111*********.gif(79.75 KB, 下载次数: 46)2222222.gif(188.09 KB, 下载次数: 25)2.细菌污染常见细菌种类：大肠杆菌、白色葡萄球菌、假单孢菌等细菌污染判断：培养液颜色变黄，出现混浊镜下观察，大量圆球状颗立漂浮，细胞表面和周围有大量细菌细胞生长停止，并有中毒表现细菌和真菌污染的检测：涂片染色镜检；接种培养：Trypticase大豆肉汤、BHI、Thioglycocollate肉汤和血琼脂板适于广泛的细菌检测；Sabouraud肉汤、YM肉汤和营养肉汤适于检测真菌。
整理总结：细胞培养中的第一大害——污染.doc
整理总结：细胞培养中的第一大害——————————污染污染是细胞培养第一大害！预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
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细胞污染的类型一、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染。
一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。
即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。
最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变而呈现黄色。
也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。
所以，每天应仔细观察。
污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
一般细菌污染进程很快，大约污染一两天后肉眼就能显著观察到。
二、真菌污染真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。
最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。
念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间（发生卵圆形物体污染的几率很大）。
个体细小，有增多趋势。
镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
三、支原体污染支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。
开始不易发现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素有抗药性。
细胞污染原因和处理
细胞污染原因和处理养成良好的无菌操作的习惯拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。
就不再会发生细菌污染。
决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！我辨认出在抽取须要非政府时，往往头会距离非政府很将近，所以拎口罩很关键！还要换无菌衣（紫外Ramanathapuram的白大褂）另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！除了，努力做到绝对无菌，那不可能将！但我们可以努力做到最大限度的增加含菌量！采用回去的东西尽快抽走无菌台！另外无菌台上的器械，试剂放置，也尽量遵从一定的顺序！依污染可能将程度依次向外挂。
1.滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
2.凡是碰触瓶口后都必须用酒精灯烧烧。
3.初学者一般可以用培养瓶养细胞，个人认为瓶污染的机率要比皿小。
4.特别注意酿制全然培养基时不要出现污染，在采用前一定必须搞无菌培育，因为通常应用领域污染后的培养基培育细胞后，很快就可以出现特别轻微的污染。
2.1.注意喷酒精装置的应用：制作很简单，用过的化妆品，理发店理发前往头发上喷水的瓶子及其他一些有喷水功能的瓶子，经过处理装上百分之75的酒精就可以了（我不知道有没有实验专用喷洒酒精的瓶子，如果有那就更好了）。
我用的是师姐留下来的一种护肤品的瓶子。
常常往超净台台面，手上喷洒酒精，效果很好。
2。
我步入细胞培养室就穿上pe手套（一次性塑料薄膜手套），当在无尘室台操作方式时穿上一次性橡胶手套。
3。
培养箱内水盘里的水，用灭菌的超净水，每周更换一次（至少也要两周换一次）。
换水前要用百分之75酒精消毒。
水浴箱也要定期消毒（用百分之75酒精）换双蒸水。
细胞污染原因及处理
细胞污染概述凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染，细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。
细胞污染根据污染源主要可以分为物理性，化学性和生物性污染。
一、物理性污染的来源、危害及预防物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。
物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分，从而影响细胞的代谢。
培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。
细胞、培养液或其它培养试剂暴露于放射线、辐射或过冷过热的温度中，可以引起细胞代谢发生改变，如细胞同步化、细胞生长受抑制甚至细胞死亡。
通过实验室的合理设计及建立规范的操作规程，可以减少环境中物理因素对细胞的影响。
孵箱应放在温度较恒定的环境中，周围不能放置能引起机械振动的设备，如离心机。
培养液及培养试剂应放在固定的位置，为避免光照试剂不能放在玻璃门的冰箱中，试剂周围不能放同位素。
培养液从冰箱中取出后应在室温中放置一段时间后再进行实验，以避免过冷的温度对细胞的影响。
二、化学性污染的来源、危害及预防培养环境中许多化学物质都可以引起细胞的污染。
化学物质并不总是抑制细胞的生长，某些化学物质如激素就可促进细胞的生长。
不同细胞对化学物质污染的反应是不一样的。
未纯化的物质、试剂、水、血清、生长辅助因子及储存试剂的容器都可能成为化学性污染的来源。
细胞培养的必需养分，如氨基酸，若浓度超过了合适的范围，也会对细胞产生毒性。
同样，不同细胞系其最佳培养条件下对血清和缓冲液的要求是不一样的，在培养中应严格控制。
玻璃制品清洗过程中残留的变性剂或肥皂(通常残留在瓶盖的内表面)是最常见的化学性污染。
水是唯一一种在凝固时膨胀的化合物。
因此在选择冻存细胞的容器时应考虑到这个因素。
容器因水的膨胀而发生破裂是引起试剂污染的重要原因。
为了避免金属离子、有机分子、细胞内毒素等物质对水的污染，在配制液体，清洗容器时必须使用不含杂质的超纯水。
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关于细胞污染的一些总结和心得概述凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染，细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。
细胞污染根据污染源主要可以分为物理性，化学性和生物性污染。
物理性污染的来源、危害及预防：物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。
物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分，从而影响细胞的代谢。
培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。
细胞、培养液或其它培养试剂暴露于放射线、辐射或过冷过热的温度中，可以引起细胞代谢发生改变，如细胞同步化、细胞生长受抑制甚至细胞死亡。
通过实验室的合理设计及建立规范的操作规程，可以减少环境中物理因素对细胞的影响。
孵箱应放在温度较恒定的环境中，周围不能放置能引起机械振动的设备，如离心机。
培养液及培养试剂应放在固定的位置，为避免光照试剂不能放在玻璃门的冰箱中，试剂周围不能放同位素。
培养液从冰箱中取出后应在室温中放置一段时间后再进行实验，以避免过冷的温度对细胞的影响。
化学性污染的来源、危害及预防培养环境中许多化学物质都可以引起细胞的污染。
化学物质并不总是抑制细胞的生长，某些化学物质如激素就可促进细胞的生长。
不同细胞对化学物质污染的反应是不一样的。
未纯化的物质、试剂、水、血清、生长辅助因子及储存试剂的容器都可能成为化学性污染的来源。
细胞培养的必需养分，如氨基酸，若浓度超过了合适的范围，也会对细胞产生毒性。
同样，不同细胞系其最佳培养条件下对血清和缓冲液的要求是不一样的，在培养中应严格控制。
玻璃制品清洗过程中残留的变性剂或肥皂(通常残留在瓶盖的内表面)是最常见的化学性污染。
水是唯一一种在凝固时膨胀的化合物。
因此在选择冻存细胞的容器时应考虑到这个因素。
容器因水的膨胀而发生破裂是引起试剂污染的重要原因。
为了避免金属离子、有机分子、细胞内毒素等物质对水的污染，在配制液体，清洗容器时必须使用不含杂质的超纯水。
需要注意的是，超纯水放置过久其纯度会下降。
在高压蒸气灭菌及蒸馏水时水经常被污染，因为高压蒸气锅及纯水机的常规维护后可能有少量的化学物质残留。
为了保证水的纯度，我们应采取措施尽量避免化学物质的残留。
动物血清是细胞培养中常用的天然培养基，但血清又是潜在的生物及化学污染的来源。
由于血清采集于多个动物，而且不同厂商的生产工艺及质量各不相同，因此血清中许多成分的浓度存在很大的变异。
血清对不同细胞的促生长能力及毒副作用取决于这些细胞的分化功能、组织来源及培养基的成分等因素。
在进行一系列实验时，为了保证实验的可重复性，最好选用同一批次的血清。
培养液、培养附加成分、试剂培养液、培养附加成分、试剂都可能成为化学性污染的来源。
细胞培养使用的所有物质都应是高纯度的，并经过权威机构的鉴定，实验者本人也应对上述成分进行纯度鉴定。
同时，正确配置和储存培养液及试剂也是非常重要的，应该采取标准的操作步骤，避免液体体积计算错误，混用类似化合物等错误。
培养器皿及容器细胞培养过程中会使用到各种不同的培养器皿及容器。
培养器皿的大小，构形设计可能会影响到培养中气体交换、湿度、培养液的pH值和细胞生长密度。
培养器皿的工艺及灭菌过程中的差异可能对培养体系产生影响。
塑料制品在生产过程中可能残留一些有毒成形剂，生产工艺的不同可能引起器皿表面附着能力的不同。
储存不同物质时应选用合适的塑料或玻璃容器，因为酒精、强酸、强碱能够溶解塑料或玻璃的某些成分。
微生物污染由于体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而在培养基中加抗生素的抗污染能力也是有限的，因而细胞微生物污染一旦发生往往是无法挽救的。
一般在细胞受到污染早期或污染较轻时，能及时处理并除去污染物，部分细胞还有可能得到挽救。
但当细胞持续在污染环境中生长时，轻者细胞生长缓慢，分裂相减少，细胞变得粗糙，轮廓增强，胞浆中出现较多的颗粒物质；较重的细胞增殖停止，分裂相消失，细胞质中出现大量堆积物，细胞变圆或崩解，从瓶壁脱落。
不同的微生物污染物对细胞的影响也有差别，微生物中支原体和病毒对细胞形态和技能的影响是长期的，缓慢的和潜在的。
而霉菌和细菌增殖迅速，能在很短的时间内抑制细胞生长或产生有毒物质杀灭细胞。
霉菌污染表现：真菌的种类很多，污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌等。
霉菌污染后多数在培养液中形成淡黄色或是白色的漂浮物，一般肉眼可见，较易被发现，短期内培养液多不变混浊。
倒置显微镜下可以看见细胞之间有纵横交错穿行的丝状，树枝状或管状菌丝，并漂浮在培养液中。
很多菌丝在高倍镜下可以看见链状排列的菌株。
念珠菌及酵母菌菌株呈卵圆形，散在细胞上及细胞周边生长。
有时通过显微镜可能会发现在培养瓶外壁生长的菌丝，较易误认为污染。
发现瓶外的菌丝后应及时用酒精擦拭干净。
处理：首先，需确定污染物是细菌、真菌、支原体，还是酵母。
现在你确认是霉菌污染。
因此，尽快把污染细胞与其它细胞系隔离开，同时需要对实验过程中所用的器材和试剂做处理。
一般来说，高浓度的抗生素和抗霉菌素都可能对细胞或细胞系有毒性作用，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。
这点在使用抗生素如两性霉素B 和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。
下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1)在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。
2)分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。
在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。
例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4. 0,8.0 mg/ml。
3)每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。
4)确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2－3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2－3代。
5)在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6)重复步骤4。
7)在无抗生素的培养基中培养4－6代，确定污染细胞霉菌污染后的处理讨论：/bbs/actions/archive/post/3179739_1.html霉菌污染的鉴别：/bbs/actions/archive/post/350237_1.html孵箱霉菌污染的处理和挽救：/bbs/actions/archive/post/1256786_1.html/bbs/actions/archive/post/5662002_1.html/bbs/actions/archive/post/3631212_1.html培养基霉菌污染的鉴别和处理：/bbs/actions/archive/post/3139496_1.html细菌污染细菌污染较常见的有大肠杆菌，白色葡萄球菌，假单孢菌等。
加用抗菌素的培养液可预防和排除个别一般少量细菌的污染。
一旦发生细菌污染很容易发现，多数情况下培养液短时间内变黄，表明有大量酸性物质产生，出现明显浑浊现象；有时静置的培养液起初不混，但稍加震荡，就有许多混浊物漂起。
倒置显微镜下观察，可见培养液中有大量圆球状颗粒物漂浮，有时在细胞表面及周围有大量细菌存在，细胞停止生长并有中毒表现。
必要时可取少量培养液涂片染色检查以明确细菌种类；有的培养液改变不明显而有疑似污染，亦可向肉汤培养基内地入少量培养液，37度培养以检测。
处理：一般用抗生素的常用量的5~10倍作冲击疗法，用药24~48小时后再换常规培养液，有时在早期污染时此法有效。
细胞培养中用抗生素多为预防细菌污染，一半多联合应用。
一旦发生污染后再使用抗生素常常难以根除，有的抗生素只有抑菌作用而无杀菌效应。
园子中的一些细菌污染后的处理方案：/bbs/actions/archive/post/1250527_1.html/bbs/actions/archive/post/5810723_1.html/bbs/actions/archive/post/6023160_1.html培养箱细菌污染的处理：/bbs/post/view?bid=66&id=8061768&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0 #8061768支原体污染支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。
支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。
支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。
电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。
支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。
横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央无颗粒群或中央束。
支原体代谢需固醇类物质、部分种类需要精氨酸、O 2或葡萄糖，每一种支原体都有自身持点。
多数支原体适合于偏碱条件下生存(PH7．6—8．0)，对酸耐受性差。
对热比较敏感，对一般抗生素不敏感。
支原体污染细胞后．培养液可不发生混浊．多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解．因此易被忽视。
但个别严重者，可致细胞增殖缓慢．甚至从培养器皿脱落。
为确定有无支原体污染可做如下检酗：①相差显微境检测：将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上，24h后取出，用相差油镜观察．支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。
②荧光染色法：荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258，可使支原体内含有的DNA着色，染色后用荧光显微镜观察。
具体方法如下：首先将细胞接种盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不合酚红的Hanks液漂洗一下，用l：3醋酸甲酵固定10Min，然后用生理盐水漂洗．置于用生理盐水配浓度为50pg／ml的Hoechst 3325 8中染色10min。
染色后用蒸溜水洗1—2min．向细胞面滴加pH5．5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。
镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。
③电镜检查；用扫描电镜方法简便快速．也可以利用透射电镜。
④DNA分子条文检查或支原体培养等方法：检出率高．但方法较为复杂更具体的内容请点击：/bbs/post/view?bid=66&id=206260&sty=1&tpg=1&age=-1处理：（1）加温：根据支原体对热敏感的特点，将受支原体污染的细胞放在41度作用4~5小时，最长不超过18小时，以杀灭支原体。
但如此高的温度对细胞生长本身也有影响，因而在实验前先用少量细胞膜所最适合的温度和时间，以尽可能保证杀灭支原体而细胞本身又不受损伤。
（2）动物体内接种：将受支原体污染的细胞接种在同种动物的皮下或腹腔，借体内的免疫系统杀灭支原体。
待一定时间后，取出做原代培养再繁殖。
在园子里看见的一些处理方法：/bbs/actions/archive/post/6082993_1.html/bbs/post/view?bid=66&id=7569953&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0 #7569953/bbs/actions/archive/post/3444771_1.html/bbs/actions/archive/post/1649491_1.html/bbs/actions/archive/post/5835136_1.html/bbs/post/view?bid=66&id=3458081&sty=3&keywords=%D6%A7%D4%AD%CC%E5%CE%DB%C8%BE/bbs/post/view?bid=66&id=1786529&sty=3&keywords=%D6%A7%D4%AD%CC%E5%CE%DB%C8%BE/bbs/actions/archive/post/4088449_1.html黑胶虫问题：/bbs/post/view?bid=66&id=5938528&sty=3&age=0&tpg=1&ppg=1 #5938528/bbs/post/view?bid=66&id=8690437&sty=3&tpg=1&age=0/bbs/actions/archive/post/274117_1.html/bbs/post/view?bid=66&id=2006186&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0 #2006186/bbs/post/view?bid=66&id=128317&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0# 128317/bbs/actions/archive/post/212302_1.html/bbs/post/view?bid=66&id=2731649&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0 #2731649“黑胶虫”在细胞培养中是一个令人头痛的问题，小生尽管刚开始做细胞培养，但在自己培养的细胞中也出现过“小黑点”，在高倍镜下似乎能看见其有不规则的运动，并且其生长与细胞的生长有此消彼长的关系，即当细胞状态好时小黑点会相应的减少；反之则增加，似乎有细胞竞争生长的关系，但总的来说它的出现并不影响细胞的生长。