FACAria流式细胞仪操作程序
BDFACSCalibur流式细胞术标准操作规程
BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BDFACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。
适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。
责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。
保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。
科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。
内容：1.每日开机程序1.1在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2.检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。
1.4打开电脑。
1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
1.6做Prime。
1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。
2.每日关机程序2.1用3mlFACSCIean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。
2.2将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。
2.3将样品管换成蒸馏水重复1-2步。
2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
2.5选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。
2.6退出所有应用软件，关闭电脑。
2.7将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。
3.每月维护程序3.1将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。
3.2旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINEFILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER 端口），以防伤害。
3.3将盛有3ml FACSClean 洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30 分钟。
3.4将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以HI RUN 60 分钟。
3.5将鞘液桶装满鞘液，恢复过滤器。
BDFACSCalibur流式细胞仪简明操作规程
BD FACSCalibur流式细胞仪简明操作规程一．开机程序1.把稳压器电源开关设到ON。
2.打开储液箱，把黑色开关开到TANK CHANGE位置，鞘液桶加满鞘液，倒空废液桶，把黑色开关开到Pressurize位置。
3.将FACSCalibur右侧下面的绿色按钮按开。
4.打开电脑。
二．仪器条件设定1.点击“苹果”菜单项下的CELLQuest，建立一个新视窗。
2.点击“Acquire”菜单下的“Parameter description”建立自己的文件夹，保留在屏幕上。
3.点击“Acquire”菜单下的“Connect to Cytometer”联机，这时出现“Acquisiton Control”对话框，保留在屏幕上。
4.点击“Cytometer”菜单下的“Detectors/Amps”、“Threshold”、“Compensation”三个对话框，保留在屏幕上。
5.点击“Cytometer”菜单下的“Instrument settings”，出现对话框，点击对话框中“open”，选择自己的实验条件后，点击“set”，然后点击“Done”6.加上对照样本，样品支撑架置于中位，用LO 流速RUN，点击AcqusiotionControl 对话框的Acquire，观察样品的散射光和荧光参数是否合适，调节“Detectors/Amps”对话框的相关参数，直到各个参数都合适为止。
7.点击”Acqusiotion Control”对话框的“Setup”，开始测试样品。
当所有样品分析完毕，即换上双蒸水，并将流式细胞仪置于“STANDBY”状态，以保护激光管。
三．关机程序1.测试完毕样品后，从File中选择Quit, 退出软件，点击“Special”菜单项下的“Shutdown”关机。
2.试管中加入3 ml Clean液，将样品支撑架置于旁位清洗外管，以外管吸入1ml Clean液，将样品支撑架置于中位，用HI流速RUN5分钟清洗内管，。
BD-FACSCalibur 流式细胞仪-细胞周期-操作步骤
BD/FACSCalibur流式细胞仪检测细胞周期操作步骤1、先给鞘液桶接超纯水。
2、把鞘液桶装上，拧紧。
3、开左边开关，从右向左依次打开，即总电源插头-交流稳定电压-插板-稳定输出电源。
（关机时从左向右关）。
4、按流式细胞仪开关。
换上新的已装超纯水的流式管。
5、将减压阀调至“run”（水缸旁边的黑色按钮）。
6、排气：将白色的手动排气阀从小头向大头移动，排气，2-3次，至无气泡。
最后停至小头。
自动排气：开始时是“低速”“standby”，调至“低速”“prime”，待排气完成会自动跳到“standby”，如此循环，到流式管内无气泡为止。
7、插电脑白色插头，打开电脑。
8、到无气泡时候调到“hign”“run”。
9、输入开机密码，打开电脑桌面上的“CELLQuest”（第四个图标）启动软件。
File→open Document→date→先找到打开自己之前的文件（cell dw 2018LSD）→Acquire→Connect to Cytometer→Acquisition面板中点击“change”修改文件名和日期，count改成1，即从第一个开始。
10、Acquire→counters→点击下面Acquisition control面板中的Acquire，看是否正常。
11、上样。
使仪器处于low run状态，样品管支架左移，上样品管后支架回位。
确认Acquisition control 窗口中Setup前需打勾（即不收集数据，用于仪器设置），点击Acquire。
仪器设置完成后，取消Setup前的“√”，点击Acquire 正式开始收集数据。
调界面操作：Cytometer → Detectors/Amps出现 Detectors/Amps 界面后，调FSC和SSC和FL2和FL2-W。
FSC调节的是门内(R1)细胞位置的左右，FSC的“Voltage”调到“E-1”，“E-1”是指个体很大细胞；“Amo Gain”的值调节门内(R1)细胞位置的宽度。
FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程
FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程一、环境和液流的消毒1、准备足量的无菌1×PBS（3L左右）和去离子水（10L左右）。
PBS和去离子水可高压灭菌，sheath桶和装DI水的5L小桶依次用75％医用酒精和无菌去离子水各涮洗三次，然后将无菌PBS和去离子水分别注入相应桶内即可。
2、房间在分选前紫外灯照射15－20分钟；用1:50新洁尔灭拖地；用75％医用酒精擦拭工作台和收集架；用75％医用酒精喷洒分选细胞收集区和上样区。
二、开机和管道的消毒1、将 Sheath液换为活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液（不要用75％的酒精），开机。
开机前，先掀起流动室和分选室的罩盖，开启电源，打开计算机并等计算机进入WINDOWS系统后，打开激光电源，运行FACSDiva软件，联机成功后，执行Fluidics startup命令。
然后从FACSDiva的sort菜单进入sort setup，选择合适的液流压力（high、 middle、low）。
一般来说，100μm的喷嘴选用Low，而70μm的喷嘴选用middle。
2、打开breakoff window，点击显示窗上的液流开关，检查液流是否正好流入废液槽中间和液流的形态是否正常。
如果出现异常，可以通过调整喷嘴的位置，改变 Breakoff 窗口的Amplitude的大小和打开Attenuation开关等来进行调整。
（具体操作可参考Instrument User’s Guide的194－200页），直至液流形态和位置符合分选要求。
3、在上样管中装入1ml 活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液,将上样管放在上样架上，点击Acquisition窗口的Load开关，运行15－20分钟后，点击Unload 开关，取下上样管。
4、将Sheath液换为无菌PBS，先后执行Fluidics shutdown和Fluidics startup程序各一次。
通过上述操作完成了环境和管道的消毒，为分选准备了无菌的环境，在后续的操作中应注意保持，以确保分选样本不被污染。
BDFACSCalibur流式细胞仪操作手册
BD FACSCalibur流式细胞仪FACS101 Handbook本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。
如希望进一步了解流式细胞技术应用，请至本公司网站订阅FACSinformation电子报。
如需要本课程手册，欢迎至本公司网站下载。
如需要免疫荧光染色方法，请至本公司网站下载。
一、BD FACSCalibur基本结构1.1仪器本体：1. 电源开关：在BD FACSCalibur仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。
2. 光学系统：BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射以BD FACSCalibur 基本型为例➢FSC Diode 只收488 nm波长散射光➢SSC PMT 只收488 nm波长散射光➢FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿色范围（波长515-545 nm）➢FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长564-606 nm）➢FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围（波长 >650 nm）3. 仪器面板：仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。
流速控制：LO：样品流速：12 μl /minMED：样品流速：35 μl /minHI: 样品流速：60 μl /min功能控制：•RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进入流动室。
（正常显示绿色；黄色时表示仪器不正常，请检查是否失压。
）•STANDBY：无样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停止流动，雷射功率自动降低。
•PRIME：去除流动室中的气泡，流动室施以反向压力，将液流从流动室冲入样品管，持续一定时间后，以鞘液回注满流动室。
PRIME 结束，仪器恢复STANDBY状态。
4. 储液箱抽屉：在主机左下方之储液箱抽屉。
可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter，及空气滤网 Air filter。
请注意气路减压阀VENT TOGGLE之位置。
BD FACSCalibur流式细胞术标准操作规程
BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。
适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。
责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。
保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。
科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。
内容：1. 每日开机程序1.1 在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2. 检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。
1.4打开电脑。
1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
1.6做Prime。
1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。
2. 每日关机程序2.1 用3mlFACSClean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。
2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。
2.3 将样品管换成蒸馏水重复1-2步。
2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
2.5 选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。
2.6 退出所有应用软件，关闭电脑。
2.7 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。
3. 每月维护程序3.1 将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。
3.2 旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINE FILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER端口），以防伤害。
3.3 将盛有3ml FACSClean洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30分钟。
3.4 将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以 HI RUN 60分钟。
流式细胞仪操作步骤(FACSCalibur)
流式细胞仪操作步骤(FACSCalibur)一、开机程序：1.检查鞘液桶和废液桶。
确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位置，可以连续工作3个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足够空间容纳本批标本排弃的废液。
如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中气压。
2.依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印机。
3.气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以排除管路中气泡。
二、运行FACSComp软件、检查仪器状况1.制备三色标准微球样本。
一般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加入1滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。
2.机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。
选择所需校正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。
3.在软件界面左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过程中是否需要清洗样品。
4.上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。
功能键设置在“RUN”。
5.仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。
6.FACSComp软件运行完毕，显示结果通过测试。
7.做Set up。
8.打印校正结果，退出FACSComp程序。
备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，一定要用“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。
在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。
三、样品分析软件：CellQuest Pro1.软件，选择“联机”。
Acq Connect（1）在弹出的界面中的选择数据存储路径（Directory 菜单）；（2） 对实验样本进行命名；（3） 对实验通道进行预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。
备注：如果界面被关闭，重新调出步骤：2.调出质控模板。
3. 画图 选择画图工具（一般选择散点图），Inspect 界面会自动弹出，对几够选中图形），将 改为 ,更改横纵备注：第一个散点图横坐标为FSC ，纵坐标为SSC 。
FACScalibur检测前后操作步骤
流式细胞仪检测开始前操作步骤1.检查鞘液桶, 若鞘液少于1/3, 请补充鞘液(双蒸水). 注意鞘液桶不可加满, 须至少保留1/5空间;2.将压力阀移到加压位Pressurize;3.取一流式管, 加入1/2体积双蒸水, 置于进样器上;4.依次打开稳压器, 流式细胞仪, 电脑;5.用水高速冲洗管路10分钟: HIGH+RUN; 在此等待期间可进行程序设置.流式细胞仪检测结束后操作步骤1.取一流式管, 加入1/2体积清洗液(双蒸水稀释的84消毒液, 9:1稀释), 置于进样器上;2.仪器设定为HIGH+RUN;3.将样品支持架置于侧位10-20秒, 以清洗进样针; 然后将样品支持架置于正位3-5分钟, 以清洗管路;4.取一流式管, 加入1/2体积双蒸水, 替换下清洗液. 重复步骤3;5.按亮STANDBY, 使仪器进入待机状态5-10分钟, 以冷却激光器;6.依次关闭软件, 电脑, 流式细胞仪, 稳压器;7.将压力阀移到泄压位Vent.8.清空废液桶.检测过程中相关操作1.检测过程中注意观察样品管,勿让样品被全部吸干, 以免气体进入管路; 若样品不慎被吸干, 请取一流式管, 加入1/2体积双蒸水, HIGH+RUN用水高速冲洗管路10分钟以排出气体, 方可继续正常检测.2.若鞘液耗尽需补充鞘液:1)按亮STANDBY使仪器进入待机状态;2)将压力阀移到泄压位Vent以消除管路高压;3)补充鞘液;4)将压力阀移到加压位Pressurize;5)取一流式管, 加入1/2体积双蒸水, HIGH+RUN用水高速冲洗管路10分钟以排出气体, 方可继续正常检测.3.若废液桶满需及时清空:1) 按亮STANDBY使仪器进入待机状态;2) 将压力阀移到泄压位Vent以消除管路高压;3) 清空废液桶;4) 将压力阀移到加压位Pressurize;5) 取一流式管, 加入1/2体积双蒸水, HIGH+RUN用水高速冲洗管路10分钟以排出气体, 方可继续正常检测.。
FACAria流式细胞仪操作程序
一、准备工作1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。
1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。
再用干棉签擦干。
2）5ml注射器吸超纯水，清洗缝隙。
用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。
2，鞘液桶加液3，喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。
用滤纸吸干水分，晾干。
二、开机启动1，启动电脑，密码BDIS，点开软件，无密码2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。
3，液流启动：Cytometer----FiuidSetup1）气路（透明管）、液路（蓝色管），从乙醇桶上拔下，插到鞘液桶2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置，旋转至12点方向3）取下闭合喷嘴4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。
4，喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---SortSetup----70um（选择当前使用的喷嘴大小）5，液流调整：点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。
查看是否都处于正常状态：1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。
如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。
2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。
4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。
然后关闭主机箱外盖。
调整液流：通过调整振幅来实现。
1）振幅Ampl，数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。
2）频率Freg，一般不动。
3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。
100um时，为10,、11、12。
4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。
5）点击StreamSpot，锁死数值，保持液流稳定。
Drop1：实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。
Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。
此视为稳定液流。
FACSCalibur流式细胞仪中文操作手册
5. 上樣區： 上樣區是樣本管的上樣位置。它包括三個部 分，一個是進樣針 Sample Injection Tube，將 樣本輸入流動室，還有就是支撐架 Tube Support Arm、和液滴存留系統 Droplet Containment System。 進樣針：是一根不鏽鋼管，將細胞從樣本針中吸入流動室。進樣管外有一套管， 是液滴保留系統的一部分。 支撐架：用於支撐樣本管、並負責啟動液滴存留系統。支撐架有三個位置：位於 樣本管之下的中位，樣本管左側或右側。 液滴存留系統：系統由支撐架、真空幫浦和外套 管組成。當支撐架位於左側或右側位置時，真空 幫浦就會啟動，將液體從外管吸入廢液桶內。上 樣時，須注意將支撐架位於中位，以避免過多樣 品被抽吸到廢液筒內（當支撐架位於中位，真空 幫浦停止工作）。更換樣品時，讓儀器保持 RUN 的模式，使得進樣針可以反沖；切換到 STANDBY 模式前，確保液路已沖洗徹底以免碎片沈積到流 動室中。
FACS101 Handbook Pro
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4. 從 Acquire 功能表中選擇 Connect to Cytometer，建立儀器和電腦之間通訊。此時 會出現 Browser 方框。將之移至適當位置。
5. 從工具板中點擊散點圖圖示。在實驗文件的空白區點擊，拖曳對角線至適當大小， 然後放開滑鼠。此時應可以在右方看到 Inspector：Dot Plot 對話框。
FACS101 Handbook Pro
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6. 從螢幕上方 Edit 功能表中選擇 Duplicate 功能，可複製一個同樣大小的散點圖，完 成後可將重製圖移至原圖右方。
7. 從螢幕上方 Edit 功能表中選擇 Select All 功能，文件中所有圖譜的四角會出現黑色 方塊，表示被選取。可在出現之 Inspector：2 Objects 方框中將 Plot Type 改成 Acquisition。 8. 因應實驗需求來修改所有圖譜中顯示之參數。第一圖 X 和 Y 軸參數分別設為 FSC-H 1024、SSC-H 1024；第二圖 X 和 Y 軸參數分別設為 FL1-H 1024、FL2-H 1024。 修改動作為輕擊圖譜，並在出現之 Inspector 方框依需要選擇。 FSC：細胞大小 SSC：細胞顆粒性 FL1：FITC 綠色螢光 FL2：PE 橙色螢光 FL3：PerCP 紅色螢光 儀器設定 注意：實驗數據品質，取決於最適化儀器設定。儀器設定文件不能在數據收取後再更 改，研究人員必須在第一次就使用正確的儀器設定。 儀器設定（Instrument settings），含偵測器電壓（Detector/ Amps），閾值 （Threshold），螢光補償（Compensation）等儀器條件的組合。一般而言，儀器設 定的順序為 Detector/Amps -- Threshold -- Compensation。
AriaII操作手册-分选
FACSAri aⅡ流式细胞仪一、开机准备（一）准备液路1.将流式细胞仪的上盖打开；2.开启计算机，等待所有程序载入。
3.开主机电源Mainpower（右图），从电脑桌面上双击打开FACSDiva软件，输入密码BDIS。
打开激光开关laser power（根据实验需要进行选择）；开启实验所需激光器电源。
4.确认液流车中各种液体的液面水平（鞘液、废液、去离子水、漂白剂、乙醇），倒空废液或加满其他液体（下图）。
5.从软件的Cytometer菜单上选择Fluidic Startup(射流启动)，点击OK确认。
将出现如下窗口：6．将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点Done；7．将Closed-loop 喷嘴（闭环喷嘴）插入流动室；完成后点Done；会出现右侧窗口，提示液流开启进行中；8．达到100%，移去Closed-loop喷嘴，完成后点Done；9．按照实验要求，插入直径合适的喷嘴（喷嘴直径应该是分选颗粒直径的3-6倍）；10．然后点OK，完成整个过程；11．从菜单上选择Sort(分类)sort setup,确认setup模式与喷嘴大小匹配。
（二）开液流1．打开液流窗口的液流；♦点击软件界面上（如下图）的按钮打开分选液流窗口（如下图）♦点击分选液流窗口的按钮(stream 的前面按钮)，开启液流2．打开分选仓前的门，检查液流。
液流应为一条细线落入废液槽正中(可通过调整红色标志的键)；（如果液流不稳，检查流动室中是否有气泡，将液流关闭，10秒钟后再开，排除气泡。
）3．关上分选仓前的门。
（三）设定液流断点1.调整液流震幅（Ampl），使断滴位于窗口上方1/3处。
（Ampl不要超过70，如果超过，检查流动室是否有气泡；确认鞘液压力和震动频率是否合适）；2.确认卫星液滴与大液滴融合，应该在断滴的6滴之内融合（红色箭头数起，左图的左侧合格，右侧不合格），如果没有融合，重新安装喷嘴。
二、建立实验模板1.在软件界面左侧Browser面板下，依次点击New Folder、Experiment、Specimen （均可重命名），单击Specimen左侧“+”符号，显示下方的Tube，点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色（当前指示）。
流式细胞仪操作步骤（FACSCalibur）
流式细胞仪操作步骤（FACSCalibur）⼀、开机程序：1.检查鞘液桶和废液桶。
确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位置，可以连续⼯作3个⼩时左右）、盖紧⿊盖、管道畅通、废液桶有⾜够空间容纳本批标本排弃的废液。
如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中⽓压。
2.依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印机。
3.⽓压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以排除管路中⽓泡。
⼆、运⾏FACSComp软件、检查仪器状况1.制备三⾊标准微球样本。
⼀般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加⼊1滴质控⼩微球，也可以根据实际情况调节浓度。
2.机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。
选择所需校正内容，如果使⽤的微球是新⼀批产品要输⼊微球的批号。
3.在软件界⾯左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过程中是否需要清洗样品。
4.上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。
功能键设置在“RUN”。
5.仪器⾃动检查，并做电压、补偿等设置。
6.FACSComp软件运⾏完毕，显⽰结果通过测试。
7.做Set up。
8.打印校正结果，退出FACSComp程序。
备注：在质控过程中，如果提⽰收集细胞速度慢可以提⾼细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，⼀定要⽤“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。
在使⽤仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。
三、样品分析软件：CellQuest Pro软件，选择“联机”。
1.（2）对实验样本进⾏命名；（3）对实验通道进⾏预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。
备注：如果界⾯被关闭，重新调出步骤：2.调出质控模板。
3.画图选择画图⼯具（⼀般选择散点图），Inspect界⾯会⾃动弹出，对⼏个常⽤选项进⾏设定：将散点图选中（⽤⿏标点击散点图边框才能够选中图形），将更改横纵坐备注：第⼀个散点图横坐标为FSC，纵坐标为SSC。
BD FACSCalibur 流式细胞仪 操作规程
FACSCalibur流式细胞仪简明操作规程1.开机程序开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源；开启计算机，桌面不显示跳动的提示，认为细胞仪和电脑连接成功；确认鞘液筒有2/3满，废液桶近似空的，桶盖是旋紧的（所有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠）；将气压阀方向调在加压位置，用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起；PRIME排除液流过滤器中的气泡；HIGH RUN 鞘液或超纯水两分钟；开始分析样品。
2.上机操作确保流式细胞仪处于“Run，Hi”状态；上样前，确认样本细胞是否已过滤，去除检品中的细胞团块，以防止管路堵塞；将样本的试剂管在旋涡器上正立混匀5秒；支持架置于旁位，上样，支持架置于正位；点击软件右下方“Acquire”；分析完成后，换样，重复操作。
3.关机程序清洁加样针的外管和内管，防止加样针堵塞或有染料残留；取3ml浓度为0.5%-1%的次氯酸钠（洗液）上样，将样品支持架置于旁位，以外管吸去约1ml，将样品支持架置于中位，再HIGH RUN 10分钟（内管吸去1-2ml）；取 3ml ddH2O 于上样针，将样品支持架置于旁位，用外管吸取1-2ml液体将样品支持架置于正位，按RUN HI，时间需长于5分钟，如8-10分钟；最后留约 1ml ddH2O 在试管中，置于上样位；按Standby以冷却激光，五分钟后关闭细胞仪（务必等五分钟后再FACSCalibur 电源，以延长激光光源寿命。
）；倒掉废液，将气压阀放在减压位置，将鞘流液筒充填至2/3满；确认退出计算机中所有BD应用软件，所有数据已储存备份，关程序，关闭苹果计算机；填写使用记录。
4.日常维护方法标本检测结束后都应清洗机器。
关闭仪器之前，必须清洁进样针，及进样针与套管间的区域。
做好月保养工作，进行系统管道清洗，每月至少一次。
每月至少一次质控，通过标准微球来监测仪器的工作状态定期对设备的各种功能进行检查。
将清洗以及检查、维护记录在案。
使用注意事项该仪器仅限仪器管理人员和通过仪器操作培训的人员操作；样品务必过滤后上机；使用完毕后及时清洗管路。
BD FACSAria Ⅲ流式细胞分选仪
1.开机程序（1）开启稳压电源，启动计算机，在出现的登陆对话框中，输入用户名和密码，点击“OK”。
（2）开启仪器电源，打开所需激光电源。
若仪器刚关闭，需等到仪器系统压力完全消除后，再开启主电源。
（3）运行BD FACSDiva Software软件，双击桌面上的快捷方式。
在出现的登陆对话框中，无需输入用户名和密码，直接点击“OK”。
（4）仪器自动联机，在“Cytometer仪器框”中确认软件已经和仪器相连接即“Cytometer Connected”；检查此窗口底部的液流系统水平，如果需要，则充满液体或清空废液。
（5）在FACSDiva软件的“Cytometer”菜单中，选择“Fluidics Startup”选项。
按窗口提示步骤进行操作。
（6）将气路和液路从乙醇关机液桶断开，连接到鞘液桶相对应的接口上，点击done。
（7）确认装有O圈的闭合喷嘴在流动检测池上，点击done。
（8）取下闭合喷嘴，点击done。
（9）安装合适口径的喷嘴，保证O圈正确装入喷嘴。
（10）单击OK完成此过程。
（11）液流启动完成后，在“Sort”菜单中选择“Sort Setup”选项，确认设置模式与喷嘴的口径相匹配。
（12）开启液流。
（13）打开流动检测池上盖，打开分选区门，检查位于废液吸引器中的液流的位置，并检查断点液流窗口中的液流情况。
液流应顺利由喷嘴流入废液吸引器的中央。
液滴应该表现大小均匀，且以一定的距离相隔排列。
如果发现有液滴滴洒、不稳定或者任何液流异常现象，关闭液流，重新检查液流情况。
（14）关闭分选区门和流动检测池上盖。
2.关机程序（1）关闭液流。
（2）检查废液桶是否已满、乙醇关机桶是否需要补液。
（3）从流动检测池取下喷嘴。
（4）安装好闭合喷嘴，确定O圈在喷嘴上。
（5）在“Cytometer”菜单下选择“Cleaning Modes/Clean Flow Cell”选项。
（6）在进样管中装入约2ml FACSClean solution 或0.5%NaClO溶液，放于载物台上，点击OK。
流式细胞仪使用方法及程序
流式细胞仪的使用程序------血液病实验诊断中心一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4．如果需要打印，打开打印机电源。
5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。
7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。
4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程一、开机程序1、检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。
2、打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用超纯水，特殊情况需要用PBS），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3、将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热 5－10 分钟。
排出过滤器内的气泡。
4、如果需要打印，打开打印机电源。
5、打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6、执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。
7、分析样品时，先用 FACAFlow 或 PBS 进行 HIGH RUN 约 2 分钟，以去除可能的管路残片。
二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1、从苹果标志中选择 CELLQuest，建一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2、选取屏幕左列绘图工具中的 Dot plot，绘出一个或多个 Dot Plots（点图）。
从 Dot Plot 对话框中选取 Acquisition 作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和 y 轴参数。
3、选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram（直方图）。
4、将此视窗命名后储存于 FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder\EXP 文件夹中（也可以自己取名，但每个实验人员只能建立一个文件夹），下次进行相同实验时可直接调用。
三．用 CELLQuest 进行仪器的设定和调整1、从苹果画面中选取 CELLQuest，进入 CELLQuest 后在 File 指令栏中打开合适的获取模式文件。
2、从屏幕上方 Acquire 指令栏中，选取 Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。
FACAria 流式细胞仪操作程序
一、准备工作1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。
1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。
再用干棉签擦干。
2）5ml注射器吸超纯水，清洗缝隙。
用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。
2，鞘液桶加液3，喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。
用滤纸吸干水分，晾干。
二、开机启动1，启动电脑，密码BDIS，点开软件，无密码2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。
3，液流启动：Cytometer----Fiuid Setup1）气路（透明管）、液路（蓝色管），从乙醇桶上拔下，插到鞘液桶2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置，旋转至12点方向3）取下闭合喷嘴4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。
4，喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---Sort Setup----70um（选择当前使用的喷嘴大小）5，液流调整：点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。
查看是否都处于正常状态：1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。
如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。
2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。
4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。
然后关闭主机箱外盖。
调整液流：通过调整振幅来实现。
1）振幅Ampl，数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。
2）频率Freg，一般不动。
3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。
100um时，为10,、11、12。
4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。
5）点击Stream Spot，锁死数值，保持液流稳定。
Drop1：实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。
Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。
FACSCalibur流式细胞仪操作维护规程
F A C S C a l i b u r流式细胞仪操作维护规程1.目的规范流式细胞仪FACSCalibur操作维护规程，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行和设备安全。
2.适用范围适用流式细胞仪FACSCalibur的使用操作。
3.职责3.1操作人员按照本规程操作仪器，对仪器进行正常维护，并作使用记录。
3.2保管人负责监督仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护和保养。
3.3仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理。
4.操作程序4.1安全操作注意事项和特别提示：4.1.1该仪器必须有专人保管，使用前需通读仪器说明书。
4.1.2严格遵守操作规程，如仪器出现故障，应马上停止使用，并立即向保管人、仪器管理人以及科室负责人报告，严格按照单位有关制度实施，不得擅自“修理”，查明原因，处理后仪器保管人应及时做好故障情况及维修记录。
4.2设备每日开机程序：4.3设备质控程序：4.3.1.1取试剂盒中的Unlabeled试剂，充分混匀，加一滴到装有1ml鞘液的试管中，混匀，标记为unlabeled。
4.3.1.2取FITC、PE、PerCP、Unlabeled试剂，充分混匀，各加一滴到第二支装有3ml鞘液的试管中，混匀，标记为mixed。
4.3.2上机操作：4.3.2.1按电脑桌面的FacsComp进入质控程序。
4.3.2.2在出现的“Signin”窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息；单击“Accept”。
4.3.2.3在试验选项中，选择Lyse/No-Wash(LNW)：免洗程序。
4.3.2.4在CalibriteBeadsLotIDs中,根据每种颜色的beads所对应的LotIds，输入编号，此编号在Calibritebeads试剂盒内，打开新买的试剂盒，里面有一张橙色胶纸，取出贴在试剂盒的背面，标题是Calibritebeads?3BatchNO,选择FACSFlowSheath下的编号(右侧的编号)。
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、准备工作1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。
1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。
再用干棉签擦干。
2）5ml 注射器吸超纯水，清洗缝隙。
用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。
2，鞘液桶加液3, 喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。
用滤纸吸干水分，晾干。
二、开机启动1, 启动电脑，密码BDIS,点开软件，无密码2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。
3, 液流启动：Cytometer --- FiuidSetup1 ）气路（透明管）、液路（蓝色管） ,从乙醇桶上拔下,插到鞘液桶2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置,旋转至12 点方向3）取下闭合喷嘴4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。
4, 喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---SortSetup --- 70um （选择当前使用的喷嘴大小）5, 液流调整：点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。
查看是否都处于正常状态：1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。
如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。
2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。
4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。
然后关闭主机箱外盖。
调整液流：通过调整振幅来实现。
1）振幅Ampl,数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。
2）频率Freg ，一般不动。
3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。
100um时，为10, 、11 、12。
4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。
5）点击StreamSpot ，锁死数值，保持液流稳定。
Dropl :实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。
Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。
此视为稳定液流。
三、手动调补偿：样品：Negative （双阴管），FITC（单阳），PE（单阳）‘SampleFITC,PE 双阳）1，Browser 中：建立文件夹（单击folder 图标）-------- 建立文件（单击experiments图标）,出现CST新窗口，选择keepcurrentcytomotersetting --- 建立样本，单击注射器图标，出现spcimen ---- 点开下面的+号，出现Tube，点成绿色。
以上文件最好都改名，分别右击英文，raname。
2，Inspect 对话框中看参数，Cytometer 中调参数。
在电压Parament中：FSC, SSC选择线性，即lingeage , 即不打勾。
其他对数log ，即打勾。
3，Inspect 中lables ，改标签名称，egCD3-FITC,CD4-PE。
4，上ddH2O，Flowrate ：11。
5，上样品Negtive （双阴），Flowrate 只要在1/5Fred （说明Fred单位为kHZ所以乘以1000除以5）。
画散点图两个，分别选择标识。
图一：横坐标FSC纵坐标SSC图二，横坐标CD4-FITC,纵坐标CD8-PE图一，调节FSC，SSC的电压，在Cytometer 中parameter 里。
使得样品出现在中央位置。
图二，调节FITC，PE的电压，使得散点落在左下侧里。
完成收样后，在图一画门。
在图二右击showpopulation ，点击P1,再右击showpopulati on hierarchy 显示门的关系，再十字象限画门。
6, 上样品FITC单阳管。
调补偿。
在AcquisitionDashboard 中选择nexttube ，在load 样品。
不可选择newtube。
调补偿。
在PE-X%FITC X上调数字，使得散点图落下。
7, 同理，上PE单阳。
如果双阴跑出横纵坐标以外，可以自动或者手动调整负轴。
Automatic 自动,则单击Inspector ,选PotPlot ,在BiexponentialDisplay 中把XAxis，YAxis，打勾，使负值轴显示。
Manual 手动,打勾,调数值。
8, 上双阳。
9, 事后调补偿。
若复制到当前文件夹。
在Browser 的当前tube 中右击Cytometer , 选择copyspectraloverlap , 选择Pastspectraloverlap 在总experiment 。
若复制到其他文件夹。
在Browser 的experiment 在右击DuplicateWithoutData四、自动补偿1, 在Browser 中Newexperiment , 选择keepcurrentsetting 。
在Cytometersettings 中删除参数。
2, 文件栏中experiment ,选compersationsetup ,选creatcompensationcontrols 。
将自动生成各种tube ,点击tube 呈绿色后,自行生成散点图和直方图3, 上样，双阴管。
调整电压FSCSSC电压，在Cytometer 中的Parameter ，使得细胞在中央位置。
上样结束后，设门。
右击图片，Applytocompensationcontrols.调FITC的电压，使得峰值图出现在10八2位置。
调PE的电压，同理。
4，上样，单标FITC，只需load，阳性门移动到阳性峰，不用调节其他。
5，上样，单标FITC，同理。
（上样量如果不够，可以在加样，并record 以后，Append 继续累积。
）6，计算文件栏中，Experiment 中选中Compensationsetup ，选中catulatecompensation, 修改需保存的名称，点击link&save 。
此后所有实验的Specimen 都是和该电压补偿的参数保持一致。
就此补偿结束。
五、检测样本1，新建Specimen.在Normalworksheet中点第一个小图标，切换回实验用的GlobalWorksheet 。
2，Browers 中，点中生成Tube。
在Acquisition 中选nexttube, 右击rename，在record。
3，上样，双阴性negative ，4，上样，双阳性sample。
六、关机1，关液流，在Cytometer 在选Fluidshutdown ，关掉Stream 。
2，鞘液桶的气路（透明管）、液路（蓝色管）插到酒精桶的位置。
液路需要从滤器旁边拆开，先插液路，再插气路。
气路足可以放气。
3，取喷嘴，超声2min。
4，放入封闭喷嘴，等待清洗。
5，取出封闭喷嘴6，Cytometer 中standby 。
7，关仪器开关，激光开关。
关电脑。
细胞分选1，鞘液。
1）在70um对话框，点开voltage调加压。
点testsort 呈花洒状态，测试分选。
反复点opticalfilter 选择性过滤。
调节下面四个电压，其中一三四为0，反复调整二的值，使得液流在两个空白框内。
2，上accudrop 。
1 ）在文件栏中，选择experiment ，选newexperiment ，出现ExperimentAccudropDelay 模式。
逐级点下去，Sepcimen，双击tube ，点sortlayout ，要opensortlayout 对话框。
调节FSC的电压，使得小于50。
2) 点Voltage 加电，opticalfilter 中看百分比。
上样速度flowrate调高使达到2000 个/s 。
3) 点击Sort ，在对话框中选择cancel 。
4) 点击AutoDelay 。
Startrun 。
等待分选左侧框100%数值出现。
退出Exit 。
保存数据3，鞘液。
左右分选位置测试。
1) 空白管放入仪器架上，准备对液流位置。
2) 70um对话框中，分别点击加压、测试、过滤、去挡板。
3) 反复调节两个空白框下的二路和三路电压，时刻查看电压是否能够使仪器上液流打到管子中心，避免到壁上。
4) 调节2rd,3rd,4th 数值，先都归零，再依次调。
排除静电干扰，使光束聚焦。
4，样本。
1) 更换接受样品管。
2) Sort 点OK。
？？？3) 打开实验文件夹，呈现书形。
双击experiment ，在Globalworksheet 中画满，P2,P3.4) 上样本管。
Browser 中箭头绿色，browser 的bar 里点createanewsortlayout选择。