第十三章_维生素类药物分析

△或有金属离子存在时氧化↑
环氧化物
VitA醛
VitA酸
二、鉴别试验
（一） 三氯化锑反应
VitA 蓝色 紫红
CHCl3
SbCl 3
条件 无水无醇
+
CH2
-
S b C l 5 RCOO
蓝色
+
CH2
-
S b C l 5 RCOO
紫红
（二） UV法
VitA 去水VitA
A328(校正) = 3.52 ( 2A328 - A316 - A340 )
=3.52 ( 2×0.663 – 0.592 – 0.553 )
=0.637
A328(校正) – A328(实测) A328(实测)
×100 =
0.637 – 0.663 0.663
×100
= -3.92
E
1% 1cm
( 328nm ) =
A328(校正)
100ms/D
=
0.637 100×0.1287/1250
= 61.87
1% E 供试品中维生素A效价= 1cm ( 328nm ) ×1900
= 61.87 ×1900 =117553（IU/g ）
VA效价(IU/g) ×每丸内容物平均装量(g/丸) 标示量% = ×100% 标示量( IU/丸) 117553×0.07985 = ×100% = 93.9% 10000
物质、检查方法与原理。
三、了解维生素D的性质和分析特点。
概 维生素：
述
是维持人体正常代谢机能所 必需的一类活性物质 。 人体不能合成维生素。
分类
按溶解度分
脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1 等
水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。
维生素发展史
公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维A。 1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。 1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。 1831年-胡萝卜素被发现。 1905年-甲状腺肿大被碘治愈。 1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。 1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年-维生素B被分离出来。 1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维D引起的。
取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定
A325校正 6.815 A325 2.555 A310 4.260 A33
f
A 325(校正) A 325 A 325
100%
A325校正
－3%
A325
0
A325校正
3%
（二）三氯化锑比色法
标准曲线法 蓝色
VitA + SbCl 3
优点 简便 快速
λmax 618nm～620nm 呈色不稳定 （5 ~ 10s内） H 2O 水分干扰 SbCl 3 SbOCl 缺点 与标准曲线温差≤1℃ 专属性差 三氯化锑有腐蚀性
（三） HPLC
Ch.P.（2010）新增HPLC法作为维生素A的法定含
量测定方法。本法适用于维生素A醋酸酯原料及其
△ 无水乙醇 HCl
λmax为326nm
λmax为350～390nm
一个吸收峰
三个吸收峰
↓
VitA
CH2
去水VitA（VitA3）
（三） TLC法 BP 对照品法 显色剂 三氯化锑
USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
三、 含量测定
（一） UV法
维生素A2
立体异构体 氧化降解产物 合成中间体
第十三章
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 第六节
维生素类药物的分析
维生素A的分析 维生素B1的分析 维生素C的分析 维生素D的分析 维生素E的分析 复方制剂中多种维生素的分析
基本要求
一、掌握维生素 A、维生素B1、维生素C、维生素E的化学 结构、理化性质以及分析方法间的关系，专属反应、主要
的含量测定方法与原理。 二、熟悉维生素 A 、维生素 B1 、维生素 C、维生素 E的有关

Vit A Vit E
第二节 维生素B1 HCl
H3C N N NH2 CH2 N
+
S
CH2CH2OH CH3
Cl-
氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)
主要的药理作用：
维持糖代谢及神经传导，治疗多发性神经 炎、肠道疾病等
主要来源：
种子外皮及胚芽中，米糠、麦麸、黄豆、 酵母、瘦肉等
一、结构与性质
NaOH
N H 3C N
中微溶。水中不溶。
（二） 为一个具有共轭多烯侧链的环己烯
具有UV吸收
存在多种立体异构化合物
易发生脱氢、脱水、聚合反应
VitA2
VitA3
鲸醇
（二） 共轭多烯侧链 易被氧化
VitA VitA 醛 环氧化物 VitA 酸
[O ] 紫外线、O 2、氧化剂
第二步
% 求 1cm ( 样 )
A % 1cm(样) C(%) l
注意：
% % 1cm ( 样) 1cm ( 纯 ) C 为混合样品的浓度
第三步
求效价
% E 换算因数 效价（IU / g） (样) 1cm(样)
换算因数由纯品计算而得：
效价（IU / g） 换算因数＝ % E1cm(纯)
乙醚提取 挥干乙醚
溶解 稀释至9～15IU / ml 于300、 310、 325、 334nm 处测Ai
• 判断max是否在323～327nm之间
是 否
• 计算
A300
A325
取未皂化样品 采用色谱法纯 化后再测定
• 判断 A300 /A325 是否大于0.73
是 否
• 计算A325(校正)
效价（IU / g） 3330000 换算因数＝ % 1820 E1cm(纯)
6
1830
第四步：求标示量％
IU / 丸 标示量％＝ 100％ 标示量
IU / g 平均丸重 ＝ 100％ 标示量
A 换算因数 平均丸重 C 100％ 标示量
（2） 第一法 • 方法：
• 计算 A328（校正）
• 用A328计算
A328校正 3.522 A328 A316 A340
f
A 328(校正) A 328 A 328
100%
第二法
A 328校正
A 328
第二法
－15%
－3%
0
3%
讨论
1. VA 醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法 （即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式 是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导 而来。 2. 在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波 长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进 行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品 应不得少于两份。
维生素A3 环氧化物 维生素A醛
维生素A酸
三点校正法（法定方法）
1. 原理：
（1）杂质的吸收在310~340nm波
长范围内呈一条直线，且随波
长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。
2. 波长的选择：
（ 1） 1 VitA的max（328nm）
（ 2） 2 3
分别在1的两侧各选一点
第一法
等波长差法
328 316 340 328
= 12nm
测定对象 VitA醋酸酯
第二法
等吸收比法
6 A1 A2 A3 7
1=325nm, 2=310nm, 3=334nm
测定对象
VitA醇
3. 测定法
（1）基本步骤: 第一步 A的选择
选择依据：
所选A值中杂质的干扰已基本消除
A 300 A 316 A 328 A 340 A 360 A 328 A 328 A 328 A 328 A 328
规定值
0.555 0.907
差值
1.000 0 0.811 0.299
• 判断差值是否超过规定值的 0.02 有一个以上 超过 0.02 无超过 0.02
制剂中维生素A的含量测定。 Ch.P.（2010）规定维生素AD软胶囊、维生素AD滴 剂用该法测定含量。
RP-HPLC同时测定人血清中Vit A和Vit E含量
色谱条件
色谱柱：C18 流动相：甲醇-水 流速：1.2ml/min 检测波长与AUFS： 0～8min(330nm,0.25AUFS); 8min后(292nm,0.05AUFS) 内标：Vit A 酯
1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。 1922年-维E被发现。 1928年-科学家发现维B至少有两种类型。 1933年-维E首次用于治疗。 1948年-大剂量维C用于治疗炎症。 1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。 1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。 1957年-Q10多酶被发现。 1969年-体内超级抗氧化酶被发现。 1970年-维C被用于治疗感冒。 1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果。
维生素A醋酸酯
S 9～15IU / ml 溶液 分别于300、 316、 328、 340、 360nm 处测Ai
环己烷
• 判断 max是否在326～329nm之间
max在326～329nm之间
是 否
• 求算 Ai / A328
改用第二法
并与规定值比较
Ai / A328
VitAD胶丸中VitA的含量测定
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量 差异项下（平均装量 0.07985g/ 丸）的内容物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量 转移至 50ml 量瓶中，用环己烷稀释至刻度， 摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中， 用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空 白，测定最大吸收波长为 328nm ，并在下列 波长处测得吸收度为
第一节 维生素A
主要的药理作用： 干眼病、角膜软化症、皮肤干燥、夜盲等 主要来源：
自然界：鲛类无海鱼肝脏中提取的脂肪油 目前主要采用人工合成。
一、结构与性质
9
8 7 6
5
4 3 2
1
具有共轭多烯侧链的环己烯 R:
-H
-COCH3 -COC15H31
维生素A醇
维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
（一）与CHCl3、乙醚、环己烷等互溶，乙醇
（一）溶解性
1、易溶于水 2、水溶液呈酸性
（二）UV
共轭双键
λmax = 246nm
（三） 硫色素反应
硫色素 蓝色荧光
OH O

正丁醇
（四）嘧啶环 —— 噻唑环 ——
与生物碱↓→↓ 呈氯化物的反应，
（五）氯化物特性 用于鉴别。
ຫໍສະໝຸດ Baidu、 鉴别试验
（一） 硫色素反应
NaOH
A300 A316 A328 A340 A360
：0.374 ：0.592 ：0.663 ：0.553 ：0.228
A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328
：0.564 ：0.893 ：1.000 ：0.834 ：0.344
求本品中维生素A占标示量的百分含量？
1IU 0.344g维生素A醋酸酯
1 10 g 效价（IU / g） 2907000 0.344g
效价（IU / g） 2907000 换算因数＝ % 1530 E1cm(纯)
6
1900
1IU 0.300g维生素A醇
1 10 g 效价（IU / g） 3330000 0.300g
ChP2010
H 2O 环合
VitB1 硫色素 [O ] 蓝色荧光 荧光消失
OH
K 3 Fe（CN） 6
正丁醇
H
+
N H3C N
CH 2 NH 2 HCl
N S
CH 3 C 2 H 4 OH
（3）第二法（等吸收比法） [ 皂化法、6/7A法 ]
适用于维生素A醇 第一法无法消除杂质干扰时用此法
脂溶性 VitA 醋酸酯 VitA 醇 KOH / 乙醇 S 皂化液 植物油 甘油和脂肪酸盐 水溶性
除去植物油的干扰 异丙醇
A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328
：0.564 － ：0.893 － ：1.000 － ：0.834 － ：0.344 －
0.555 0.907 1.000 0.811 0.299
= + 0.01 = －0.01 = 0 = + 0.02 = + 0.04