血清胆固醇的定量测定

血清胆固醇的定量测定

摘要：目的：定量测定人血清胆固醇。方法：采用磷硫铁法测定胆固醇含量。结果：该人血清胆固醇为132mg/ml。结论：该人的胆固醇含量正常。

关键词：胆固醇；磷硫铁法

胆固醇参与血浆蛋白的组成，是细胞膜的结构成分，胆汁酸盐，肾上腺皮质激素，维生素D等的前体。胆固醇的测定方法包括化学显色法（磷硫铁法和邻苯二甲醛法）和酶学法（试剂盒），本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇。血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇则溶在无水乙醇中。在乙醇提取液中加入磷硫铁试剂，胆固醇和试剂会产生紫红色化合物，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 721型分光光度计；离心机；试管；EP管；

1.2 药品与试剂人血清；10%三氯化铁溶液；磷硫铁试剂；胆固醇标准溶液；无水乙醇

2 方法

2.1 胆固醇的提取取人血清约100μL，分装到两个EP管中，每个管中分别加入200μL无水乙醇，摇匀，每个管中加入无水乙醇1000μL，摇匀，静置10min，离心（3000rpm，5min），得到上清液备用。

2.2 比色测定取三支试管，分别按照表1加入如下试剂。摇匀，室温静置10min。将混合溶液加入比色皿中，若比色皿过大，可加入无水乙醇稀释，放入分光光度计中进行测定吸光度。

表1

试管编号1（测定管）2（标准管）3（空白管）胆固醇提取液 1.0ml ————

胆固醇标准液—— 1.0ml ——无水乙醇———— 1.0ml

磷硫铁试剂 1.0ml 1.0ml 1.0ml

2.3 计算人血清胆固醇=(OD

2/OD

1

)×0.08×(100/0.04)= (OD

2

/OD

1

)×200，其中，

OD

2表示测定管的吸光度，OD

1

表示标准管的吸光度。

3 结果与讨论

3.1 计算结果 OD

2为0.096，OD

1

为0.145，计算可得，人血清胆固醇为132mg/ml.

3.2 讨论正常人胆固醇含量约为110-220 mg/ml，从结果来看，我们可以看处这个人的胆固醇含量是正常的。在实验操作中，配制试剂时要格外吸小心，看清标注以免搞错，胆固醇过高，会引起动脉粥样化，甚至引起冠心病，胆固醇过低，会使人抵抗力不足，容易引发感染性疾病。