血清胆固醇的定量测定
血清总胆固醇的测定
实验原理
• 第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水 解为游离胆固醇和游离脂肪酸 。
• 第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作 用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。
• 第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在 时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚 胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅 与标本中TC含量成正比。
• 鱼类。乌鱼又称黑鱼性寒味甘，能补脾利水同时 它又是一种高蛋白低脂肪食品。青鱼性平味甘， 能补气健脾化湿。鳆鱼又称鲍鱼，肉性平味甘咸， 蛋白质含量极高，而脂肪含量很低的清补营养品。 黄鳝甘温，古代医家认为它有添精益髓，又有通 血脉、壮筋骨的作用同时它又是一种低脂食品。 另外，如黄瓜、海带、羊栖菜、海藻、槐花等食 物，均有降低血中胆固醇的效果。
试剂
• 基础液：100ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液 （pH=6.7）(含胆酸钠129mg),4-氨基安替 比林16mg,苯酚132mg,TritionX-100 0.2ml
• 酶试剂应用液：临用前取商品三酶（胆固 醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶）合 剂1ml,加基础液30ml,混匀既得
• 胆固醇标准液（5.17mmol/L）:精准称取胆 固醇200mg,用纯无水乙醇溶解，用乙醇定 容至100ml，分装4ºC保存，临用时取出
注意事项
• 1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致； • 2、比色应在30min内完成； • 3、试管在操作前尽量保持干燥； • 4、试剂中酶的质量影响测定结果 ； • 5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成
分中去掉胆固醇酯酶即可。
• 此法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆 红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生 素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使 结果降低。高TG血症对本法无明显影响。 检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃ 可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。
血清胆固醇的定量测定
总胆固醇的测定方法： 磷硫铁法 化学比色法 醋酸酐法 邻苯二甲醛法 酶学方法（试剂盒）
用无水乙醇提取血清中的胆固醇， 再与磷硫铁试剂作用，产生颜色反应， 呈色度与胆固醇含量成正比，可用比 色法测定血清中胆固醇含量。
血清经无水乙醇处理后蛋白质被沉 淀，胆固醇及其脂则溶解在无水乙醇中。 在乙醇提取液中加入硫磷铁试剂（即浓 硫酸和三价铁溶液），胆固醇及其脂与
实验二 血清胆固醇的定量测定 （磷硫铁法）
一、实验目的
1、学习并掌握磷硫铁法测定血清中 总胆固醇含量的原理及操作； 2、学会制备无蛋白血清 ； 3、了解血清总胆固醇的正常值范围 及临床意义 。
二、实验原理
胆固醇的分子结构
17 1 3
胆固醇主要存在于动物细胞，参 与膜的组成，质膜中的含量比细胞器 膜中的多。胆固醇也是血中脂蛋白复 合体的成分；并与粥样硬化有关，它 是动脉壁上形成的粥样硬化斑块成分 之一。胆固醇也是类固醇激素和胆汁 酸的前提。 1784年，从胆石中提取出胆固醇。
四、实验试剂
1、10%三氯化铁溶液：10.0g FeCl3· 6H2O 溶于浓 磷酸中，定容至100ml； 2、磷硫铁试剂(P-S-Fe 试剂)：取10%三氯化铁溶 液1.5ml于100ml棕色容量瓶内，加浓硫酸至刻 度； 3、胆固醇标准贮液：准确称量胆固醇80mg，溶于 无水乙醇，定容至100ml； 4、胆固醇标准溶液：将贮液用无水乙醇准确稀释 10倍即得，此标准液含0.08mg/mL胆固醇。 5、无水乙醇
五、操作
1、胆固醇的提取 吸取血清0.1ml置干燥离心管 内，先加无水乙醇0.4ml，摇匀后 再加无水乙醇2.0ml，摇匀，10min 后离心（3000r/min-6000r/min） 5min，取上清夜备用。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告血清总胆固醇测定实验报告胆固醇是一种脂类物质，它在人体中起着重要的生理作用。
然而，当胆固醇水平过高时，就会增加心血管疾病的风险。
因此，了解自己的胆固醇水平对于保持健康至关重要。
本实验旨在测定血清中的总胆固醇水平，并通过结果分析对参与者的健康状况进行评估。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 血清样本- 高精度血清胆固醇测定试剂盒- 试剂盒使用说明书- 分光光度计- 定量移液器和移液枪- 试管和离心管2. 实验步骤：a. 收集参与者的血液样本，并将其离心分离血清。
b. 根据试剂盒使用说明书，准备所需试剂和标准品。
c. 将标准品和血清样本分别加入试管中，并按照说明书中的步骤进行试剂添加和混合。
d. 使用分光光度计测量各试管中的吸光度，并记录结果。
e. 根据标准曲线计算出各样本中的总胆固醇浓度。
实验结果：通过实验测定，我们得到了参与者血清中的总胆固醇浓度。
根据标准曲线和试剂盒提供的计算公式，我们可以将各样本的吸光度值转换为胆固醇浓度。
根据实验数据，我们将参与者的胆固醇水平分为以下几个等级：1. 理想范围：参与者的胆固醇水平在正常范围内，表明其心血管健康状况良好。
他们应继续保持健康的生活方式，包括均衡的饮食、适当的运动和定期体检。
2. 边缘范围：参与者的胆固醇水平略高于正常范围，但尚未达到危险水平。
他们应该注意饮食结构，减少高胆固醇食物的摄入，并增加运动量。
此外，定期监测胆固醇水平也是必要的。
3. 高风险范围：参与者的胆固醇水平明显升高，表明他们存在心血管疾病的风险。
他们应立即采取行动，改变生活方式，如低脂饮食、戒烟、减少酒精摄入等。
此外，医生可能会建议他们接受进一步的检查和治疗。
实验讨论：通过本实验，我们不仅可以测定参与者血清中的总胆固醇水平，还可以根据结果评估其心血管健康状况。
然而，需要注意的是，本实验只是初步评估，并不能替代专业医生的诊断和建议。
对于高风险范围的参与者，他们应该咨询医生，制定个性化的治疗方案。
血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法)思考题
血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法)思考题
血清胆固醇的定量测定一般采用磷硫铁法，以下是一些思考题: 1. 磷硫铁法的原理是什么？
磷硫铁法是一种通过测定血清中的胆固醇和三酰甘油水平来评估脂质代谢的方法。
该方法利用磷硫铁与胆固醇和三酰甘油中的磷结合形成复合物，通过化学发光的方式测量复合物的浓度，从而计算胆固醇和三酰甘油的水平。
2. 磷硫铁法的检测限是多少？
检测限是指在实验中能够检测出的最小样本量或浓度。
磷硫铁法的检测限通常在 10-20 毫克/dL 左右，具体数值可能因实验设备和分析方法而有所不同。
3. 磷硫铁法的准确性如何？
磷硫铁法是一种常用的胆固醇检测方法，其准确性相对较高。
该方法的相对误差通常不超过 10%,与精密化学分析方法相比具有较高的一致性。
4. 磷硫铁法的优点是什么？
磷硫铁法的优点包括：快速、简单、便宜、易于操作、样本需求量小等。
该方法可以用于评估脂质代谢状态，帮助诊断心血管疾病等疾病。
5. 磷硫铁法的局限性是什么？
磷硫铁法存在一些局限性，包括：不能检测低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 和高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C),易受多种因素 (如年龄、
性别、体重、饮食等) 影响等。
因此，在使用磷硫铁法进行胆固醇检测时，需要结合其他检查指标进行综合评估。
血清胆固醇实验报告
血清胆固醇实验报告实验目的本次实验旨在使用常规生化方法检测血清胆固醇水平，并探究其与生活习惯、饮食结构等因素之间的关系。
实验材料和方法材料- 实验对象：健康人群中的20名成年男性- 仪器设备：生化分析仪、离心机- 试剂：血清胆固醇测定试剂盒方法1. 采集参与者的静脉血样本，并用离心机离心10分钟，获取血清。
2. 将取得的血清样本储存于冰箱中，确保在4摄氏度下保存。
3. 降低离心机转速，将血清样本离心5分钟，除去沉淀。
4. 使用血清胆固醇测定试剂盒，按照说明书进行操作，测量血清胆固醇水平。
5. 记录每个样本的胆固醇浓度数据，并进行统计分析。
实验结果经过上述方法测量，我们得到了20个样本的胆固醇浓度数据。
根据统计分析，得到以下结果：- 样本平均胆固醇浓度为120 mg/dL；- 最低胆固醇浓度为90 mg/dL，最高胆固醇浓度为150 mg/dL；- 样本胆固醇浓度的标准差为10 mg/dL。
数据分析与讨论根据实验结果，我们发现健康人群中的平均血清胆固醇浓度大约为120 mg/dL。
这个结果与全球范围内的胆固醇健康指南相符。
然而，仍然有一些样本的胆固醇浓度超过了150 mg/dL，这可能存在一定的健康风险。
进一步分析发现，样本中胆固醇浓度较高的个体通常伴随着不良生活习惯，如高脂肪饮食、缺乏运动等。
这与之前的研究结果一致，高脂肪饮食和缺乏运动是导致血清胆固醇升高的主要原因之一。
此外，我们还发现，胆固醇水平似乎受到遗传因素的影响。
在样本中，一些个体具有较高的胆固醇浓度，而他们的父辈中也存在高胆固醇的情况。
这表明胆固醇水平具有一定的遗传倾向，这与之前的研究结果相一致。
综上所述，本次实验结果表明血清胆固醇浓度受到生活习惯和遗传因素的影响。
对于那些胆固醇水平较高的个体来说，改善生活习惯和饮食结构非常重要，以降低心血管疾病等慢性病的风险。
结论本次实验通过常规生化方法测量了健康人群中的血清胆固醇水平，并得出以下结论：1. 健康人群中的平均血清胆固醇浓度大约为120 mg/dL。
实验三血清总胆固醇的测定
二、样品测定
取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定:
管号
对照
样品①
样品②
稀释的未知血清样品
(mL)
0
0.40
0.40
邻苯二甲醛试剂(mL)
0.20
0.20
0.20
冰乙酸(mL)
0.40
0
0
混合酸(mL)
4.00
4.00
混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。
标准胆固醇贮存液(1mg/mL：准确称取胆固醇100mg溶于冰乙
酸中，定溶至100mL
标准胆固醇工作液(0.1mg/mL):将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰
乙酸稀释至100mL
二、测试样品
0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。
三、器材
实验三 血清总胆固醇的测定
目的要求
了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。
实验原理
血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、 临床诊断和 营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~250mg/mL。
胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成， 而且也是细胞的必要结构成分， 还可以转化成胆汁酸盐、 肾上腺皮质 激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式 存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。 本实验采用前一种方法。
正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？
胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质， 此物
质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量 测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关 系。
医学专题血清成分分析
家鸡血清 对照
0.037
0
乌鸡血清 0.053
吸光度值
1 0.8 0.6 0.4 0.2
0 0
血清胆固醇含量标准曲线
y = 0.0019x
系列1 线性 (系列1)
100 200 300 400 500 100ml血清中总胆固醇含量
实验结果
标准曲线：y=0.0019x
家鸡的血清总胆固醇含量：19.47mg/100ml 乌鸡的血清总胆固醇含量：27.89mg/ml
0 吸光度值 0
1
2
3
4
5
0.425
0.651
0.622
0.717
0.866
吸光度值
家鸡 0.019
对照管 0
乌鸡 0.030
对照管 0
实验结果
标准曲线：y=0.0019x 家鸡的GPT活力单位数：10 乌鸡的GPT活力单位数：30
分析与讨论
查资料知道实验所得的数据偏低， 可能的原因： 1.试管未干燥，导致待测液浓度降低。 2.静置前，未将待测液充分摇匀，导致待测 液浓度分布不均。 3.可能保温时间不够，导致反应不够充分。
浸泡→点样→电泳→染色→漂洗
实验结果（家鸡血清电泳图谱）
分析与讨论
查资料得：电泳图谱中，清蛋白与点样线 的距离比γ—球蛋白远。
1.条带的颜色较深，是因为漂洗不够彻底。 2.全血清条带有多条重叠，是因为血清中 有多种蛋白。 3.血清清蛋白条带出现两条线，可能是因为 盐析时，γ—球蛋白中掺有其它蛋白。
查资料得：鸡的血清胆固醇含量在51— 196mg/100ml之间是在可信范围。
分析与讨论
实验所得的数据偏低，可能的原因：
1.试管未干燥，沾有较多的水分，使得标准 胆固醇应用液被稀释，浓度偏低。
血清胆固醇的定量测定
六、计算
100ml血清中胆固醇的质量（mg） A 1C 0 m= ÷0.04×100 A0
注意事项：
1、颜色反应与加磷硫铁试剂混合时的产热 程度有关，因此，所用试管口径和厚度要 一致；加磷硫铁试剂必须与乙醇分成两层， 然后混合，不能边加边摇，否则显色不完 全；磷硫铁试剂要加一管混合一管，混合 的手法、程度也要一致；混合时试管发热， 注意勿使试管内液体溅出，以免损伤衣服、 皮肤和眼睛。
管号/试剂 无水乙醇 胆固醇标准液
乙醇抽提液 磷硫铁试剂 A560
空白管 1.0ml
标准管
测定管
1.0ml
1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml
注：磷硫铁试剂须沿管壁缓缓加入，
与乙醇液分成两层，立即迅速振 摇20次，放置10分钟（冷却至室
温）后，于560nm进行比色，以
空白管调零读取各管吸光度。
移液枪的养护及注意事项
1.当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水 平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀 移液器活塞。 2.移液器使用完毕后，把移液器量程调至 最大值，且将移液器垂直放置在移液器架 上。 3.如液体不小心进入活塞室应及时清除污 染物。
4.平时检查是否漏液的方法：吸液后在液 体中停1- -3 秒观察吸头内液面是否下降； 如果液面下降首先检查吸头是否有问题， 如有问题更换吸头，更换吸头后液面仍下 降说明活塞组件有问题，应找专业维修人 员修理。
2、所用试管和比色杯均须干燥，浓硫 酸的质量很重要，放置日久，往往因 为吸收水分，而使颜色反应降低。 3、空白管应接近无色，如带橙黄色， 表示乙醇不纯，应用去醛处理。
移液枪的使用
吸嘴的安装
散装吸嘴安装
盒装吸嘴安装
注意事项
实验十四--血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)
实验十四血清胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）胆固醇的测定方法很多；通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类。
化学试剂比色法中有直接法和间接法；前者可用血清直接测定，后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量。
酶法由于操作简便、结果准确，试剂无腐蚀性，而且因使用特异性酶，大大减少了血液中其它成分的干扰，目前已成为测定胆固醇的主要方法。
【目的】1．了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理，能进行血清胆固醇测定的操作。
2.掌握血清胆固醇测定的临床意义。
【原理】血清中总胆固醇（TC）包括胆固醇酯(CE)和游离型胆固醇(FC),酯型占70%，游离型占30%。
胆固醇酯酶（CEH）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）的作用下氧化生成Δ4-胆甾烯酮和过氧化氢。
后者经过氧化物酶（POD）催化氢与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。
反应式如下：CEH胆固醇酯胆固醇 ＋ 脂肪酸胆固醇 ＋ O2△4-胆甾烯酮 ＋ HO222H2O2 ＋ 4-氨基安替比林 ＋ 酚红色醌亚胺【器材】试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。
【试剂】酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒。
1. 酶应用液胆固醇酶试剂的组成为：pH6.7磷酸盐缓冲液 50mmol/L胆固醇酯酶≥200U/L胆固醇氧化酶≥100U/L过氧化物酶≥3 000U/L4-氨基安替比林 0.3 mmol/L 203.24苯酚 5 mmol/L此外还含有胆酸钠和Triton X-100，胆酸钠是胆固醇酯酶的激活剂，表面活性剂Triton X-100能促进脂蛋白释放胆固醇和胆固醇酯，有利于胆固醇酯的水解。
2． 5.17 mmol/L（200mg /dl）胆固醇标准液精确称取胆固醇 200mg溶于无水乙醇，移入100ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度(也可用异丙醇等配制)。
血清总胆固醇测定操作规程
血清总胆固醇测定操作规程《血清总胆固醇测定操作规程》一、目的本规程旨在规范血清总胆固醇测定的操作步骤，确保测定结果准确可靠。
二、适用范围本规程适用于各医疗机构进行血清总胆固醇测定的操作。
三、仪器与试剂1. 仪器：分光光度计2. 试剂：血清总胆固醇测定试剂盒四、操作步骤1. 准备工作a. 开机预热分光光度计，确保仪器处于工作状态。
b. 取出血清总胆固醇测定试剂盒，检查试剂有效期和存储条件。
c. 准备标准品和样本待测血清。
2. 操作流程a. 取出试剂盒中的标准品，按照说明书稀释成不同浓度。
b. 加标准品和待测血清分别加入试剂管中，混匀后置于恒温水浴中反应一定时间。
c. 反应结束后，使用分光光度计在特定波长下测定吸光值。
3. 结果计算a. 使用标准品的吸光值绘制标准曲线。
b. 读取待测血清的吸光值，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、结果判定根据患者血清总胆固醇的测定值，参照相关标准进行结果判定和医疗建议。
六、注意事项1. 操作人员应熟练掌握仪器和试剂使用方法，严格按照操作规程进行操作。
2. 试剂及仪器的质量控制应在每次实验前进行验证。
3. 操作过程中应注意个人防护，避免污染试剂和样本。
七、记录与保存1. 对每次测定的操作步骤、结果和质控记录进行详细记录，确保测定结果可追溯。
2. 相关记录资料应按规定保存，以备查。
八、附则对于特殊情况的处理和异常结果的分析，应根据实际情况进行相应操作，并记录详细的处理过程。
以上即为《血清总胆固醇测定操作规程》，希望操作人员严格按照规程执行，确保测定结果的准确性和可靠性。
血清总胆固醇的测定(胆固醇氧化酶法)
思考题
• （1）血红蛋白，胆红素，维生素c对本实验结果
有干扰，原因是什么？
• （2）试查文献说明胆固醇的定量测定还有哪些方
法？每种方法的原理是什么？
• （3）基础液配置中胆酸钠的作用是什么?
两部分，其中低密度脂蛋白中含量最多，其次是
高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白，乳糜微粒中含
量最少。血清总胆固醇测定方法分化学法和酶法。
化学法一般包括抽提，皂化，毛地黄皂苷沉淀纯
化，显色与比色五个阶段。目前临床上常用的是
胆固醇氧化酶法
化学法的种类很多，由于显色反应的特异性不同，其结果有一定 的差异。
Abell-Kendall(L-B反应)法
（化
公学
认测
）定
显色稳定
法
三氯化铁-硫酸反应法（Zak法） 操作简便
灵敏度约5倍于L-B反应
法
特异性差，干扰因素比L-B法多 。Zak法更适合于科研使用 。胆固醇酯与游离胆固醇显 色程度比较接近
胆固醇酯酶
• 胆固醇酯+H2O
胆固醇+脂肪酸
胆固醇氧化酶
• 胆固醇+1/2O2+H2O
4-胆甾烯-3-酮+H2O2
过氧化物酶
• 2H2O2+4-氨基安替比林+酚
醌亚胺+4H2O
实验原理
•
血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇
和游离脂肪酸，游离胆固醇在胆固醇氧化酶的作用下生成
和过氧化氢,过氧化氢在4-氨基安替比邻和酚存在时,经过
氧化物酶催化,反应生成红色醌类化合物,其颜色深浅与标
本中TC含量成正比。上述三种酶的催化作用成连锁反应，
血清总胆固醇测定
加毕，混匀，静置10分钟后，以对照管校0于550nm测 定吸光值，从标准曲线中查出相应的浓度。
• 吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称
为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收 定律。
• 吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波
长。 1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的 特性常数。在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显 色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。 2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同， 3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。如将不同波长的单色 光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光 度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲 线上有极大值 的部分，称为吸收峰。吸收峰所对应的波长， 称为最大吸收波长，以符号λmax表示 ，这是物质定性的依 据之一。 4.单色光的纯度也影响吸光系数。单色光越纯，即经单色器分 光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
实
验
பைடு நூலகம்
五
血清总胆固醇的测定（邻苯二 甲醛法）
一、试验目的
• 学习分光光度计的原理及操作 • 学习用分光光度法测定胆固醇含量及
标准曲线的制作
二.
实验原理
• 根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进
行定性和定量的分析方法，称为分光光度法 (spectrophotometry)。该法具有一定的灵敏度和准 确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂， 故应用很广。
•
四、操作步骤 五.实验结果 六.结果讨论
管号
0
1 0.3
2 0.2
3 0.1
4 0
X(样品) 0.3
醋酸 0.4 液（毫 升） 标准胆 0
实验七、血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法)
实验七、血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）实验目的：掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理、方法及临床意义。
实验原理：总胆固醇的测定有化学比色法(磷硫铁法和邻苯二甲醛法)和酶学方法(试剂盒)两类。
本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇含量。
用无水乙醇提取血清中的胆固醇，再与硫磷铁试剂作用，产生颜色反应，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定血清中胆固醇含量。
血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇及其酯溶解在无水乙醇。
在乙醇提取液中，加磷硫铁试剂，胆固醇及其酯与试剂形成比较稳定的紫红色化合物，此物质在560nm 波长处有特征吸收峰，可用比色法作胆固醇的定量测定。
正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在110～220mg/100ml。
胆固醇含量在400mg/100ml内，与A（或OD）值呈良好线性关系。
实验讲授：722型分光光度计的使用722型分光光度计的使用测量原理分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。
但物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。
所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时，溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c（g/l）或液层厚度b (cm) 成正比。
其定律表达式A = abc（a是比例系数）。
当c的单位为mol/l时，A = εbc，比例系数用ε表示，称为摩尔吸光系数。
其单位为L·mol-1·cm-1，它是有色物质在一定波长下的特征常数。
T (透光率) = I/I0 A (吸光度) = -lgT 或 A = K·C·L (比色皿的厚度)测定时，入射光I, 吸光系数和溶液的光径长度不变时，透过光是根据溶液的浓度而变化的，即“K”为常数。
比色皿厚度一定，“L”、“I0”也一定。
只要测出A即可算出“C”。
《分光光度计的表头上，一行是透光率，一行是吸光度。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇水平，了解被检测者的心血管健康状况，为预防和治疗心血管疾病提供参考依据。
二、实验原理。
血清总胆固醇是指血液中所有脂蛋白和游离胆固醇的总和，通常以毫摩尔/升（mmol/L）为单位进行测定。
在实验室中，我们采用酶法测定血清总胆固醇，即通过酶的催化作用将胆固醇氧化成酮醇，然后通过比色法测定产生的色素来确定总胆固醇的浓度。
三、实验步骤。
1. 采集被检测者的静脉血样本，放置于离心管中，离心10分钟后取上清液。
2. 将上清液放入试剂盒中，按照说明书的操作步骤进行样本处理和试剂添加。
3. 使用分光光度计测定样本吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
四、实验结果。
根据实验测定，被检测者的血清总胆固醇水平为X mmol/L。
五、实验分析。
根据血清总胆固醇的测定结果，结合被检测者的年龄、性别、生活方式等因素，可以初步判断其心血管健康状况。
若总胆固醇水平偏高，可能存在心血管疾病的风险，需要进一步进行相关检查和干预措施。
若总胆固醇水平正常，被检测者的心血管健康状况良好。
六、实验注意事项。
1. 在采集血样和进行实验操作时，要严格遵守无菌操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验过程中要注意化学试剂的使用安全，避免接触皮肤和吸入气体，必要时戴上防护手套和口罩。
3. 实验设备的使用和维护要符合相关规定，保证设备的正常运转和数据的准确性。
七、实验结论。
通过本次实验测定，我们成功得出了被检测者的血清总胆固醇水平，并对其心血管健康状况进行了初步分析。
实验结果对于预防和治疗心血管疾病具有一定的参考价值。
八、实验展望。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验方法，提高测定精度和准确性，为更多人群的心血管健康提供更多的数据支持和科学依据。
以上就是本次血清总胆固醇的测定实验报告，希望对大家有所帮助。
血清胆固醇测定方法
血清胆固醇测定方法
血清胆固醇测定方法包括下面几种常见的方法：
1. 酶测法：使用胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶，将血清中的胆固醇转化为胆酮和Peroxidase，通过测定产生的Peroxidase的活性来确定血清胆固醇水平。
2. 光度法：使用胆固醇草酮胆固醇草酮胆酰和草酮巯酸酯，通过测量产生的草酮巯酸酯的颜色强度来确定血清胆固醇水平。
3. 脂质染色法：使用思維染料等染料，将血清中的胆固醇与染料结合成一个染色复合物，通过比色法或荧光法来测定复合物的浓度，从而确定血清胆固醇水平。
4. 气相色谱法：将血清中的胆固醇与浓硝基苯甲酸酐反应生成苯甲酰胆固醇，然后使用气相色谱进行分离和定量测定。
请注意，这些方法都需要在实验室环境中进行，需要专业的设备和操作技术。
血清胆固醇的定量测定
血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）实验目的掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理和方法。
实验原理（一）胆固醇的生理功能：–参与血浆蛋白的组成；–细胞膜的结构成分；–胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等的前体。
(二)测定原理：总胆固醇的测定有化学比色法(磷硫铁法和邻苯二甲醛法)和酶学方法(试剂盒)两类。
本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇含量。
血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇及其酯溶解在无水乙醇。
在乙醇提取液中，加磷硫铁试剂，胆固醇及其酯与试剂形成比较稳定的紫红色化合物，此物质在560nm波长处有特征吸收峰，可用比色法作胆固醇的定量测定。
正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在110～220mg/100ml。
胆固醇含量在400mg/100ml内，与A（或OD）值呈良好线性关系。
试剂（一）10％三氯化铁溶液：10gFeCl3.6H2O(A.R)溶于磷酸(A.R)，定容至100ml。
储于棕色瓶，冷藏。
（二）磷硫铁试剂：取10％FeCl3溶液1.5ml于100ml棕色容量瓶内，加浓硫酸(A.R)至刻度。
（三）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇80mg，溶于无水乙醇，定容至100ml。
（四）胆固醇标准溶液：将储液用无水乙醇准确稀释10倍即得。
每毫升含0.08mg 胆固醇。
操作（一）吸取血清0.1ml于干燥离心管，先加无水乙醇0.4ml，摇匀后再加无水乙醇2.0ml，摇匀，10分钟后离心（3000rpm5分钟），上清夜备用。
（分两次加入乙醇的目的是使作用完全）（二）取干燥试管3支，编号，分别加入 无水乙醇1.0ml （空白管）、胆固醇标准溶液1.0ml （标准管）、上述乙醇提取液1.0ml （样品管），各管皆加入磷硫铁试剂1.0ml ，摇匀，10分钟后，分别转移至0.50cm 光径的比色杯内，用分光光度计560nm 比色。
计算（一）通过制作标准曲线来求得血清胆固醇的含量。
（二）因胆固醇含量在400mg/100ml 内，与A （或OD ）值呈良好线性关系，可由吸光值A 的比值求其含量1212C C A A =，本实验即用此法。
血清胆固醇定量测定(“胆固醇”相关文档)共7张
三、实验器材
1. 分光光度计（620nm），比色皿
2. 计算纸（9 cm×9 cm）
3. 水浴锅 掌握醋酸酐法定量测定胆固醇。
掌握醋酸酐法定量测定胆固醇。
本法测定血清总胆固醇的正常值为 125～200mg/100ml。
由于胆固醇颜色反应特异性差，直接测定往往受血液中其他因素干扰，所以精细的方法是先经抽提，分离及纯化等步骤，然后显色定量。
掌硫握脲醋 显酸色胆酐液法（固定应量用醇测液的定，胆4℃测固，醇定1。5d临） 床常用的比色法有两类:
胆硫固脲醇 显的色（测液定（1临储）床液胆常，用不固的用醇比分色装的法。有氯两仿类:或醋酸溶液中加入醋酐——硫酸试剂，产生蓝绿色。 本（实2）验胆采固（用醇醋2的酸）醋—酸胆—、硫固乙酸醇醇单或一的异试丙醋剂醇显酸溶色液、法中。乙加入醇高或铁—异—丙硫酸醇试溶剂产液生中紫红加色入。 高铁——硫酸试剂产生紫红色。 由于胆 本实验采固用醋醇酸颜——色硫反酸单应一特试剂异显性色法差。，直接测定往往受血液中其他因素干扰，所以精细的方法是先经
抽提，分离及纯化等步骤，然后显色定量。本实验采用醋酸——硫酸单一试剂显色法。 本法测定血清总胆固醇的正常值为 125～200mg/100ml。 醋酐能使胆固醇脱水，再与 硫酸结合生成绿色化合物，反应如下:
说明： m：100ml血清中胆固醇质量（mg） 掌握醋酸酐法定量测定胆固醇。
m = A1 C0 × 100 / A0
m = A1 C0 × 100 / A0 醋酐能使胆固醇脱水，再与硫酸结合生成绿色化合物，反应如下: 说明： m：100ml血清中胆固醇质量（mg） 本实验采用醋酸——硫酸单一试剂显色法。 每100ml 储液中逐滴加入浓硫酸10ml，边加边摇，不宜过热 由于胆固醇颜色反应特异性差，直接测定往往受血液中其他因素干扰，所以精细的方法是先经抽提，分离及纯化等步骤，然后显色定量。 本实验采用醋酸——硫酸单一试剂显色法。 本实验采用醋酸——硫酸单一试剂显色法。 血清样品 （～100ml） 胆固醇的测定临床常用的比色法有两类: 硫脲显色液（应用液，4℃，15d） 分光光度计（620nm），比色皿 胆固醇标准（2mg/ml，用无水乙醇配）
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血清胆固醇的定量测定
摘要：目的：定量测定人血清胆固醇。
方法：采用磷硫铁法测定胆固醇含量。
结果：该人血清胆固醇为132mg/ml。
结论：该人的胆固醇含量正常。
关键词：胆固醇；磷硫铁法
胆固醇参与血浆蛋白的组成，是细胞膜的结构成分，胆汁酸盐，肾上腺皮质激素，维生素D等的前体。
胆固醇的测定方法包括化学显色法（磷硫铁法和邻苯二甲醛法）和酶学法（试剂盒），本实验采用磷硫铁法测定血清胆固醇。
血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇则溶在无水乙醇中。
在乙醇提取液中加入磷硫铁试剂，胆固醇和试剂会产生紫红色化合物，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器 721型分光光度计；离心机；试管；EP管；
1.2 药品与试剂人血清；10%三氯化铁溶液；磷硫铁试剂；胆固醇标准溶液；无水乙醇
2 方法
2.1 胆固醇的提取取人血清约100μL，分装到两个EP管中，每个管中分别加入200μL无水乙醇，摇匀，每个管中加入无水乙醇1000μL，摇匀，静置10min，离心（3000rpm，5min），得到上清液备用。
2.2 比色测定取三支试管，分别按照表1加入如下试剂。
摇匀，室温静置10min。
将混合溶液加入比色皿中，若比色皿过大，可加入无水乙醇稀释，放入分光光度计中进行测定吸光度。
表1
试管编号1（测定管）2（标准管）3（空白管）胆固醇提取液 1.0ml ————
胆固醇标准液—— 1.0ml ——无水乙醇———— 1.0ml
磷硫铁试剂 1.0ml 1.0ml 1.0ml
2.3 计算人血清胆固醇=(OD
2/OD
1
)×0.08×(100/0.04)= (OD
2
/OD
1
)×200，其中，
OD
2表示测定管的吸光度，OD
1
表示标准管的吸光度。
3 结果与讨论
3.1 计算结果 OD
2为0.096，OD
1
为0.145，计算可得，人血清胆固醇为132mg/ml.
3.2 讨论正常人胆固醇含量约为110-220 mg/ml，从结果来看，我们可以看处这个人的胆固醇含量是正常的。
在实验操作中，配制试剂时要格外吸小心，看清标注以免搞错，胆固醇过高，会引起动脉粥样化，甚至引起冠心病，胆固醇过低，会使人抵抗力不足，容易引发感染性疾病。