离子结合型果胶含量试剂盒说明书(分光光度法
苏州格锐思生物科技有限公司多聚半乳糖醛酸酶(PG)试剂盒说明书
多聚半乳糖醛酸酶（ploygalacturonase，PG）试剂盒说明书（货号：G0701F分光法48样）一、产品简介：果胶酶是指分解果胶的多种酶，主要包括多聚半乳糖醛酸酶(PG)，果胶裂解酶(PL)，果胶甲酯酶(PME)和原果胶酶，贮藏过程中起作用的主要是PG。
所以该酶在食品贮藏保鲜和植物抗病性等领域具有较高的研究价值。
果胶在多聚半乳糖醛酸酶(PG)作用下，能水解产生带有具有还原性醛基的半乳糖醛酸。
与DNS试剂反应生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
二、试剂盒组成和配制：试剂名称规格保存要求备注提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二液体20mL×1瓶4℃保存试剂三液体46mL×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存若重新做标曲，则用到该试剂三、所需仪器和用品：可见分光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、台式离心机、天平、可调式移液器、水浴锅、研钵、冰。
四、多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性检测：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.2g组织（水分充足的样本可取1g），加入1mL经预冷的95%乙醇冰浴匀浆，4℃放置10min；12000rpm，4℃离心5min；弃上清，留沉淀，向沉淀中加入经预冷的80%乙醇混匀，4℃放置10min；12000rpm，4℃离心5min；弃上清，留沉淀。
再向沉淀中加入1mL经预冷提取液，涡旋混匀，4℃放置10min；12000rpm，4℃离心10min；留上清，弃沉淀。
上清液置冰上待测。
②液体样本：直接检测。
若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：①分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
②在EP管中依次加入：试剂名称（μL）测定管对照管样本6060试剂一390试剂二39040℃水浴30min试剂三450450沸水浴（95-100℃）5min，冰浴或淋浴冷却后，全部转移于1mL玻璃比色皿中，540nm处测定吸光值A，△A=A测定管-A对照管（每个测定管设一个对照管）。
果胶的提取与果胶含量的测定
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载果胶的提取与果胶含量的测定地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容果胶的提取与果胶含量的测定一、引言果胶广泛存在于水果和蔬菜中，如苹果中含量为0.7—1.5%（以湿品计），在蔬菜中以南瓜含量最多（达7%-17%）。
果胶的基本结构是以α-1，4苷键连接的聚半乳糖醛酸，其中部分羧基被甲酯化，其余的羧基与钾、钠、铵离子结合成盐。
在果蔬中，尤其是未成熟的水果和皮中，果胶多数以原果胶存在，原果胶通过金属离子桥（比如Ca2+）与多聚半乳糖醛酸中的游离羧基相结合。
原果胶不溶于水，故用酸水解，生成可溶性的果胶，再进行提取、脱色、沉淀、干燥，即为商品果胶。
从柑橘皮中提取的果胶是高酯化度的果胶（酯化度在70%以上）。
在食品工业中常利用果胶制作果酱、果冻和糖果，在汁液类食品中作增稠剂、乳化剂。
二、实验材料、试剂与仪器材料：桔皮，苹果等；试剂：0.25% HCL，95%乙醇（AR），精制乙醇，乙醚，0.05mol/L HCl，0.15%咔唑乙醇溶液，半乳糖醛酸标准液，浓硫酸（优级纯）仪器：分光光度计，50mL比色管，分析天平，水浴锅，回流冷凝器，烘箱等三、实验步骤（一）果胶的提取1、原料预处理：称取新鲜柑橘皮20g（或干样8g），用清水洗净后，放入250mL容量瓶中，加水120mL，加热至90℃保持5-10min，使酶失活。
用水冲洗后切成3～5mm的颗粒，用50℃左右的热水漂洗，直至水为无色、果皮无异味为止（每次漂洗必须把果皮用尼龙布挤干，在进行下一次的漂洗）。
2、酸水解提取：将预处理过的果皮粒放入烧杯中，加约60mL 0.25% HCL 溶液，以浸没果皮为宜，调pH至2.0～2.5，加热至90℃煮45min，趁热用100目尼龙布或四层纱布过滤。
NYT2016-2011水果及其制品中果胶含量的测定分光光度法
NY/T 2016—2011 水果及其制品中果胶含量的测定 分光光度法1 范围本标准规定了用分光光度法测定水果及其制品中果胶含量的方法。
本标准适用于水果及其制品中果胶含量的测定。
本标准方法线性范围为1 mg／L～l00 mg／L，检出限为0.02 g／kg。
2 规范性引用文件下列文件对本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB／T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理用无水乙醇沉淀试样中的果胶，果胶经水解后生成半乳糖醛酸，在硫酸中与咔唑试剂发生缩合反应,生成紫红色化合物，该化合物在525 nm处有最大吸收，其吸收值与果胶含量成正比，以半乳糖醛酸为标准物质，标准曲线法定量。
4 试剂除非另有说明，所用水应达到GB／T 6682规定的三级水要求，所用试剂均为分析纯试剂。
4.1无水乙醇(C2H6O)。
4.2 硫酸（H2SO4，优级纯）。
4.3 咔唑(C12 H9N)。
4.4 67%乙醇溶液：无水乙醇＋水= 2+1。
4.5 pH0.5的硫酸溶液：用硫酸调节水的pH至0.5。
4.6 40 g／L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠，用水溶解并定容至100 mL。
4.7 1 g／L咔唑乙醇溶液：称取0.100 0 g咔唑，用无水乙醇溶解并定容至100 mL。
作空白实验检测，即1 mL水、0.25 mL咔唑乙醇溶液和5 mL硫酸混合后应清澈、透明、无色。
4.8 半乳糖醛酸标准储备液：准确称取无水半乳糖醛酸0.100 0 g，用少量水溶解，加入0.5 mL氢氧化钠溶液(4.6)，定容至100 mL，混匀。
此溶液中半乳糖醛酸质量浓度为1 000 mg／L。
4.9半乳糖醛酸标准使用液：分别吸取0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL半乳糖醛酸标准储备液(4.8)于50 mL容量瓶中,定容，溶液质量浓度分别为0.0 mg／L、20.0 mg／L、40.0 mg／L、60.0 mg／L、80.0 mg／L、100.0 mg／L。
多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2660规格:50T/24S产品简介：多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase,PG）属果胶酶的一种，广泛存在于植物、细菌及真菌中。
其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物时，可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁，进而导致病程发展。
PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。
若溶液中有晶体析出，37℃水浴溶解。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入8mL蒸馏水，60℃水浴助溶。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1支，10mg半乳糖醛酸，4℃保存。
临用前加入0.943mL蒸馏水，配成50μmol/mL 的标准液。
操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照质量（g）:蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，16000g，离心10min，取上清置于冰上待测。
细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万个细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后4℃，16000g，离心10min取上清置于冰上待测。
液体：直接检测或用提取液稀释后检测。
果胶甲酯化程度试剂盒说明书
果胶甲酯化程度试剂盒说明书 微量法100T/96S注 意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：植物细胞壁中的果胶是植物初生细胞壁的主要成分，除了起结构支撑、物质运输等作用外，还具有抵抗逆境的作用。
果胶甲酯化程度影响了细胞壁的坚韧程度及其抗性。
测定原理：果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇，甲醇与2,4-戊二酮反应显色，在412nm 下测定吸光值；同时半乳糖醛酸在70℃下与浓硫酸反应生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲酰基-2-呋喃甲酸与3,5-二甲基苯酚反应产生有色物质，在450nm 下有最大吸光值。
以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值代表果胶甲酯化程度。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水、硫酸。
试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体3mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体 2.5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃避光保存；临用前加入22mL 试剂六充分溶解待用，用不完的试剂4℃避光保存。
试剂六：液体25mL×1 瓶，4℃保存。
试剂七：液体3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂八：液体 2.5mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取：称取约0.1g 组织，加入1mL 蒸馏水，进行冰浴匀浆。
10000g 4℃离心10min，弃上清，留沉淀。
沉淀中加入1mL 提取液，混匀后90℃水浴2h，冷却至室温，10000g4℃离心10min，取上清待测。
测定操作表：1．甲醇生成量测定：试剂名称（μL）空白管测定管样本50提取液50试剂一25 25混匀，室温静置30min试剂二25 25试剂三20 20混匀，冰浴至紫色褪去，约需要15-30min试剂四20 20水60 60试剂五200 200混匀，60℃反应15min。
原果胶检测试剂盒(咔唑比色法)
原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑比色法)简介：天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pectin)、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、茎、叶中，是细胞壁的一种组成成分，它们伴随纤维素而存在，构成相邻细胞中间层粘结物，使植物组织细胞紧紧黏结在一起。
原果胶是不溶于水的物质，但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下，加水分解转变成水溶性果胶。
果胶(Pectin)又称多聚半乳糖醛酸，是由D-半乳糖醛酸以α-1,4糖苷键连接形成的直链状聚合物，本质上是一种线形的多糖聚合物，含有数百个脱水半乳糖醛酸残基。
原果胶是一种非水溶性的物质，在未成熟的果实或植物组织中果胶物质大多与纤维素结合以原果胶的形式存在，原果胶能使果实或其他植物组织坚硬、变脆。
Leagene 原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑比色法)检测原理是果胶物质水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，该化合物呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比，该化合物颜色在反应内呈色最深，当反应液颜色最深时在波长处测定吸光度，通过与标准曲线比较，计算出样品中原果胶或可溶性果胶含量。
该试剂盒主要用于定量检测植物组织或果实中原果胶含量，亦可用于定量检测植物组织或果实中可溶性果胶含量，进而计算出总果胶含量(为原果胶含量与可溶性果胶含量之和)。
该25T试剂盒可以检测25-30左右个样本。
该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：编号名称TC212325TStorage试剂(A): 果胶标准(1mg/ml) 1ml 4℃避光试剂(B): SP Lysis buffer 2×500ml RT试剂(C): PP Lysis buffer 100ml RT使用说明书1份1、蒸馏水2、浓硫酸3、实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织4、研钵或匀浆器5、试管6、离心机7、水浴锅8、比色杯9、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、可溶性及原果胶提取：①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于研钵或匀浆器。
果胶酯酶(pectinesterase ,PE )试剂盒说明书
货号: QS2628 规格：20样果胶酯酶（pectinesterase，PE）试剂盒说明书电位滴定法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：果胶酯酶属果胶酶系，催化水解果胶中甲氧基生成果胶酸，从而增加果胶在水中的溶解度，广泛存在于高等植物和可以降解细胞壁的细菌和真菌中，起内源调控植物细胞壁上及细胞之间果胶含量的作用，在食品工业中具有及其重要的作用和开发前景。
测定原理：果胶酯酶催化水解果胶分子释放H+，是反应体系的的pH下降，用碱液保持体系的pH始终保持在7，通过碱消耗的量反映果胶酯酶的活性。
需自备的仪器和用品：天平、研钵、常温离心机、自动电位滴定仪。
试剂的组成和配制：提取液：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前每瓶加双蒸水100mL充分溶解。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加少量蒸馏水于50℃加热溶解，冷却后转入1L容量瓶，用蒸馏水定容。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加少量蒸馏水溶解，转入1L容量瓶，用蒸馏水定容。
样品处理：将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液体积(mL)为1: 10的比列（建议取约0.5g样品，加入5mL提取液）冰浴研磨，再于8000g、4℃离心15min，取上清液待测。
测定操作：1.试剂一于50℃保温10min，同时打开电位滴定仪，用蒸馏水清洗仪器。
2.用试剂二补液，补液结束后用取50mL试剂一，用试剂二滴定到pH为7。
3.加入待测样品5mL，将滴定延迟时间设为180s，用试剂二滴定至pH为7。
4.滴定结束后记录消耗的试剂二体积V（mL）和滴定至终点所需时间T（S）。
计算公式：酶活定义：每g组织每秒钟消耗NaOH的量定义为一个酶活单位。
PE活性（U/g 鲜重）= V/(T-180)×F/WV：滴定所消耗的NaOH的量，mL；T-180：反应时间，S；F：样品稀释倍数；W：样品质量，g注意事项：1.补液结束后检查输液管中是否有气泡，有气泡要补液清除气泡后再进行样品滴定。
果胶酯酶（PE）活性检测试剂盒说明书
果胶酯酶（PE ）活性检测试剂盒说明书NaOH 滴定法货号：BC2700规格：50T/48S 、100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称50T 规格100T 规格保存条件提取液粉剂×1瓶粉剂×2瓶室温保存试剂一粉剂×1瓶粉剂×1瓶室温保存试剂二液体1.5mL×1支液体3mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体10mL×1瓶液体20mL×1瓶2-8℃保存50T 溶液的配制：1、提取液：临用前加入100mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂4℃避光可保存3个月；2、试剂一：临用前加入100mL 蒸馏水，磁力搅拌50℃加热溶解3小时左右至完全溶解，转移至250mL 容量瓶，蒸馏水定容至250mL ；用不完的试剂4℃可保存8周；（因试剂一较难配制，建议客户提前制备）3、试剂三工作液：临用前根据样本量取出部分试剂三，用蒸馏水稀释16倍得到试剂三工作液备用，现配现用，用不完的试剂4℃可保存1周；100T 溶液的配制：1、提取液：临用前取1瓶加入100 mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂4℃避光可保存3个月；2、试剂一：临用前加入100mL 蒸馏水，磁力搅拌50℃加热溶解3小时左右至完全溶解，转移至500mL 容量瓶，蒸馏水定容至500mL；用不完的试剂4℃可保存8周；（因试剂一较难配制，建议客户提前制备）3、试剂三工作液：临用前根据样本量取出部分试剂三，用蒸馏水稀释16倍得到试剂三工作液备用，现配现用，用不完的试剂4℃可保存1周；产品说明：果胶酯酶（Pectinesterase ，PE ），又称果胶甲基酯酶、果胶氧化酶，广泛存在于植物及微生物中。
果胶是构成植物细胞壁的主要成分之一，而果胶酯酶催化果胶的甲氧酯水解产生果胶酸和甲醇，在植物果实成熟的细胞壁代谢过程中发挥着重要作用，在食品工业中具有极其重要的作用和开发前景。
果胶类检测
果胶类检测
果胶物质是生长在植物的细胞壁和细胞之间的物质，主要存在于植物的初生细胞壁和细胞之间的中层内，是细胞壁的基质多糖。
在浆果、果实和茎中最丰富。
每种多糖随植物来源、组织和发展阶段的不同，其侧链中残基的数目、种类、连接方式以及其他取代基存在的情况都有相当大的变化。
果胶
迪信泰检测平台采用生化法检测果胶系列物质，结合相应的试剂盒，可高效、精准的检测果胶系列物质的变化。
目前常见检测的果胶系列物质包括果胶酶、果胶、可溶性果胶、果胶酯酶等。
此外，我们还提供果胶类物质的生化试剂盒代测服务，以满足您的不同需求。
不同钙浓度处理对苹果水溶性果胶的影响
迪信泰检测平台可检测果胶类项目
原果胶含量检测
可溶性果胶(WSP) 含量检测
离子结合型果胶(ISP) 含量检测
共价结合型果胶(CSP)含量检测
多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测
果胶酶活性检测
果胶酯酶活性检测
果胶裂解酶活性检测
生化法测定果胶类样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL，测定样品不返还，请您保留备份。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 果胶类物质含量/果胶相关酶活性信息。
果胶酶检测试剂盒(DNS比色法)
果胶酶检测试剂盒(DNS 比色法)简介：天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pectin)、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、茎、叶中，是细胞壁的一种组成成分，它们伴随纤维素而存在，构成相邻细胞中间层粘结物，使植物组织细胞紧紧黏结在一起。
果胶酶(Pectinase)是一类分解果胶质酶类的总称，实质是多聚半乳糖醛酸水解酶，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。
Leagene 果胶酶检测试剂盒(DNS 比色法)检测原理是果胶酶水解果胶生成β-半乳糖醛酸，通过二硝基水杨酸(DNS)与反应形成紫红色的化合物，该化合物呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比，于分光光度计处测定吸光度，通过与标准曲线比较，计算出样品中果胶酶活性。
该试剂盒主要用于定量检测植物组织或果实中果胶酶，反应颜色越深，吸光度越大，果胶酶的活性越强。
该50T 试剂盒可以检测约23-24次样本。
该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织3、 研钵或匀浆器4、 离心管或试管5、 离心机6、 水浴锅7、 比色杯8、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号 名称TE0523 50T Storage试剂(A): 果胶标准(1mg/ml) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): Pectinase Lysis buffer 200ml RT 试剂(C): Pectinase Assay buffer 15ml4℃ 避光 使用说明书1份1、果胶酶提取：取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于提前4℃预冷的研钵或匀浆器，加入预冷的Pectinase Lysis buffer，充分研磨或匀浆后转入离心管或试管，离心。
留取上清液，即为果胶酶提取液，保存待用。
2、稀释果胶标准溶液：取适量的果胶标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：加入物(ml) 1 2 3 4 5果胶标准(1mg/ml) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05蒸馏水0.49 0.48 0.47 0.46 0.45果胶含量(μg) 10 20 20 40 503、加样：按照下表设置空白管、标准管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。
果胶物质的提取与测定
水果中果胶物质的提取和测定一、实验目的1、温水基本操作，如PH计的使用、抽滤，分光光度计的使用，标准曲线的绘制；2、初步了解和掌握食品中某些成分的提取技术、分离技术以及测定方法，为灵活运用食品化学的研究方法奠定基础。
二、实验原理本实验采用钙离子螯合剂和果胶酶提取水果中的总果胶物质，然后用分光光度法测定总果胶物质，先用乙醇处理样品，使果胶沉淀，再用乙醇溶液洗涤沉淀，除去可溶性糖类、脂肪、色素等物质，从残渣中提得果胶物质。
采用NaOH溶液将果胶物质皂化，生成果胶酸钠，再经乙酸酸化使之生成果胶酸，再加入果胶酶使之水解。
分光光度法测定是以果胶分子的基本结构单位——半乳糖醛酸和咔唑的反应为基础的。
果胶经水解生成半乳糖醛酸，在强酸中与咔唑发生缩合反应，生成紫红色化合物，其呈色强度与半乳糖醛酸含量成正比，测定的结果可用脱水半乳糖醛酸（AUA）。
三、实验仪器与试剂仪器：玻璃器皿烧杯、试管、玻棒、胶头滴管、容量瓶、PH计、分光光度计试剂：①果胶酶提取液：1份果胶酶试剂和10份水在一起搅拌1h，然后离心除去沉淀，上清液即为果胶酶提取液；②1%EDTA溶液（乙二胺四乙酸）；③醋酸溶液（1份醋酸+2份水）；④浓硫酸；⑤95%乙醇；⑥精制乙醇：在1L95%乙醇中，加入4g锌粉和4ml硫酸（1+1），在水浴中回流24h，然后蒸馏，在馏出液中加入4g锌粉和4gKOH后再蒸馏一次；⑦一水半乳糖醛酸。
四、实验步骤1、果胶物质的提取将10g新鲜橘皮和125mL95%乙醇一起捣碎，抽滤后保留沉淀，用50mL75%乙醇洗涤沉淀两次，将沉淀转移到250mL烧杯中，加入100mL 1%EDTA溶液，用1mol/LNaOH将pH调节至11.5，保持30min后，再用醋酸溶液将果胶溶液酸化到PH5.0，然后加入10mL 果胶酶提取液，搅拌0.5h后，定容至250mL，2、半乳糖醛酸的比色测定在20Ⅹ200mm试管中准确加入12ml浓硫酸，用冰浴将试管及内容物冷却到3℃，吸入1.00ml 待测溶液，每毫升溶液中含5~40µg果胶物质。
果胶测定的实验报告
一、实验目的1. 了解果胶的基本性质和提取方法。
2. 掌握测定果胶含量的实验操作步骤。
3. 通过实验验证果胶提取和测定的准确性。
二、实验原理果胶是一种天然高分子多糖，广泛存在于水果和蔬菜中，具有较强的凝胶性能。
果胶的提取通常采用酸浸提法，通过调节溶液的pH值和温度，使果胶从原料中分离出来。
果胶含量的测定通常采用重量法，即测定提取液中果胶的重量占原料重量的百分比。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：苹果、柠檬、橘子等水果，盐酸、无水乙醇、蒸馏水等。
2. 实验仪器：天平、烧杯、漏斗、抽滤瓶、蒸馏装置、锥形瓶、量筒、pH计等。
四、实验步骤1. 果胶提取（1）将水果洗净，去皮，去核，切成小块。
（2）将水果块放入烧杯中，加入适量的盐酸溶液，调节pH值为2.0。
（3）将烧杯置于恒温水浴锅中，加热至60℃，保温1小时。
（4）将提取液过滤，收集滤液。
2. 果胶含量测定（1）将提取液置于锥形瓶中，加入适量的无水乙醇，搅拌均匀。
（2）将锥形瓶置于冰箱中，冷却至室温。
（3）取出锥形瓶，将上层清液倒出，剩余沉淀物用蒸馏水洗涤两次。
（4）将洗涤后的沉淀物转移至烧杯中，加入适量的蒸馏水，加热溶解。
（5）将溶液过滤，收集滤液。
（6）将滤液转移至烧杯中，加入适量的氯化钡溶液，搅拌均匀。
（7）将烧杯置于恒温水浴锅中，加热至80℃，保温30分钟。
（8）将烧杯取出，加入适量的稀硝酸，使溶液呈酸性。
（9）将溶液过滤，收集滤液。
（10）将滤液转移至烧杯中，加入适量的过氧化氢溶液，加热至沸。
（11）将溶液冷却至室温，用蒸馏水定容至一定体积。
（12）用分光光度计测定溶液在波长520nm处的吸光度。
（13）根据标准曲线计算果胶含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果（1）苹果提取液吸光度为0.823，果胶含量为2.56%。
（2）柠檬提取液吸光度为0.798，果胶含量为2.42%。
（3）橘子提取液吸光度为0.812，果胶含量为2.34%。
2. 实验分析本实验采用酸浸提法提取果胶，结果表明，苹果、柠檬、橘子中的果胶含量分别为2.56%、2.42%、2.34%。
果胶含量检测试剂盒说明书 微量法
果胶含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1405规格：100T/48S产品内容：试剂一：标准液1mL×1支，4℃保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。
产品说明果胶是一种植物胶体，分布于果蔬类植物中，存在于植物的细胞壁和细胞内层。
果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，主要成分是半乳糖醛酸，其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。
采用咔唑比色法测定果胶含量。
果胶水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑试剂缩合生成紫红色化合物，在530nm处有最大吸收峰。
测定样品中半乳糖醛酸的含量，即可确定果胶的含量。
需自备的仪器和用品研钵、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、浓硫酸和蒸馏水。
操作步骤：一、样品处理将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和蒸馏水体积(mL)为1:5-10的比列（建议取约0.1g样品，加入1mL蒸馏水），充分匀浆，8000g、4℃离心10min，取上清液待测。
二、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm处，蒸馏水调零，试剂一和试剂二37℃预热10min以上。
三、测定操作表（在EP管中加入下列试剂）试剂名称（μL）空白管标准管对照管测定管待测样本5050试剂一50蒸馏水5050试剂二505050混匀浓硫酸400400400400充分混匀，95℃水浴5min后，冷却至室温，取200μL置微量石英比色皿或96孔板中，测定530nm 处吸光值，空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为A1、A2、A3和A4。
若A大于1，需将待测样本用蒸馏水稀释（可稀释10倍或20倍）注意：空白管和标准管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。
四、计算公式果胶含量(mg/mg prot)=(C标准×V1)×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷Cpr×稀释倍数果胶含量（mg/g鲜重）=(C标准×V1)×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数C标准：标准管浓度，0.05mg/mL；V1：加入样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
索莱宝离子结合型果胶（ISP）含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）
离子结合型果胶（ISP ）含量检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC4150规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液一液体100 mL×1瓶（自备）4℃保存提取液二液体30 mL×1瓶4℃保存提取液三液体50 mL×1瓶4℃保存试剂一液体60 mL×1瓶（自备）4℃保存试剂二液体3 mL×1瓶4℃保存试剂三液体5 mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液一：80%乙醇，自备。
即将80 mL 无水乙醇和20 mL 蒸馏水混合。
2、试剂一：浓硫酸60 mL ，自备。
3、标准品：10 mg 半乳糖醛酸。
临用前加入0.943 mL 提取液三，配成50 μmol/mL 的标准液。
产品说明：果胶（Pectin ）是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，对细胞起着软化和黏合作用。
果胶间以Ca 2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP ）、离子结合型果胶（ISP ）和共价结合型果胶（CSP ）。
利用带有螯合剂的酸性提取液提取离子结合型果胶（ISP ），其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，生成物质在530nm 处有最大吸收峰。
技术指标：最低检出限：0.0212 μmol/mL 线性范围： 0.025-2.5 μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）取约0.1g样本，加入1mL 提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。
辅酶Ⅰ NAD(H)含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4338
可见分光光度法辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号:UPLC-MS-4338规格:50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件酸性提取液液体15mL×1瓶4℃保存碱性提取液液体15mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二液体6mL×1瓶4℃保存试剂三液体16mL×1瓶4℃保存试剂四液体3mL×1瓶-20℃保存试剂五液体40mL×1瓶4℃保存试剂六液体75mL×1瓶（自备）常温保存NAD标准品粉剂×1支-20℃保存NADH标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂三：需要严格避光；2、试剂六：72mL乙醇和3mL蒸馏水混合，备用；3、NAD标准品：临用前加入1.5mL蒸馏水，即2µmol/mL，将其稀释为1.25nmol/mL的NAD标准溶液备用；4、NADH标准品：临用前加入1.4mL蒸馏水，即2µmol/mL，将其稀释为1.25nmol/mL的NADH标准溶液备用。
产品说明：辅酶I包括还原型和氧化型两种形式，在生物氧化中起传递氢的作用。
氧化型辅酶I又称烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）是脱氢酶的辅酶，它在糖酵解、糖异生、三羧酸循环和呼吸链中发挥着不可替代的作用。
中间产物会将脱下的氢递给NAD，使之成为NADH（还原型辅酶I）。
而NADH则会作为氢的载体，在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式，合成ATP。
NAD(H)在机体内有重要的生理意义，与物质代谢、能量代谢、抗细胞衰老、抗氧化以及一些疾病的发生密切相关。
体内辅酶I含量降低会导致细胞损伤或衰亡。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值，NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。
辅酶 II NADP含量检测试剂盒MTT 显色法)说明书__ 可见分光光度法UPLC-MS-4370
辅酶II NADP(H)含量检测试剂盒（MTT 显色法）说明书货号：UPLC-MS-4370规格：50T/24S可见分光光度法产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件酸性提取液液体15mL×1瓶2-8℃保存碱性提取液液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体20mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三液体12mL×1瓶2-8℃保存试剂四A 粉剂×1支-20℃保存试剂四B 液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体40mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体70mL×1瓶2-8℃保存NADP 标准品粉剂×1支-20℃保存NADPH 标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入6mL 蒸馏水充分混匀，溶解后2-8℃保存4周。
2、试剂四：临用前将试剂四A 溶解到试剂四B 中，溶解后分装保存，避免反复冻融，-20℃保存4周。
3、NADP 标准品：临用前加入1.27mL蒸馏水，即5µmol/mL ，-20℃可以保存2周。
4、NADPH 标准品：临用前加入1.2mL 蒸馏水，即5µmol/mL ，-20℃可以保存2周。
产品说明：辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP +和NADPH 含量测定可以计算NADP （NADPH +NADP +)含量和NADPH/NADP +比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。
NADPH/NADP +比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP +和NADPH 。
NADPH 通过PMS 的递氢作用，使氧化型噻唑蓝（MTT ）还原为甲瓒，570nm 下检测吸光值，从而测定NADPH 含量。
果胶提取检测
黄皮果渣果胶含量的测定方法研究果胶水解之后的生成物是半乳糖醛酸，该物质在强酸溶液中与咔唑试剂作用发生缩合反应，呈现紫红色。
一定波长条件下呈色强度与试样中半乳糖醛酸的含量成正比，可以进行比色定量测定。
试剂1)0.5mol/L硫酸溶液; 2)0.15%咔唑乙醇溶液:称取咔唑0.15g，在少量精制的乙醇溶液中溶解，并定容至l00mL; 3)标准半乳糖醛酸溶液:准确称取半乳糖醛酸l00mg，溶解于水并且定容至l00mL混匀，即浓度为lmg/mL操作2)标准曲线的绘制:准确吸取lmg/mL的半乳糖醛酸标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0mL于9个100mL容量瓶中，用蒸馏水定容后，摇匀，即得到一组浓度为10、20、30、40、50、60、70、80、90mg/L的溶液。
取25 ml的比色管10支，用吸管注入浓硫酸各12 ml，置冰水浴中冷却，边冷却边分别徐徐加入上述不同浓度的半乳糖醛酸溶液各2 ml，充分混合后，再置冰浴中冷却。
然后用沸水水浴加热10 min，冷却至室温，加入0.15%咔唑溶液各1 ml，充分混合后室温下放置30 min后，用蒸馏水做空白实验。
用分光光度计，在波长530 nm下对试剂空白样品分别测定吸光度，以测得的吸光度为纵坐标，每毫升标准溶液中半乳糖醛酸含量为横坐标，制作标准曲线，并计算其线性回归方程。
3)半乳糖醛酸的测定取1 ml稀释一定倍数的果胶溶液，注入容量瓶中，定容到50 ml。
取12 m1浓硫酸于50ml 的具塞比色管中，冰浴缓慢加入2m1的果胶溶液，充分混合，沸水浴加热15 min，冷却，加入1 ml 0.5%的咔唑试剂，充分摇匀，置于室温下放置30 min，于530 nm下测定吸光度。
通过标准曲线计算果胶含量。
(3)计算方法果胶提取率的计算E(%)﹦G×100／WE—提取率G—半乳糖醛酸含量(克)W—向日葵盘中的果胶含量酸法提取材料：黄皮果、盐酸、六偏磷酸钠、仪器：PHS-3C精密酸度计上海精科雷磁、LP1002电子天平常熟市衡器厂、快HH-42速恒温数显水箱常州国华电器有限公司、其他实验室常用设备方法:取5.0g干黄皮果粉，经灭酶、漂洗后加入30倍水充分混合，用盐酸调节溶液pH值为3.5，配制0.8%的六偏磷酸纳溶液，按料液比1:25加入烧杯中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。
果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是许多高等植物细胞壁中含量最丰富的多糖成分，其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。
果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。
测定原理：
利用带有螯合剂的酸溶液提取离子结合型果胶（ISP），采用咔唑比色法测定果胶含量。
果胶水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应，生成物质在530 nm处有最大吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体50mL× 1瓶，4℃保存。
试剂二：液体50mL× 1瓶，4℃保存。
试剂三：标准液1mL× 1支，4℃保存。
试剂四：液体5 mL× 1瓶，4℃保存；
样品的前处理：
1、细胞壁的提取：取约0.3g样本，加入1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，95℃水浴20min，
冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。
沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL试剂一（去除淀粉）浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。
2、ISP的提取：称取烘干的CWM 3mg，加入1mL试剂二，充分匀浆。
8000g 4℃离心10min，
取上清液待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm处，蒸馏水调零；试剂三和试剂四37℃预热10min以上；
别记为A1、A2、A3和A4。
若A大于2，需将待测样本用蒸馏水稀释（可稀释10倍或20
倍）。
空白管和标准管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。
ISP含量计算：
ISP含量(mg /g 干重)= (C标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数
=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数
C标准：标准管浓度，0.05mg/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；W：样本干重，g。
注意：最低检测限为50μg /g 干重。