速率法测定ALT
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1-丙氨酸氨基转移酶测定程序（速率法）一、原理：ALT 催化L-丙氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。
LDH 催化丙氨酸还原的同时将NADH 氧化成NAD+。
NADH 吸光度的下降速率和ALT 的活力成正比。
IFCC 推荐法含磷酸吡哆醛（P-5-P ），是为了稳定ALT 活性，避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏低。
健康人血清中磷酸吡哆醛含量适中，国内试剂一般不含磷酸吡哆醛。
化学反应式＋LDH ＋ALT乳酸＋NAD丙酮酸＋NADH＋H −−→−+−−→−-+丙酮酸谷氨酸酮戊二酸丙氨酸α二、临床意义1 ALT 存在于各种组织细胞内，以肝细胞中含量最多，正常时血清中ALT 活性很低。
2 肝细胞因感染病毒而受损伤，尤其是处于急性期时，ALT 从细胞内逸出至血液中，血清中ALT 活性可明显升高，因此是各种肝炎患者检查的一个重要指标。
3 某些药物对肝细胞有毒性副作用，过量或长期使用可至肝脏受损，亦可以ALT 活性升高反映4 实质性脏器有非感染性炎症或损伤时，如脂肪肝、梗阻性黄疸、肝内胆汁瘀滞、胆管炎、胆囊炎、肝癌、急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血等，均可成为血清ALT 升高的原因。
4 ALT 与AST 联合测定并计算其比值有助于对某些疾病的鉴别，正常情况下ALT ／AST 比值小于1，但在传染性肝炎及其它原因引起的肝脏炎症时，ALT ／AST 比值升高；肝硬化、肝癌、进行性肌营养不良、皮肌炎时，AST 升高的幅度高于ALT 。
三、结果计算：ALT (U/L) ＝ 3)410340(10min min--⨯⨯⨯⨯∆=⨯∆εl V V A K A sTnm四、医学决定水平1 20U/L 此为排除值，低于此值可排除许多与ALT 升高有关的病种，而考虑其他诊断。
此值可以作为病人自身的ALT 的对照，与过去和（或）将来的值进行比较。
2 60U/L 高于此值时，对可引起ALT 增高的各种疾病均应考虑，并应进行其他检查以求确诊。
血清丙氨酸氨基转移酶测定速率法
血清丙氨酸氨基转移酶测定速率法血清丙氨酸氨基转移酶（简称ALT）测定速率法，听起来是不是有点拗口？别担心，今天咱们就一起来聊聊这个看似复杂、实则挺简单的东西。
ALT是什么呢？它其实是一种存在于我们身体里的酶，主要在肝脏里工作，帮忙转化一些重要的氨基酸。
你知道的，肝脏就是那个“沉默的英雄”，总是在默默地承担着解毒、代谢的重任。
只不过，有时候肝脏忙碌得有点过头了，搞得肝细胞有点“小情绪”，于是这时候，ALT的含量就会变得比较高，这可就给我们敲响了警钟。
所以，ALT的测定在体检中占据着举足轻重的位置，可以帮助我们了解肝脏的健康状况。
说到这里，你可能会想，“哎，那测这个有啥用啊？”嘿，告诉你，它可是个大有用处的检测指标呢！ALT升高常常意味着肝脏受损或者有炎症，比如肝炎、脂肪肝，甚至是肝硬化，都是有可能导致ALT升高的。
最神奇的是，ALT的升高通常早早就会出现在你自己没有感觉到的情况下。
所以，定期检查血清ALT，基本上能帮你提前发现肝脏的小毛病，避免大病发生。
那咱们要怎么测呢？ALT测定的方法其实很多，不过最常见的还是速率法。
这种方法可不像你想象中那样复杂，一般来说，检测的步骤其实挺简单的。
首先得抽点血，血液样本可不能少。
然后，实验室里会通过加试剂、测量反应速度等方式，得出ALT的活性水平。
说白了，咱们就是通过看这个酶反应的速度来推算ALT的水平。
这个方法既准确又快捷，基本上1015分钟就能出结果，简直是急救中的“快刀斩乱麻”。
不过，怎么测也得有一个标准吧？ALT测定的标准很明确，健康人的ALT水平通常是在正常范围内，也就是50单位/升以下。
超过这个数值，就得注意了。
比如，如果ALT数值一度飙升到100单位/升，可能就说明你的肝脏正在经历一些“风雨”，要赶紧去医院看看了。
如果你想知道具体数值和标准，最好还是请教医生，毕竟每个人的身体情况都不一样。
让咱们再来谈谈这个“速率法”，听起来好像很厉害对吧？速率法就是通过测量ALT催化反应中产物变化的速度，来得出酶的活性。
丙酮酸氧化酶速率法在大批量献血员ALT检测中的应用
测得 的结 果基 本不 变 ， ｎ以后 值偏 低 ， 明第 二 次 ８ｍｉ 说
１ ｉ ３ｍｎ时第 二次 比色 吸光 度 为 Ａ （ 双 时测 量模 式 即 用
Ｂ孔为 标准 ， Ｄ 孔 为 质 控 ， ２ 孔 为 测定 。 于 Ｃ及 Ａ ～Ｈ
Ａ 孔 内加蒸馏水 ２ Ｌ 于 Ｂ 孔 内加标准血 清 ２ ； １ ， ０ ， 。 Ｏ Ｃ 及 Ｄ 孔分别加 低 值及 高值 质控 血 清 ２ Ｌ Ａ ～Ｈ ０ ； ： 孔 内分别加受检 血清 ２ Ｌ 然 后 各孔 加 工作 液 ２０ Ｏ ， ０ ， 混匀 ， ３ 置 ７℃反应 １ ｉ ０ ｍ ｎ时第一次 比色 吸光度 为 Ａ 及
高值血 清 （ ：０ ／ 。 Ｈ） １３Ｕ Ｌ
Ａ ＴＴ
紫 外酶偶 联 速 率 法 （ ） 上 海 久 强 试 剂 盒 测 定 血 清 Ｘ用
Ａ Ｔ， 法相 关 系数 为 ｒ＝０ ９ １ Ｙ＝１ ０ ２ Ｌ 两 ．９ ， ． ７ ｘ＋１ ０ ２ ．３ 。 ２ ３ 精密 度 ． 取 ２份 低 值 、 高值 质 控 标 本 ， 内重 复 批 ： １ ３ ／ ，Ｓ ＝ ２ ０， Ｖ ＝ ０ Ｕ Ｌ Ｄ ． Ｃ 测定 ２ ０次 ， 值 标 本 ＝５ ／ ，Ｓ ＝ １ １ Ｃ ＝ 低 １Ｕ Ｌ Ｄ ． ，Ｖ ２ １％ ； 值 标 本 ． 高 １９ ．４％ 。批 间重 复 ， 标 本 存 ４ ｃ 将 Ｃ冰箱 ， 每天 重 复 测 定 ４次 ， 测定 ２ 共 ０次 ， 值标 本 ＝ １Ｕ Ｌ Ｓ ＝ １ ５ 低 ５ ／ ， Ｄ ．， Ｃ ：． Ｖ ２ ９％ ； 值 标 本 ＝１３ Ｕ Ｌ， Ｄ ＝ ２ ９ Ｃ ： 高 ０ ／ Ｓ ． ，Ｖ
１ ４ 反应原理 Ｌ一 ． 丙氨酸 ＋ 酮戊二酸 ＝ 丙酮酸 ＋ 仅一 ＋
干式化学法和速率法检测血清ALT的结果分析
干式化学法和速率法检测血清ALT的结果分析作者：范文成朱林李小容张宁宁朱容向晓欢谭寒玉陈素琼来源：《医学信息》2014年第12期摘要：目的比较干式化学法和速率法检测血清ALT的精确性和差异性。
方法分别用干式化学法和速率法检测血清ALT。
结果精密度测定，干式化学法测定的ALT的变异系数（CV）值为7.34%，速率法变异系数（CV）值为6.81%和6.21%，干式化学法和速率法的符合率较高，经χ2检验两种方法之间差异均无显著性（P>0.05）。
结论干式化学法和速率法检测结果准确、快速、方便，用干式化学法实施采前初筛，有效降低献血者ALT的不合格率，减少血液的报废。
关键词：干式化学法；速率法；ALT《献血者健康检查要求》（GB18467-2011）规定血液ALT检测应符合相关要求[1]。
《血站技术操作规程（2012版）》规定对献血者ALT献血前应采用干化学法记录检测结果和结论并签名[2]；ALT采用2种方法（干化学法和速率法）进行2次检测，分别在采血前和采血后进行[2]。
导致血液ALT升高的影响因素较多，ALT的升高是血站血液报废的主要原因，也是导致献血者延迟献血的重要因素，如何降低血液报废率，进一步巩固无偿献血者队伍便成为血站工作的重点和难点，加之目前血液资源宝贵，血站应采取措施及时对ALT按规定进行检测，从而减少血液报废现象。
常规在采血前用干式化学法，采血后用速率法检测ALT，现对两种方法的检测情况报告如下：1资料与方法1.1一般资料厂家提供的质控血清；40份献血者标本。
1.2试剂与仪器干式化学法用Mission C100干式生化分析仪，杭州艾康试纸条，ALT﹥50U/L为不合格。
速率法用Roche cabas c311全自动生化分析仪，德国罗氏试剂，ALT﹥50U/L 为不合格。
试剂均为质检合格且在有效期内使用。
1.3检测质控干式化学法用杭州艾康的质控品47 U/L，速率法用罗氏的质控品低值44.7U/L，高值114U/L。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定方法操作规程
包头文治医院- 1 -丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。
【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。
后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。
L-丙氨酸+α-酮戊二酸ALT丙酮酸+ L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+LDH L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/L L-丙氨酸750 mmol/L 乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/L NADH 0.9mmol/L *不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm 温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤空白/校准/样本10ul R1200ul混匀，37℃孵育5min；R250ul 混匀，37℃孵育1min后，连续测定3min内的吸光度，计算吸光度变化率（ΔA/min）。
干式化学法和速率法检测血清ALT的结果分析
干式化学法和速率法检测血清ALT的结果分析目的比较干式化学法和速率法检测血清ALT的精确性和差异性。
方法分别用干式化学法和速率法检测血清ALT。
结果精密度测定，干式化学法测定的ALT的变异系数（CV）值为7.34%，速率法变异系数（CV）值为6.81%和6.21%，干式化学法和速率法的符合率较高，经χ2检验两种方法之间差异均无显著性（P>0.05）。
结论干式化学法和速率法检测结果准确、快速、方便，用干式化学法实施采前初筛，有效降低献血者ALT的不合格率，减少血液的报废。
标签：干式化学法；速率法；ALT《献血者健康检查要求》（GB18467-2011）规定血液ALT检测应符合相关要求[1]。
《血站技术操作规程（2012版）》规定对献血者ALT献血前应采用干化学法记录检测结果和结论并签名[2]；ALT采用2种方法（干化学法和速率法）进行2次检测，分别在采血前和采血后进行[2]。
导致血液ALT升高的影响因素较多，ALT的升高是血站血液报废的主要原因，也是导致献血者延迟献血的重要因素，如何降低血液报废率，进一步巩固无偿献血者队伍便成为血站工作的重点和难点，加之目前血液资源宝贵，血站应采取措施及时对ALT按规定进行检测，从而减少血液报废现象。
常规在采血前用干式化学法，采血后用速率法检测ALT，现对两种方法的检测情况报告如下：1资料与方法1.1一般资料厂家提供的质控血清；40份献血者标本。
1.2试剂与仪器干式化学法用Mission C100干式生化分析仪，杭州艾康试纸条，ALT﹥50U/L为不合格。
速率法用Roche cabas c311全自动生化分析仪，德国罗氏试剂，ALT﹥50U/L为不合格。
试剂均为质检合格且在有效期内使用。
1.3检测质控干式化学法用杭州艾康的质控品47 U/L，速率法用罗氏的质控品低值44.7U/L，高值114U/L。
2结果2.1方法的准确度和精密度比較分别用干式化学法和速率法测定ALT质控血清20次，见表1。
干式化学法与速率法检测在无偿献血ALT筛查中的应用分析
干式化学法与速率法检测在无偿献血ALT筛查中的应用分析张艳丽【摘要】目的：比较干式化学法和速率法检测献血者谷丙转氨酶（ALT）的结果，以探讨干式化学法对献血前 ALT 初筛的适用性。
方法选取2013年9月至2013年10月于本站采集的500例无偿献血者标本为研究对象，分别采用干式化学法和速率法检测 ALT，对两种检测方法的结果进行对比分析；同时取两种定值质控血清，分别采用干式化学法和速率法检测 ALT，比较两种方法的检测精密度。
结果干式化学法和速率法检测结果具有良好的相关性，干式化学法检测500例献血者ALT 的总符合率为98.60%（790/500）；干式化学法和速率法检测两种定值质控血清均具有良好的精密度，批内变异系数（CV）值均＜试剂盒规定的15%标准，但干式化学法的精密度稍差于速率法。
结论干式化学法具有操作简便、快速准确，可用于采血车和采血屋献血者献血前 ALT 的初筛，值得临床推广。
【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2016(014)006【总页数】2页(P40-40,41)【关键词】干式化学法;速率法;献血者;丙氨酸转氨酶【作者】张艳丽【作者单位】河南省漯河市中心血站，河南漯河 462001【正文语种】中文【中图分类】R446血液丙氨酸转氨酶（ALT）是我国血站献血者献血前初筛的重要内容和实验室检测的必检项目，然而献血者ALT不合格也是造成血站血液报废的重要原因[1]。
目前国内多数血站采用干式化学法对献血者献血前进行ALT初筛，以尽量减少因ALT不合格而造成血液报废，但是，笔者在实际操作过程中常碰到初筛合格的血液经实验室复检仍有部分因ALT异常而报废。
为更好的了解本站所采用的干式化学法初筛ALT的检测效果，我们将干式化学法和速率法两种检测方法进行对比观察，现将结果报道如下。
1.1 临床资料：选取2013年9月至2013年10月于本站采集的500例无偿献血者标本为研究对象，其中男性献血者247例，女性253例，年龄18～55岁，平均（34.26±7.15）岁，所有献血者献血前体格检查均符合《献血者健康检查要求》（2011版）[2]。
简述速率法法测定ALT的原理
简述速率法法测定ALT的原理
测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的速率法原理如下:
1. 原理:
ALT可以催化丙氨酸和α-酮戊二酸生成谷丙氨酸和丙酮酸的反应。
测定这一反应的初始速率,可以计算出ALT的活性。
2. 反应:
ALT
丙氨酸+ α-酮戊二酸:left_right_arrow: 谷丙氨酸+ 丙酮酸
3. 方法:
将血清加入底物溶液(含丙氨酸、α-酮戊二酸),混合后测定340nm处的吸光度变化率,根据比尔-朗伯特定律计算生成的NADH量,反应速率与ALT活性成正比。
4. 优点:
反应速度快,结果准确,可用于自动分析仪检测。
5. 缺点:
受呼吸链滴定酶活性及试剂稳定性影响。
综上所述,速率法通过测定ALT催化反应速率来检测其活性,是测定ALT的标准方
法之一。
速率法测定ALT
结果计算： 结果计算： 酶活力=- △A/min*1746（U/L） 酶活力 （ ）
操看示教
注意事项
反应准确计时 检测标本最好用新鲜标本 溶血的影响
评价
准确性好 重复性好 操作简便 实验条件要求高， 实验条件要求高，成本高
临床意义
ALT主要存在肝脏 ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细胞 的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入 血，致血中该酶活性浓度增加，故测定ALT常 作为判断指标。
酶活力amin1746ul样本和试剂迅速混匀后340nm波长试剂空白调零室温测定123分钟的吸光度得到aminalt主要存在肝脏alt在肝细胞中含量较多且主要存在于肝细胞的可溶性部分
ALT测定 测定
速率法
学习目的
掌握速率法的原理 熟悉速率法测定ALT注意事项和比色法与速率 法的区别 了解ALT的临床意义
15mmol/L
0.18mmol/L >5000U/L 100mmol/L （PH7.3) 500mmol/L
操作步骤（工作液配制） 操作步骤（工作液配制）
取R2 10ml溶解R1
操作步骤（手工） 操作步骤（手工）
按S：R=1：100制备各测定管 ： ： 制备各测定管 样本和试剂迅速混匀后， 波长， 样本和试剂迅速混匀后，340nm波长，试剂空白调零， 波长 试剂空白调零， 室温测定1、2、3分钟的吸光度 得到-△ 分钟的吸光度， 室温测定1、2、3分钟的吸光度，得到-△A/min
思考题
比较赖氏法和速率测定ALT。
酶活性浓度测定方法
平衡法:通过测定酶促反应开始至反应达到平衡时产物
或底物浓度的总变化量来求出酶活性浓度的方法,文献 上也称终点法。
定时法: 多将酶固定作用一段时间,然后加入强酸,强碱,
ALT丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒(速率法)产品说明书
丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（速率法）说明书[产品名称] 通用名称: 丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（速率法）英文名称:L-Alanine Aminotransferase Assay Kit（ALT）[包装规格]2×200Tests；2×400Tests；R1:4×60ml、R2:4×15ml；R1:4×80ml、R2:4×20 ml；R1:4×120ml、R2:2×60ml；R1:8×40ml、R2:2×40ml；R1:4×50ml、R2:2×25 ml；R1:2×40ml、R2:2×10ml；R1:4×50ml、R2:4×25ml。
[预期用途] 用于体外定量检测人血清中的丙氨酸氨基转移酶的活力。
[检验原理]ALTL-丙氨酸 +α-酮戊二酸丙酮酸+ L-谷氨酸LDH丙酮酸 + NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ + H2O[主要组成成份]由试剂R1和试剂R2组成。
试剂R1：三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液、乳酸脱氢酶（LDH）、L-丙氨酸、α-酮戊二酸；试剂R2：三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液、还原型辅酶（NADH）。
[储存条件及有效期] 试剂在2℃～8℃无腐蚀性气体中避光储存，若无污染，可稳定至失效期。
有效期12个月。
开瓶后2℃～8℃可稳定30天。
备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。
[适用仪器]日立7170、奥林巴斯AU640、贝克曼LX-20全自动生化分析仪。
[样本要求]使用新鲜的无溶血血清，血清不宜反复冻融，以免影响酶活性。
[检验方法]（1）双试剂无需配制，直接使用。
（2）试验条件：样本（S）：15 µl试剂1(R1) ：200 µl 试剂2（R2）：50 µl温度：37 ℃测定类型：速率法主波长：340 nm 副波长：405 nm 反应方向：下降方法：先将样本与R1混合，37 ℃5分钟后加入R2试剂，然后测定加入R2后2分钟至4分钟之△A/min 。
血液样本保存温度对ALT速率法测定值的影响
８ ７４ ． ６ １ ６ ３ ８ ３１ ５ １ ３ ７ ２ ． ３ ４ ４ ４ ０ ８ ９９ ５ ８９ ５ ２ ５ ４ ９ ３１ ５ ４ ４ ０ ００
３ 讨 论
２ 结 果
检 测结 果 见下 表 １ 。 ２ １ 于 ２～８ 冰 箱放 置 的样 本 ， 连 续 ５天进 行 Ａ Ｔ检 ． ℃ 经 Ｌ 测 ， 均 为 阴性 ， 明样本 在此 条件 下 保存 相对 比较稳 定 。 结果 说 ２２ 于 ２ ３ ℃培 养箱 中放 置 的样 本 ， ． ５～ ５ 连续 ５天进 行 ＡＪ ｒ Ｔ
ｌ ｄ ２ ｄ ３ ｄ ４ ｄ ５ ｄ １ ２ ４ ２５ １ ９ ６ ３ ５ １ ８ ７ ３ ４ １ ８ ４５ ２ １．２ ５ ３６
【 文献标识码 】 Ｂ
丙氨 酸氨基 转移 酶 （ Ｌ ） 人 体 内促 进 丙 氨 酸 和 Ｏ一酮戊 ＡＴ是 ． ／ 二酸氨基 转 移的 酶之一 ， 清 中含量 很少 ， 大部 分 Ａ Ｔ存 在于 血 绝 Ｌ 肝细胞 内 ， 为血 浆 Ａ Ｔ含量 的数 百倍 ， 约 Ｌ 当肝 细 胞 损 害 时 ， 大量 Ａ Ｔ进 入血 浆 中 ， 血液 内 Ａ Ｔ活性 明 显升 高 … 。因此 ， 血 Ｌ 使 Ｌ 检测 清 Ａ Ｔ活性 可 以作 为 诊 断肝 脏 疾病 ， 别 是 病毒 性 肝 炎 的一 个 Ｌ 特
参 考 文献
检测 ， 结果则各有不同， 但阳性率总体有所升 高。其中 １ 、 号 ２ 号和 ５号样本 Ａ Ｔ检测始终为 阴性 ； Ｌ ３号样本 Ａ Ｔ检测值第 ２ Ｌ 天变为阳性 ， 从第 ３ 天开始下 降， ４ 第 ５ 变为 阴性； 第 、 天 ４号样 本 Ａ Ｔ检 测值 第 ２ 变为 阳性 ， ３天值 达 到最 高 ， 第 ４天开 Ｌ 天 第 从 始下 降 ， ５天 变 为 阴性 ； 第 ６号样 本 Ａ Ｔ检测 值 始 终 为 阴性 ， Ｌ 但 第 ２天值 达 到最 高 ， ３ 开始 下 降 ； 第 天 ７号样本 Ａ Ｔ检测 值从 第 Ｌ
ALT测定
丙氨酸氨基转移酶ALT操作规程用途本试剂采用IFCC推荐方法配制，用于体外测定人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶活力。
临床意义ALT在肝脏中有较高的浓度，而在肾、心、骨胳肌、胰、脾、肺脏中则含量较少。
通常ALT的升高由某些与肝脏有关的疾病引起，包括: 肝硬化、肝癌、病毒性或中毒性肝炎和阻塞性黄疸。
ALT升高也见于广泛损伤和肌肉疾病，伴有休克、氧不足的循环衰竭，心肌梗塞和溶血性疾病。
方法学原理ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+ L-谷氨酸LDH丙酮酸+ NADH+ H+→L-乳酸+ NAD+上述偶联反应中,还原性辅酶Ⅰ(NADH) 的氧化速率与标本的ALT活性成正比。
NADH在340nm 有特异吸收，因而可监测NADH吸光度的下降来计算ALT活力。
试剂组成试剂1（R1）试剂2（R2）Tris缓冲液80mM NADH 0.18mML-丙氨酸500mM α-酮戊二酸15mMLDH ≥2000U/L试剂贮存及稳定性试剂自生产日期起2—8℃避光存放可稳定12个月；R1、R2按4:1比例混为工作液2—8℃避光可稳定4周。
标本要求不溶血的血清或肝素抗凝血浆。
标本在4℃以下至少可稳定7天，－20℃保存2个月内稳定。
测定方法1. 试剂准备若双试剂检测，该试剂盒可直接使用，无需配制；若单试剂操作，将试剂1与试剂2按4:1比例混合即可。
2. 基本参数测定模式速率法样品量40ul延迟时间60秒试剂量 1.0ml测定时间60秒主波长340nm温度37℃副波长405nm光径1cm F值41273. 测定a. 手工、半自动及单一试剂的全自动测定按需要量将R1、R2以4:1比例配制工作液，平衡至测定温度。
混匀，延迟时间60秒，测定时间60秒，测定△A/分。
b. 双试剂全自动生化仪测定混匀，延迟时间60秒，测定时间60秒，测定△A/分。
4. 结果计算ALT (U/L)=△A/分×FV tF=——————×103V s×ε×LV t = 反应液总体积（ul）V s = 样本体积（ul）L = 比色杯光径（cm）ε= NADH在340nm处的毫摩尔吸光系数，为6.22ALT（U/L）=△A/分×4127 (双试剂，光径1cm)ALT（U/L）=△A/分×4127 (单试剂，光径1cm)试剂性能1. 线性范围：0-1200U/L若测定值大于1200U/L，用生理盐水稀释重测。
谷丙转氨酶(ALT) IFCC速率法
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂、校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+ a-酮戊二酸---------- 丙酮酸+ L-谷氨酸LDHNADH + 丙酮酸+ H+---------- L-乳酸+ NAD+2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司ALT试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
临床生化检验：丙氨酸氨基转移酶测定 (速率法 )
丙氨酸氨基转移酶
丙氨酸氨基转移酶（ALT）又称为谷丙转氨酶（GPT ）。是转移酶类的一种，能催化双底物分子之间基团 的转移，将供体分子基团或辅酶转移给受体分子。 主要存在于各种组织细胞中，以肝细胞中含量最多。 正常时只有极少量释放入血液中，故血清ALT活性很 低。各种肝炎的急性期，药物中毒性肝细胞性坏死等 疾病时，肝细胞酶大量释放入血中，使血清ALT活性 显著增高，因此它是诊断病毒性肝炎，中毒性肝炎等 肝病的重要指标。
反应式
试剂与器材
R1试剂： Tris缓冲液 100mmol/L L-丙氨酸 500mmol/L 乳酸脱氢酶(LDH) ≥ 2000U/L NADH
R2试剂： α-酮戊二酸 15mmol/L 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH) 0.18mmol/L
标准液：79U／L 病人血清 紫外分光光度计
样品要求
丙酮酸 NADH H LDH L 乳酸 NAD
上述偶联反应中， NADH被氧化为NAD+ ， NADH 的氧化速率与标本中酶活性呈正比，在340nm波长处， NADH呈现特征性吸收峰，而NAD则没有。因此，可在 340nm处连续监测到NADH的消耗量（即吸光度的下降 速率-△A/min ），从而计算出ALT活性浓度。
性能指标
1、线性范围：0-400U/L范围内，剂量-反应曲线线 性相关系数应不低于0.9900
2、准确度：误差≤±10% 3、精密度：批内变异系数＜6%，批间相对极差＜
8% 4、空白吸光度：以蒸馏水为空白对照（340nm；
1cm；37℃）应不小于0.9
注意事项
1．操作中必须准确加入标准液及标本量，并严格控制反应 时间，准确读数。
2．血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性。血清置 4℃冰箱1周，酶活性无显著变化，不推荐冰冻保存ALT测 定标本，而宜用新鲜血清标本。草酸盐、肝素、枸橼酸盐 虽不抑制酶活性，但可引起反应液轻度混浊。血液混浊时 可影响测定结果或无法测定（如血脂过高、血清蛋白变质 等）。红细胞内ALT含量为血清中3～5倍，应避免使用溶 血标本。
ALT检测操作规程
ALT检测操作规程ALT（丙氨酸氨基转移酶）是一种存在于细胞质中的酶，广泛分布于人体包括肝脏、心脏、肾脏等组织中。
ALT是肝脏功能的重要指标之一，通过测量血液中ALT的活性，可以评估肝脏功能的健康程度。
本文将介绍ALT（丙氨酸氨基转移酶）检测操作规程（速率法）。
一、实验器材和试剂准备1.乙醚：用于准备昏迷鼠模型；2.丙酮：用于制备丙酮胺溶液；3.氯化二乙酸：用于制备氯化二乙酰胺试剂；4.丙酮胺：用于制备丙酮胺溶液；5.磷酸氢二钾溶液：用于制备缓冲液；6.氧化丙酮胺：用于制备氧化丙酮胺试剂；7.pH7.0缓冲液：用于制备反应体系；8.4-氨基硫代洪美酸：用于停止反应；9.甲醛：用于制备甲醛溶液；10.维生素C溶液：用于制备维生素C溶液；11.肝组织磷酸化酰胺：用于制备肝组织提取液；12.酶提取液：用于提取ALT酶。
二、实验步骤1.制备ALT酶提取物：（1）取新鲜动物（小鼠）肝脏组织15g，加入磷酸缓冲液5倍的体积；（2）放入冷冻机中，-20℃下保存12h；（3）取出，加入万能匀浆器中，对肝脏组织进行研磨；（4）将研磨后的肝脏组织加入毛细管离心管中，进行离心，1800r/min 离心10 min；（5）将提取液转入新的毛细管离心管中，再次离心，3000r/min 离心10 min；（6）将上清液收集至离心管中，取出备用。
2.制备标准曲线：（1）取6个试管，分别标记为A、B、C、D、E、F，一个空白试管用作对照；（2）分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml的ALT 酶提取液；（3）加入pH 7.0缓冲液，使总体积为2.0ml；（4）每个试管中加入0.2ml的氧化丙酮胺试剂；（5）按顺序加入2ml、0.2ml、2ml的维生素C溶液、氧化丙酮胺试剂和ALT提取液；（6）加入4-氨基硫代洪美酸停止反应，并立即搅拌均匀；（7）用甲醛溶液处理样品；（8）分别在0.1、0.2、0.3、0.4及0.5的浓度范围内，测定样品的吸光度。
波音特生物科技(南京)有限公司 血清丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒(ALT)使用说明书（酶学速率法）
酶学速率法波音特生物科技（南京）有限公司PO IN TE BIO TEC H(N ANJ ING ) C O., LTD.血清丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒(ALT)使用说明书（酶学速率法）【产品名称】通用名称：血 清 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 检 测 试 剂 盒) 英文名称： The Serum ALT Reagent Kit 【包装规格】 型号 规格通用型 240ml （R1:4×48ml + R2:1×48ml ） 通用型 255ml （R1:3×68ml + R2: 3×17ml ） 通用型360ml （R1:3×96ml + R2:3×24ml ）【预期用途】本试剂盒用于测定人血清或血浆中ALT 的含量。
【检验原理】OH NAD L H NADH L L LDH ALT2+− → +− → −−++乳酸＋丙酮酸＋谷氨酸丙酮酸＋酮戊二酸丙酮酸＋α上述偶联反应中，还原性辅酶Ⅰ(NADH)的氧化速度与标本ALT 活性成正比。
NADH 在340nm 处有特异性吸收率，因而可通过监测NADH 吸光度的下降速率来计算出ALT 的活力。
【主要组成成份】 试 剂成 份 含 量 Tris 缓冲液60mmol/L NADH 0.18mmol/L L-丙氨酸 500mmol/L R 1LDH 600U/L a-酮戊二酸15mmol/L 丙氨酸 500mmol/L R 2稳定剂和防腐剂【储存条件及有效期】本试剂盒在2~8℃避光保存，防止冷冻，可稳定12个月； 开启后在2~8℃避光保存可稳定30天。
【适用仪器】本试剂通用型适用于日立7170/7180/7080/7600 /7060/7150 /7 020;奥林巴斯AU400/640/7200/5400; Abbott Aeroset 2000/C 8000;SHIMADZU CL7200/7300/8000；东芝40FR/120FR/200FR;迈瑞BS-300；利霸；Beckman CX/LX;DADE Behring AR/RxL/X –Pand 。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)
丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法) 简介：转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT)主要存在于肝细胞浆内，细胞内ALT浓度远高于血清，肝细胞破坏后，血清ALT立即迅速升高，因此谷ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
Leagene 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，丙酮酸与NADH经LDH催化生成NAD+，上述方法实际为ALT速率法，其反应公式如下：L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。
丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD+。
在上述偶联反应中，NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比。
对于单试剂速率法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT催化反应立即启动，通过分光光度计或自动分析仪检测在吸光度下降速率(-ΔA/min)，下降速率(-ΔA/min)与ALT活性呈正比，比色杯光径1.0cm，进而计算酶的活性单位。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水2、比色杯3、分光光度计或自动分析仪操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：1 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT的检测。
2 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个月有效，用于ALT/GPT的检测。
3 (选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT含量。
分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
注意：由于酶促反应时间极短，Leagene建议加入丙酮酸工作液后立即检测，加样时间越短越好，其反应基本在1-2min内，其后反应趋于平缓。
谷丙转氨酶(ALT) IFCC速率法
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂、校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。
丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。
ALTL-丙氨酸+ a-酮戊二酸---------- 丙酮酸+ L-谷氨酸LDHNADH + 丙酮酸+ H+---------- L-乳酸+ NAD+2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司ALT试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
修正计算系数速率法微量快速测定ALT
修正计算系数速率法微量快速测定ALT
叶肾林;邹红岩
【期刊名称】《陕西医学检验》
【年(卷),期】1999(014)004
【总页数】1页(P40)
【作者】叶肾林;邹红岩
【作者单位】深圳血液中心;齐齐哈尔血站
【正文语种】中文
【中图分类】R446.112
【相关文献】
1.干式速率法快速测定献血者ALT的效果评价 [J], 罗秋初;徐飞;陈瑞玲
2.ALT快速速率法在无偿献血中的应用与分析 [J], 周平
3.ALT快速速率法在无偿献血中的应用与分析 [J], 周平
4.血液样本保存温度对ALT速率法测定值的影响 [J], 刘捷;王艳平
5.血液样本保存温度对ALT速率法测定值的影响 [J], 刘捷;王艳平
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+
NADH
LDH
乳酸 + NAD+
实验酸
NADH LDH R2： ： Tris缓冲液 缓冲液 L-丙氨酸 丙氨酸
15mmol/L
0.18mmol/L >5000U/L 100mmol/L （PH7.3) 500mmol/L
操作步骤（工作液配制） 操作步骤（工作液配制）
ALT测定 测定
速率法
学习目的
掌握速率法的原理 熟悉速率法测定ALT注意事项和比色法与速率 法的区别 了解ALT的临床意义
酶活性浓度测定方法
平衡法:通过测定酶促反应开始至反应达到平衡时产物
或底物浓度的总变化量来求出酶活性浓度的方法,文献 上也称终点法。
定时法: 多将酶固定作用一段时间,然后加入强酸,强碱,
取R2 10ml溶解R1
操作步骤（手工） 操作步骤（手工）
按S：R=1：100制备各测定管 ： ： 制备各测定管 样本和试剂迅速混匀后， 波长， 样本和试剂迅速混匀后，340nm波长，试剂空白调零， 波长 试剂空白调零， 室温测定1、2、3分钟的吸光度 得到-△ 分钟的吸光度， 室温测定1、2、3分钟的吸光度，得到-△A/min
结果计算： 结果计算： 酶活力=- △A/min*1746（U/L） 酶活力 （ ）
操作步骤（半自动） 操作步骤（半自动）
具体操作先看示教
注意事项
反应准确计时 检测标本最好用新鲜标本 溶血的影响
评价
准确性好 重复性好 操作简便 实验条件要求高， 实验条件要求高，成本高
临床意义
ALT主要存在肝脏 ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细胞 的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入 血，致血中该酶活性浓度增加，故测定ALT常 作为判断指标。
蛋白沉淀剂等终止酶促反应,测定这段时间内底物的减 少量或产物的生成量,也称为”两点法”。
连续监测法：连续测定酶反应过程中某一反应产物的
浓度随时间变化的多点数据,求出酶反应初速度,间接 计算酶活性浓度的方法。
基本原理
L-丙氨酸 丙氨酸 + α-酮戊二酸 酮戊二酸 ALT
α -丙酮酸 丙酮酸
+
L-谷氨酸 谷氨酸
思考题
比较赖氏法和速率测定ALT。