常见PCR检测项目表

pcr实验有哪些

pcr实验有哪些1. 引言PCR（聚合酶链反应）是一种在分子生物学中广泛使用的技术，可以在短时间内扩增DNA片段。

PCR实验是生物学研究和临床诊断中不可或缺的步骤，它可以在病毒检测、基因测序、基因定量等方面发挥重要作用。

2. 反应体系PCR反应体系主要包括模板DNA、引物、dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）、聚合酶、反应缓冲液和水。

模板DNA是待扩增的DNA片段，引物是加在模板DNA上的两个特异性序列，dNTPs是四种脱氧核苷酸（A、T、C、G），聚合酶用于DNA合成，反应缓冲液提供了合适的酶活性和pH条件。

3. 扩增步骤PCR实验一般分为三个步骤：变性、退火和延伸。

3.1 变性在PCR反应开始时，反应体系中的DNA双链被高温（通常为94°C-98°C）变性成两条单链。

这个步骤不仅可以破坏DNA的二级结构，还可以使DNA解开成两条单链，为下一步的引物结合提供条件。

3.2 退火PCR反应体系中加入的引物会与目标DNA序列互补结合。

退火步骤通过降低温度（通常为50°C-65°C）来促进引物与模板DNA的互补结合，从而在目标DNA序列的两端形成初始的引物结合位点。

3.3 延伸在延伸步骤中，聚合酶利用模板DNA上的引物，以dNTPs为原料合成新的DNA 链。

这个步骤的温度通常为72°C，因为常用的聚合酶具有较高的温度稳定性。

4. PCR类型PCR实验根据不同的应用领域和需要，还可以进行多种特殊扩增技术。

4.1 实时定量PCR实时定量PCR（qPCR）是一种能够实时监测PCR扩增过程的技术。

它可以定量检测样本中的目标DNA的数量，并且具有高灵敏度和高特异性。

4.2 反转录PCR反转录PCR（RT-PCR）是一种将RNA转化为DNA的技术，常用于研究基因的表达水平。

在RT-PCR中，RNA首先经过逆转录反应转化为互补的DNA（cDNA），然后再进行PCR扩增。

PCR检测技术(一) 模板

dNTP是PCR反应所必须的底物，为四种的混合物当四种核苷酸的浓度相同时可将核苷酸的错误掺人率降至最低。最相宜的dNTP终浓度应按照被扩增片段的长度和碱基组成来确定。普通用法的浓度为0.2mol/L。
3.DNA聚合酶
目前PCR扩增中最常用的DNA聚合酶是TagDNA聚合酶，它是由水生栖热菌(Ther-masaquaticus)产生，热稳定性好，可耐94℃高温，在此温度下短时光内对活力无多大影响。最适反应温度为72℃,70℃催化核酸链延伸的速度是2800核苷酸/min，在100uL反应体系中普通用2单位，它的用量多少对PCR扩增效率及特异性有一定影响。除了TagDNA聚合酶外，近年来耐热的pfuDNA聚合酶也被广泛地用于PCR反应，此酶是山极端嗜热的激烈热球菌(Pyrococcusfuriosus)产生的DNA聚合酶，是迄今发觉的掺人错误率最低的耐热DNA聚合酶，但其延长速度比TagDNA聚合酶低550核苷酸/min；另外得到应用的还有一种rTthDNA聚合酶，因为PCR反应以DNA模板举行扩增反应，而rTthDNA聚合酶可将反转录和聚合作用融合在一起，挺直由其将RICA反转录后扩增出大量的DNA片段，因而可大大简化操作程序，提高效率。
TagDNA聚合酶往往会在DNA链3'末端加上非模板互补核苷酸，从而产生不易克隆的PCR产物。通过用其他DNA聚合酶(如T4DNA聚合酶)处理扩增产物，补平或除去突出末端可解决这一问题。
4．反应缓冲液
PCR反应中常用的反应缓冲液含10～50mmol/L(pH8.3～8.8)的Tris-HCl,50mmol/LKCl和1.5mmol/LMgCl2。反应缓冲液的pH至关重要，假如KCl浓度过高，则会抑制酶的活性。在反应中存在适当浓度的Mg2+至关重要，它是TagDNA聚合酶活力所必须的，并可影响PCR产物的特异性和产量、引物退火的程度、模板与PCR产物链的解离温度、引物的特异性、引物二聚体的形成以及酶的活性和精确性等。因为EDTA或磷酸根能影响Mg2+的浓度，所以应注重模板DNA溶液中的EDTA浓度和PCR反应中所加模板和引物的量以及dNTP浓度(dNTP可提供磷酸基团，从而影响Mg2+浓度)。要获得最佳反应结果，必需挑选合适的Mg2+浓度，普通为2～5mmol/L。

分子诊断室收费标准

1190.7
新鲜组织 / 270700003 石蜡组织 / 腹水 270700004 S-1 270700003 270700005 S-2
828
5~6 工作日
212.4 414 1710 5~6 工作日 4~5 工作日
荧光定量 PCR
详见“西妥昔单抗检测意义”
新鲜组织/ 石蜡组织/ 胸水
270700004 S-1
774.9
4~5 工作日
270700003
828
5~6 工作日 4~5 工作日
KRAS 突变在我国 NSCLC 中约占 KRAS 基因 12,13 号 10%，KRAS 突变与 EGFRTKI 靶密码子突变向药物耐药或疗效不佳相关。用于治疗既往接受过化学治疗或不适于化疗的局部晚期 EGFR 基因拷贝数或转移性非小细胞肺癌(NSCLC) EGFR 基因 20 号外显子 T790M 突变 MET 基因扩增 EGFR 基因拷贝数变异与 EGFR 突变或蛋白表达相关，可能与 EGFR TKI 疗效相关。 EGFR-TKI 的主要耐药机制之一。 MET 基因扩增与 NSCLC EGFR TKI 继发性耐药相关。
IGH/c-myc 染色体易位检测 IGH/CCND1 染色体易位检测
API2/MALT1 染色体易位检测
第一部分肿瘤个体化用药分子检测
1、肿瘤个体化用药——靶向药物篇
吉非替尼、表皮生长因厄洛替尼、子受体酪氨酸激酶抑制埃克替尼、剂 (EGFR-TKI) 阿法替尼肿瘤多基因突变分型 BIM 基因 2 号内含子片段缺失
靶向药物药物性质适应证检测项目检测意义检测方法适用样本省物价局编码收费标准报告周期

PCR开展项目简介

胎儿畸形及新生儿角膜炎宫颈癌发生有关内科妇产科优生优育科弓形虫弓形体toxdna新生儿神经系统疾病内科妇产科优生优育科风疹病毒rvrna风疹新生儿先天性风疹综合症主要表现为耳聋白内障和先天性心脏病内科妇产科优生优育科巨细胞病毒hcmvdna巨细胞包涵体病儿多脏器损害内科妇产科优生优育科结核杆菌tbdna结核性疾病内科呼吸内科胸科儿科传染科肺炎支原体mppdna新生儿肺炎肺炎支原体性肺炎内科呼吸内科胸科儿科传染科eb病毒ebdna鼻咽癌病毒性脑炎耳鼻喉科呼吸道科
4沙眼
性病科、妇产科（优生优育科）、泌尿科、皮肤科、外科
*解脲脲原体
UU-DNA
1引起泌尿生殖道感染；
2不孕症；
3新生儿支原体性肺炎或低体重儿；
性病科、妇产科（优生优育科）、泌尿科、皮肤科、外科
人乳头瘤病毒
HPV-DNA
1尖锐湿疣；
2新生儿孕妇患此病婴儿通过产道可发生喉部乳头瘤；
3肿瘤。（HPV6,11型主要引发的是：尖锐湿疣；HPV16,18型主要引发的是：宫颈癌、宫颈息肉）
*丙肝病毒
HCV-RNA
丙型肝炎
内科、传染科、妇产科（优生优育科）
性
传
播
性
疾
病
类
检
查
*淋球菌
NG-DNA
1淋病；
2不孕症；
3新生儿淋菌性眼结膜炎；
4引起泌尿生殖系统感染。
性病科、妇产科（优生优育科）、泌尿科、皮肤科、外科
*沙眼衣原体
CT-DNA
1体性肺炎、眼炎及其他脏器损害；
3宫颈癌发生有关
内科、妇产科（优生优育科）
育
类
检
查
弓形虫（弓形体）
TOX-DNA
1弓形虫性疾病

PCR方法学妇产科检查项目(HPV+GBS)基本情况

1.人乳头瘤病毒（HPV）检测生理情况非感染人体不存在HPV，荧光定量PCR结果为阴性。

病理情况HPV可引起人皮肤、黏膜不同程度的增生性病变，临床表现为良性疣或乳头状瘤，HPV也是尖锐湿疣的病原体，某些型别可使组织发生癌变，引起宫颈癌、口腔鳞状细胞癌、皮肤癌、肛门癌。

HPV基因组为双链环状DNA，HPV的复制方式独特，皮肤中只有基底层细胞可以分裂增殖，基底层细胞向表皮层分化为棘细胞、颗粒细胞、角质层细胞。

即HPV DNA复制、衣壳蛋白的合成与装配分别在上皮不同的细胞层内进行，所以HPV不能在体外细胞培养中增殖。

主要通过直接接触感染者的病变部位或间接接触HPV污染的物品感染，而生殖器的HPV感染主要通过性交传播，少数可经污染的内裤、浴盆、浴巾而间接受染。

新生儿出生时，可经带病毒的产道感染而患喉部乳头瘤。

HPV感染人的皮肤黏膜，主要引起各种疣状损害，无病毒血症。

HPV型别不同，引起的病变不同。

HPV6型、11型主要引起尖锐湿疣；HPV16型、18型主要感染子宫颈，与宫颈癌的发生有密切关系。

HPV33型、31型也可引起子宫颈癌；口腔鳞状细胞癌与HPV16型感染有关等。

标本类型分泌物或活检组织检验干扰因素和注意事项①要求用无菌技术采集标本，应使用无菌有盖容器收集，杜绝污染。

②禁止加福尔马林浸泡。

1.人乳头瘤病毒（HPV）检测生理情况非感染人体不存在HPV，荧光定量PCR结果为阴性。

病理情况HPV可引起人皮肤、黏膜不同程度的增生性病变，临床表现为良性疣或乳头状瘤，HPV也是尖锐湿疣的病原体，某些型别可使组织发生癌变，引起宫颈癌、口腔鳞状细胞癌、皮肤癌、肛门癌。

HPV基因组为双链环状DNA，HPV的复制方式独特，皮肤中只有基底层细胞可以分裂增殖，基底层细胞向表皮层分化为棘细胞、颗粒细胞、角质层细胞。

即HPV DNA复制、衣壳蛋白的合成与装配分别在上皮不同的细胞层内进行，所以HPV不能在体外细胞培养中增殖。

主要通过直接接触感染者的病变部位或间接接触HPV污染的物品感染，而生殖器的HPV感染主要通过性交传播，少数可经污染的内裤、浴盆、浴巾而间接受染。

PCR检测记录表参考模板

基因扩增荧光定量检测记录表
实验日期：检测项目：Linegene保存文件名：
使用说明
1、严格按单一流向进行实验，即试剂准备区（1区）→样本处理区（2区）→扩增分析区（3区），严禁逆向。

本记录表的流向亦遵循此流程；
2、各项目执行后在相应项目前的方框内打√；
3、实验室内温度为15～30℃为合格范围；
4、实验后对实验室的清洁与消毒方法参见“PCR实验室清洁程序”，实验后次日关闭通风设备和移动紫外灯；
5、实验结束后，将标本的检测结果登记至标本记录本上以备查询。

本记录表保存在归档文件夹中，存放在实验室文件柜中，保存2年；
6、Linegene扩增仪中结果保存于D盘对应实验日期的文件夹中，如2004年4月的结果保存于“D：\2004\04\”中，每月底将当月资料备份于软盘中，保存2年。

10人份/盒
RNA类
丙型肝炎病毒(HCV)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
10人份/盒
RNA类
丙型肝炎病毒(HCV)基因分型检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
10人份/盒
性病类
DNA类
沙眼衣原体(CT)核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
20人份/盒
DNA类
淋球菌（NGH）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒
20人份/盒
DNA类
解脲脲(UU)原体核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒
20人份/盒
DNA类
人乳头瘤病毒（6，11型）(HPV6,11)核酸定量检测试剂盒（PCR荧光法）
20人份/盒
DNA类
单纯疱疹病毒II型(HSV II)核酸扩增（PCR）荧光定量测定试剂盒
20人份/盒
RNA类
人类免疫缺陷病毒1型(HIV I)核酸定量检测试剂盒（巢式PCR-荧光法）
DNA类
人乳头瘤病毒（16、18型）(HPV16,18)核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒
20人份/盒
DNA类
人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法(RDB))
20人份/盒
遗传疾病类
DNA类
α-地中海贫血基因诊断试剂盒（gap-PCR法）
20人份/盒
DNA类
β-地中海贫血基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法）
检测种类
核酸种类
产品名称
规格
肝炎类
DNA类
乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
20人份/盒
DNA类
乙型肝炎病毒(HBV)基因分型检测试剂盒（PCR-反向点杂交法）

PCR方法学常见感染系列检查项目(VZV+B19+HAV+TOX)基本情况

生理情况非感染人体不存在VZV，荧光定量PCR结果为阴性。

病理情况水痘-带状疱疹病毒VZV在儿童初次感染时引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，少数人在青春期或成年后引起带状疱疹，皮肤是病毒的主要靶细胞。

小儿水痘好发在3~9岁，多在冬春季流行。

病毒主要通过呼吸道或接触传播。

带状疱疹仅发生于过去有水痘史的人，成人和老人多发。

儿童患水痘康复后，体内存在的病毒不能全部被清除，少量病毒可潜伏于脊髓后根神经节或脑神经的感觉神经节中。

标本类型全血或水疱液或粪便生理情况非感染人体不存在VZV，荧光定量PCR结果为阴性。

病理情况水痘-带状疱疹病毒VZV在儿童初次感染时引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，少数人在青春期或成年后引起带状疱疹，皮肤是病毒的主要靶细胞。

小儿水痘好发在3~9岁，多在冬春季流行。

病毒主要通过呼吸道或接触传播。

带状疱疹仅发生于过去有水痘史的人，成人和老人多发。

儿童患水痘康复后，体内存在的病毒不能全部被清除，少量病毒可潜伏于脊髓后根神经节或脑神经的感觉神经节中。

标本类型全血或水疱液或粪便2.人细小病毒（B19）DNA检测生理情况非感染人体不存在B19，荧光定量PCR结果为阴性。

病理情况B19感染后引起的常见疾病是1）儿童性传染性红斑，潜伏期为1~2周，患者出现发热、全身不适、呼吸道症状等，经过1周左右，病人可出现变态反应。

首先在面颊部出现玫瑰色融合性斑丘疹，随后胸背、上肢、臀股、手足等部位出现网状、环形斑丘疹。

皮疹多持续1~2周即消退，可因日晒、沐浴、情绪紧张等刺激复发。

2）再生障碍性贫血危象，多见于15岁以下儿童。

若病人同时患有慢性溶血性贫血（镰刀细胞性贫血、遗传性球形红细胞增多症、海洋性贫血、全身免疫性溶血性贫血），则容易发生严重的再生障碍性贫血危象。

病人出现发热、苍白、乏力等症状，外周血血红蛋白可降至40g/L以下，但常在1周内恢复基础水平。

3）多发性关节炎，本病多见于成年妇女，B19感染后，病人出现感冒症状，肌肉疼痛、关节疼痛等，约经1周左右症状消失。

分子诊断室收费标准

270700004 S-1
1190.7
4~5 工作日
帕妥珠单抗拉帕替尼曲妥珠单抗抗 HER2 单用于克隆抗体
EGFR 和 HER2 双重
HER2
靶向药物
药物性质
适应证阳性转移性
检测项目
检测意义
检测方法
适用样本
省物价局编码
收费标准
报告周期
IGH/c-myc 染色体易位检测 IGH/CCND1 染色体易位检测
API2/MALT1 染色体易位检测
第一部分肿瘤个体化用药分子检测
1、肿瘤个体化用药——靶向药物篇
吉非替尼、表皮生长因厄洛替尼、子受体酪氨酸激酶抑制埃克替尼、剂 (EGFR-TKI) 阿法替尼肿瘤多基因突变分型 BIM 基因 2 号内含子片段缺失
检测项目省物价局编码 250403003-2 250403065-2 250403065-2 250403013-2 250403066-3 270700004S-1 270700004S-1 270700004S-1 270700004S-1 270700003 270700003 270700004S-1 270700004S-1 270700004S-1 270700003 270700003 270700003 270700003 270700003 270700003 收费名称病原体定量检测病原体定量检测病原体定量检测丙型肝炎病毒 RNA 定量检测人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测-等离子谐振法组织切片基因检测-PCR 法组织切片基因检测-PCR 法 EGFR 基因突变荧光定量聚合酶链式反应法 KRAS 基因突变荧光定量聚合酶链式反应法脱氧核糖核酸测序脱氧核糖核酸测序组织切片基因检测-PCR法组织切片基因检测-PCR法组织切片基因检测-PCR法脱氧核糖核酸测序脱氧核糖核酸测序脱氧核糖核酸测序脱氧核糖核酸测序脱氧核糖核酸测序脱氧核糖核酸测序收费单价 134.4 134.4 134.4 145.3 226.8 212.4 212.4 774.9 1190.7 207 检测项目数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 3 3 1 2 19 4 4 2 5 2 1 套用形式套用收费名称套用收费名称套用收费名称未套用未套用套用收费名称套用收费名称未套用未套用套用收费名称*3 项套用收费名称*3 项套用收费名称套用收费名称*2 项套用收费名称*19 项套用收费名称*4 项套用收费名称*4 项套用收费名称*2 项套用收费名称*5 项套用收费名称*2 项套用收费名称*1 项收费 134.4 134.4 134.4 145.3 226.8 212.4 212.4 774.9 1190.7 621 621 212.4 414.8 4035.6 828 828 414 1035 414 207

病原微生物实验室简介及项目介绍

病原微生物实验室简介及项目介绍病原微生物实验室的检测项目和检测方案根据临床需要综合设计，做到结果稳定可靠、效率高、检测周期短，从而为临床诊断和治疗提供及时和可靠的依据。

血液系统恶性疾病患者常伴免疫功能低下，尤其造血干细胞移植或长期的放化疗后，患者的免疫功能更低，易继发各种病原微生物感染，甚至机会性致病菌爆发感染，部分患者还可因感染继发恶性淋巴细胞增殖性疾病，常常危及生命危险。

目前常用的病原微生物检测方法有：病原微生物培养、免疫血清学检测、抗原检测和基因检测。

由于血液系统恶性疾病患者多免疫功能低下，产生抗体困难;病原微生物培养检测周期长，而且受多种因素影响阳性率很低，不能满足临床需要。

故检测病原基因或抗原更能反应感染的状态。

病原微生物实验室现已开展了多种血液病患者中常见的致病和机会性致病的病原微生物定量和定性检测项目。

主要应用PCR基因扩增检测的方法对病原微生物进分型鉴定，具有检测灵敏度高、分型准确、窗口期短、报告速度快的优势。

所配备的仪器主要有AB 3500实时荧光定量PCR仪、AB 9700和AB Verity 型普通PCR仪。

本实验室的检测项目和检测方案根据临床需要综合设计，做到结果稳定可靠、效率高、检测周期短，从而为临床诊断和治疗提供及时和可靠的依据。

病原微生物实验室现有人员5人，其中特聘教授1人、硕士学历2人、本科1人，专科1人。

项目介绍：1。

病原微生物PCR定性检测项目：1) 人类疱疹病毒筛查(HHV1-HHV8)同时筛查8种人类疱疹病毒2) 出血性膀胱炎病毒(BKV、JCV、SV40)3) 人类T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV1-RNA)4) 真菌PCR2。

病原微生物PCR定量检测项目：人类疱疹病毒1) 单纯疱疹病毒(HSV-1、HSV-2)2) 水痘-带状疱疹病毒(VZV)3) EB病毒(EBV)4) 巨细胞病毒(CMV)5) 人类疱疹病毒6型(HHV-6)6) 人类疱疹病毒7型(HHV-7)7) 人类疱疹病毒8型(HHV-8)呼吸道病毒：1) 呼吸道合胞病毒2) 腺病毒(ADV)肠道病毒：1) 柯萨奇病毒2) 轮状病毒其他特殊病原微生物：1) 微小病毒B192) 结核杆菌3) 卡氏肺囊虫4) 支原体3。

26!检验科PCR实验室数据记录表

1
0.5μM
Taq DNA聚合酶
0.5
1U/50μL
缓冲液
5
1x
MgCl2（25mM）
2.5
2.5mM
纯水
X
总体积
25
2. PCR扩增程序
1.热起始：95°C，5分钟
2.循环扩增：30 cycles
- 95°C，30秒
-温度Tm，30秒
- 72°C，30秒
3.最终延伸：72°C，10分钟
4.保持：4°C，静置
三、实验结果记录
在下方表格中记录PCR扩增结果。请根据实验情况，填写阳性（+）或阴性（-）结果。
样品编号
扩增结果
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19Hale Waihona Puke 202122
23
24
正对
负对
四、实验结论
根据上述实验结果记录，分析样品的扩增情况，得出相应结论。
26!检验科PCR实验室数据记录表
一、实验目的
本实验旨在记录26!检验科PCR实验室的数据，包括PCR反应体系的配制和PCR扩增结果的记录。
二、实验操作
1. PCR反应体系配制
成分
体积（μL）
浓度（最终浓度）
模板DNA（10ng/μL）
2
引物1（10μM）
1
0.2μM
引物2（10μM）
1
0.2μM
dNTPs（2.5μM）

HIV病毒聚合酶链反应检测

HIV病毒聚合酶链反应检测体检表格：HIV病毒聚合酶链反应检测聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）是一种常用的分子生物学技术，用于检测和定量特定DNA序列。

HIV病毒聚合酶链反应检测是一种用于早期诊断HIV感染的重要检测方法。

以下是一份标准的HIV病毒聚合酶链反应检测体检表格。

姓名：___________________ 年龄：_________________ 性别：____________________联系方式：电话号码：____________________ 电子邮件：____________________日期：________________________ 医疗机构：____________________首次感染状况：1. 今日是否为首次进行HIV病毒聚合酶链反应检测？- 是 - 否风险评估：请回答以下问题，以评估您的HIV感染风险，并决定是否需要进行HIV病毒聚合酶链反应检测。

1. 您是否曾与HIV感染者接触过？- 是 - 否2. 您是否曾经进行过不安全的性行为？3. 您是否曾与多个性伴侣有过性行为？- 是 - 否4. 您是否曾分享过注射药物的器具，如针头或注射器？- 是 - 否5. 您是否曾进行过输血或输液？- 是 - 否上述问题中，如果您回答了“是”，请继续填写以下必要信息：1. 曾接触过的HIV感染者姓名/关系：____________________2. 曾进行不安全的性行为的频率：____________________3. 性伴侣数量：____________________4. 分享注射器或针头的情况：____________________5. 输血/输液日期：____________________个人健康状况：1. 过去三个月内，您是否有发热、恶心、呕吐、腹泻、皮疹等症状？ - 是 - 否2. 过去三个月内，您是否有体重显著下降？- 是 - 否3. 过去三个月内，您是否有频繁感染或反复感染的情况？4. 过去三个月内，您是否有进行过其他检测或治疗？- 是 - 否其他信息：1. 您是否患有其他疾病或接受过其他治疗？- 是 - 否2. 近亲属中是否有HIV感染者？- 是 - 否3. 您是否曾参与HIV感染的研究或治疗项目？- 是 - 否备注（可根据需要填写其他重要信息）：___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________请确保填写的信息准确无误，谢谢您的合作！注意事项：1. 本检测结果仅供参考，如有疑问或需要进一步诊断，请咨询专业医生。

超全统计!PCR实验室经常开展的检验项目介绍,从此再也不求人!

超全统计！PCR实验室经常开展的检验项目介绍，从此再也不求人！PCR实验室又叫基因扩增实验室，PCR是聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)的简称。

是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。

通过DNA基因追踪系统，能迅速掌握患者体内的病毒含量，其精确度高达纳米级别。

在新冠疫情之前，大多数PCR实验室集中在大型三级甲等医院，因其建设成本高、人员素质要求高，实验室运营成本高，常规检测样本量少等特点，很多二级医院并没有建设。

在国家政策和疫情发展的推动下，各地二级及以上医疗机构都已经建立独立合规的PCR实验室，实验室人员经过2年多疫情的“锤炼”，也已经初步具备了符合岗位要求的素质。

新冠疫情终会结束，除了新冠核酸检测，“遍地开花”的PCR实验室还能做些什么呢？本文为大家整理介绍PCR实验室可开展的检验项目。

一、感染性疾病分子检验项目1.乙肝病毒核酸检测利用实时荧光定量PCR以定量检测HBVDNA，从而对HBV感染做出快速早期诊断。

用于HBV感染的辅助诊断和乙型肝炎患者药物治疗的疗效监控。

2.乙肝病毒基因分型检测国内HBV基因型中约60%为C型基因，30%为B型基因。

应用PCR 结合Taqman技术，检测B/C型HBV特异性DNA核酸片段。

可以结合临床表现和其它实验室检测指标对患者病情进行评价。

3.丙肝病毒核酸检测利用实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现HCVRNA 的定量检测。

用于HCV感染的辅助诊断和丙型肝炎患者药物治疗的疗效监控。

4.丙肝病毒基因分型应用PCR结合Taqman技术，对1b型、2a型HCV的特异性RNA核酸片段进行检测。

可以对标本进行HCV的基因分型，结合临床表现和其它实验室检测指标对患者病情进行评价。

5.结核分枝杆菌DNA定量检测应用PCR结合Taqman技术，对TB的特异性DNA核酸片段进行荧光检测，从而对TB感染做出快速早期诊断。

PCR检测项目及取样

PCR检测项目及取样
取样方法：
1、静脉采血
（1）备齐用物，贴好标签，核对无误后按静脉穿刺法采取所需血量，立即卸下针头，将血液沿管壁缓慢注入试管内，切勿将泡沫注入，避免震荡，以防红细胞破裂而造成溶血。

因血液中细胞的内外成分有很大差异，如细胞内钾离子浓度是细胞外的20倍，细胞内的某些酶含量也较细胞外高，如发生溶血，则直接影响检验结果的准确性。

（2）如需全血、血浆，可将血液如上法注入盛有抗凝剂（肝素除外）的试管内，立即轻轻摇动，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固。

2、痰标本采集
嘱病人晨起用清水漱口清洁口腔，然后用力咳出气管深处的痰液，盛于蜡纸盒或广口瓶内。

3、分泌物标本采集
（1）咽拭子采集将拭子取出蘸无菌生理盐水（必要时以压舌板轻压舌部），嘱病人发“啊”音，以轻快的动作，迅速擦拭两侧腭弓及咽、扁桃体的分泌物后，速将试管口在酒精灯火焰上消毒，将拭子插入试管中塞紧，并立即送验。

取霉菌培养标本，须在口腔溃疡面上采取分泌物。

（2）分泌物拭子采集用洁净生理盐水湿棉签擦去尿道口、子宫颈口等患处的脓性分泌物，另取一支洁净的湿棉签插入子宫颈口或尿道壶腹部稍加压力转动棉签取脱落细胞及分泌物样本，洗涤到含1ml生理盐水的1.5ml离心管中。

PCR项目及临床意义

PCR检验室常规项目简介1. 乙型HBV-DNA定量HBV-DNA定量检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法间接检测的局限性，通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况从而对于HBV的准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等各个方面具有重大意义：1）判断疾病的严重程度和传染性。

HBV-DNA是直接反映HBV复制状态及传染性的最佳指标。

2）PCR定量结果与血清免疫学结果的综合评价。

采用FQ-PCR定量检测乙肝病毒DNA，结合“二对半”检测结果，对于机体乙肝病毒感染状态尤其变异株发生和病人预后的评估更为科学。

3）观察抗病毒药物疗效，指导药物用量。

直接检测血清中的HBV-DNA是监控HBV 传染和观察抗病毒药物疗效的最可靠的方法。

根据《2000拉米夫定临床应用指导意见》，中国慢性乙型肝炎病人治疗的目的之一就是要降低血清HBV-DNA。

同时血清HBV-DNA滴度的动态变化还可在临床上对用药的剂量、用药时间是否需要联合用药以及用药的效果等提供参考。

4）献血员窗口期病毒核酸的筛查及早期诊断。

HBsAg在血清中的检出通常在乙肝病毒感染后的2－4月出现，平均为56天左右。

而HBV-DNA的检出可以将该所谓″窗口期″提前6－15天，对于早期诊断和提高输血安全有着重要的意义。

5）预测病情、判断预后。

通常HBV-DNA持续阳性超过6个月的会转为慢性肝炎。

抗－HBe阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝损严重。

6）对阻断母婴传播的监测。

联合应用高价免疫球蛋白和乙肝疫苗有效地阻断母婴传播，但仍有5-10%婴儿对疫苗呈低反应，荧光定量PCR可对此进行监测。

7）器官移植中的作用。

肝脏器官移植是目前肝硬化晚期治疗的唯一方法，定量检测HBV-DNA为肝移植术后的跟踪观测具有较好的临床价值。

乙肝病毒定量相关检测还有：乙肝标志物定性，乙肝标志物定量，乙型HBV-DNA 定量，肝脏功能检测。

2. 乙型HBV-DNA定性HBV-DNA是乙肝病毒基因，其有无、多少是乙肝病毒存在及有无复制能力的直接标志。

PCR实验室原始记录

登革热病毒基孔肯雅热病毒诺瓦克病毒季节性流感病毒甲型h1n1流感病毒h7n9流感病毒中东呼吸症病毒甲肝病毒乙肝病毒丙肝病毒人乳头状瘤病毒hpv伤寒杆菌霍乱弧菌疟原虫抗原检测甲乙型流感病毒痢疾杆菌试剂厂家批号
PCR实验室原始记录
实验项目：登革热病毒基孔肯雅热病毒诺瓦克病毒季节性流感病毒甲型H1N1流感病毒H7N9流感病毒中东呼吸症病毒甲肝病毒乙肝病毒丙肝病毒人乳头状瘤病毒（HPV）伤寒杆菌霍乱弧菌疟原虫抗原检测甲、乙型流感病毒痢疾杆菌
仪器状态：
故障/良好/其它
故障/良好/其它
故障/良好/其它
故障/良好/其它
阳性对照
Ct值：
UNDET.
阴性对照
Ct值：
UNDET.
实验判读结果：
样本结果：
阴性样本编号：
阳性样本（Ct值）：
备注：
试剂厂家（批号）：上海之江/
核酸类型：DNA/RNA
采样时间：
样本类型：全血血浆血清漱口水胸水腹水脑脊液尿液粪便咽拭子
实验方法：荧光PCR法
样本编号温度：℃
实验室湿度：%
仪器开启时间：
生物安全柜：时分
全自动核酸提取仪：时分
ABI7500：时分
离心机：时分

PCR考核内容及评分表

思考步骤,监考老师请注意讲解内容与考核标准保持一致)
得分
□否考核评语
进实验室的穿戴顺序:口罩,帽子,实验服,鞋套,手套等
实验准备阶段
实验仪器,耗材,试剂的准备
实验台面清洁，移液器清洁,物品摆放不凌乱
正确取用各种试剂管，不得触碰管内盖。拿捏管位置合适。无加试剂时应及时盖好盖子，不长时间开启
在PCR管管盖和管口稍下处管壁外侧编号
出现其他错误（此为扣分项）
污染模板或试剂
必定不合 PCR体系配置出错格项 PCR程序设定出错
电泳结果不符合要求
最终成绩统计结果
请考生仔细阅读考核细则、考核说明、评语、成绩，确认后签字
此项中若出现任何一项，则视为不合格
说明：PCR考核总分为100分，85分以上（含85分）判定为合格
文件编号/Document Number：版本号/Version number：
PCR考核评定表
姓名：
工否通过：□是
操作评分细则 (每项为5分，该项出现任何错误都判定为0分；操作熟练两项中分数设置为5
考核日期：
分、3分、0分；操作熟练的标准：实验操作条理清晰，实验过程不需要停顿
正确计算试剂使用量，配置表的合理使用
取用合适量程的移液器
加试剂顺序正确，加Taq酶后放于冰上
Mix配好后混匀离心,离心机配平
正确分装Mix量
实验操作过程正确加入模板
中退枪头不在操作区上方经过，不经过开盖的枪头盒，枪体不伸入垃
圾盒
不长时间开启枪头盒，阶段性使用后应及时盖好
不在操作区上方进行非必须操作，如取放移液器、调节移液器量程、配制试剂、吸液等
操作熟练，20分钟内完成操作
正确使用PCR仪,操作熟练，5分钟内设定PCR程序

PCR实验记录表

PCR 实验室检验流程表检验日期：检验项目：实验前准备试剂在有效期内扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内 □生物安全柜的滤膜在使用有效期内消毒溶液在有效期内离心管、带滤芯吸头已经经过质检合格操作者：试剂准备区（1区）实验前：实验后：清洁实验室台面、地面、加样器，并进行紫外线照射30分钟以上。

处理实验废弃物。

操作者：打开通风设备实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）冰箱温度：冷藏室（2~8℃）： ℃ 冷冻室（-18℃±2℃）： ℃实验室温度： ℃（允许范围：10~30℃）相对湿度：（允许范围：30%~70%） PCR 试剂来源：批号：检验项目：本次试验用量：人份剩余量：人份标本制备区（2区）检验日期：检验项目：实验前：核酸提取及加样过程：按sop 进行仪器设备使用：生物安全柜：正常不正常恒温仪温度校准：正常不正常离心机：正常不正常振荡器：正常不正常试验后：清洁实验室台面、地面及仪器设备。

处理实验室废弃物。

操作者：打开通风设备实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）冰箱温度：冷藏室（2~8℃）： ℃ 冷冻室（-18℃±2℃）： ℃ 实验室温度： ℃（允许范围：10~30℃）相对湿度：（允许范围：30%~70%）阳性室内质控物来源：浓度及批号：扩增位置：阴性室内质控物来源：批号扩憎位置：扩增及产物分析区（3区）检验日期：检验项目：扩增仪保存文件名：实验前：失控原因及分析：（失控判断标准及原因分析）实验结果：实验后：清洁实验室台面、地面及仪器设备。