特殊显微镜的使用

(A) bright-field microscopy.(B) phase-contrast microscopy (C) differential-interference-contrast microscopy. (D) dark-field microscopy.
作业
1.绘制口腔粘膜上皮细胞、洋葱内表皮细
在使用时只要把相应的光阑转到光路即可。
2.2相板
位于物镜内部的后焦平面上。相板上有两个区域， 直射光通过的部分叫“共轭面”，衍射光通过的部 分叫“补偿面”。带有相板的物镜叫相差物镜，常 以“Ph”字样标在物镜外壳上。
相差物镜剖面图
转盘聚光器构造图
• 二、实验步骤
• 1.样品制备：在一张清洁无痕的载玻片上滴一滴生 理盐水，用牙签刮自己的口腔粘膜少许或用镊子撕 洋葱内表皮细胞与载玻片上的生理盐水混合均匀， 盖上清洁的盖玻片，用滤纸条吸取盖片周围多余的 水分，用指甲油封片（或不封片）。 • 2.将10x相差物镜旋入光路。 • 3.将相应于10x相差物镜的相差聚光器的环状光阑移 入光路中，完全打开聚光器的孔径光阑。 • 4.将样品置于载物台上，用聚焦螺旋聚焦样品。
相差最重要的步骤。具体方法是：取下一个目镜，插
入一个聚焦望远镜或肉眼直接观察，如果环状光阑的 明亮光圈与圆形相板不吻合，可以通过调节聚光器上 的调中螺旋使之吻合。调节吻合后，插入目镜，就可 在目镜中观察到一个清晰的口腔上皮细胞的相差像。
• 7.如果换用高倍相差物镜观察，需要移入相应的高倍
相差物镜的聚光器环Fra Baidu bibliotek光阑进行观察。
不发生变化，仅相位有变化(相应发生的差异即相位差)， 而这种微小的变化，人眼是无法加以鉴别的，故在普通显
微镜下难以观察到。
相差显微镜能够改变直射光或衍射光的相位，并
且利用光的衍射和干涉现象，把相位差变成振幅
差（明暗差），同时它还吸收部分直射光线，以 增大其明暗的反差。因此可用以观察活细胞或未 染色标本。
胞图（3~5个细胞），并比较暗视野和相差 显微镜下洋葱内表皮细胞的差别？ 2.明视野和相差显微镜成像原理有哪些区 别？相差显微镜的特殊组件是什么？
细胞生物学实验
实验一 特殊显微镜的原理及其使用
I 暗视野显微镜
一、实验目的
• 了解暗视野显微镜观察活细胞的基本原理； • 了解暗视野显微镜的特殊组件和位置；
• 掌握调节暗视野显微镜的基本步骤。
二、原理和结构特点
1.原理
根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背景条件下观
察被检物体的显微镜。 不让直射光线进入物镜的镜头，而是先让直射光线经 过暗视野聚光器后改变途径，使其斜向射向被检物体。 能观察到明视野下看不到的极其微小的物体，可判断 物质颗粒的存在与否。最高分辨率可达0.004微米 主要用于微小粒子、细菌形态、细菌记数，透明标本
1 原理
• 光波有振幅（亮度）、波长（颜色）及相位(指在某一时间
上光的波动所能达到的位置)的不同。 • 当光通过物体时，如波长和振幅发生变化，人们的眼睛才 能观察到，这就是普通显微镜下能够观察到染色标本的道 理。而活细胞和未经染色的生物标本，因细胞各部微细结
构的折射率和厚度略有不同，光波通过时，波长和振幅并
• 5.用柯勒照明法调节聚光器：①将视场光阑关到
最小；②用聚光器升降调节螺旋，调节聚光器的 上下位置，直至在目镜中观察到视场光阑像的边
缘清楚；③调节聚光器的调中螺旋，使视场光阑
的像移至视场中央（调中聚光器）；④打开视场
光阑，使其边缘与目镜中的视场同样大小。柯勒
照明是调好相差像的关键之一。
• 6.观察物镜后焦面，调节仪器使聚光器中环状光阑的 像和相差物镜中相板的圆环互相吻合，这一步是调好
作
细胞）
业
1.绘制暗视野内洋葱内表皮细胞图（3~5个 2.明视野和暗视野像的主要区别是什么？暗 视野显微镜的特殊组件是什么？
II.相差显微镜的原理和使用
一、实验目的
• 了解相差显微镜观察活细胞的基本原理； • 了解相差显微镜的特殊组件和位置； • 掌握调节相差显微镜的基本步骤。
二、原理和结构特点
2.结构特点
• 相差显微镜与普通显微 镜的主要不同之处是： 用环状光阑代替可变光 阑，用带相位板的物镜 (通常标有PH的标记)代 替普通物镜，并带有一 个合轴调节用的望远镜。
2.1环状光阑
具有环形开孔的光阑。位于聚光器的前焦点平面上， 光阑的直径大小是与物镜的放大倍数相匹配的，并
有一个明视场光阑，与聚焦器一起组成转盘聚光器。
观察等。
2 .结构特点 使用中央遮光板或暗 视野聚光器（常用的是抛 物面聚光器），使光源的 中央光束被阻挡。不能由 下而上地通过标本进入物 镜。从而使光线改变途径， 倾斜地照射在观察的标本 上，标本遇光发生反射或 散射，散射的光线投入物 镜内，因而整个视野是黑 暗的。
三、实验步骤 1.样品制备：在一张无划痕、清洁的载玻片上滴一 滴生理盐水，用牙签取牙垢或用镊子撕洋葱内表 皮细胞与载玻片上的生理盐水混合均匀，盖上盖 玻片，用滤纸条吸取盖片四周多余的水分，镜检。 2.将暗视野聚光器安装在显微镜上，调强照明光。 3.在聚光器透镜的上表面滴上镜头油。向上缓慢调升 聚光镜，使镜头油与载玻片下表面缓缓接触。只 有在油滴与载玻片的底面相接触后，光线才能射 向标本。 4.将标本置于载物台上，插入10x物镜，用调焦螺旋 聚焦样品。