豆豉和腐乳中耐盐乳酸菌的筛选鉴定

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A bs t r ac t: S a mp l e s o f s o me c om m e r c i a l D ouc h i a nd S uf u we r e us e d a s e x pe im e r nt a l ma t e r i ls a ,a d o pt i ng c lc a i um d i s s ol v i ng in r g me t ho d,t h i r — t y —one s t r a i ns o f La c t i c a c i d b a c t e r i a we r e i s ol a t e d f r o m ni ne s a mp l e s of D ouc hi a n d S u f u.F i v e s t r a i ns we r e s c r e e ne d o ut f or t he i r h i g he r a b i l i t y ofr e s i s t a nc e t o s a l t ,na me l y BD 2, D B1 5,F W 1 —2, GH 1 ~2B a nd W ZH 1—3 B, t he Na Cl c on t e nt c a n r e a c h 1 2 %, i t wi l l p l a y s a n i m po r t a nt r ol e i n i m pr o vi ng t h e q ua l i t y of D ou c hi a nd Su f u. And t he i f ve s t r a i n s we r e i de n t i ie f d b y m ol e c u l a r b i o l o g y me t h od. Th e i de nt i ic f a t i on r e s u l t i nd i — c a t e d t ha t BD 2, D B1 5,GH 1 —2 B a nd W ZH 1 —3 B we r e Ent e r oc oc c us du r a ns , FW 1—2 wa s Ent e r oc o c c us f a e c a l i s . Ke y wo r ds : La c t i c a c i d b a c t e r i a; s a l t -r e s i s t a nc e; s c r e e n i ng; i d e nt i ic f a t i o n
工 作 台 zHT H—c1 1 1 8 C等 。
1 . 2 1 . 2 . 1 方 法 乳 酸 菌 的 分 离 与 纯 化
乳 酸 菌 是 豆 豉 和 腐乳 中 重 要 的天 然 菌 群 。乳 酸 菌 在 代 谢 过 程 中 产 生 的 代 谢 产 物 赋 予 了 食 品 特 殊 的 风味 、 色泽 和质 地 , 而且 能 够抑 制腐 败 菌 的生 长 , 从 而
养 基平 板上 , 3 7℃ 培 养 2 4  ̄ 4 8 h 。 从 平 板 上 随 机 选 取 有溶 钙 圈且 符 合 乳 酸 菌 菌 落 形 态 特 征 的菌 落 , 在 MRS固 体 培 养 基 上 反 复 划 线 纯
分离 、 筛 选和 鉴定 , 旨在 为 稳 定 和 提 高 豆 豉 、 腐 乳 的产 品 品质 , 实 现 豆豉 、 腐 乳 的 工业 化 生 产 起 到 积极 的促 进作用 , 同 时 也 可 为 优 良乳 酸 菌 制 剂 的 研 究 和 功 能 性
豆豉 、 腐乳 : 购 于农 贸批 发市 场 ( 共9 个样) 。 MRS液 体 培 养 基 , M RS固体 培 养 基 , 脱脂 乳 培养
基 , P CR -  ̄剂 盒 等 。 可 见 分 光 光 度 计 T6新 锐 , 台 式 高 速 离 心 机
TG1 6 G, 电 热 恒 温 鼓 风 干 燥 箱 DHG一9 0 7 5 A, 电热 恒 温 培 养 箱 DHP -9 0 8 2, P CR. 仪 CF X9 6 , 垂 直 流 超 净
术与加工工程 。 通讯作者 : 张凤梅
化, 直 至长 出 的菌落形 态 基本一 致 。 将 上述 所 有 分 离 纯 化 好 的 菌 株进 行 革 兰 氏染 色 试验 和过氧 化氢 酶试验 , 选 取 革 兰 氏 染 色 阳性 、 过 氧化 氢 酶 试 验 阴性 的 菌 株 暂 定 为 乳 酸 菌 , 并 将 其 进 行 保
摘 要: 以市售不 同厂 家的豆豉和腐乳为原料 , 采 用溶钙 圈法 , 从 中分 离得 到 3 1 株 菌株 ; 经Na C l 耐受性试验 , 筛选得到 5 株耐 盐性较
强的菌株 , 即B D2 、 DB 1 5 、 F W1 — 2 、 G H1 — 2 B和 WZ H1 — 3 B, 耐盐性可达到 1 2 %, 耐盐性菌株的 筛选对提 高豆豉腐乳的品质起 着重要作
NAN Xi a o — f a n g , BAO Qi u ~ h u a , S HUANG Qu a n, ZHANG F e n g —me i
( Co l l e g e o f Fo o d S c i e nc e a nd Eng i ne e ing r , I nne r M on g o l i a Ag r i c u l t ur a l Uni ve r s i t y, Ho h ho t 01 0 0 1 8 , Chi na )
中图分类号 : q9 3 — 3 3 1
文献标识码 : A
文章编号 : 1 0 0 1 — 2 2 3 0 [ 2 0 1 6 } 0 4 — 0 0 1 0 — 0 3
I s o l a t i on a nd i de nt i 】 6 i c a t i on o f s a l t -r e s i s t a nt La c t i c a c i d b a c t e r i a f r o m D ouc hi ,S uf u
1 Q2 6 臻 4 4 卷第 4 期( 总第3 o 期
Re s e a r c h P a p e r s  ̄ 究报告
藏 备用 。 1 . 2 . 2 菌 株 的 筛 选
不 断 变 小 。 在 Na CI 的质 量分 数 为 2 %、 4 %和 6 %的 MI L S 液 体 培 养基 中 , 所 分 离 的菌 株基 本 不 受影 响 , 均 能 生 长 良好 , OD 值 范 围 为 0 . 7 9 8  ̄ 2 . 7 2 4之 间 ; 当 Na C1 的 质 量 分数 上 升 为 8 %时 , 部 分 菌株 的 生 长受 到 了影
将 上 述 保 藏 的 菌 株 在 MRS液 体 培 养 基 中 活 化 三 代后 , 以耐盐性 为筛 选条 件 , 筛 选 出 耐 盐 菌 株 。 具 体 方 法为 : 将 活化 好 的菌株 , 按质 量 分 数 为 2 %接 种 量 分 别 接 种 于 含 Na C1 质量 分数 为 2 %, 4 %, 6 %, 8 %, 1 0 %, 1 2 %, 1 4 %, 1 6 %, 1 8 %的 M RS液 体 培 养 基 中 ; 于3 7℃ 培 养 箱
延 长 食 品 货 架 期 。 本 研 究 对 豆 豉 和 腐 乳 中 耐 盐 性 的 乳 酸 菌 进 行 了
无 菌 条 件下 称 取 豆 豉 、 腐 乳 样 品各 1 . 0 g, 并 分 别 用 9 . 0 mL无 菌 生 理 盐 水 浸 泡 , 混匀 , 将 1 . 0 mL洗 脱 液 接种至 5 . 0 mL脱 脂 乳 培 养 基 中 , 3 7℃ 培 养 2 4  ̄ 4 8 h。 选 择 适 宜 的稀 释度 , 各取 0 . 2 r n L涂 布 于 M RS固 体 培
1 . 2 . 3 菌 株 的 鉴 定 1 . 2 . 3 . 1 生 化 鉴 定
BD4的 oD 值 仍 相 对 较 高 ; 表 明这 1 3 株 菌 具有 一 定 的 Na C1 耐受 能力 ; 当 Na C1 的质量 分数 到达 为 1 2 %时 , 只有 菌 株 w zH1 - 3 B, I = W1 -2 , GH1 -2 1 3 , DB1 5 , BD2 的 OD 。 。 值在0 . 1 0 0 2  ̄ E 右, 依然可 以生长 ; 当 Na G1 的质 量 分 数 上升为 1 4 %、 1 6 % 和1 8 % 时, 菌 ̄ w z r - n一 3 B, I = W1 - 2 。 Gi l l 一2 B, DB1 5 , BD2的 OD6 0 0值 范 围 分 别 为 0 . 0 3 2 ~ 0 . 0 6 5 、 0 . 0 2 9  ̄ 0 . 0 5 7和 0 . O 1 9 ~ 0 . 0 4 8 , 考 虑 到接 种 量 的影 响, 可 初 步 判 定 菌 株 在 Na C1 质量分数为 1 4 %、 1 6 %和 1 8 % 的 MRS 液 体 培 养 基 中不 生 长 。 因此 , 可筛选得 到 5 株具
0 引 言
豆豉 是 以豆类 为原料 , 经 由原 料 处 理 、 制 曲及后 发
豆豉 、 腐乳 的研 发提 供理 论基 础 。
1 实 验
1 . 1 材料、 试 剂 与设备
酵 三 阶 段 酿 制 而 成 的 一 类 传 统 发 酵 食 品 。腐 乳 是 我 国
独有 的调 味 品 , 是 一种 利 用微 生 物法 改 变植 物 蛋 白风 味 的植 物奶 酪食 品 , 又称 为 中 国干 酪 n 1 。 因豆 豉 和 腐 乳通 常 以天然发 酵方 式生产 , 且 发酵周 期较 长 , 必然 会 积 累 大 量 重 要 微 生 物 。 同 时 , 腐 乳 和 豆豉 中 的微 生 物相 关研究 , 缺 乏像 干酪 、 发 酵 乳 那 样 系 统 的研 究 。 因 此 , 如 果 加 以分 离 利 用 , 将具 有 十. 4 ) - - 重 要 的意 义 。
w ww . c hi na da i r y . ne t
中国乳 品工业
d q / r yI NDU S T R Y
z g r p g y @1 6 3 . C O n r
豆豉和腐乳 中耐盐乳酸菌 的筛选鉴定
南晓芳 , 包秋华 , 双全 , 张凤梅
( 内 蒙 古 农 业 大 学 食 品 科 学 与 工程 学 院 , 呼和 浩特 0 1 0 01 8 )
响, OD 值 范 围 为 0 . 1 4 5  ̄ 0 . 5 6 8 之 间; 当 Na G1 的质量 分 数上升为 1 0 %时 , 大 部 分 菌 株 的生 长 受 到 了 抑制 , 但
是 W ZH1 — 3 B, I Z W 1 — 2, Y j l 一2 A, Y J 2 —2 A, Y J 2 —4 B,
G H 1— 2B ,Y C 1—4A ,D B 4,D B 6 ,D B 1 2 ,D B 15,B D 2 ,
中培 养 2 4 h , 然 后 以 未 接 种 的 M Rs 液 体 培 养 基 做 空 白 对照 测定 各组发 酵液 在 6 0 0 r i m波 长处 的吸光值 。
用 。 然 后 通 过 生理 生 化 和 分 子 生物 学鉴 定 , 确 定B D2 、 DB 1 5 、 GH1 - 2 B和 W Z H1 - 3 B为 坚强 肠 球 菌 ( E n t e r o c o c c u s d u r a n s ) , F W1 — 2 为 粪 肠 球 ( E n t e r o c o c c u s f a e c a l i s ) 。 关键词 : 乳 酸茵 ; 耐盐性 ; 筛选 ; 鉴 定
收稿 日期 : 2 0 ( 3 1 4 6 0 4 4 3 ) ; 内蒙古博士科研启动基金 ( B J 2 0 1 3 D一 1 8 ) ; 内蒙古博士科研启动基金( 2 0 6 0 1 1 ) 。 作者简介 : 南 晓芳 ( 1 9 8 9 一 ) , 女, 硕 士研 究生 , 研究方 向为乳 品肉品生物技
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