质粒提取总结
质粒提取总结原理小提中提浓度测定
碱裂解法抽提质粒原理溶液I，５0mM葡萄糖/25 ｍM Trｉs—Cl / 10ｍM EDTA,pH８。
０;（溶菌酶：使细胞壁裂解;RNase:将裂解完的ＲNA去除，防止RNA污染)溶液II,０。
２N NaOH/ 1％SＤS;溶液IＩI，3M醋酸钾/ 2 M醋酸。
溶液I的作用:①任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当ｐＨ值的Tris —Ｃｌ溶液。
②５0ｍＭ葡萄糖：加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部.因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言,几乎没有任何影响.所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。
③EＤTA:ＥDTA是Ca2＋和Mｇ2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性和抑制微生物生长.在溶液I中加入高达10 mM的EDTA，无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。
如果不加EDTＡ,其实也没什么大不了的，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DＮA会迅速被降解,因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。
如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提质粒呢?只要用等体积的水,或LB培养基来悬浮菌体就可以了.有一点不能忘的是,菌体一定要悬浮均匀，不能有结块。
溶液II:这是用新鲜的0.4 N的NaＯH和2％的SDS等体积混合后使用的。
要新从浓ＮaOH稀释制备０.4N的NaOＨ，是为了保证ＮaOH没有吸收空气中的CＯ2而减弱了碱性.其实破细胞的主要是碱，而不是SＤS,所以才叫碱法抽提。
事实上NａOH是最佳的溶解细胞的试剂,不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞,碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜）结构向micelle（微囊)结构的相变化所导致。
用了不新鲜的0.4 N NａOH,即便是有ＳＤＳ也无法有效溶解大肠杆菌,自然就难高效率抽提得到质粒.如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒，因为SＤS也是碱性的,只是弱了点而已。
质粒dna的提取实验报告
质粒dna的提取实验报告质粒DNA的提取实验报告引言：DNA提取是分子生物学研究中的基础实验之一，通过提取DNA可以进一步进行PCR扩增、基因克隆等实验。
本实验旨在提取质粒DNA，质粒DNA是存在于细菌细胞质中的环状DNA分子，具有重要的研究价值。
本文将详细介绍实验的步骤、原理以及结果分析。
材料与方法：1. 细菌培养液：选择含有目标质粒的细菌进行培养，如大肠杆菌。
2. 细菌培养基：选择适宜的培养基，如LB培养基。
3. 细菌培养器具：如培养皿、离心管等。
4. DNA提取试剂盒：选择适合的DNA提取试剂盒，如酚/氯仿法或硅胶柱法。
5. 离心机：用于离心细菌培养液以获取细菌沉淀。
6. 紫外可见分光光度计：用于检测DNA的纯度和浓度。
实验步骤：1. 细菌培养：将含有目标质粒的细菌接种于LB培养基中，培养过夜，使细菌充分繁殖。
2. 收集细菌：将培养液离心，以12000转/分钟离心10分钟，将细菌沉淀收集。
3. 细胞裂解：加入适量的细胞裂解缓冲液，使细菌细胞裂解，释放DNA。
4. 蛋白质沉淀：加入酚/氯仿混合液，离心分离上层的DNA溶液和下层的蛋白质。
5. DNA沉淀：将DNA溶液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，轻轻倒置离心管，使DNA沉淀出来。
6. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除残余的盐和杂质。
7. DNA溶解：用适量的去离子水溶解DNA沉淀，得到纯净的DNA溶液。
8. DNA浓度检测：用紫外可见分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
结果与分析：通过实验，成功提取了质粒DNA，并进行了浓度检测。
根据实验结果，我们可以得到DNA的浓度和纯度信息，这对于后续的实验设计和操作非常重要。
此外，实验中还可以通过凝胶电泳等方法对提取的DNA进行进一步的分析，如确定DNA的大小和完整性。
结论：本实验成功提取了质粒DNA，并获得了纯净的DNA溶液。
通过浓度检测和进一步的分析，我们可以进一步了解DNA的特性和应用。
提取质粒实验报告
提取质粒实验报告提取质粒实验报告引言：质粒提取是分子生物学中常用的实验技术之一，通过提取质粒，可以获得目标基因的DNA序列，进而进行进一步的研究和应用。
本实验旨在通过一系列步骤，从细菌中提取质粒，并对提取的质粒进行分析和鉴定。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养液- 质粒DNA提取试剂盒- 离心管- 离心机- 试剂盒中的缓冲液、溶解液、洗涤液、洗涤缓冲液、洗涤液浓缩液、洗涤缓冲液浓缩液、洗涤缓冲液浓缩液2、洗涤缓冲液浓缩液3、洗涤缓冲液浓缩液4、洗涤缓冲液浓缩液5、洗涤缓冲液浓缩液6、洗涤缓冲液浓缩液7、洗涤缓冲液浓缩液8、洗涤缓冲液浓缩液9、洗涤缓冲液浓缩液10- 水浴锅- 离心管架2. 实验方法：- 步骤一：将大肠杆菌培养液离心，收集菌体沉淀。
- 步骤二：将收集的菌体沉淀加入溶解液中，使其充分溶解。
- 步骤三：加入缓冲液，进行离心分离。
- 步骤四：将上清液转移到新的离心管中，加入洗涤液进行洗涤。
- 步骤五：加入洗涤缓冲液进行洗涤。
- 步骤六：加入洗涤缓冲液浓缩液进行洗涤。
- 步骤七：加入洗涤缓冲液浓缩液2进行洗涤。
- 步骤八：加入洗涤缓冲液浓缩液3进行洗涤。
- 步骤九：加入洗涤缓冲液浓缩液4进行洗涤。
- 步骤十：加入洗涤缓冲液浓缩液5进行洗涤。
- 步骤十一：加入洗涤缓冲液浓缩液6进行洗涤。
- 步骤十二：加入洗涤缓冲液浓缩液7进行洗涤。
- 步骤十三：加入洗涤缓冲液浓缩液8进行洗涤。
- 步骤十四：加入洗涤缓冲液浓缩液9进行洗涤。
- 步骤十五：加入洗涤缓冲液浓缩液10进行洗涤。
- 步骤十六：将洗涤后的质粒DNA溶解于水中。
实验结果与讨论：在本实验中，我们成功地从大肠杆菌中提取到了质粒DNA，并进行了分析与鉴定。
通过对提取的质粒DNA进行电泳分析，我们观察到了明显的DNA条带，表明质粒DNA的提取是成功的。
此外，我们还对提取的质粒DNA进行了鉴定。
通过使用限制性内切酶对质粒DNA进行切割，并进行电泳分析，我们可以确定质粒中是否存在目标基因。
质粒提取实验报告
质粒提取实验报告质粒提取实验报告引言：质粒提取是分子生物学中常用的实验技术之一，它的目的是从细菌中提取质粒DNA。
质粒是一种环状的DNA分子，存在于细菌细胞质中，具有自主复制的能力。
质粒提取实验对于研究基因功能、基因工程以及遗传学等领域具有重要意义。
实验材料与方法：本次实验所用材料包括细菌培养物、质粒DNA提取试剂盒、离心管、离心机等。
实验步骤如下：1. 选择合适的细菌培养物，如大肠杆菌。
2. 将细菌培养物转移到含有适当抗生素的琼脂平板上，孵育过夜。
3. 从琼脂平板上挑取单个菌落，接种到含有适当抗生素的培养基中，培养过夜。
4. 将过夜培养的细菌转移到含有适当抗生素的液体培养基中，继续培养。
5. 收集培养物，离心沉淀细菌细胞。
6. 使用质粒DNA提取试剂盒进行质粒提取。
实验结果与讨论：经过以上步骤，我们成功地从细菌中提取到质粒DNA。
提取的质粒DNA经过琼脂糖凝胶电泳分析，显示出明亮的DNA条带。
这些条带的大小与我们预期的质粒大小相符，证明提取的质粒DNA质量良好。
质粒提取实验的成功与否受到多个因素的影响。
首先，选择合适的细菌培养物非常重要。
常用的大肠杆菌是质粒提取实验的理想选择，因为大肠杆菌具有较高的质粒含量。
其次，培养条件的控制也是关键。
适当的培养时间和培养温度可以提高质粒的复制效率。
此外，质粒提取试剂盒的选择和使用方法也会对实验结果产生影响。
正确操作试剂盒中的各个步骤，如细胞破裂、DNA纯化和洗涤等，是保证实验成功的关键。
质粒提取实验在科学研究和应用中有着广泛的应用。
首先，通过质粒提取实验可以获得大量的质粒DNA，为基因克隆、基因测序等实验提供了材料基础。
其次，质粒提取实验也是进行基因工程技术的前提。
通过将目标基因插入质粒中，可以实现基因的定向表达和转基因等操作。
此外，质粒提取实验还可以用于研究细菌的耐药性、毒力因子等重要基因的分析。
然而，质粒提取实验也存在一些局限性。
首先，质粒提取实验只能提取到细菌中的质粒DNA，无法获取真核生物的质粒。
质粒提取实验报告分析
质粒提取实验报告分析引言质粒提取是分子生物学实验中常用的技术手段之一，可以用于获取目标质粒并纯化。
在本次质粒提取实验中，我们使用了传统的琼脂糖凝胶柱层析法提取目标质粒。
本报告将对实验过程、结果和讨论进行详细的分析。
实验方法1. 质粒培养和提取1. 选取目标质粒进行大规模培养，添加适量的抗生素并摇床培养。
2. 收集培养液，离心沉淀并洗涤。
3. 使用琼脂糖凝胶柱层析法提取目标质粒。
2. 质粒浓度检测1. 取提取得到的质粒样品，使用纳米比色计测量DNA的浓度。
2. 根据测量结果计算质粒的浓度。
实验结果1. 质粒提取情况根据琼脂糖凝胶柱层析法分离得到的质粒经紫外线照射后观察，发现提取效果良好，目标质粒很大程度上得到了纯化。
2. 质粒浓度检测根据纳米比色计的测量结果，计算得到质粒的浓度为XX ng/μl。
测量的标准曲线显示结果可靠。
结果分析1. 实验验证质粒提取的过程中，通过琼脂糖凝胶柱层析法有效地分离出了目标质粒，并得到了相对较纯的质粒样品。
通过紫外线照射观察质粒形态，进一步确认了提取效果良好。
2. 质粒浓度结果根据浓度检测结果，我们可以初步了解到质粒的含量。
这对后续实验的设计和操作非常重要。
结论通过本次实验使用琼脂糖凝胶柱层析法提取质粒，成功获得了相对纯净的目标质粒样品。
质粒的浓度检测结果进一步验证了实验的成功。
这为后续的实验研究和应用提供了基础数据。
改进和展望1. 实验中可以尝试使用其他提取方法，比较不同方法的效果并选取最佳方案。
2. 在质粒浓度检测方面，可以引入其他的分析方法，如凝胶电泳等，以更全面地评估质粒的品质。
参考文献[1] 张三, 李四. 质粒提取实验方法综述[J]. 生物技术通讯,20XX,XX(XX):XX-XX.。
质粒提取总结(原理、小提、中提、浓度测定)
如此看来，溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的纳离子形成了不溶性的PDS，而高浓度的盐，使得沉淀更完全。SDS专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。这个过程不难想象，因为基因组DNA太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合。
质粒小提
质粒小提（这里试剂盒没有柱平衡步骤）：
1、大离心管4000rpm离心5min，吸除上清；
2、每5ml菌液、加入250μlP2，上下颠倒6-8次，温和，＜5min；
4、加入350μlP3，上下颠倒6-8次，温和；12000rpm离心10min；
5、取上清，加到柱子里，12000rpm离心2min，弃废液；
6、加入去蛋白液HB 500μl，12000rpm离心1min，弃废液；
7、加入75%乙醇700μl，12000rpm离心1min，弃废液；
8、重复上一步；
9、空离一次，12000rpm离心2min，弃收集管；
10、晾干；
11、加ddH2O溶解，放2min，12000rpm离心2min。
注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250μl溶液P1（先检查是否加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀；
质粒提取实验报告
1. 学习并掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理和操作步骤。
2. 掌握DNA琼脂糖凝胶电泳技术，用于检测提取的质粒DNA。
3. 熟悉实验室安全操作规程，提高实验技能。
二、实验原理质粒是细菌细胞质中独立于染色体之外的小型环状双链DNA分子，具有自主复制能力。
在基因工程中，质粒常作为载体携带外源基因进行扩增和表达。
本实验采用碱裂解法提取质粒DNA，其原理是利用碱性环境使细菌细胞壁和细胞膜破裂，蛋白质变性，从而使质粒DNA与蛋白质等杂质分离。
随后，通过酚-氯仿抽提、乙醇沉淀等步骤纯化质粒DNA。
三、实验材料1. 大肠杆菌菌种（含有质粒）2. LB液体培养基3. 碱裂解液（含SDS、NaOH）4. 酚-氯仿5. 乙醇6. TE缓冲液7. 琼脂糖8. 电泳缓冲液9. DNA分子量标准10. 紫外线灯11. 凝胶电泳仪12. 离心机13. 微量移液器14. 玻璃棒1. 菌液制备：将含有质粒的大肠杆菌接种于LB液体培养基中，37℃培养过夜。
2. 离心：取1.5ml菌液，4000r/min离心5min，弃上清液。
3. 碱裂解：向沉淀中加入100μl碱裂解液，混匀，室温放置5min。
4. 酚-氯仿抽提：取1/3体积的酚-氯仿，加入上述裂解液，混匀，室温放置10min。
5. 离心：4000r/min离心10min，取上清液。
6. 乙醇沉淀：向上清液加入等体积的乙醇，混匀，-20℃放置1h。
7. 离心：8000r/min离心10min，弃上清液。
8. 溶解：用50μl TE缓冲液溶解沉淀，即为提取的质粒DNA。
9. DNA琼脂糖凝胶电泳：取5μl提取的质粒DNA，加入1μl DNA分子量标准，进行琼脂糖凝胶电泳。
10. 观察：打开紫外线灯，观察电泳结果。
五、实验结果1. 琼脂糖凝胶电泳结果显示，提取的质粒DNA在相应位置出现条带，与DNA分子量标准相符。
2. 提取的质粒DNA纯度较高，无杂质。
六、实验讨论1. 碱裂解法提取质粒DNA操作简便，效率较高，是实验室常用的提取方法。
三种提取质粒的方法及原理
三种提取质粒的方法及原理《三种提取质粒的方法及原理》一、离心法离心法是最常用的一种提取质粒的方法，它通过离心力的作用，使细胞或质粒（例如DNA、RNA等）从悬浮液中分离出来，从而得到提取的质粒。
分离过程如下：1.从对象（例如细胞）上提取纯化的质粒，使其形成悬浮液。
2.将所得悬浮液置于微量离心机中，加入适当的离心剂，并配置合适的离心条件（如离心速度，离心时间）。
3.根据离心力，细胞及其他悬浮液的组分会在离心机的内壁及底部形成层，质粒则聚集在中心处，形成离心质粒。
4.把离心质粒从中心处取出，即可得到纯化的质粒。
二、丙酮离心法丙酮离心法是一种以丙酮、乙醇和水作为分离剂的提取质粒方法，它可用于提取活性质粒，如抗体、RNA和DNA等，这是因为丙酮和乙醇可以良好地维持质粒的活性，并可以使悬浮液以柱状分离，有利于质粒的提取。
丙酮离心法的分离过程如下：1.将所要提取的对象加入适当的提取液（如200 ml丙酮），形成悬浮液。
2.将悬浮液置于微量离心机中，并配置合适的离心条件。
3.由于丙酮和乙醇的作用，悬浮液以柱状分离，并形成梁状质粒在柱峰中。
4.把梁状质粒从柱峰中取出，即可得到纯化的质粒。
三、超滤法超滤法是一种用于提取质粒的物理分离方法，它通过扩散作用及滤膜孔径的大小，可以有效地将非蛋白质物质等从悬浮液中分离出来，而不改变其本身的结构和性质。
超滤法的分离过程如下：1.将所要提取的对象加入适当的提取液（如水），形成悬浮液。
2.将所得悬浮液置于微量超滤器中，并配置合适的超滤条件（如超滤压力、超滤温度）。
3.根据超滤的原理，液体及其他悬浮物质会被超滤滤膜过滤，而质粒则不会被过滤，从而被滤过的液体中提取出质粒。
4.把质粒从超滤液中取出，即可得到纯化的质粒。
质粒dna提取实验报告
质粒dna提取实验报告引言DNA的提取是生物学实验中非常重要的一步，它可以用于后续的分子生物学研究，比如克隆、PCR、基因测序等。
而本次实验的目的是从细菌中提取质粒DNA，并对提取的结果进行分析，评估提取效果。
材料与方法1. 实验材料- 大肠杆菌菌液- 细胞裂解液- RNase A- 莱文斯坦缓冲液- 高盐裂解液- 乙酰盐- 氯仿- 异丙醇- TE液- 离心管等实验仪器和耗材。
2. 实验步骤- 调制莱文斯坦缓冲液，用于细胞裂解和质粒DNA的稳定。
- 预处理大肠杆菌菌液，用高盐裂解液处理使其细胞壁破裂，释放出质粒DNA。
- 添加异丙醇与氯仿，用于分离DNA和其他细胞组分。
- 加入乙酸盐处理DNA上的蛋白质，使其沉淀。
- 用异丙醇洗涤DNA沉淀，去除杂质。
- 用TE液溶解提取得到的DNA。
结果与讨论经实验，我们成功地从大肠杆菌中提取到了质粒DNA。
通过紫外光照射，我们观察到了明亮的DNA带，证明提取得到的DNA具有较高的纯度。
另外，我们还使用琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA进行了分析。
从琼脂糖凝胶电泳的结果中，我们观察到细长而连续的DNA 条带，说明提取得到的质粒DNA具有较好的完整性。
此外，我们还注意到，在琼脂糖凝胶中，质粒DNA的迁移速率要快于细菌染色体DNA，这是因为质粒DNA的分子量较小。
在实验的过程中，我们注意到了一些实验技巧和注意事项。
首先，在进行细胞裂解和DNA提取过程中，必须保持材料的无菌状态，以免外源性DNA的污染。
其次，避免在提取过程中显著提高DNA样本的温度，以防止DNA的降解。
最后，注意避免DNA溶液与金属物质接触，因为金属离子可能对DNA具有毒性。
结论通过本次实验，我们成功地从大肠杆菌中提取到了高质量的质粒DNA，并在琼脂糖凝胶上观察到清晰的DNA带。
实验过程中，我们掌握了DNA提取的基本操作技巧和注意事项，这对我们今后的分子生物学研究将产生积极的影响。
然而，本次实验还有一些改进的空间。
质粒提取问题与心得
质粒提取问题与心得质粒提取是分子生物学实验中常见的操作，用于从细菌中提取质粒DNA。
质粒是细菌细胞内的环状DNA分子，通常用于在细菌中传递外源基因。
质粒提取的过程涉及细胞破裂、DNA纯化和浓缩等步骤，下面我将从几个方面来谈谈质粒提取的问题与心得。
首先，质粒提取的关键步骤包括细胞破裂、DNA纯化和浓缩。
在细胞破裂过程中，使用适当的细胞破裂缓冲液和方法对细菌进行破裂，释放质粒DNA。
在DNA纯化过程中，通过离心、溶液添加和酚/氯仿提取等方法，将质粒DNA与蛋白质、RNA等杂质分离。
最后，通过乙醇沉淀等方法对DNA进行浓缩，得到纯净的质粒DNA。
其次，质粒提取过程中可能遇到的问题包括DNA污染、纯化不彻底、DNA浓度不足等。
为了解决这些问题，可以在细胞破裂缓冲液中添加蛋白酶等物质，提高DNA的纯化效果；在DNA纯化过程中，可以多次进行酚/氯仿提取和乙醇沉淀，提高纯化的彻底性；在最后的浓缩过程中，可以根据实际情况调整乙醇的浓度，以获得所需浓度的质粒DNA。
此外，质粒提取的心得体会包括操作技巧、实验条件和耐心。
在进行质粒提取实验时，需要熟练掌握各个步骤的操作技巧，尤其是在细胞破裂和DNA纯化过程中需要细心操作；实验条件也很重要，包括细菌培养的状态、破裂缓冲液的配制和储存等；此外，需要有耐心，因为质粒提取是一个细致而耗时的过程，需要耐心等待和细心操作。
综上所述，质粒提取是分子生物学实验中常见的操作，需要注意细节、耐心等。
在实际操作中，我们需要不断总结经验，积累心得，以期获得更好的实验结果。
希望以上内容能够对你有所帮助。
提取质粒实验学习整理
提取质粒实验学习整理1.菌液OD值越高，质粒产量越高2.大肠杆菌OD值越高，提取的质粒的浓度就越高吗还要看质粒纯度，纯度一般在1.8-1.9最适合，再高了就是蛋白污染3.一般而言gene 导入原核细胞称转化，导入真核细胞称转染。
4.用QIANGEN质粒提取试剂盒提取质粒，我没有提不出来的经历，有以下几点要注意，从细胞、试剂盒及操作三个方面考虑：1..确定细菌是阳性转化子，应该含有你的质粒，过夜摇菌已足够，记得加抗生素。
2.关于试剂。
溶液2中是否浑浊，SDS在低温产生结晶，使用前用37度水浴。
溶液3中的醋酸钾可能产生结晶，使用前应该温水溶解。
确认洗脱液1中的乙醇没有挥发，闻一闻就知道了。
洗脱液2是否在使用前已加乙醇，加乙醇后在盖子上打钩，以免与没加的混淆。
3.抽提过程中，加溶液1（放4度保存）后应该充分悬浮菌体，以便裂解充分；加溶液2和3应该快，加溶液2后打开盖有丝状物，加溶液3出现絮状沉淀，离心要充分。
请严格按说明书操作。
如果你觉得以上几点你都做的很好，试剂盒是新的，换含其它质粒的菌株试一试，如pUC18的转化子。
如果试剂和是用过的，放置太久，换其它试剂盒吧，要不换土法试试！5.Qiagen我卖这么多个，到目前还是零投诉。
不过出现问题基本如下：1。
如果是质粒超纯试剂盒，得率偏低，因为Qiagen自己得专利树脂填料，对纯度得要求比对得率得要求高，在超纯质粒的抽提过程中，得率比同类产品要低些，不过OD 得比值很好，就是纯度很高。
2。
如果是质粒小提，快速提取等，基本不出什么问题。
有些操作要注意，1。
Solution 2,3有没有沉淀。
2。
细菌培养过程中，有没有抗生素选择压力，不然质粒丢失。
4。
收获细菌有没有测OD值，有些仅凭目测，呵呵，又差异得。
不过，有个建议，质粒小提，快速提取，就不要用Qiagen得了，偏贵。
6.从你跑的电泳来看，你的质粒不是很多，差不多就是300ng,可能你的小片段太少，所以你的小片断那就看不出来了，不知道你大片段分子是小片段的多少倍，一般跑电泳能看到在50ng左右,标准的MARK是每条带是50ng,如果你即使切下来了，但你的小片段太小，也是什么都看不到的，这里有一个大约估计量的公式，小片段的纳克数等于大片段纳克数乘他们分子量的比值7.提取质粒失败的可能的原因：1：克隆有问题；2：提质粒时裂解时间过长；3：质粒提取试剂盒的溶液有问题；4：有点可能本身拷贝数就比较低，可换感受态重新转化后提质粒8.做重组质粒转化大肠杆菌，质粒用的pGL3-Basic (长度4818bp),连接的目的片段为1.8kb，通过抗性平板筛选每次都有几个单菌落长出，挑单菌落于LB培养基扩增，之后摇菌提取质粒想做酶切验证是都阳性克隆，但是提取到的质粒具有多个条带，这样的话也就没法做酶切验证了。
细菌质粒提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握碱裂解法提取细菌质粒的原理和操作步骤。
2. 了解质粒DNA在分子生物学研究中的应用。
3. 学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
二、实验原理质粒是细菌细胞内的一种小型、环状、双链DNA分子，独立于细菌染色体之外。
质粒携带的基因可以赋予细菌额外的生理代谢能力，如抗生素耐药性等。
碱裂解法是提取质粒DNA的常用方法，其原理如下：1. 在碱性条件下，蛋白质与DNA发生变性，质粒DNA与染色体DNA分开。
2. 加入盐溶液使pH值恢复至中性，质粒DNA迅速复性，而染色体DNA不易复性，形成网状结构。
3. 通过离心，将质粒DNA与蛋白质、染色体DNA等杂质分离。
三、实验材料与仪器1. 仪器：恒温摇床、台式离心机、微量移液器、紫外灯、凝胶成像系统、电泳仪、凝胶制备装置等。
2. 试剂：LB液体培养基、LB固体培养基、NaOH溶液、SDS溶液、KAc溶液、酚/氯仿/异戊醇溶液、无水乙醇、TE缓冲液、琼脂糖、DNA Marker、染色剂等。
3. 菌种：含质粒的大肠杆菌菌株。
四、实验步骤1. 菌液的制备：将含质粒的大肠杆菌菌株接种于LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。
2. 收集菌体：取适量培养液，4000r/min离心2min，收集菌体。
3. 菌体裂解：向菌体中加入NaOH和SDS溶液，65℃水浴10min，使蛋白质与DNA变性。
4. 质粒DNA的纯化：向裂解液中加入KAc溶液，混匀后4℃静置10min，使质粒DNA沉淀。
5. 离心：4000r/min离心10min，收集沉淀。
6. 洗涤：向沉淀中加入70%乙醇，混匀后4℃静置10min，再次离心，收集沉淀。
7. 干燥：将沉淀干燥至完全无水。
8. 溶解：向沉淀中加入适量TE缓冲液，溶解质粒DNA。
9. 琼脂糖凝胶电泳检测：取适量质粒DNA溶液，加入上样缓冲液，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
五、实验结果与分析1. 琼脂糖凝胶电泳结果显示，质粒DNA在凝胶上呈现清晰的单一条带，表明质粒DNA已成功提取。
质粒的抽提实验报告
质粒的抽提实验报告质粒的抽提实验报告引言：质粒是一种重要的分子生物学工具，广泛应用于基因工程、遗传转化等领域。
质粒抽提是从细菌中提取质粒DNA的关键步骤，其目的是获得高纯度、高质量的质粒DNA。
本实验旨在探究质粒抽提的方法和步骤，并评估其效果。
材料与方法：1. 细菌培养：选取含有目标质粒的细菌菌株，在LB培养基中培养过夜。
2. 细菌收获：将培养的细菌菌液经过离心，收集菌体沉淀。
3. 细胞裂解：使用裂解缓冲液将菌体沉淀裂解，释放质粒DNA。
4. 质粒分离：通过离心将细胞碎片、蛋白质等杂质与质粒DNA分离。
5. 质粒纯化：将分离得到的质粒DNA进行纯化，去除杂质。
6. DNA浓度检测：使用分光光度计检测纯化后的质粒DNA浓度。
结果与讨论：通过上述步骤，我们成功地从细菌中提取到了质粒DNA，并进行了质粒纯化。
下面将对实验结果进行讨论。
1. 细菌培养：在培养过程中，选择适当的培养基和培养条件对细菌的生长至关重要。
LB培养基是常用的培养基之一，其成分简单且易于制备。
适当的培养时间和温度也能够影响细菌的生长速度和菌体产量。
2. 细菌收获：通过离心将培养的细菌菌液进行收获，可以得到菌体沉淀。
离心的速度和时间对菌体的沉淀效果有一定影响，过高或过低的离心条件都可能导致菌体无法完全沉淀或沉淀不完整。
3. 细胞裂解：细胞裂解是将菌体内的质粒DNA释放出来的关键步骤。
使用裂解缓冲液能够破坏细菌细胞壁和细胞膜，释放出细胞内的DNA。
裂解缓冲液的成分和浓度都需要经过优化，以确保高效的细胞裂解。
4. 质粒分离：通过离心将裂解后的细胞碎片、蛋白质等杂质与质粒DNA分离。
离心条件的设定对分离效果有重要影响，过高或过低的离心速度都可能导致质粒DNA无法完全分离或杂质残留。
5. 质粒纯化：质粒纯化是去除杂质，提高质粒DNA纯度的步骤。
常用的方法有酚/氯仿法、硅胶柱纯化法等。
选择合适的纯化方法和试剂能够有效去除杂质，提高质粒DNA的质量。
质粒dna提取实验报告
质粒dna提取实验报告质粒DNA提取实验报告引言：质粒DNA提取是分子生物学研究中常用的技术手段之一。
通过提取质粒DNA，我们可以获得特定的基因片段，进一步进行基因克隆、转染、PCR扩增等实验。
本实验旨在探究质粒DNA提取的方法和步骤，并验证提取的质粒DNA是否纯度高、浓度适宜。
材料与方法：1. 细菌培养：选择含有目标质粒的细菌菌株，如大肠杆菌。
2. 培养基制备：制备含有适当抗生素的LB培养基。
3. 菌液培养：在培养基中接种细菌菌液，培养至适当的生长期。
4. 细菌收获：离心细菌培养液，收集菌体沉淀。
5. 细胞裂解：使用裂解液将细菌细胞壁破裂，释放细胞内的DNA。
6. 蛋白质沉淀：通过加入盐溶液，将蛋白质沉淀下来。
7. DNA沉淀：加入酒精，使DNA沉淀出来。
8. 洗涤：使用乙醇洗涤沉淀的DNA，去除杂质。
9. 干燥：将洗涤后的DNA干燥至无水状。
结果与讨论：经过以上步骤，我们成功提取到了质粒DNA。
下面将对实验结果进行分析和讨论。
首先，我们需要评估提取的质粒DNA的纯度。
常用的方法是使用比色法或分光光度法测量DNA溶液的吸光度比值（A260/A280）。
纯度较高的DNA溶液其吸光度比值通常在1.8-2.0之间。
如果比值低于1.8，说明可能存在蛋白质、RNA 或其他杂质的污染，需要进一步纯化处理。
其次，我们需要评估提取的质粒DNA的浓度。
常用的方法是使用比色法或分光光度法测量DNA溶液的吸光度（A260）。
通过测量吸光度并使用标准曲线，我们可以计算出DNA的浓度。
在实验中，我们可以根据需要调整DNA的浓度，以适应后续实验的要求。
此外，我们还可以通过琼脂糖凝胶电泳来评估提取的质粒DNA的完整性。
将DNA样品与DNA标准品一同加载到琼脂糖凝胶上，经电泳分离后，通过比较DNA带的大小和形态，我们可以初步判断提取的质粒DNA是否完整。
在实验过程中，需要注意的是避免DNA的降解。
DNA在裂解液中容易受到核酸酶的降解，因此在裂解过程中应尽量避免长时间的暴露。
质粒提取实验报告心得体会
质粒提取实验报告心得体会
实验室是一个充满了惊奇和创新的地方，每一次实验都是一次
对科学探索的尝试和思考。
本次进行的质粒提取实验也不例外，
我们通过这次实验了解了质粒提取的原理、方法和步骤，也对实
验过程中的一些细节进行了探究和分析。
首先，我们需要准备适当的材料和仪器，包括质粒提取试剂盒、E. coli菌落、离心管、显微镜等。
然后，根据质粒提取试剂盒说
明书的指示，我们进行了样品的制备，包括菌落的挑取、洗涤、
离心和温和的离解等。
这一过程需要耐心和认真，需要注意操作
的细节并避免出现污染和错误。
接下来，我们进行了质粒DNA的纯化和洗涤，这也是整个实
验的重点和难点。
我们按照说明书的步骤进行钠盐洗涤和烟酰胺
盐洗涤，分别使用100%酒精和丙酮作为洗涤液，在洗涤过程中需
要注意洗涤液的体积和离心的速度和时间。
这一步需要特别小心
谨慎，避免在洗涤过程中损失目标DNA或者产生其他的杂质。
最后，我们对提取的质粒DNA样品进行了定量和质量的检测，并进行了质粒酶切和凝胶电泳等进一步的分析。
我们发现，通过
本次实验可以得到高质量和高纯度的质粒DNA样品，并可以进一步用于外源蛋白表达、病毒载体构建、遗传改造等研究方面。
通过本次实验，我们深刻认识到了质粒提取技术的重要性和应用价值，也感受到了科学实验中的细节和思考。
我们相信，通过不断的实践和探索，我们能够更好地理解和掌握质粒提取技术，并在基因工程、生物医学等领域中发挥更大的作用和贡献。
质粒dna的提取实验报告
质粒dna的提取实验报告引言：DNA是生命的基本遗传物质，研究DNA的结构和功能对于理解生命的本质具有重要意义。
在分子生物学实验中，质粒DNA的提取是一项关键步骤，它能够帮助我们获得足够纯度和数量的DNA样本，以便进行后续的实验分析。
本实验旨在提取质粒DNA，并验证提取效果和纯度。
材料和方法：1. 细菌培养：选择含有目标质粒的菌落进行预培养，接种至100ml含有适当抗生素的LB培养基中，37℃摇床培养过夜。
2. 提取质粒DNA：使用质粒DNA提取试剂盒，按照说明书进行操作。
主要步骤包括细菌离心、细菌裂解、质粒DNA与蛋白质分离、质粒DNA沉淀和洗涤等。
3. DNA质量和浓度检测：使用紫外分光光度计检测提取得到的DNA样品的260nm吸光度值，计算DNA浓度。
结果和讨论：量和浓度的检测。
质检测结果显示，提取得到的质粒DNA纯度较高，吸光度比值（A260/A280）在1.8-2.0之间，说明DNA中没有明显的蛋白污染。
这对于后续实验如聚合酶链式反应（PCR）等有着重要的影响。
同时，我们还测定了DNA的浓度，得到了大致的目标值，为1μg/μl左右。
在实验过程中，我们需要注意一些关键点，例如细菌的培养条件、细菌离心和裂解的时间和速度、蛋白质分离的温度等。
这些因素都会对质粒DNA的提取效果产生影响，需要精确控制，保证实验结果的准确性。
质粒DNA的提取是分子生物学实验的常见步骤之一，其应用广泛。
例如，可以将提取得到的DNA用于质粒转染、DNA测序、基因克隆等研究中。
同时，提取得到的质粒DNA也可以用于分子诊断、疾病基因检测等临床应用。
结论：提取效果和纯度。
提取得到的DNA可以广泛应用于分子生物学及医学研究领域，为后续的实验工作提供了坚实的基础。
总结：质粒DNA的提取是分子生物学实验中不可或缺的一环。
本实验通过严谨的操作步骤和质量检测，成功地提取了高纯度、适量的质粒DNA。
在今后的实验工作中，我们将继续基于这些DNA 样本，进一步开展相关研究，推动科学的发展和创新。
提取质粒实验报告
一、实验目的1. 掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理和步骤。
2. 熟悉质粒DNA提取过程中所用试剂和仪器的使用方法。
3. 学习通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的方法。
二、实验原理质粒DNA是一种双链闭环的DNA分子，存在于细菌细胞质中，独立于细胞染色体之外。
碱裂解法是提取质粒DNA的一种常用方法，其原理是利用DNA在不同pH值下的变性和复性差异，将质粒DNA从细菌细胞中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 大肠杆菌（含有质粒DNA）- LB液体培养基- 无菌水- 10% SDS溶液- 5M NaCl溶液- 1M Tris-HCl（pH 8.0）溶液- 0.5M EDTA（pH 8.0）溶液- 70% 乙醇- 琼脂糖- DNA标准分子量Marker- 电泳缓冲液- 紫外线灯2. 实验仪器：- 恒温摇床- 台式离心机- 热水浴- 琼脂糖凝胶电泳仪- 移液器- 移液管- 微量离心管四、实验步骤1. 将含有质粒DNA的大肠杆菌接种于LB液体培养基中，37℃培养过夜。
2. 取适量培养物，离心（4000r/min，2min）收集菌体。
3. 将菌体悬浮于5M NaCl溶液中，涡旋混匀。
4. 加入10% SDS溶液，涡旋混匀。
5. 加入1M Tris-HCl（pH 8.0）溶液和0.5M EDTA（pH 8.0）溶液，涡旋混匀。
6. 将混合液放入65℃热水浴中，保温15min，使DNA变性。
7. 将变性后的混合液冷却至室温，加入等体积的70% 乙醇，混匀。
8. 离心（12,000r/min，5min）收集沉淀。
9. 将沉淀用70% 乙醇洗涤，离心（12,000r/min，5min）收集沉淀。
10. 将沉淀溶于适量TE缓冲液中，即为提取的质粒DNA。
11. 使用琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA。
五、实验结果与分析1. 琼脂糖凝胶电泳结果显示，提取的质粒DNA在紫外灯下呈现出明亮的目的条带，与DNA标准分子量Marker对应。
质粒dna的提取实验报告
质粒dna的提取实验报告实验目的：通过质粒DNA的提取实验，掌握质粒DNA的提取方法，了解质粒DNA提取的原理和步骤，并评估提取质量和纯度。
实验材料：- 大肠杆菌菌落- 磷酸盐缓冲液- 10% SDS溶液- 去离子水- 超纯酒精（乙醇或异丙醇）- 氯仿- 石英研钵- 离心管和离心机- 显微镜和比色皿- 分子生物实验器材- DNA评估工具（如凝胶电泳仪）实验步骤：1. 随机挑选一颗大肠杆菌菌落，接种至含有磷酸盐缓冲液的离心管中，用显微镜观察菌落的情况，确保菌落无杂质。
2. 加入500 μL含有磷酸盐缓冲液的离心管中，用微量移液管捞取菌落，将其完全悬浮在磷酸盐缓冲液中。
3. 加入10 μL 10% SDS溶液，翻转离心管轻轻摇匀。
4. 加入200 μL NaOH和150 μL氯仿，离心1分钟。
此时，质粒DNA会被氯仿等重物分离到有机相中，而大部分细胞膜和核酸会留在水相中。
5. 转移上清液至新的离心管中，避光加入等量的超纯酒精，轻轻摇匀。
DNA会在酒精中沉淀。
6. 离心10分钟，取出上清液。
7. 加入70%乙醇或异丙醇定居洗涤一次，离心2分钟，取出上清液。
8. 反复使用去离子水洗涤，使残留的乙醇或异丙醇彻底除去。
9. 用去离子水稀释DNA，摇匀。
10. 用凝胶电泳仪评估提取的质粒DNA的质量和纯度。
实验结果：通过凝胶电泳仪评估质粒DNA的质量和纯度，得到如下结果：- DNA带有明显的质粒带，且带的位置与预期一致。
- DNA带的强度较均匀，并且没有明显的附带杂带。
- 带的强度与浓度成正比，说明提取的质粒DNA具有较高的质量。
讨论和结论：通过本实验，成功提取到了质粒DNA，并评估了其质量和纯度。
本实验中所使用的提取方法简单快速，并且获得了满意的结果。
然而，有时由于实验步骤的疏忽或操作技巧不当，可能会导致质粒DNA提取的效果不佳，如DNA带弱、杂带多等。
因此，未来可以进一步优化实验步骤和控制实验条件，提高质粒DNA提取的效率和质量。
抽质粒实验报告
一、实验目的1. 掌握碱裂解法抽提质粒DNA的基本原理和操作步骤。
2. 学会使用酚-氯仿法去除蛋白质和RNA。
3. 学习琼脂糖凝胶电泳技术检测质粒DNA。
二、实验原理质粒DNA是一种环状双链DNA分子，存在于细菌、酵母等微生物中。
在基因工程中，质粒常作为载体用于携带外源基因。
本实验采用碱裂解法抽提质粒DNA，该方法基于质粒DNA与宿主染色体DNA在结构和稳定性上的差异。
碱裂解法抽提质粒DNA的基本原理如下：1. 将含有质粒DNA的细胞裂解，使质粒DNA释放出来。
2. 使用酚-氯仿法去除细胞中的蛋白质和RNA。
3. 使用氯化钠溶液使质粒DNA沉淀。
4. 通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA。
三、实验材料1. 含有质粒DNA的大肠杆菌菌株（如E.coli DH5α）2. LB液体培养基3. 溶液I（50mM Tris-HCl，pH8.0，含100mM EDTA）4. 溶液II（100mM NaCl，pH8.0）5. 5M NaCl溶液6. 酚-氯仿混合液（酚：氯仿：异戊醇=25:24:1）7. 氯仿8. 异戊醇9. 无水乙醇10. 70%乙醇11. 0.5×TBE缓冲液12. 琼脂糖13. 电泳仪14. 显影液15. 凝胶成像系统四、实验步骤1. 将含有质粒DNA的大肠杆菌菌株接种于LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。
2. 将培养物转移至离心管中，4000r/min离心5min，收集菌体。
3. 向菌体中加入溶液I，使菌体悬浮，加入溶菌酶，37℃水浴30min。
4. 将溶液I和菌体混合物转移至新的离心管中，加入酚-氯仿混合液，剧烈振荡2min。
5. 12,000r/min离心5min，取上清液。
6. 向上清液中加入5M NaCl溶液，混匀，加入无水乙醇，混匀。
7. -20℃放置2h或过夜。
8. 12,000r/min离心10min，弃去上清液。
9. 向沉淀中加入70%乙醇，混匀，轻轻弹打离心管底部，使沉淀完全溶解。
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碱裂解法抽提质粒原理溶液I，50 mM葡萄糖 /25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH ；（溶菌酶：使细胞壁裂解；RNase：将裂解完的RNA去除，防止RNA污染）溶液II， N NaOH / 1% SDS；溶液III，3M醋酸钾 / 2 M醋酸。
溶液I的作用：①任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液。
②50mM葡萄糖：加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。
因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言，几乎没有任何影响。
所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。
③EDTA：EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性和抑制微生物生长。
在溶液I中加入高达10 mM的EDTA，无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。
如果不加EDTA，其实也没什么大不了的，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。
如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提质粒呢只要用等体积的水，或LB培养基来悬浮菌体就可以了。
有一点不能忘的是，菌体一定要悬浮均匀，不能有结块。
溶液II：这是用新鲜的 N的NaOH和2％的SDS等体积混合后使用的。
要新从浓NaOH稀释制备的NaOH，是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性。
其实破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。
事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂，不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞，碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化所导致。
用了不新鲜的 N NaOH，即便是有SDS也无法有效溶解大肠杆菌，自然就难高效率抽提得到质粒。
如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒，因为SDS也是碱性的，只是弱了点而已。
很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA变性，以便沉淀，这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致。
有人不禁要问，既然是NaOH溶解的细胞，那为什么要加SDS呢那是为下一步操作做的铺垫。
这一步要记住两点：第一，时间不能过长，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂；第二，必须温柔混合，不然基因组DNA也会断裂。
基因组DNA的断裂会带来麻烦，后面我再详细说明。
溶液III溶液III加入后就会有大量的沉淀，最容易产生的误解是，当SDS碰到酸性后发生的沉淀。
如果你这样怀疑，往1%的SDS溶液中加如2M的醋酸溶液看看就知道不是这么回事了。
大量沉淀的出现，显然与SDS的加入有关系。
如果在溶液II中不加SDS会怎样呢，也会有少量的沉淀，但量上要少得多，显然是盐析和酸变性沉淀出来的蛋白质。
既然SDS不是遇酸发生的沉淀，那会不会是遇盐发生的沉淀呢在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，你会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的。
因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀。
但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你会发现沉淀的量要多的多。
这其实是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate,PDS），而PDS是水不溶的，因此发生了沉淀。
如此看来，溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的纳离子形成了不溶性的PDS，而高浓度的盐，使得沉淀更完全。
SDS专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。
这个过程不难想象，因为基因组DNA 太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合。
那么2M的醋酸又是为什么而加的呢是为了中和NaOH，因为长时间的碱性条件会打断DNA，所以要中和之。
基因组DNA一旦发生断裂，只要是50－100 kb大小的片断，就没有办法再被PDS共沉淀了。
所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入，琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带。
很多人误认为是溶液III加入后基因组DNA无法快速复性就被沉淀了，这是天大的误会，因为变性的也好复性的也好，DNA分子在中性溶液中都是溶解的。
NaOH本来是为了溶解细胞而用的，DNA分子的变性其实是个副产物，与它是不是沉淀下来其实没有关系。
溶III加入并混合均匀后在冰上放置，目的是为了PDS沉淀更充分一点。
不要以为PDS沉淀的形成就能将所有的蛋白质沉淀了，其实还有很多蛋白质不能被沉淀，因此要用酚/氯仿/异戊醇进行抽提，然后进行酒精沉淀才能得到质量稳定的质粒DNA，不然时间一长就会因为混入的DNase 而发生降解。
这里用25/24/1的酚/氯仿/异戊醇是有很多道理的，这里做个全面的介绍。
酚对蛋白质的变性作用远大于氯仿，按道理应该用酚来最大程度将蛋白质抽提掉，但是水饱和酚的比重略比水重，碰到高浓度的盐溶液（比如4M的异硫氰酸胍），离心后酚相会跑到上层，不利于含质粒的水相的回收；但加入氯仿后可以增加比重，使得酚/氯仿始终在下层，方便水相的回收；还有一点，酚与水有很大的互溶性，如果单独用酚抽提后会有大量的酚溶解到水相中，而酚会抑制很多酶反应（比如限制性酶切反应），应此如果单独用酚抽提后一定要用氯仿抽提一次将水相中的酚去除，而用酚/氯仿的混合液进行抽提，跑到水相中的酚则少得多，微量的酚在乙醇沉淀时就会被除干净而不必担心酶切等反应不能正常进行。
至于异戊醇的添加，其作用主要是为了让离心后上下层的界面更加清晰，也方便了水相的回收。
回收后的水相含有足够多的盐，因此只要加入2倍体积的乙醇，在室温放置几分钟后离心就可以将质粒DNA沉淀出来。
这时候如果放到-20℃，时间一长反而会导致大量盐的沉淀，这点不同于普通的DNA酒精沉淀回收，所以不要过分小心了。
高浓度的盐会水合大量的水分子，因DNA分子之间就容易形成氢键而发生沉淀。
如果沉淀，就用70％的乙醇多洗几次，每次在室温放置一个小时以上，并用tip将沉淀打碎，就能得到好的样品。
得到的质粒样品一般用含RNase（50ug/ml）的TE缓冲液进行溶解，不然大量未降解的RNA会干扰电泳结果的。
琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时，多数情况下你能看到三条带，但千万不要认为你看到的是超螺旋、线性和开环这三条带。
碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，不信的话你用EcoRI来线性化质粒后再进行琼脂糖电泳，就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。
其实这三条带以电泳速度的快慢而排序，分别是超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。
如果你不小心在溶液II加入后过度振荡，会有第四条带，这条带泳动得较慢，远离这三条带，是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断。
质粒小提质粒小提（这里试剂盒没有柱平衡步骤）：1、大离心管4000rpm离心5min，吸除上清；2、每5ml菌液加入250μl P1（4℃），彻底悬浮，移到 EP离心管中；3、加入250μl P2，上下颠倒6-8次，温和，＜5min；4、加入350μl P3，上下颠倒6-8次，温和；12000rpm离心10min；5、取上清，加到柱子里，12000rpm离心2min，弃废液；6、加入去蛋白液HB 500μl，12000rpm离心1min，弃废液；7、加入75%乙醇700μl，12000rpm离心1min，弃废液；8、重复上一步；9、空离一次，12000rpm离心2min，弃收集管；10、晾干；11、加ddH2O溶解，放2min，12000rpm离心2min。
12、测浓度质粒小提试剂盒（离心柱型）：天跟本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。
1、柱平衡：向吸附柱CP3（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm 离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；2、取1-5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12000rpm离心1min，尽量吸除上清；注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250μl溶液P1（先检查是否加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀；4、向离心管中加入250μl溶液P2（使用后立即盖上瓶盖，以免空气中的CO2中和P2中的NaOH反应，降低溶菌效率），温和地上下翻转6-8次，使菌液充分裂解；注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。
此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒收到破坏，如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5、加入350μl溶液P3，立即温和地上下翻转6~8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀，12000rpm离心10min；注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6、吸取上一步上清液转移至吸附柱CP3中（吸附柱放入离心管中），尽量不要吸出沉淀，12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液，将吸附柱放入收集管中；7、可选步骤：向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3重新放回收集管中。
如果宿主菌是end A+宿主菌（TG1，BL21，HB101，JM系列，ET12567等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，推荐采用此步。
如果宿主菌是end A-宿主菌（DH5α，TOP10等），此步可省略。
8、向吸附柱CP3中加入600μl漂洗液PW（先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；9、重复操作步骤8；10、将吸附柱CP3放入收集管中，12000rpm离心两分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP3开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
11、将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100μl洗脱缓冲液EB，室温放置2min，12000rpm离心2min将质粒溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。