猪脾中DNA的提取课件
猪脾中DNA的提取及含量测定
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核酸提取的主要步骤：
1）破碎细胞； 2）去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂
类等生物大分子； 3）去除其它不需要的核酸分子； 4）沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质。
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☺ 核酸提取的方案，应根据具体生物 材料和待提取的核酸分子的特点而定。
☺ 对于某特定细胞器中富集的核酸分 子，事先提取该细胞器，然后提取目的 核酸分子的方案，可获得完整性和纯度 两方面质量均高的核酸分子。
1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液; 2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化; 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相 及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中; 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
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（2）阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可 以直接从生物材料中提取DNA。
猪脾中DNA的提取
指导教师：滕利荣
Email:tenglirong@
2005.03
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1
二十世纪是 物理、化学和电子科学 的世纪
二十一世纪是 生命科学 的世纪
生命是 ？
生命 = 核酸 + 蛋白质
二十一世纪是核酸、蛋白质的世纪
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2
DNA提取的意义：
1、用于研制核酸类药物及保健品 2、用于基因诱变 3、用于DNA克隆 4、用于DNA测序 5、用于PCR扩增
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2.细胞的破碎
有坚硬的细胞壁的细胞，首先要破碎细胞。方法 有三种：
①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法； ②化学试剂法：用SDS处理细胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁 破碎。
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dna提取课件
dna提取课件DNA提取课件DNA提取是生物学实验中常见的一项技术，它可以从细胞中分离出DNA分子，为后续的实验研究提供基础。
本文将介绍DNA提取的原理、步骤以及在科学研究和医学应用中的重要性。
一、DNA提取的原理DNA提取的原理基于细胞的结构和化学性质。
细胞是生物体的基本单位，其中包含了DNA分子。
DNA分子是由碱基、糖和磷酸组成的巨大分子，它们通过特定的键结合在一起，形成螺旋状的双链结构。
DNA提取的过程主要包括细胞破碎、蛋白质去除和DNA沉淀。
首先，细胞膜需要被破坏，以使DNA从细胞中释放出来。
这可以通过机械破碎、酶解或化学方法来实现。
接下来，蛋白质需要被去除，以避免对DNA的干扰。
最后，通过加入盐和酒精等物质，可以使DNA沉淀下来，从而分离出纯净的DNA。
二、DNA提取的步骤DNA提取的步骤可以分为样本准备、细胞破碎、蛋白质去除和DNA沉淀等几个阶段。
首先，需要准备样本。
样本可以是植物组织、动物组织、细菌或真菌等。
样本的选择和处理对于提取DNA的质量和效果至关重要。
接下来，进行细胞破碎。
这可以通过机械方法（如研磨或振荡）或化学方法（如酶解）来实现。
破碎后的细胞释放出DNA分子。
然后，进行蛋白质去除。
蛋白质会干扰DNA的提取和纯化过程，所以需要将其去除。
这可以通过加入蛋白酶等物质来实现。
最后，进行DNA沉淀。
通过加入盐和酒精等物质，可以使DNA分子沉淀下来。
沉淀后的DNA可以通过离心等方法分离出来。
三、DNA提取的重要性DNA提取在科学研究和医学应用中具有重要的意义。
首先，DNA提取是进行分子生物学实验的基础。
无论是基因克隆、PCR扩增还是基因测序，都需要从细胞中提取纯净的DNA。
DNA提取的质量和纯度直接影响后续实验的结果和可靠性。
其次，DNA提取在遗传学研究中起着关键作用。
通过提取DNA，可以分析基因的组成和结构，研究基因在遗传传递中的作用和变异。
这对于理解遗传性疾病的发生机制、进行基因治疗以及种群遗传学研究等方面具有重要意义。
猪采血及提DNA
猪采血具体操作方法为：取一高度为1米左右的小桌，将预采样的猪只仰卧于桌上，三个保定助手一人固定其头部一人固定住后肢，中间一人将猪只两前肢固定并向两侧拉开使猪只露出前肢与颈部的凹陷处，保定时要务必使猪只仰卧时保持对称成一条直线。
采血人员与猪只的头部朝向相向而立，先用酒精棉球在猪前肢与颈部的凹陷处消毒，然后用左手大拇指用力压住凹陷处接近肋骨与胸骨的接合处，右手将采血针插入大拇前端，保持大拇指压力调节采血针位置，感觉是否插入前腔静脉，当采血针导管前端流出血时即已插入血管，此时保持位置不变让另一助手将采血针另一端插入一次性采血管，在采血管内负压作用下，血液自动流入管内，当血量达到采血管1/3以上时即可停止采血，先拔出扎针取血一端让采血针导管内血液流入采血管后再拔出插采血管一端针头。
采完血样后做好标记后立即放入冰盒带回实验室提取DNA。
2.2.2 样本DNA的提取DNA的提取方法参照屈伸等（2007）编写的《分子生物学实验技术》。
其操作步骤如下：①采取实验猪耳静脉或前腔静脉血样，加入抗凝剂。
②取2ml血加入6ml细胞裂解液（155mmol/L NH4Cl，10mmol/l KHCO3，0.1mmol/L EDTA），置于冰浴中10min，使红细胞裂解。
③离心，1000r/min，4℃，10min。
血细胞沉淀重新悬浮于2ml 0.15mol/L NaCl0.015mol/L 柠檬酸钠20mmol/L EDTA中。
④加入蛋白酶K 200μg，再加入10%SDS至终浓度为1%，37℃保温2h。
⑤用等体积的酚－氯仿－异戊醇（25:24:1 体积比）抽提2次，氯仿－异戊醇（24:1 体积比）抽提一次。
⑥加入1/30体积的3mol/L乙酸钠（PH5.2）和等体积的异丙醇，混匀，10000r/min离心15min。
沉淀用70%乙醇洗1次，沉淀溶于3ml TE缓冲液中。
⑦加入RNase A 至浓度20μg/ml，37℃保温2h。
实验九动物组织中DNA的提取与鉴定PPT课件
DNA鉴定
琼脂糖凝胶电泳
将提取的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳，观察电泳结果， 判断DNA的纯度和浓度。
紫外吸收法
利用紫外分光光度计测量 DNA溶液在260nm处的吸 光度值，计算DNA的浓度 和纯度。
荧光染料染色法
利用荧光染料染色DNA， 通过荧光分光光度计测量 DNA的荧光强度，判断 DNA的纯度和浓度。
细胞内的DNA。
DNA提取
离心
将匀浆后的样品进行离心，使细胞碎片和 杂质沉淀到底部，上清液中含有DNA。
洗涤
用洗涤液清洗吸附柱，去除未被吸附的杂 质。
吸附
将上清液加入到吸附柱上，DNA被吸附在 吸附柱的硅基质膜上，而蛋白质和其他杂 质被排除。
洗脱
用洗脱液将DNA从吸附柱上洗脱下来，收 集洗脱液中的DNA。
移液器
用于精确移取和量 取实验试剂。
电脑和PPT软件
用于制作和展示实 验课件。
03
实验步骤
样品处理
样品收集
选择新鲜的动物组织样品，确保 无菌条件下收集，避免样品受到
污染。
样品处理
将收集的动物组织切成小块，用 生理盐水或磷酸盐缓冲液冲洗，
去除表面的污物和血液。
样品匀浆
将处理过的组织块放入匀浆器中， 加入适量的匀浆介质（如石英砂、 玻璃珠等），破碎细胞，释放出
电泳技术的局限性
琼脂糖凝胶电泳技术虽然能够较好地分离DNA条带，但对于较长片段和大分子量DNA的 分辨率有限，未来可考虑采用其他电泳技术或优化现有技术。
纯度分析的注意事项
在紫外分光光度计检测过程中，需要注意消除样品中蛋白质、酚类等物质的干扰，以确保 纯度分析的准确性。同时，对于不同来源和性质的DNA样品，可能需要采用不同的纯度 分析方法。
DNA的提取(34张)ppt课件
柠檬酸钠溶液
①
提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水
②
2. 溶解细胞核内的 DNA
2 m1／L的 NaCI溶液40 mL
③
3. 析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
④
4. 滤取含DNA物再溶解 2 mol／L的 NaCl溶液 20 mL
⑥
6. 过滤含DNA的 NaCl溶液
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5．在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl
溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ C ）
A．有利于溶解DNA B．有利于溶解杂质 C．减少DNA的溶解度 D．减少杂质的溶解度
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方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度 为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl 溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶 液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。
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方案二：直接在滤液中加入嫩肉 粉，反应10-15min，嫩肉粉中木 瓜蛋白酶能够分解蛋白质。
DNA
DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同
DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同
的
DNA与二苯胺呈现蓝色反应
粗
提
DNA粗提取
选择适宜材料
破碎细胞
取
与
DNA的纯化
DNA的溶解和析出
鉴
定
鉴定DNA
与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
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1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加
入蒸馏水的作用是( B )。
动物组织DNA提取最终ppt课件
实验材料不佳或量少 破壁或裂解不充分 沉淀不完全
③
对 策
④ ⑤ ⑥
④
洗涤时DNA丢失
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二、实验方法及一般步骤
2）破碎抽提核酸除去杂质
首先使脱氧核糖核蛋白、核糖体、病毒的核蛋白与其它 成分分离 使核酸与蛋白质分离 除去脂类 多糖的除去
二、实验方法及一般步骤
3）核酸的纯化
根据所需核酸的性质和特点除去其它核酸污染, 并除去提取过程中的系列试剂(盐、有机溶剂等） 杂质，最后得到均一的核酸样品。
二、实验方法及一般步骤
核酸制备中常用的蛋白质变性剂
作用： 1.使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造 成蛋白污染。
2.使蛋白质变性，故可使核糖体解聚释放出核酸。
3.某些蛋白质变性剂也有抑制 RNase活性和破裂细胞的作用。 如：苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC
二、实验方法及一般步骤
核酸制备中常用的酶 DNase:降解DNA RNase：降解RNA 蛋白酶K：降解蛋白质 溶菌酶：破碎细胞
二、实验方法及一般步骤
4）核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质
温度： 4℃ 样品经常使用 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存,避免反复冻融
保存介质： 灭菌水 TE缓冲溶液(最常用)： 10mmol/L Tris-Cl pH8.0 1mmol/L EDTA pH8.0
用紫外分光光度计检测DNA浓度与纯度
增加70％乙醇洗涤 的次数（2-3次）
③
③
五、 DNA提取常见 问题
问题二：DNA降解
原 因
① ②
①
③
④ ⑤
材料不新鲜或反复冻 融 未很好抑制内源核酸 酶的活性 提取过程操作过于剧 烈，DNA被机械打断 外源核酸酶污染 DNA样品反复冻融
DNA的提取与鉴定讲解ppt课件
4D不 溶、N解同AD，，和NA而利蛋的当m大D一液在m随逐时ND使用N白o中，氯Na原o溶N，N渐lAC杂这lA／溶浓化质/aa理l的D降L的溶解CC质L解度钠一时N等，ll溶时低溶液溶溶A或为性的沉特，可其解，；解浓溶液液析物淀D以点0D度他在度度解浓浓出质．NN，使最，0又继成度度度A的1A.或D14的低续逐选的最的低量分4N者m。溶增渐溶小浓增于择A在mo相利 在加度增解解；加0ol适不／.l1为用 盐度时大反当而度/4当LL同时最这 溶， 。2的浓，盐度浓的度Na就C能l溶使液D中N溶A解充度分
4.DNA的再溶解。 用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。
5.DNA的沉淀和浓缩。
对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进 一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na＋的 DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可 以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物， 悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰 箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒 （玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。
3.DNA的鉴定： 加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水 浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。
三、实验小结
1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”
2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”
四、实验原理拓展介绍。
1.DNA的释放。 DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释 放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以 大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌 的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释 放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放 的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。 2.DNA与蛋白质分离。 在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解， 析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中 3.DNA的析出与获取。 因为DNA在低浓度（ 0.14mol/L ）的氯化钠溶液中溶解 度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含DNA 的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶 液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。
生化试验指导——猪脾DNA的提取
phenol(酚) chloroform(氯仿) and isopropyl alcohol(异戊醇)
precipitate protein release the nucleic acid
• Separate out the nucleic acid in 95% alcohol of 2.5 times volume
Materials and Method
purine + NH4OH + AgNO3
purine
light
AgOH
white
Ag2O
brown red
Materials and Method
Identification of phosphate:
1(S DNA)
10 drops
5 drops of
reductant
yellow
blue
reductant: Vit C, aminonaphthosulfonic acid
Materials and Method
Identification of deoxyribose:
5 drops of
diphenylamine
二苯胺
1(S DNA) 2(R DNA) 20 drops 20 drops
Materials and Method
sample DNA
reagent DNA
add 4 ml 5%H2SO4
add 4 ml 5%H2SO4
bath in boiling water 15min
bath in boiling water 15 min
实验一 猪脾DNA钠盐的提
实验一猪脾DNA钠盐的提取延安大学生命科学学院——齐向英核酸是重要的生物大分子，任何有机体,包括病毒、细菌、动植物等都无一例外地含有核酸。
早在1953年，Watson-Crick 提出DNA 的双螺旋结构模型，把遗传学提高到分子遗传学的高度,使生物学进入了分子生物学水平。
DNA是染色体的重要成分，与生物的遗传有关,存在于线粒体、叶绿体及微生物质粒中。
核酸分脱氧核糖核酸( deoxyribonucleic acid, DNA)和核糖核酸(ribonucleic acid, RNA)两大类。
核酸由核苷酸组成,核苷酸又由碱基(嘌呤和嘧啶碱基)、核糖或脱氧核糖以及磷酸组成。
我们以核糖或脱氧核糖的检测来区别RNA 和DNA,也可用对糖、碱基或磷酸的测定来定量DNA 和RNA。
一、实验目的采用浓盐法制备DNA；掌握从动物组织中提取、分离、纯化、制备DNA 的基本原理及其操作。
二、实验原理在细胞核内，核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物———核糖核蛋白(RNP)和脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在的。
因而，初步的提取、分离技术是设法将这两大类的核蛋白分开。
在不同浓度的电解质溶液中，RNP 及DNP 的溶解度有很大的差别。
例如：在低浓度的NaCl 溶液中，DNP 的溶解度随着NaCl 浓度的增加而逐渐下降，当NaCl 浓度为0.14 mol/L时，DNP 的溶解度仅为其在纯水中溶解度的1% 。
但当NaCl 的浓度继续增加时，DNP 的溶解度又渐次增大；NaCl 浓度增至0.5 mol/L 时，DNP 的溶解度约与其在纯水中的溶解度近似；当NaCl 浓度继续增至1.0 mol/L 时，DNP 的溶解度则约为其在纯水中的溶解度的 2 倍了，且随着盐浓度的上升其溶解度仍继续呈增大之趋势。
但RNP 与之不同，在0 . 14 mol/L 盐溶液中，DNP 溶解度很低，而RNP 的溶解度仍相当大。
因此，常常采用0.14 mol/L 的盐溶液来提取RNP，以使其与DNP 分开。
猪脾中DNA的提取及含量测定
外，还有质粒DNA 等。
对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容易， 多数病毒DNA 分子量较小，提取时易保持其结 构完整性。
核酸提取的主要步骤：
1）破碎细胞； 2）去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂 类等生物大分子； 3）去除其它不需要的核酸分子； 4）沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质。
RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较 小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此， 在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。
从不同材料中提取DNA的方法不同，分离
提取的难易程度也不同。
从高等动植物及细菌中提取DNA难度大一
些。由于其DNA 分子量较大。因此易被 机械张力剪断。
细菌DNA，除核DNA
所得混合液倒入磨口塞的锥形瓶中，加入同体 积氯仿—异戊醇，激烈振荡10分钟，8000r离 心10分钟，上层水相取出后倒入烧杯，以同 积氯仿—异戊醇重复去蛋白2次。
取出水相于烧杯中，逐渐加入2倍 体积95%乙醇，玻棒搅动，DNA纤维绕 于璃玻棒上后挤干，用70%乙醇洗DNA 纤维2次，用95%乙醇洗一次，再用乙 醚洗一次，取出并挤干。
（3）试剂： ① 20×SSC：175.2gNaCL，88.2g柠檬酸 钠•2H2O，PH=7.0加水至1000ml； ② 1×SSC，0.1×SSC由①作相应的稀释 得来； ③ NaCL-Na2EDTA 液 ： 8 . 7 7 gNaCL，3.72g Na2EDTA溶于800ml蒸馏水中，用固体NaOH调 PH=8后定容至1000； ④ 5%SDS（W/V）：6gSDS溶于100ml45%乙 醇中； ⑤ 氯仿-异戊醇=24：1（体积比） ⑥ 其他:95%乙醇，盐，冰.
猪脾中提取DNA
猪脾DNA提取实验报告
猪脾DNA提取实验报告引言DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的重要步骤之一。
本实验旨在通过提取猪脾组织中的DNA，了解DNA提取的步骤和原理，并掌握实验操作技巧。
材料与方法1.实验材料：–猪脾组织样本–细胞裂解缓冲液–蛋白酶K–氯仿–异丙醇–75% 乙醇–TE缓冲液2.实验步骤：1.准备猪脾组织样本，并将其切碎。
2.加入适量的细胞裂解缓冲液，充分裂解组织细胞。
3.加入蛋白酶K，消化蛋白质。
4.加入等体积的氯仿，混合均匀。
5.离心，分离上清液和沉淀。
6.将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇。
7.轻轻摇匀，DNA会从上清液中沉淀出来。
8.用吸管或微量移液器小心地吸取DNA沉淀。
9.加入75%乙醇洗涤DNA沉淀，去除残余盐和杂质。
10.用TE缓冲液溶解DNA沉淀。
结果与讨论在实验中，我们成功地从猪脾组织中提取到了DNA。
在DNA提取过程中，细胞裂解缓冲液的作用是破坏细胞膜和细胞核，使DNA释放到溶液中。
蛋白酶K能够降解蛋白质，进一步净化DNA样本。
氯仿的加入可以分离DNA溶液中的脂质和蛋白质，使DNA沉淀。
异丙醇的加入会使DNA从上清液中沉淀出来。
通过实验观察，我们可以发现DNA沉淀呈现为白色或乳白色的颗粒状物质，可通过肉眼直接观察到。
在DNA沉淀的过程中，注意不要将DNA颗粒状物质弄丢或弄碎，以免影响后续实验步骤。
在DNA提取过程中，需要注意的是避免污染。
使用无菌操作技巧，保持实验环境干净整洁，使用无菌的试剂和工具，可以最大程度地减少污染对实验结果的影响。
结论本实验通过猪脾组织样本的DNA提取，展示了DNA提取的基本步骤和原理。
通过实验操作，我们成功地从猪脾组织中提取到了DNA，并观察到了DNA沉淀的现象。
DNA提取是许多分子生物学实验的前提步骤，对于研究生物学和遗传学等领域具有重要意义。
掌握DNA提取的方法和技巧，有助于我们深入了解生物体的基因组结构和遗传信息。
参考文献[1] Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press.。
猪脾dna的提取实验报告
猪脾dna的提取实验报告猪脾DNA的提取实验报告引言：DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内的遗传物质，它携带着生物体的遗传信息。
在生物学研究中，提取DNA是一项重要的实验技术。
本实验旨在通过提取猪脾组织中的DNA，了解DNA的提取过程以及相关实验技术的应用。
实验材料与方法：材料：1. 猪脾组织样本2. 细胞裂解缓冲液3. 蛋白酶K4. 乙酰化酒精5. 乙酸钠6. 乙醇7. 异丙醇8. 磷酸盐缓冲液9. TE缓冲液方法：1. 准备猪脾组织样本：将猪脾组织切碎并置于离心管中。
2. 细胞裂解：向离心管中加入适量的细胞裂解缓冲液，使组织细胞完全裂解。
3. 蛋白酶处理：加入适量的蛋白酶K，使蛋白质分解。
4. 乙酸钠处理：加入适量的乙酸钠，中和蛋白酶。
5. 乙酰化酒精处理：加入适量的乙酰化酒精，使DNA得以沉淀。
6. DNA沉淀：将样本离心，将DNA沉淀收集。
7. DNA洗涤：用乙醇洗涤DNA沉淀，去除杂质。
8. DNA溶解：用磷酸盐缓冲液溶解DNA。
9. 存储：将溶解的DNA样品存储于TE缓冲液中。
实验结果与分析：通过上述实验步骤，我们成功地从猪脾组织中提取到了DNA。
观察提取得到的DNA样品，可以看到一条透明的DNA链。
这表明我们的提取过程相对纯净，没有明显的杂质污染。
同时，我们可以通过测量DNA的浓度和纯度来评估提取的质量。
测量DNA浓度和纯度的常用方法包括比色法和吸光光谱法。
其中，比色法通过与DNA溶液中的染料反应，测量溶液的吸光度来推测DNA的浓度。
吸光光谱法则通过测量DNA溶液在不同波长下的吸光度，来确定DNA的纯度和浓度。
这些方法都可以帮助我们评估提取到的DNA样品的质量。
实验结论：通过本次实验，我们成功地从猪脾组织中提取到了DNA，并评估了提取样品的质量。
DNA提取技术在生物学研究中具有广泛的应用，例如基因测序、基因工程和遗传学研究等。
通过了解DNA提取的过程和相关实验技术，我们可以更好地理解生物体内的遗传信息，并为进一步的研究提供基础。
猪脾DNA提取实验报告
猪脾DNA提取实验报告猪脾DNA提取实验报告引言：DNA提取是分子生物学中常用的实验技术，它可以从生物体中提取出DNA，并用于进一步的分析和研究。
本实验旨在通过提取猪脾组织中的DNA，探索DNA 提取的原理和方法，并了解DNA在生物体中的重要作用。
实验材料和方法：材料：1. 猪脾组织样本2. 细胞裂解缓冲液3. 蛋白酶K4. 乙醇5. 氯仿6. 异丙醇7. TE缓冲液方法：1. 将猪脾组织样本切碎并置于离心管中。
2. 加入适量的细胞裂解缓冲液和蛋白酶K，轻轻摇动混匀。
3. 将混合物孵育于恒温水浴中，使细胞溶解。
4. 加入等体积的氯仿，轻轻摇动混匀。
5. 离心，分离出上清液（含DNA）和下层的有机相。
6. 将上清液转移至另一个离心管中，加入等体积的异丙醇，轻轻摇动混匀。
7. 离心，分离出上清液（含DNA）和下层的异丙醇相。
8. 倒掉上清液，加入适量的乙醇，轻轻摇动混匀。
9. 离心，分离出上清液（含DNA）和下层的乙醇相。
10. 倒掉上清液，加入适量的TE缓冲液，轻轻摇动混匀。
11. 离心，分离出上清液（含DNA）和下层的TE缓冲液。
结果与讨论：经过以上步骤，我们成功地从猪脾组织中提取出了DNA。
通过观察提取出的DNA溶液的颜色和浓度，可以初步判断DNA的纯度和浓度。
DNA溶液应该呈现无色或淡黄色，且浓度应在50-200 ng/μl之间。
DNA提取的关键步骤是细胞裂解和蛋白酶处理。
细胞裂解缓冲液中的成分可以破坏细胞膜和核膜，释放出细胞内的DNA。
蛋白酶K的作用是降解蛋白质，使DNA从蛋白质的包裹中解脱出来。
在实验中，我们选择了猪脾组织作为样本，因为猪脾中含有丰富的核细胞，有利于DNA的提取。
在提取DNA的过程中，我们使用了氯仿和异丙醇进行DNA的分离和纯化。
氯仿可以与细胞裂解液中的有机相混合，形成两相体系，通过离心分离出上清液中的DNA。
异丙醇的加入可以使DNA沉淀，进一步提高DNA的纯度。
最后，通过加入乙醇和TE缓冲液，我们将DNA溶解并保存在TE缓冲液中，以便后续的实验使用。
猪脾DNA的制备
损失较小，是实验室制备DNA的良好原料。 但是，胸腺来源短缺，往往很难及时满足需要。猪脾
较易获得，它的细胞核含量也高，可以代替胸腺。用猪脾脏组
织制备DNA，其纯度和产率均可达到采用小牛胸腺组织制备 DNA时的相似水平，制备流程也基本相似。但是必需指出，在 破碎脾脏组织以分离制取细胞核时，以及沉淀析出制取DNA钠 盐过程中，一定要严格掌握所规定的操作条件并实行监控，这 样可以使产率和质量都较为稳定。 在细胞内核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物-核 糖核蛋白(RNP)和脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在的。因而， 初步的提取，分离技术即是设法将这两大类的核蛋白分开。 在不同的电解质溶液中，RNP及DNP的溶解度有很大的差 别。例如：在低浓度的NaCl溶液中，DNP的溶解度随着NaCl 浓度的增加而逐渐下降，当NaCl浓度为0.14mol/L时，DNP的 溶解度仅为其在纯水中溶解度的约百分之一。但当NaCl的浓度 继续增加时，DNP的溶解度又渐次增大，当NaCl浓度增至
四、操作方法
新鲜猪脾5g
1. 剪成小块。
2.加入10 mL (450=200mL) 0.10 mol/L氯化钠-柠檬酸钠 的混合提取液，匀浆（每次5秒，间隔30秒，共4-5次） 3.离心沉降（3000 r/m，15 min），收集细胞核沉淀。
上清液 (弃去)
沉淀（含细胞核） 1. 加入30 mL (430=120mL) 1.71 mol/LNaCl，充 分搅匀。0-5℃冰箱静置2小时(1小时) 。 2. 将上述液体慢慢倒入预冷的11倍体积(330 mL)蒸 馏水中，使DNP析出。冰箱静置1小时(0.5小时) 。
4. 260nm波长测定OD值
0.5mol/L时，DNP的溶解度约与其在纯水中的溶解度近似，当
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二十世纪是 物理、化学和电子科学 的世纪
二十一世纪是 生命科学 生命是 的世纪
？
生命 = 核酸 + 蛋白质
二十一世纪是核酸、蛋白质的世纪
DNA提取的意义：
1、用于研制核酸类药物及保健品 2、用于基因诱变 3、用于DNA克隆 4、用于DNA测序 5、用于PCR扩增
提取DNA的主要来源：
3.DNA提取的几种方法 (1)浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者 分离。
1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液; 2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化; 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相 及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中; 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
核酸的分布：
95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内，
其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。 RNA分子则主要存在于细胞质中，约占75%， 另有10%在细胞核内，15%在细胞器中。
1、核酸的理化性质
DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。
核酸和核苷酸 大都呈酸味（除肌苷酸、鸟苷酸具 有鲜味外）。
核酸提取的原理
核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与 蛋白质结合的状态存在，用DNP和RNP 表示； DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影 响而不同。 DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度 的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至 1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。
RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较 小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此， 在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。
从不同材料中提取DNA的方法不同，分离
提取的难易程度也不同。
从高等动植物及细菌中提取DNA难度大一
Hale Waihona Puke 些。由于其 DNA 分子量较大。因此易被 机械张力剪断。
细菌DNA，除核DNA
（3）试剂： ① 20 × SSC：175.2gNaCL，88.2g 柠檬酸 钠•2H2O，PH=7.0加水至1000ml； ② 1×SSC，0.1×SSC由①作相应的稀释 得来； ③ NaCL-Na2EDTA 液 ： 8 . 7 7 gNaCL，3.72g Na2EDTA 溶于 800ml 蒸馏水中，用固体 NaOH 调 PH=8后定容至1000； ④ 5%SDS（W/V）：6gSDS溶于100ml45%乙 醇中； ⑤ 氯仿-异戊醇=24：1（体积比） ⑥ 其他:95%乙醇，盐，冰.
核酸提取的方案，应根据具体生物 材料和待提取的核酸分子的特点而定。 对于某特定细胞器中富集的核酸分 子，事先提取该细胞器，然后提取目的 核酸分子的方案，可获得完整性和纯度 两方面质量均高的核酸分子。
2.细胞的破碎
有坚硬的细胞壁的细胞，首先要破碎细胞。方法 有三种：
①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法；
（2）阴离子去污剂法: 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可 以直接从生物材料中提取DNA。 由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或 配位键结合,而阴离子去污剂能够破坏这种价键,所 以常用阴离子去污剂提取DNA。
（3）苯酚抽提法: 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的 降解作用。 用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 连 接键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团 与苯酚相似相溶。 蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离 心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含 DNA 的水相。 利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀 DNA 。此法的特点是使提取的DNA保持天然状 态 。
外，还有质粒DNA 等。
对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容易， 多数病毒DNA 分子量较小，提取时易保持其结 构完整性。
核酸提取的主要步骤：
1）破碎细胞； 2）去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂 类等生物大分子； 3）去除其它不需要的核酸分子； 4）沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质。
2. 操作步骤:
取鲜猪脾,去脂、血,称取5g,用预冷的1×SSC溶液 洗2次，剪碎； 按脾：1×SSC=1; 5W/V 加入25ml预冷的1×SSC， 用高速组织捣碎机破碎8次,每次5秒,中间间隔30秒； 将匀浆液放在烧杯中， 于冰盐浴中冷却10分钟。 4℃，8000rpm离心5分钟。去掉上清，取↓；
②化学试剂法：用SDS处理细胞；
③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁 破碎。
高等动物的DNA 主要存在于细胞核与线粒体中， 所以提取时有两个困难（高等植物与此类似）：
1）破碎细胞难，从处死动物分离组织器官到 破碎细胞费时长。在长时间内 DNA 可能会被 DNase 降解； 2）因分子量大，在使用组织匀浆器破碎组织 时易造成DNA 断裂； 对不同生物材料，要根据具体情况选择适当 的分离提取方法。
1、动物组织及器官 脾、肝、胸腺、鱼类精子等。 2、植物 种子的胚芽等 3、微生物 细菌、酵母菌等
核酸的存在形式：
核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以 与蛋白质结合的状态存在； 真核生物的染色体DNA为双链线性分子； 原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器 DNA为双链环状分子； 有些噬菌体DNA有时为单链环状分子； 病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样， 有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状 等。
猪脾中提取DNA
1. 实验材料，仪器和试剂： （1） 实验材料：新鲜猪脾： （2）仪器： 量筒：10ml 、100ml 3个； 烧杯：100ml 2个、250ml 2个； 磨口锥形瓶： 250ml 1个、500ml 1个； 移液管：1ml 1支、10ml 1支； 滴管、玻棒、离心机、电动搅拌器、台秤、 剪刀、镊子。
DNA、RNA和核苷酸都微溶于水，不溶于乙醇、氯 仿等有机溶剂。
DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。 RNA钠 盐在水中溶解度可达40g/L。
在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性 或弱碱性溶液中较稳定。
DNA溶液的粘度很大，而RNA溶液的粘度小 得多。核酸发生变性或降解后其粘度降低。 核酸受到强大离心力的作用时，可从溶液中 沉降下来，其沉降速度与核酸的大小和密度有 关。