ELISA,Western Blot,免疫组化的区别
免疫印迹 酶联免疫
免疫印迹酶联免疫
免疫印迹和酶联免疫都是生物化学和免疫学领域常用的实验技术，用于检测特定蛋白质的存在和浓度。
免疫印迹（Western blot）是一种用于检测特定蛋白质的技术，它通过将待测样品中的蛋白质
分离并转移到膜上，然后使用特异性抗体与目标蛋白结合，最终通
过显色或发光方法来检测蛋白质的存在和相对丰度。
免疫印迹技术
常用于研究蛋白质的表达和定量分析。
而酶联免疫（ELISA）是一种广泛应用于生物医学和生物化学领
域的实验技术，用于检测样品中特定蛋白质的存在和浓度。
酶联免
疫的原理是利用酶标记的抗体或配体与待测物质结合，然后通过底
物的反应产生可定量的信号，从而检测样品中目标物质的存在和浓度。
ELISA技术具有高灵敏度和高特异性，常用于临床诊断、药物
筛选、生物学研究等领域。
从技术原理上来看，免疫印迹和酶联免疫都是利用抗体与特定
抗原结合的原理，但在实验步骤、操作流程和应用领域上有所不同。
免疫印迹主要用于研究蛋白质的表达和定量分析，而酶联免疫则更
广泛地应用于临床诊断和生物学研究中。
两种技术在科研和临床实
验室中都具有重要意义，能够帮助科学家和医生更准确地检测和分析样品中的蛋白质，为疾病诊断和药物研发提供重要信息。
免疫学检验的方法和特点
免疫学检验的方法和特点免疫学检验是一种通过检测和分析机体免疫系统相关指标来评估机体免疫功能的方法。
它可以用于疾病的诊断、预防和治疗过程中，对于研究免疫系统的功能和疾病的免疫机制也具有重要意义。
免疫学检验的方法主要包括体外诊断试验、免疫组化技术和流式细胞术等。
下面将逐一介绍这些方法的特点和应用。
1. 体外诊断试验：体外诊断试验是最常用的免疫学检验方法之一，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫分析（RIA）、免疫印迹（Western Blot）等。
这些试验通过检测血清中的抗体或抗原来评估机体的免疫状态。
其特点是操作简单、结果准确可靠、样本来源广泛，可以用于检测多种疾病，如感染病、自身免疫病等。
体外诊断试验的优势在于可以进行大规模筛查，对于人群健康状况的监测和疾病的早期诊断具有重要意义。
2. 免疫组化技术：免疫组化技术是利用抗体与组织或细胞中特定分子的结合反应来检测和定位这些分子的方法。
常用的免疫组化技术包括免疫组织化学（IHC）和免疫荧光染色（IF）等。
这些技术可以用于检测和定位肿瘤标志物、炎症细胞因子、免疫细胞表面标志物等，对于疾病的诊断和治疗有重要的指导意义。
免疫组化技术的优势在于可以直接观察到分子的表达和分布情况，具有较高的灵敏度和特异性。
3. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过检测和分析细胞表面标志物来鉴定和分类细胞的方法。
通过标记细胞表面的抗原或抗体，结合流式细胞仪的高速流式分析技术，可以对单个细胞进行高通量的检测和分析。
流式细胞术可以用于检测和鉴定免疫细胞亚群、肿瘤细胞、干细胞等，对于疾病的诊断和治疗选择有重要的指导作用。
流式细胞术的优势在于可以同时检测多个指标，对于复杂的样本分析有较高的效率和准确性。
免疫学检验的特点包括以下几个方面：1. 高度特异性：免疫学检验方法可以通过特异的抗体-抗原反应来检测和定量分析特定的分子或细胞，具有较高的特异性。
这使得免疫学检验方法在疾病的诊断和治疗中具有重要的优势，可以准确地鉴定和区分不同的疾病类型。
蛋白表达不同检测方式的比较和分析(仅供参照)
蛋白表达不同检测方式的比较和分析免疫组化法(immunohistochemistry)原理：免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
特点：是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
蛋白免疫印迹( Western Blot)原理：蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC 膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。
特点：先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
ELISA检测原理：酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法，它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。
特点：用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
蛋白表达不同检测方式的比较和分析
蛋白表达不同检测方式的比较和分析免疫组化法(immunohistochemistry)原理：免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
特点：是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
蛋白免疫印迹( Western Blot)原理：蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC 膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。
特点：先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
ELISA检测原理：酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法，它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。
特点：用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
ELISA,Western Blot,免疫组化的区别
页眉内容免疫组化是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
elisa（酶联免疫吸附试验）用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
western bolt先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
以下western和Elisa的区别不是原创，是找的资料。
western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦elisa可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而Elisa无能为力，一锅端了。
WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。
wb和elisa原理
wb和elisa原理
WB和ELISA是两种常用的蛋白质检测技术。
WB即WesternBlotting，是一种检测蛋白质的方法，通常用于确定特定蛋白质在复杂混合物中的存在和定量。
ELISA即Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，是一种通过酶标记的抗体来检测特定蛋白质的方法，通常用于测定血清或其他生物样本中的蛋白质含量。
WB的基本原理是利用电泳将复杂混合物中的蛋白质分离出来，然后将其转移到固定在膜上的蛋白质。
接下来，使用一种特定的抗体来探测目标蛋白，通常是标记有荧光素或放射性同位素的抗体。
这种方法可以检测蛋白质的存在、大小和量。
ELISA的基本原理是将待检测的蛋白质用一层特定的抗体捕获在微孔板上，然后使用另一种标记有酶的抗体来探测目标蛋白质。
酶标记抗体与目标蛋白质结合后，添加底物后酶会催化反应产生颜色或荧光，从而测定蛋白质的含量。
总之，WB和ELISA都是常用的蛋白质检测技术，但其原理和应用略有不同。
需要根据实验需要选择合适的方法。
- 1 -。
免疫印迹法和ELISA检测过敏原结果比较
免疫印迹法和ELISA检测过敏原结果比较引言过敏是一种常见的免疫反应，它可能导致症状包括呼吸困难、皮疹、肠胃不适等。
过敏源可以是多种物质，包括花粉、某些食物、家居灰尘等。
为了确定过敏源并制定合适的治疗方案，需要进行过敏原检测。
目前，传统的免疫印迹法和ELISA检测法是常用的过敏原检测方法。
本文将对这两种方法进行比较，以帮助评估选择最合适的过敏原检测方法。
免疫印迹法1.定义免疫印迹法，也称为Western Blotting，是一种应用于蛋白质检测的技术。
它基于电泳分离蛋白质并转移至固体支撑表面的原理，通过特异性抗体与靶蛋白结合的方法来检测特定蛋白质。
2.操作具体操作步骤如下：•经过SDS-PAGE电泳分离的蛋白质样品被转移到硝酸纤维素或聚氨酯膜上；•用抗原特异性的一抗与蛋白质结合；•加入二抗结合于一抗上的酶发生化学反应，使被检测目的蛋白质按特定颜色成像。
3.优缺点优点：•特异性高；•可以同时检测多个蛋白质。
缺点：•操作较为繁琐；•对试样量要求高；•分离光谱和电泳前的特定色谱处理效应对结果有影响。
ELISA1.定义ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），也称为酶标记免疫吸附测定法，是一种用于检测蛋白质或其他分子的方法。
ELISA利用抗体与特异性抗原结合的原理，利用酶标记抗体与抗原结合的结果来进行分析。
2.操作具体操作步骤如下：•选择特定抗体，将其吸附到微孔板上；•加入一定量的被检样本，使其结合到抗体上；•加入酶标记抗体并使其与抗原结合；•加入显色底物，记录吸光度测量结果，根据标准曲线计算出样本中某种特定抗原的存在量。
3.优缺点优点：•高度敏感度；•操作较为简便。
缺点：•不能检测多个蛋白质；•可能出现假阴性和假阳性反应。
比较1.灵敏度和特异性对比两项检测法，ELISA检测法的灵敏度、特异性均明显高于免疫印迹法。
ELISA检测法可以检测出更少量的目标物质并消除假阳性的干扰。
RT-PCR、Western blot和ELISA三者的区别
RT-PCR、Western blot和ELISA三者的区别？(2010-07-10 21:46:17)转载标签：杂谈PCR是从转录水平上检测目的基因,而非蛋白,从转录到翻译还有复杂的过程,因此基因的表达量与蛋白的表达量不一定是正相关的.WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说你可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响基因翻译蛋白质, PCR可以检测基因的表达量，绝对定量和相对定量。
但基因翻译表达蛋白质是个复杂的过程，有可能出现基因量大而蛋白质少，或者相反，甚至其他情况。
所以，PCR是从基因层面DNA或mRNA进行的检测，而Western Blot是目前一种结合内参对蛋白质进行半定量的方法，Elisa可以定量检测某些蛋白、激素等一、目的虽然两者都是通过抗原抗体反应对蛋白质进行检测，WB主要还是定性，Elisa可以定性，也可以定量。
WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而Elisa无能为力，一锅端了。
二、模式WB是（抗原-抗体-二抗酶）模式进行检测；Elisa模式有多种，如（抗原-抗体-二抗酶）、（抗原-抗体-抗原酶）、（抗抗体-抗体-抗原酶）、（抗体-抗原-抗体酶）、（抗抗体-抗体-抗原-抗体酶）等等很多很多。
三、抗体的适用性WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。
从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而Elisa不行。
四、灵敏度一般Elisa的灵敏度要远高于WB，这从一般酶标记物的使用浓度或待检样品的稀释度上就可以看出。
五、可操作性WB一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。
Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。
免疫学检测法汇总
免疫学检测法汇总免疫学检测法是现代医学中常用的一种检测方法，通过检测人体免疫系统产生的抗原-抗体反应来确定疾病的存在与否，以及疾病的类型和程度。
免疫学检测法广泛应用于临床诊断、流行病学调查、药物监测和研究等领域。
以下将对常用的免疫学检测法进行汇总。
1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA是一种常用的免疫学检测方法，利用酶标技术来检测抗原或抗体的存在。
ELISA分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接荧光ELISA等多种类型，适用于检测各种疾病，如感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等。
2.免疫磁珠技术：免疫磁珠技术是通过抗体与磁性颗粒结合，然后利用磁力分离的原理实现对抗原或抗体的检测。
该技术具有高灵敏度和高特异性的特点，常用于病原微生物的检测、蛋白质的分离等。
此外，免疫磁珠也可用于药物检测、生物分子的富集等。
3. 蛋白质印迹（Western blot）：蛋白质印迹是一种用于检测蛋白质的存在和表达水平的方法。
首先将蛋白质分离并转移到膜上，然后利用抗体与目标蛋白质结合，最后通过荧光标记或酶标记的二抗进行信号的检测。
该方法常用于疾病的诊断和研究，如肿瘤标记物的检测和鉴定。
4.免疫组织化学（IHC）：免疫组织化学是一种通过对组织切片中特定抗原的免疫反应进行染色来检测该抗原的存在和分布的方法。
该技术应用广泛，在病理学诊断中常用于确定肿瘤的类型和分级、鉴别不同组织类型等。
5.流式细胞术：流式细胞术是一种通过检测细胞表面或内部抗原的免疫反应来对细胞进行分类和分析的方法。
流式细胞术结合免疫标记物和激光技术可以实现对单个细胞的快速高通量检测，常用于免疫细胞亚群的检测、免疫细胞活性的评估等。
6.荧光免疫检测：荧光免疫检测利用荧光标记的抗体或荧光探针与靶分子结合来检测目标物的存在和表达水平。
该技术具有高灵敏度、高分辨率和多重检测的优势，常用于疾病的诊断和治疗监测。
除了上述常用的免疫学检测法外，还有ELISPOT（酶联免疫斑点法）、免疫电镜（Immuno-EM）等特殊的检测方法，用于对特殊细胞亚群或抗原的检测。
真核细胞常用几种基因表达检测方法比较论文
关于真核细胞常用几种基因表达检测方法的比较【摘要】目前国际上对真核细胞基因的表达调控机制研究的已经相当深入了，相对应得对基因表达的产物的检测也逐渐多了起来。
首先基因表达的最终产物分为rna和蛋白质。
所以所有的检测方法都是以此为基础进行的。
其中以rna为检测底物的方法有：rt-pcr，northern blot等。
以蛋白质为检测的底物的方法有：elesa，western blot，免疫组化等。
各种方法有其适用范围及优缺点，本文就其最新进展及常用方法作一个阐述及总结。
【关键词】rt-pcr；northern blot；elisa；western blot；免疫组化真核细胞比原核细胞复杂的多，基因表达调控机制也不一样。
以介绍常用的真核细胞基因表达的检测方法来引导读者更深层次的理解真核细胞基因表达的复杂性。
更加全面得理解真核细胞的复杂隔室结构与其基因表达的关系。
及解决一些实验过程中常见的错误。
1.以rna为底物的检测方法1.1 rt-pcrrt-pcr为反转录rcr（reverse transcription pcr）的缩写。
逆转录pcr，或者称反转录pcr（reverse transcription-pcr，rt-pcr），是聚合酶链式反应（pcr）的一种广泛应用的变形。
在rt-pcr中，一条rna链被逆转录成为互补dna，再以此为模板通过pcr进行dna扩增。
由一条rna单链转录为互补dna（cdna）称作“逆转录”，由依赖rna的dna聚合酶（逆转录酶）来完成。
随后，dna的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖rna的dna聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的pcr。
原先的rna模板被rna 酶h降解，留下互补dna。
rt-pcr的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的rna。
rt-pcr广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种rna的含量。
试剂为：oligo多聚体，相当于mrna引物，amv（m-mlv）：逆转录酶dntp：脱氧核苷酸，rnase：rna酶抑制剂，pcr buffer：rt-pcr缓冲液，mgcl2：2价镁离子。
蛋白质分析技术(Western Blot、ELISA、免疫荧光与免疫组化技术)
记，成为一种生物反应放大系统。生物素化抗体可捕获多个亲和素，后者再与酶结合，加入
底物后，产生颜色反应。这一系统可以大大提高 ELISA 的灵敏度。
操作过程：
抗原包被→封闭→待检标本→生物素化抗体→洗涤→ 酶标记亲和素→洗涤→加底物显色和 检测 三 免疫荧光技术 利用某些荧光素，如 FITC、R-PE 等通过化学反应与抗体或其它蛋白结合制备成荧光探针， 然后与被测抗原或配体发生特异性结合，形成的荧光复合物在一定波长光的激发下可产生荧 光，因此利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测未知抗原或相应配体。 （一）细胞膜蛋白分子的检测 原理： 细胞膜表面的抗原或受体可特异地与相应的抗体或配体结合，将针对细胞表面抗原的抗体或 配体用不同的荧光素标记，根据不同荧光物质的最大激发和发射波长的不同，即可准确定量 每种荧光物质的强度，从而推出相应细胞表面抗原表达量 1 直接法：细胞＋荧光素标记的抗 CD 分子的抗体→4ºC 反应 30-60min→荧光显微镜观察 或流式细胞计分析。 2 间接法：细胞＋抗 CD 分子的抗体→4ºC 反应 30-60min 荧光素标记的二抗 4ºC 反应 30-60min→荧光显微镜观察或流式细胞计分析 悬浮细胞：用 PBS 洗二次后再做染色 贴壁细胞：先用胰酶消化成悬浮细胞再染色 2 Annexin V 检测技术 (检测细胞凋亡的一个常规指标) 磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS 可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V 是一种分子量为 35~36KD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与 PS 高亲和力特异性结合。将 Annexin-V 进行 荧光素（FITC、PE）或 biotin 标记，以标记了的 Annexin-V 作为荧光探针，利用流式细胞 仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 样本处理和染色方法 1 悬浮细胞的染色：将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5~1×106）用 PBS 洗 2 次，加 入 100ul Binding Buffer 和 FITC 标记的 Annexin-V（20ug/ml）10ul，室温避光 30min，再 加入 PI（50ug/ml）5ul，避光反应 5min 后，加入 400ul Binding Buffer，立即用 FACScan 进行流式细胞术定量检测（一般不超过 1h）， 同时以不加 AnnexinV-FITC 及 PI 的一管作为 阴性对照。 2 贴壁培养的细胞染色：先用 0.25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。 3 爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。 （二）细胞内蛋白分子的检测 细胞内细胞因子的检测、凋亡相关蛋白 TFAR19 的检测等。 操作过程： （1）直接法： 细胞→3％多聚甲醛固定和 渗透化→封闭→荧光素标记的抗体→ 洗涤→荧光显微镜观察或 流式细胞计分析 （2）间接法： 细胞→3％多聚甲醛固定和渗透化→封闭→针对蛋白的特异抗体→洗涤→荧光素标记的二抗 →洗涤 → 荧光显微镜观察或流式细胞计分析 凋亡相关蛋白 TFAR19 蛋白的表达和细胞定位分析 TFAR19（PDCD5）是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因， 前期的功能研究表明，它是促进细胞凋亡的增强剂。利用荧光素（FITC）标记的 TFAR19 单 克隆抗体为探针，对细胞凋亡过程中 TFAR19 蛋白的表达水平及定位研究发现，凋亡早期
检测抗原的常用方法
检测抗原是生物学和医学研究中常用的方法。
常用的检测抗原的方法有以下几种：
1.酶联免疫吸附试验(ELISA)：这是一种常用的检测抗原的方法，它
通过酶联技术来检测抗原的存在。
2.免疫印迹(Western Blot)：这是一种用于检测蛋白质抗原的常用方
法，它通过将样品中的蛋白质迁移到膜上，然后用抗体来检测抗原。
3.免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)：这是一种用于检测组织中
抗原的常用方法，它通过在组织样本上用抗体来检测抗原。
4.免疫细胞化学(Immunocytochemistry, ICC)：这是一种用于检测细
胞中抗原的常用方法，它通过在细胞样本上用抗体来检测抗原。
5.免疫共沉淀(Immunoprecipitation, IP)：这是一种用于检测蛋白质
相互作用的常用方法，它通过在样品中用抗体来检测抗原。
6.荧光免疫染色(Fluorescence Immunostaining)：这是一种用于检测
抗原的常用方法，它通过在样品上用荧光标记的抗体来检测抗原。
需要注意的是，不同的抗原检测方法有不同的适用条件和灵敏度和特异性。
例如, ELISA 常用于检测血清中的抗原，而IHC 和ICC 常用于检测组织和细胞中的抗原。
因此，在选择检测抗原的方法时，需要根据具体应用情况来选择最合适的方法。
(最新整理)RT-PCR、Western_blot和ELISA三者的区别
编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（RT-PCR、Western_blot和ELISA三者的区别）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
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转载标签：杂谈PCR是从转录水平上检测目的基因,而非蛋白，从转录到翻译还有复杂的过程，因此基因的表达量与蛋白的表达量不一定是正相关的.WB只能半定量，但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说你可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响基因翻译蛋白质， PCR可以检测基因的表达量，绝对定量和相对定量。
但基因翻译表达蛋白质是个复杂的过程，有可能出现基因量大而蛋白质少，或者相反，甚至其他情况。
所以，PCR是从基因层面DNA或mRNA进行的检测，而Western Blot是目前一种结合内参对蛋白质进行半定量的方法，Elisa可以定量检测某些蛋白、激素等一、目的虽然两者都是通过抗原抗体反应对蛋白质进行检测，WB主要还是定性，Elisa可以定性，也可以定量。
WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的;而Elisa无能为力,一锅端了。
二、模式WB是（抗原—抗体—二抗酶）模式进行检测；Elisa模式有多种，如（抗原—抗体—二抗酶）、（抗原-抗体-抗原酶)、（抗抗体—抗体-抗原酶)、（抗体-抗原—抗体酶）、（抗抗体-抗体—抗原-抗体酶）等等很多很多。
三、抗体的适用性WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。
免疫组化与western
免疫组化与western bloting免疫组化原理•免疫组化，是应用抗原抗体反应，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
显色剂•荧光素---免疫荧光组织化学技术•酶•金属离子•同位素示例-SABC法•链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物•streptavidin biotin-peroxidase complex SA B C•生物素可标记抗体和酶。
•生物素与亲和素有很高的亲和力，1个亲和素分子上有4个生物素结合位点。
•最终形成的复合物网络了大量的酶分子，因此，敏感性更高。
E一抗SA生物素生物素显色SABC标记辣根过氧化物酶SABC标记cy3具体操作•脱蜡及水化PBS洗3% H2O2水，室温孵育10 min以消除内源性过氧化物酶活性（封闭）抗原修复PBS洗山羊血清封闭滴加Ⅰ抗PBS洗滴加生物素化二抗PBS洗滴加试剂SABC PBS洗DAB显色苏木素复染脱水、透明、封片、镜检免疫荧光组化•异硫氰酸荧光素（FITC）•四乙基罗丹明（RIB200）•四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）•等FITC免疫荧光步骤荧光显微镜一抗•FITC荧光双重漂染•同一张脑片的两种不同荧光染色重叠,乙酰胆碱转移酶和波形蛋白双阳性细胞呈黄色荧光荧光组织化学法检测髁突软骨中雌激素受体western bloting•原理•根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白质的方法。
•又叫免疫印迹法或蛋白质印迹法操作与说明SDS-PAGE凝胶电泳：分离样品中的Pr固相免疫测定：切割凝胶并用固定化基质膜与凝胶相贴，使待测Pr转移到印记上。
化学发光检测：免疫覆盖液孵育转膜、显影、定影X光胶片凝胶图像分析：X光片扫描，并读取灰度值。
99%的实验小白都会收藏，WB、ELISA、IHC进阶攻略
99%的实验小白都会收藏，WB、ELISA、IHC进阶攻略学的理论知识终于要派上用场了，可开学2 周了还是一头雾水，我的实验该从哪里入手呢师妹师兄小师妹，别担心，师兄我已在实验室摸爬滚打多年，包你分分钟学会那真的太感谢师兄了师妹师妹学习了师兄的实验方法后，奇怪，为什么我还是做不出满意的结果呢实验方法太多了，每个人做实验的习惯方式千差万别，其实你只需要学习一套标准的实验流程就 ok 了博士君师妹哪里有？快讲莫急，下面针对最常见的ELISA/WB/IHC 三大实验，我给你做一个详细的讲解吧博士君免疫组化、Western、ELISA，是免疫学三大常用工具，分别用于定位，定性和定量。
博士君在历经 26 年的刻苦专研，一路从实验小白变身为实验达人，特别能理解初入门的学员，为了帮助初学者快速上手，减少摸索的苦恼，博士君特地赶在开学季前为大家精心准备了实验视频以及实验操作要点等，有了这篇干货，相信大家就能轻松搞定实验当中的疑难杂症。
文档都准备好了，快点击文末「阅读原文」一键下载收藏！WB（蛋白质印迹）1简介先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原- 抗体- 标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
WB 实验流程图及相关产品▲点击图片查看大图WB 实验操作视频WB 实验常见问题及解决办法1高背景原因解决办法抗体浓度太高优化/降低一抗和二抗的浓度抗体孵育温度过高 4 ℃ 孵育二抗非特异性结合或与封闭剂交叉反应设置二抗对照（不加一抗），降低二抗浓度一抗或二抗与封闭剂有交叉反应在孵育和洗涤液中加入 Tween-20 减少交叉反应.封闭不充分延长封闭时间，更换合适的封闭剂（脱脂奶粉，BSA，酪蛋白等）抗体与其它蛋白质交叉反应更换不同的封闭液；勿在含生物素体系中使用脱脂奶粉封闭；降低二抗浓度；检测二抗与膜的交叉反应性洗膜不充分增加洗涤次数膜干燥保证充分的反应液，避免出现干膜现象2信号弱或无信号原因解决办法抗体增加抗体浓度；抗体与抗原结合差；抗体丧失活性抗原不足增加上样量抗原被封闭液遮蔽试用不同的封闭液；优化封闭液中蛋白质浓度；缩短封闭时间蛋白质样品在储存过程中降解重新制备样品转膜不充分,或洗膜过度使用丽春红检测转膜效果，PVDF 膜需浸透,需正确的转膜操作，勿过度洗膜过度封闭使用含 0.5% 脱脂奶或无脱脂奶的抗体稀释液,或更换封闭剂，减少封闭时间一抗失效使用有效期内抗体,分装保存,避免反复冻融取用, 工作液现配现用酶和底物失效直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。
免疫组化和WesternBlot可以用同一种抗体吗？
免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变性的影响，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制，煮后变性会消失。
如果你所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和Western，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。
免疫组化与Western
免疫组化与Western blot的区别个⼈感觉还是有⼀定的区别的，从难度上来说，western⽐免疫组化容易些。
western可以⽤内参，使结果更真实。
western也可以组织定位，不过⽐较粗略，如果想看具体的位置，⽐如想要了解是哪些细胞，就要⽤到免疫组化。
可以两个结合起来⽤。
免疫组化⼀般都是在组织上做，细胞上做的好像叫免疫过氧化物酶单层试验，叫法不⼀样。
具体应⽤那个要看你有什么样的实验材料了。
做Western Blot⽤组织的很少，⼲扰太多了，⼀般都是细胞培养出来的样品。
如果你想知道某蛋⽩的组织表达特异性，⽤免疫组化，即可定位如果想知道该蛋⽩在细胞中中有没有表达，⽤western，可定量⾸先得从免疫组化和western bolt之间的原理说起⾛哈，免疫组化，故名⽰意，应该是在组织上作的免疫荧光染⾊，包括冰冻切⽚和⽯蜡切⽚，⽽western作的是蛋⽩质电泳，⼀般是细胞破壁后的蛋⽩表达物免疫组化除了可以定量之外，还可以定位。
做免疫组化的标本来源可以是新鲜组织也可以是保存的蜡块，但western只能⽤新鲜组织免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（⼜称表位），有些表位是线性的，⽽有的属于构象型；线性表位不受蛋⽩变性的影响，天然蛋⽩和煮后的蛋⽩都含有；构象型表位由于受蛋⽩空间结构限制，煮后变性会消失。
如果你所⽤的抗体识别的是蛋⽩上连续的⼏个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时⽤于免疫组化和Western，⽽如果抗体识别构象形表位，则只能⽤于免疫组化。
⼀般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。
（限于单抗）因为如果⽤普通显微镜只能看出阳性阴性，但在带有图像采集摄像系统的显微镜，采集软件带有⾃动分析功能，根据所标定的⾯积内阳性组织或细胞的⾯积来⾃动算出阳性率，因其⼈为因素较多，只能说是半定量。
ELISA、western blot、免疫组化、RT-PCR实验方法原理及其在SCI论文材料方法、结果中的写作.
湿转
• 将膜、胶、滤纸整个浸泡在Buffer的Tank里转移的 方法；
• 适合转移大分子量（100KD以上）蛋白； • 湿转电流是恒定的，时间也是根据分子量而定； • 300mA 1h
Western blot
实验操作
转膜确认
步骤四、转膜
丽春红 • 可逆染色，检测转膜效率。 • 与下游WB检测完全兼容，无任何干扰。
抗原和抗体
抗体的基本知识
定义：antibody。指机体的免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆细 胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
结构与功能： 1）重链轻链； 2）超变区是抗原结合位，与抗原表位互补； 3）抗体Fc片段上两结构域共同与细胞膜
Fc受体结合，发挥不同的生物学效应。
引用文献
ELISA
写作实例
浓度
时间
ELISA
写作实例
操作手册
ELISA
写作实例
浓度
组别
Western blot
定义及原理 应用 实验操作 常见问题分析 半定量分析 写作实例
Western blot
定义及原理
➢ 定义：又称免疫印迹，是指将蛋白样品转移到固相载体上，而后 利用相应的抗体来检测目的蛋白的一种方法。
ELISA
常见问题分析
➢ 阴性对照出现阳性结果
• 试剂或样品可能被污染，或者由于孔之间的溅洒出现交叉污染。 • 酶标板洗板不彻底。 • 抗体量过多导致非特异结合。 • 夹心法、捕获法中检测抗体与包被抗体/抗原交互反应。
➢ 酶标板整体背景高
• 抗体非特异性结合。 • 底物结合浓度过高或反应时间过长。 • 底物溶液不新鲜或被污染。 • 底物孵育过程没有避光。
单克隆抗体浓度测定方法
单克隆抗体浓度测定方法单克隆抗体浓度测定单克隆抗体浓度测定是一项关键的实验技术，用于确定单克隆抗体在样本中的浓度。
本文将介绍几种常用的测定方法。
ELISA法ELISA法是最常用的单克隆抗体浓度测定方法之一。
以下是ELISA 法的步骤：1.涂覆：将抗原溶液均匀涂覆在酶标板上。
2.固定：将酶标板放置在低温环境中，使抗原固定在酶标板上。
3.阻断：加入非特异性蛋白质（如牛血清蛋白）阻止非特异性结合。
4.反应：加入待测样本和单克隆抗体试剂，并孵育一段时间。
5.洗涤：用缓冲液洗涤酶标板，去除未结合的物质。
6.显色：加入底物溶液，使酶标板上的酶催化反应发生显色。
7.停止反应：加入停止剂，停止酶催化反应。
8.测定：用酶标仪测定反应溶液的吸光度，根据标准曲线计算待测样本中单克隆抗体的浓度。
Western Blot法Western Blot法也被广泛应用于单克隆抗体浓度测定。
以下是Western Blot法的步骤：1.蛋白质电泳：将待测样本和已知浓度的单克隆抗体样品进行SDS-PAGE电泳分离。
2.转印：将电泳分离后的蛋白质转移到聚乙烯二醇膜（PVDF）上。
3.阻断：用非特异性蛋白质（如牛血清蛋白）阻止非特异性结合。
4.孵育：加入标记有特异单克隆抗体的二抗，孵育一段时间。
5.洗涤：用缓冲液洗涤膜，去除未结合的物质。
6.显色：加入底物溶液，使特定蛋白质产生显色反应。
7.测定：用图像分析系统测量显色带的强度，根据已知浓度的单克隆抗体样品构建标准曲线计算待测样本中单克隆抗体的浓度。
免疫组化法免疫组化法是通过单克隆抗体与待测样本中的特定抗原结合来测定单克隆抗体浓度的方法。
以下是免疫组化法的步骤：1.取样：采集待测样本，如血液或组织切片。
2.固定：使用适当的固定剂将样本固定在载玻片上。
3.渗透：使用适当的加热或酶处理方法，增加抗体对抗原的渗透性。
4.成像：加入标记有荧光物质或酶标记的单克隆抗体试剂，与样本中的特定抗原结合。
5.洗涤：用缓冲液洗涤载玻片，去除未结合的物质。
(最新整理)RT-PCR、Western_blot和ELISA三者的区别
编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（RT-PCR、Western_blot和ELISA三者的区别）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。
本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快业绩进步，以下为RT-PCR、Western_blot和ELISA三者的区别的全部内容。
转载标签：杂谈PCR是从转录水平上检测目的基因,而非蛋白，从转录到翻译还有复杂的过程，因此基因的表达量与蛋白的表达量不一定是正相关的.WB只能半定量，但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说你可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响基因翻译蛋白质， PCR可以检测基因的表达量，绝对定量和相对定量。
但基因翻译表达蛋白质是个复杂的过程，有可能出现基因量大而蛋白质少，或者相反，甚至其他情况。
所以，PCR是从基因层面DNA或mRNA进行的检测，而Western Blot是目前一种结合内参对蛋白质进行半定量的方法，Elisa可以定量检测某些蛋白、激素等一、目的虽然两者都是通过抗原抗体反应对蛋白质进行检测，WB主要还是定性，Elisa可以定性，也可以定量。
WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的;而Elisa无能为力,一锅端了。
二、模式WB是（抗原—抗体—二抗酶）模式进行检测；Elisa模式有多种，如（抗原—抗体—二抗酶）、（抗原-抗体-抗原酶)、（抗抗体—抗体-抗原酶)、（抗体-抗原—抗体酶）、（抗抗体-抗体—抗原-抗体酶）等等很多很多。
三、抗体的适用性WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。
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免疫组化
是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
elisa（酶联免疫吸附试验）
用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
western bolt
先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
以下western和Elisa的区别不是原创，是找的资料。
western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦
elisa可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到
ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响
WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而Elisa无能为力，一锅端了。
WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。
从另一个意义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而Elisa不行。
WB一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。
Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。
WB操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多。
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