_红阳_猕猴桃茎段高效再生体系的建立_赵许朋

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猕猴桃、枣高效再生体系的建立及农杆菌介导的遗传转化研究

猕猴桃、枣高效再生体系的建立及农杆菌介导的遗传转化研究猕猴桃(Actinidia)果实风味独特,营养丰富,被誉为“水果之王”。

枣(Zizyphus jujuba Mill.)是我国第一大干果树种。

猕猴桃属雌雄异株,遗传背景复杂；枣花蕾小、自然坐果率低、胚败育率高等因素,传统杂交育种方法存在周期长、效率低等问题,获得优质多抗的猕猴桃、枣新品种困难重重。

基因工程的发展为猕猴桃、枣的育种工作开辟了一条新的途径。

本研究以河南特异红果肉猕猴桃资源中华猕猴桃‘伏牛95-2’(Actinidia chinensis’Funiu95-2’)为材料,建立了中华猕猴桃‘伏牛95-2’高效再生体系、遗传转化体系,且获得了转抗菌肽D基因的转基因植株,PCR检测、Southern 杂交检测证明外源基因已整合到猕猴桃基因组中。

灰枣遗传转化研究,本试验以灰枣(Zizyphus jujuba ’Huizao’)为材料建立了灰枣组培快繁体系、叶片直接再生体系及对灰枣遗传转化进行了初步探讨。

主要结果如下：1.以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片为外植体,探讨了不同植物生长调节物质对叶片再生不定芽增殖及生根的影响,建立了高效的再生体系。

结果表明,叶片外植体在MS+ZT1.0mg/L+ NAA 0.3mg/L培养基上,不定芽分化率最高为87.5%；在MS+ 6-BA 2.0 mg/L+NAA0.5mg/L培养基中,不定芽增殖系数最高为4.2；适宜不定芽生根培养基为1/2MS+NAA2.0mg/L,生根率为100%。

2.以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片为外植体,研究了抗生素对外植体生长的影响。

结果表明,中华猕猴桃‘伏牛95-2’对卡那霉素较敏感,浓度20mg/L时愈伤组织及不定芽分化率均为0,20mg/L为中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片遗传转化时筛选最佳浓度；生根培养基中附加30mg/L卡那霉素时,则完全抑制根的形成。

头孢霉素和羧苄青霉素对中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片分化均有抑制作用,但头孢霉素对叶片分化的抑制作用比羧苄青霉素小；结合遗传转化中的抑菌试验,选用400mg/L头孢霉素为中华猕猴桃‘伏牛95-2’遗传转化中适宜抑菌抗生素及浓度。

红阳猕猴桃快速繁殖体系的建立

和生根培养，立高效的猕猴桃快速繁殖途径。结果表明，建茎段极易产生愈伤组织，ＭＳ０８／Ｔ在＋．ｍｇＬＺ＋０１ｇＬＮＡ培养基中，伤组织诱导所需时间短、．ｍ／Ａ愈出愈率高，定芽的出芽率高、长健壮；１２ＭＳ不生以／为基本培养基．添加０５ｍ／Ｂ对不定芽生根较为有利，．ｇＬＩＡ生根率达到９＿％。３３３
关键词：阳猕猴桃（ｔｉｉｈｎｎｉＶ红Ａｃｉｄａｃｉｅｓｓ．Ｈｏｇａｇ；伤组织；定芽；ｎＣｎｙｎ）愈不快速繁殖
中图分类号：６３：３９￥６．￥３．１４４
文献标识码Ａ
文章编号：４９８１（０２１－３９００３ — １４２１）１２６— ３
（．南大学园艺园林学院，庆１西重４０１；．庆文理学院花卉研究所，庆０７６２重重４２６；０１０
３重庆市特色植物种苗工程技术研究中心，庆．重
４２６；．庆高校园林花卉工程研究中心，庆０１０ｎｇｎｒｔｏｏｔｄａｈｎｎｓｓｔｏｓａｔＲｅｅｅａｉｎｆＡｃｉｉｃｉｅｉｎｉ
ＺＨＵｅｄｎＬＵ－ｉｇ，，Ｘｕ－ｏｇ，ＩＹｉｑｎ２ ” ＺＨＡＯｎ－ｏｇ，Ｒｏｇｌｎ５ＹＵＡＮｉｙｎ￣ＷＵｎＨａ－ｉｇ，Ｈ（．ＦｃｌｆＨｒｉｌｒａｄＬｎｓａｅｏｔｗｓＵｉｒｉ，Ｃｏｇｉｇ４０１１ａｕｔｏｏｔｕｔｅｎａｄｃｐ，Ｓｕｈｅｔｎｖｓｙｈｎｑｎ０７６，Ｃｉａ．ＦｏｅｅｅｒｈＩｓｔｔ，Ｃｏｇｉｇｙｃｕｅｔｈｎ；２ｌｗｒＲｓａｃｎｔｕｅｈｎｑｎｉ

‘东红’猕猴桃高效再生体系的建立

‘东红’猕猴桃高效再生体系的建立吕海燕;李大卫;钟彩虹【摘要】为有力推动猕猴桃产业化种苗生产及推广,快速高效地繁育猕猴桃新种质资源,同时为猕猴桃多倍体育种、转基因育种等新兴育种技术创造新种质资源奠定基础,该研究以'东红'猕猴桃叶片、叶柄为外植体,探讨了不同植物生长调节剂种类及质量浓度组合对不定芽诱导过程中不定芽形成的影响,并研究了不同植物生长调节剂对'东红'组培苗不定根诱导的影响.结果表明:'东红'再生最佳外植体为叶柄,叶柄不定芽再生最佳培养基为MS+0.5μg·mL-16-BA+0.2μg·mL-1 NAA,不定芽平均再生率为91.2％;不定芽经过壮苗培养(MS+0.2μg·mL-16-BA+0.05μg·mL-1 NAA),取2～3 cm高幼苗进行生根诱导,不定根再生率为93％,平均根数为6条;生根后,种苗移栽成活率在80％以上.初步建立了'东红'叶柄高效再生体系,为猕猴桃快速的产业化种苗生产及推广提供了有力保证,也为后期猕猴桃育种研究提供理论依据.【期刊名称】《广西植物》【年(卷),期】2019(039)004【总页数】8页(P464-471)【关键词】猕猴桃;'东红';再生体系;叶柄;移栽【作者】吕海燕;李大卫;钟彩虹【作者单位】中国科学院植物种质创新与特色农业重点实验室, 中国科学院武汉植物园,武汉 430074;中国科学院种子创新研究院, 武汉 430074;中国科学院植物种质创新与特色农业重点实验室, 中国科学院武汉植物园,武汉 430074;中国科学院种子创新研究院, 武汉 430074;中国科学院植物种质创新与特色农业重点实验室, 中国科学院武汉植物园,武汉 430074;中国科学院种子创新研究院, 武汉 430074【正文语种】中文【中图分类】Q943.1;Q945猕猴桃资源收集、品种选育始于20世纪初，经过一百多年的生产、推广、发展已在全球形成近24.5万hm2的种植规模，年产值已在百亿以上。

陇南野生中华猕猴桃组培快繁体系的建立

陇南野生中华猕猴桃组培快繁体系的建立作者：陈强田凤鸣何九军王永斌刘琼来源：《甘肃农业科技》2021年第10期摘要：以陇南野生中华猕猴桃种子为材料，在无菌条件下培养萌发产生实生苗，将无菌实生苗地上部分转接到培养基上建立的初代培养体系为基础，发现继代增殖最适培养条件为：MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L+GA3 0.2 mg/L，生根培养最适条件为1/2 MS+IBA 0.6 mg/L;用商品基质在温室移栽组培苗，成活率可达87.5%。

关键词：野生中华猕猴桃;无菌实生苗;组织培养;快繁体系中图分类号：S663.4;Q943.1 文献标志码：A 文章编号：1001-1463（2021）10-0035-04doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2021.10.009Establishment of Tissue Culture and Rapid Propagation System of Wild Kiwifruit in Southern Gansu ProvinceCHEN Qiang 1， 2， TIAN Fengming 1， 2， HE Jiujun 1， 2， WANG Yongbin 1， 2，LIU Qiong 1（1. College of Life Science，Longnan Teacher College， Longnan Gansu 742500， China; 2. Center for Research and Development of Longnan Characteristic Agro-Bioresource， Longnan Gansu 742500， China）Abstract：The seeds of Actinidia chinensis var. Longnan were used as explants to produce seedlings under aseptic conditions. Based on the primary culture system established by transferring the above ground part of aseptic seedlings to the medium， it was found that the optimum conditions for subculture and multiplication were MS+6-BA 2.5 mg/L + NAA 0.4 mg/L+GA3 0.2 mg/L， and the optimum conditions for rooting culture were 1/2 MS+IBA 0.6 mg/L， The survival rate of tissue culture seedlings can reach 87.5% by transplanting in greenhouse with commercial substrate.Key words：Wild kiwifruit; Aseptic seedling; Rapid propagation system猕猴桃俗称阳桃、山洋桃、毛桃等，属猕猴桃科猕猴桃属多年生藤本植物。

红阳猕猴桃快繁技术体系研究

红阳猕猴桃快繁技术体系研究
红阳猕猴桃(A．chinensis var rufopulpa Liang et Ferguson)是在四川猕猴桃原产地苍溪发现的自然变异品种，具有极高的推广前景，其红肉的性状极具开发利用价值。

为加快这一珍贵资源的繁殖，本研究以红阳猕猴桃为试材，通过田间植株顶芽、带芽茎段、茎段、叶片、叶柄以及试管苗叶片等多种外植体离体培养，研究其诱导成苗、幼苗增殖、生根移栽技术，以建立红阳猕猴桃快速繁殖体系。

结果如下： (1)通过诱导丛生芽再生成苗的途径效果差被淘汰，而选择通过愈伤组织诱导成苗途径。

(2)愈伤组织成苗途径的适宜外植体为去皮茎段，取材最佳季节是夏季。

不同外植体产生愈伤组织、芽分化率差异大，茎段愈伤组织分化率最高达83.73％；叶柄的愈伤组织芽再生率12.88％；叶片的愈伤组织芽再生率仅为8.10％。

(3)带皮茎段离体培养，筛选出最佳培养基是：基本培养基MS 最佳诱导培养基MS+BA4.0mg／L+IAA4.0mg／L，出愈率达到61.24％分化培养基MS+BA2.0mg／L+NAA0.3mg／L，芽再生率达到88.82％生根培养基1／2MS+NAA0.2mg／L，生根85.87％增殖培养基MS+BA2.0mg／L+NAA0.4 mg ／L+GA30.1 mg／L，月增殖系数达到5.32 (4)对试管苗叶块进行培养，得到叶片再生芽诱导最佳培养基为MS+BA2.0mg／L+NAA0.3mg／L，芽再生率为
87.03％。

(5)对生根苗进行了炼苗，移栽基质为蛭石25％+珍珠岩25％+河沙20％+大田土30％，成活率高，达到90％以上。

猕猴桃保护地绿色高效栽培管理技术

猕猴桃保护地绿色高效栽培管理技术作者：袁敏裴洪柱孔德明孟雪梅孔令雷来源：《果农之友》2021年第09期猕猴桃属落叶藤本果树，果实酸甜可口，富含多种药用和保健成分，如维生素C、类黄酮等，因此深受人们喜爱。

近年来，曲阜市不断从省内外引进猕猴桃良种，丰富了本地的品种结构，大力发展猕猴桃产业已成为农民致富新的经济增长点，栽培基地主要集中在吴村镇、防山镇、尼山镇等三个山区乡镇，面积已近千亩，落实栽培管理是当务之急。

目前，曲阜市所引进的猕猴桃新品种主要是红阳猕猴桃、阳光金果G3，具有较强的抗逆性和耐贮性，且丰产性良好。

为进一步提高猕猴桃的种植效益，针对当下所采用的大棚栽培这一模式，必须要采取绿色高效的栽培管理技术，以促进猕猴桃保护地增产增收。

1 园区建设1.1 大棚选址及建设推进猕猴桃绿色生产的重要前提就是科学的选址，曲阜市在引进新猕猴桃品种建园时，根据农业部颁布的《绿色食品产地环境质量》标准，保证保护地生态环境、空气质量达标。

保护地选址应远离污染源、附近水源充足且无污染;保护地土壤最好富含腐殖质，质地疏松，pH值介于中性与微酸性之间;严格检查保护地土壤土质，避免存在重金属等物质而影响猕猴桃树体生长。

大棚高3.5米，宽6～8米，长50～80米，主体包括拱杆、纵向拉杆、棚头立杆、斜拉撑、卡槽等（图1）。

1.2 保护地规划为保证引进的红阳猕猴桃、阳光金果G3猕猴桃种植品质，在确定选址后，还需要统筹安排，从生态角度合理规划，为其创设良好的生长环境。

规划主要包括以下几方面：一是复合经营。

多树种复合经营，模拟猕猴桃最佳生长环境，或是在果园周围种植缓冲林带，如杨树、白蜡等。

二是在保护地规划种植其他经济作物，如西瓜、姜、土豆等，与猕猴桃套种。

这样不仅可以提高经济收入，还能增强保护地作物的多样性，有利于保护地病虫害抵抗能力的提升。

三是开沟吊槽，将种植沟的心土挖出，把行间肥力高的表土填入到槽中，以此来增强土壤肥力。

具体做法：在抽槽时深度为0.8米，宽度1米，上下层熟土要分别堆放;回填时，可以将无病菌的枯枝落叶铺在槽底，然后按照上层熟土、底层熟土的顺序回填，并将土壤与肥料充分拌匀。

秦美猕猴桃叶片最佳再生系统的建立

维普资讯
西北植物学报２０，２４：Ｏ — ９２０２２（）９７１
ＡｃｔａＢＯｔＢｏｒａ１０ｃｉｎｔＳｉ．ｅ．一ｃｄｅ．ｎ．
文章编号：００４２（０２０— ９７０１０ — ０５２０）４００ — ６
ｔｅｅｔｂｉｈｎｆｔｅｌａｅｅｅａｉｎｓｓｅｏｗｉｕｔＱｉｍｅ）ｗａａｒｅｈｓａｌｍｅｔｏｈｅｆｒｇｎｒｔｏｙｔｍｓｆｒＫｉｆｉ（ｎｉｓｒｓｃｒｉｄ
ＦＡＮｕ —ｅｇ，ｎ。ＨＡＮｉｆｎ，ｉ —ｕＪｎｆｎＬＩＬｉｇ，Ｙ —ａ。ＬＩＪａｒｉ
（Ｎｏｔ１ｒｈｗｅｔＳｃ — ｃｎｖｒｉｙｏｆＡｇｉｕｌｕｒｎｄＦｏｅｔｙ，ｎｌｎＳｈａｘｉ７２０ＣｈｉａｌｎｓｉＴｅｈＵｉｅｓｔｒｃｔｅａｒｓｒＹａｇｉｇ，ａｎ，１１０，ｎＩ— ２
ｇｒｂｔｒｕｍｙｍｅｎｓｏｆｌａｓｅｈｏｏａｃｅｉｂａｅｆｄｉｃｍｔｄ．
ＫｅｒｓＫｉｆｕｔＱｉｍｅ）；ｅｆｒｇｅｅａｉｎｓｓｅｙｗｏｄ：ｗｉｒｉ（ｎｉｌａ；ｅｎｏｅｔｙ，ｈｎｓａｅｆｏｅｔｙ，ｅｊｇ１０９，ｉａｔｔｔｆｒｓｒＣｉｅｅＡｃｄｍｙｏｒｓｒＢｉｎ００６Ｃｈｎ）ＦＦｉ
ＡｂｓｒｃＴｈｒｔａｔ：ｏｕｇｈｈｅａｐｉａｉｔｔｐｌｃｔｏｎｏｆｏｒｈｏｇｏｌｘｐｅｉｎｔａｓｔｎａｅｒｍｅｓ，ｙｓｅｍａｉｒｓａｃｏｔｃｅｅｒｈｆ

中华猕猴桃“红阳”花药和胚囊发育研究

中华猕猴桃“红阳”花药和胚囊发育研究杜燕姬;唐维;张景荣;高兰阳;刘永胜【摘要】采用石蜡切片技术对中华猕猴桃“红阳”(Actinidia chinensiscv.Hongyang)花药和胚囊的发育进行了观察研究.结果表明:中华猕猴桃“红阳”花药由4室构成,药室壁为4层结构;子房内有30～45个心室,每心室有11～45个胚珠,胚珠为倒生型,胚囊属于蓼型根据中华猕猴桃“红阳”胚囊形成的特点,可将猕猴桃胚囊发育过程分为5个时期,即孢原细胞形成期、大孢子母细胞形成期、功能大孢子形成期、胚囊有丝分裂期和胚囊成熟期.【期刊名称】《四川大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(053)003【总页数】6页(P677-682)【关键词】中华猕猴桃“红阳”;石蜡切片;花药发育;胚囊发育【作者】杜燕姬;唐维;张景荣;高兰阳;刘永胜【作者单位】四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都 610064;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都 610064;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都 610064;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都610064;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都 610064【正文语种】中文【中图分类】Q944猕猴桃隶属于猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia)，原产于我国南部及西南地区[1]，全世界猕猴桃属共有66种，中国有62种[2]．猕猴桃富含丰富的维生素C、多种矿物质、17种氨基酸等人体所需要的营养成分，具有营养与保健双重功能，现今已成为一种重要的水果[3, 4]．猕猴桃品种较多，果肉颜色变化各异，近年来红肉猕猴桃颇受消费者的青睐．其中“红阳”品种性状较为稳定，该品种系四川省自然资源科学研究院从自然实生群体后代中选育出的优良新品种[5]．近年来，科研人员以红阳猕猴桃为材料，选出新品种且所选出后代果实产量高、性状稳定．2013年中华猕猴桃“红阳”基因组测序完成，为猕猴桃的品质改良和遗传育种奠定了基础[6]．因此对中华猕猴桃“红阳”的深入研究，有助于猕猴桃新品种的选育．猕猴桃多属于雌雄异株，雄花和雌花均属于形态上的两性花,但雌花花粉粒不是功能型花粉[7].王明忠等[8]研究发现亦存在雌雄同株的植株．近年来很多研究人员对猕猴桃的性别鉴定、花粉发育过程及染色体倍性进行了研究[9-12]，但对花药发育过程中的孢原细胞分裂、药室壁的形成以及药室间开裂散粉等方面的研究较少．此外，杨妙贤等[13]对中华猕猴桃性别分化进行研究，发现猕猴桃雌雄株在生物学性状和花发育上均存在差异，为早期猕猴桃性别分化提供了理论基础．安和祥等[14]对软枣猕猴桃胚胎发育过程中的细胞变化进行了描述，但没有明确划分各个时期．而“红阳”作为重要的猕猴桃品种，鲜有对其胚囊发育的研究报道[15]，故本文借鉴前人对其他猕猴桃品种的研究成果，对红阳猕猴桃花药和胚囊发育过程进行了较为清晰的研究，并对胚囊发育过程进行分期，为研究中华猕猴桃“红阳”胚囊、花药发育提供理论基础．本研究所用中华猕猴桃“红阳”(Actinidia chinensis ‘Hongyang’)采自四川自然资源科学院双流实验基地，取样时间为2014年2月23日至4月27日，从2月23日每隔3d取样一次，材料用FAA固定液固定,并于4℃冰箱保存备用．参考李和平石蜡切片方法[16],并在其基础上根据材料大小调整实验条件，具体步骤如下：将不同大小的猕猴桃花样品从FAA固定液中取出，较幼嫩的材料用50%的乙醇溶液冲洗，再分别用70%、85%、95%、100%的乙醇脱水两次，脱水时间约2～4 h，二甲苯梯度透明后用常规石蜡包埋，制成厚度为8～10 μm的连续切片，经铁矾苏木精或固绿染色中性树胶干燥封片后，在光学显微镜下观察并拍照记录．中华猕猴桃“红阳”属于形态上的两性花，由萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊组成,雄蕊由花丝和花药组成.随着花芽的发育，不久雄蕊原基逐渐形成，雄蕊原基顶端为花药发育区域，其4个角隅发育较其它部位快，因此初期的花药为四菱形(图1，a)．花药表皮下方的四个角隅部位分化出孢原细胞(图1，b)，孢原细胞的细胞核较周围其他细胞大，且细胞质较浓，随后孢原细胞进行平周分裂,形成初生壁细胞和初生造孢细胞(图1，c～d)．初生壁细胞进行两次平周分裂形成中层细胞和绒毡层细胞，此时，花药形成3层壁结构(图1，e)，从外到内依次为表皮、药室内壁、中层，绒毡层开始出现．初生造孢细胞经过两次有丝分裂形成小孢子母细胞且呈椭圆形(图1，f)．随后，小孢子母细胞进行减数分裂，中层呈带状，其后，由于新细胞壁的形成，将其分割形成二分体(图1，g)．二分体进行分裂形成四分体细胞 ,四分体被包藏在胼胝质壁内，呈现正四面体形,小孢子四分体的拼肌质溶解后释放出小孢子(图1，h)．初生小孢子细胞中央有一核，同时, 除3 个萌发孔位置外，小孢子细胞壁继续加厚，但四个药室仍处于封闭状态(图1，i)，小孢子细胞经过有丝分裂形成两个细胞，分别成为生殖细胞和营养细胞，因此猕猴桃花粉属2-细胞型，为三沟花粉，随着发育过程的推进，花药同一侧两药室间的药隔组织逐渐退化、消失，药室不断开裂释放出花粉(图1，j～l)．中华猕猴桃“红阳”雌蕊由子房、花柱和柱头组成，雄蕊由花丝和花药构成(图2，a)．当雌蕊原基形成后发育较快，其顶端凹陷形成花柱和柱头(图2，b)，雌蕊子房膨大并明显地高于雄蕊群,子房内有30～45个心室且有多个胚珠，此时雄蕊发育极为缓慢, 最后完全被雌蕊覆盖(图2，c)．而心皮与胎座缝接处的几个细胞进行局部平周分裂，产生胚珠原基．随着花的发育逐步形成胚珠，中轴胎座，在胚珠中靠近珠心表皮下形成一个孢原细胞，孢原细胞经过发育最终形成成熟胚囊，并且属于寥型，通过对胚囊发育进行观察，可将其划分为以下五个时期：孢原细胞形成期：在珠心顶端表皮下方细胞分化形成孢原细胞，孢原细胞体积比周围细胞大，且细胞核较大、细胞质较浓与珠心表皮下方其他细胞明显不同(图2，d)．大孢子母细胞形成期：孢原细胞不断伸长长大而成为大孢子母细胞(图2，e)．功能大孢子的形成：随后，大孢子母细胞经过两次减数分裂分别形成二分体及四分体，四分体细胞呈线性排列，随着胚囊的发育，其中3个大孢子细胞逐渐退化至消失，一个大孢子细胞体积增大形成功能大孢子(图2，f)．胚囊有丝分裂期：功能大孢子经过三次有丝分裂形成8核型胚囊，首先，大孢子细胞经过第一次有丝分裂形成二核胚囊(图2，g)，两个细胞分布在囊腔的两端，二核胚囊随即进入第二次有丝分裂形成四核胚囊(图2，h～i)，继而四核胚囊继续发育，经过第三次有丝分裂形成8个细胞，以4个为一组位列于珠孔端和合点端，形成未成熟的8核胚囊期(图2，j)．胚囊成熟期：根据对同一个胚囊进行连续切片进行的观察，发现胚囊发育过程中细胞排列发生了变化，在合点端和珠孔端分别有一个细胞向胚囊囊腔的中央移动形成2个极核(图2，k～m)，珠孔端2个助细胞彼此紧靠呈茄型，与卵细胞组为卵器，卵器上方为2个极核，合点端为3个反足细胞呈品字形排列(图2，n)，胚囊增至最大．中华猕猴桃“红阳”属于形态上的两性花，生理上的单性花．雌蕊原基形成后发育迅速, 但在此过程中，雄蕊原基的发育受到限制直至停止，花药瘦小呈T状并着生在花丝上，可形成2-细胞型花粉粒，但花粉粒干瘪不规则，因此花粉粒无活性．中华猕猴桃“红阳”的雌蕊发达，且子房膨大并明显地高于雄蕊群．绒毡层在花药发育过程中起着至关重要的作用，可将发育需要的营养物质和养分转运给花粉[17]，绒毡层发育和适时的解体退化影响着花粉的正常发育发育．本研究观察到在花粉发育过程中一直伴随着绒毡层的发育、解体及药室壁的4层结构出现中层成带状、绒毡层空腔等变化．在花药发育过程中，绒毡层细胞发生变化最为活跃，小孢子母细胞减数分裂时，绒毡层细胞径向药室内变长，且细胞质浓厚，这一结果与杨妙贤等[13]所报道的中华猕猴桃“红阳”花药发育过程中绒毡层的变化相一致．中华猕猴桃“红阳”形成的花粉粒干瘪且形状不规则，可能与绒毡层的解体较迟，不能及时向发育中的花粉提供营养物质有关．本研究表明猕猴桃属于蓼型胚囊，胚珠为倒生型，为了进一步对胚囊发育进行研究，通常会依据细胞的结构特点及分裂活动将发育过程划分为不同阶段，刘向东等[18]将水稻胚囊发育过程分为8个阶段．但由于功能大孢子形成后，所经历的主要细胞分裂为3次有丝分裂并形成8个细胞，因此把其归结为胚囊有丝分裂期，此时胚囊为8核期，也称为8核胚囊，本文依据猕猴桃胚囊发育过程中的5个主要特点，将其划分为5个阶段，分别为：孢原细胞形成期、大孢子母细胞形成期、功能大孢子形成期、胚囊有丝分裂期、成熟胚囊期．由于功能大孢子形成单核胚囊并没有发生细胞分裂活动，因此，本文并没有将其单独划分为一个时期，在早期胚囊的8核时期，各有4个细胞分布于合点端和珠孔端，在随后的发育过程中，极核位置发生了很大的变化，两端各有一个细胞向囊腔的中央移动，最后移动到中央位置，该位置的变化为中央大细胞的形成打下了基础．此时，合点端的3个细胞形态也发生了变化，其中一个细胞的细胞核变大，形状变为卵圆形，称为卵细胞，由于卵细胞的变大，导致两侧的助细胞变为茄型，此时反足细胞也在发生有丝分裂形成反足细胞器，随着发育的进程的推进，助细胞消失，反足细胞很快解体．1997年“红阳”猕猴桃通过四川省农作品种审定以来，因其具有极高的营养价值和特殊的经济性状成为学界研究的热点[19,20]．近年来，我国科研工作者以“红阳”猕猴桃为材料，通过实生选种、芽变选种、杂交育种等技术，选育出了很多新品种(系)，如四川省自然资源研究院等单位以红阳猕猴桃为母本，分别选用美味猕猴桃、SF1998M、SF0612为父本，通过杂交育种选育出“红华”[21]、“红什1号”[22]、‘SF-F0807’[5]等新品种．陕西省宝鸡市陈仓区桑果工作站，湖南省农业科学院园艺研究所和长沙楚源果业有限公司分别从“红阳”猕猴桃的实生苗中选出“晚红”[23]、“源红”[24]．四川农业大学从“红阳”猕猴桃中，通过芽变选种等到‘86-3’[25,26]．以往对“红阳”猕猴桃的育种利用多是采用传统育种途径和方法，而关于“红阳”猕猴桃分子育种的研究鲜有报道．尽管红阳猕猴桃目前已逐步进入东南亚及欧洲等国际市场，且受到了消费者的好评，但它的产量和质量都还不能满足市场的迫切需求．据主产区四川省苍溪县报道，因红阳猕猴桃在生产栽培中受到病虫害，仅约10%的红阳猕猴桃果品能达到出口标准[27]．红阳猕猴桃在生产栽培Z中易遭受病虫危害，以溃疡病害最为突出，而在传统生产中使用的农药会给猕猴桃商品化、国际化的生产带来负面影响．猕猴桃是雌雄异株的果树，通过种子实生繁育周期长且性状不稳定，嫁接繁殖速度偏慢，因此育种需要引进新的手段和方法．植物基因工程技术为猕猴桃的抗性育种提供了新途径．目前，在猕猴桃上应用的目的基因多与猕猴桃果实成熟及衰老过程有关．如ACC氧化酶基因(ACO)、ACC合成酶基因(ACS)、猕猴桃素(Actinidin) 以及脂氧合酶基因(LOX)等．此外，β-1,3-内切葡聚糖酶、OSHl等基因导入猕猴桃并获得转基因植株[28,29]．这些研究结果为红阳猕猴桃再生体系的建立以及遗传转化奠定了基础．因此采用基因工程技术，向红阳猕猴桃中导入抗病、抗虫等目的基因，可能实现红阳猕猴桃的基因工程育种，解决其生产中的病虫害问题．此外，猕猴桃属功能性雌雄异株果树，种植时必须配置雄株，不同的雄株授粉对红阳猕猴桃果品的质量和产量有较大的影响[30]．因此，深入研究猕猴桃雄花不育的机理，利用基因工程技术，恢复雄花的育性，选育出两性花的品种，生产上不需配置授粉株，又能保持红阳猕猴桃原有的优良性状，对提高红阳猕猴桃的产量和保持果品质量都具有重要意义．。

红阳猕猴桃的组织培养快繁技术

黑龙江农业科学2018(3) :72-76 http：//w w w. haasep. cn Heilongjiang Agricultural Sciences________________________________________DOI；1Q. 11942/j. issn1QQ2-2767. 2018. 03. 0Q72红阳猕猴桃的组织培养快繁技术王姗、黄雪云2,陶玉、张晓霞1(1.江苏农林职业技术学院，江苏句容212400 ;2.如皋市江安镇农业服务中心江苏如皋226500)摘要：为提高红阳猕猴桃组织培养效率，以红阳猕猴桃带芽嫩茎段和再生苗叶片为外植体，通过组培快繁试验，对影响红阳猕猴桃嫩茎段腋芽萌发和再生苗不定芽再生的生长调节物质的用量和作用进行分析筛选。

结果表明：红阳猕猴桃最适宜诱导腋芽萌发的培养基为W P M+1 m g.L1 6-B A+0. 1m g.I^N A A和W P M+1mg.L_16-B A+0. 2 m g.I^N A A,在此条件下带腋芽茎段萌芽率达100R ;再生苗叶片不定芽诱导的最佳培养基为W P M+1m g.L16-B A+0. 2 m g.L1N A A+0. 2 m g.L12,4-D;最适合红阳猕猴桃不定芽增殖的培养基为W P M+0. 2 m g.L1N A A+0. 2 m g.L12,4-D。

关键词：红阳猕猴桃；组织培养；快繁技术；愈伤组织红阳猕猴桃（AcZiwiiiia c/iiwewM、var.rufop-#/如 Liang e t F e r g u s o n)属猕猴桃科（Actinidi-aceae)猕猴桃属（A c a W f a)多年生浆果类藤本植物。

中国是猕猴桃的原产地，有着的猕猴桃收稿日期#017-12-13基金项目：江苏高校品牌工程资助项目（ppzy 20151173);江苏农林职业技科技计划资助项目(20151/031)。

红阳猕猴桃早结丰产优质栽培技术

南方园艺
２１年０１
第２卷２
第３期
红阳猕猴桃早结丰产优质栽培技术
赵鹏
（广西桂林农业学校，广西桂林５１０）４０６
摘
要：过高标准建园、强土肥水管理、通加合理的架式及科学整形、工辅助授粉、花疏果、人疏果
资源县境内生态环境好，野生猕猴桃品种多，是种植猕猴桃的理想区域之一。鉴于其优越的猕猴桃种
植条件，０６２０年资源县水果办开始在资源镇莆田村利用高位水田进行红阳弥猴桃早结丰产优质栽培示范
试验，验面积０６ｈ２按株行距２ｍ×３ｍ的规格种试．ｍ，植９０株，该果园于２０种植，０７年试花挂果，９０６年２０２００８年试产果共３６ｇ０ｋ，平均株产４ｋ，０９年产９ｇ２０量达到９９０ｋ，００年产量达到１０ｇ０ｇ２１４８０ｋ，按当年
猴桃早结丰产优质栽培技术总结如下。
红阳猕猴桃幼苗期需要一定荫蔽条件，宜采取种
收稿日期：０ｌｏ一２２１— ４ｌ作者简介：赵鹏（９１）男，１７一，汉族，广西全州县人，助理农艺师，９１年毕业于广西桂林农业学校，业后留校任教至今，１９毕现在主要从事新特优
有一席之地。资源县位于广西东北部越城岭腹地，属中亚热带季风气候区，气候温和，雨量充沛，日照时间长，但光
１高标准建园
１１园地选择．
根据红阳猕猴桃对生长环境的要求，按照水果无

贵长猕猴桃茎段高效再生体系的建立

（贵阳学院，贵州贵阳５５０００５）
摘要：以贵长猕猴桃茎段为外植体，研究不同激素组合培养基对愈伤组织诱导、不定芽分化增殖、无菌苗生根等的影响。结果表明，贵长猕猴桃茎段在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．４ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂粉８ｇ／Ｌ培养基上愈伤组织诱导率相对最高，达１００．０％，且愈伤组织生长状况相对较好，质地最优，呈黄白色湿润致密状，在ＭＳ＋６－ＢＡ５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂粉８ｇ／Ｌ培养基上不定芽出芽率相对最高，达８３．３３％，在ＭＳ＋６－ＢＡ４．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．４ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂粉８ｇ／Ｌ培养基上不定芽增殖率相对最高，达１００％，继代培养６代时的平均繁殖系数达６．４８；不定芽在含ＩＢＡ０．６ｍｇ／Ｌ的１／２ＭＳ培养基上培养生根率相对最高，达到９５．８３％，且形成庞大的根系，５０株试管苗经炼苗移栽成活率可达９６．０％。关键词：贵长猕猴桃；茎段；增殖；植株再生中图分类号：Ｓ６６３．４０４＋．３文献标志码：Ａ文章编号：１００２－１３０２（２０１９）２２－００４３－０４
组织培养是一项通过无性繁殖方式快速再生植株的生物技术，其育苗效率高于扦插嫁接等传统繁殖手段，且具有保持母本优良性状、克服有性繁殖造成品种退化的优势。组［８－１１］织培养技术是品种遗传改良和遗传转化等技术的基础，从２０世纪７０年代开始，组织培养技术育苗已成为猕猴桃良种繁育的重要方法［１２－１３］。本研究以贵长猕猴桃幼嫩茎段为外植体，通过组织培养对其愈伤组织诱导、愈伤组织分化不定芽、无菌苗生根等进行研究，以建立贵长猕猴桃茎段高效再生体系，为其快速繁殖和遗传转化研究提供技术支持。
１材料与方法

一种红阳猕猴桃的二次嫁接方法[发明专利]

专利名称：一种红阳猕猴桃的二次嫁接方法专利类型：发明专利
发明人：赵建明
申请号：CN201610959162.7
申请日：20161027
公开号：CN106416762A
公开日：
20170222
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种红阳猕猴桃的二次嫁接方法，包括对一级基砧对萼猕猴桃的培育，对萼猕猴桃砧木与野生猕猴桃品种嫁接育苗，再在生长一年后的野生猕猴桃上高位嫁接红阳猕猴桃进行栽培。

采用本方法嫁接后的红阳猕猴桃适应性强，在不同海拔，不同地势，不同土壤，不同河谷平地等地都能正常生长，可扩大猕猴桃栽培区域。

该红阳猕猴桃品种，产量大，果型大，果形端正，大小整齐，风味好。

解决了对萼猕猴桃与红阳猕猴桃亲和力不好，嫁接成活率不高的问题。

申请人：资源县山水美水果种植园(微型企业)
地址：541402 广西壮族自治区桂林市资源县中峰乡八坊村李家湾组36号
国籍：CN
代理机构：桂林市华杰专利商标事务所有限责任公司
代理人：杨雪梅
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一种猕猴桃离体再生体系的建立方法[发明专利]

专利名称：一种猕猴桃离体再生体系的建立方法
专利类型：发明专利
发明人：林苗苗,方金豹,齐秀娟,陈锦永,顾红,张威远,张洋,孙雷明
申请号：CN201510425111.1
申请日：20150717
公开号：CN105815213A
公开日：
20160803
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种猕猴桃离体再生体系建立的方法，其包括：外植体的选取和灭菌步骤，不定芽诱导步骤，不定芽增殖步骤，生根诱导步骤，以及炼苗和移栽步骤。

根据本发明提供的猕猴桃离体再生体系建立的方法，腋芽诱导率达100％，叶片愈伤诱导率为92％，出芽率为40％，不定芽增殖系数为4.5，生根率可达96％，不仅使得猕猴桃快速、大量、优质繁殖，而且其叶片愈伤诱导步骤可为猕猴桃遗传转化研究提供基础。

申请人：中国农业科学院郑州果树研究所
地址：450000 河南省郑州市航海东路南
国籍：CN
代理机构：北京冠和权律师事务所
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一种猕猴桃的增殖继代培养方法[发明专利]

专利名称：一种猕猴桃的增殖继代培养方法专利类型：发明专利
发明人：赵兰
申请号：CN201410250424.3
申请日：20140609
公开号：CN104012410A
公开日：
20140903
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种猕猴桃的增殖继代培养方法，包括以下步骤：（1）选材；（2）茎段消毒及芽启动萌发培养；（3）无菌试管苗增殖培养；（4）生根培养；（5）炼苗移栽。

本发明所述的猕猴桃的增殖继代培养方法通过改良基本培养基及成分，同时辅助合理的培养方法，使得猕猴桃的外植体繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良种化程度高，以使得最终培育得到的猕猴桃的果实质量及营养价值高，口感好，有利于猕猴桃的大力发展和推广应用。

申请人：赵兰
地址：325200 浙江省温州市瑞安市飞云街道飞云西路一巷20号
国籍：CN
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猕猴桃“翠香”再生体系的建立

2021年第50卷第3期中国南方果树137猕猴桃“翠香”再生体系的建立丁光雪S 刘天天2,辛纳慧3,李钰媛3,张乃群3,杨迪2(1南阳幼儿师范学校，河南南阳，474150; 2南阳农业职业学院，河南南阳，473000;3南阳师范学院生命科学与农业工程学院，河南南阳，473061)摘要取“翠香”猕猴桃的幼嫩枝条为材料，利用不同植物生长调节剂及浓度诱导茎段腋芽、增殖、生根，并进行驯化移栽。

结果表明：“翠香”猕猴桃茎段腋芽诱导最佳培养基为M S +6-BA 2.0mg /L +N A A 0. 3 mg /L ，诱导率达88. 89%;增殖培养最佳培养基为M S + 6-BA 5 mg /L + NAA0. 4 mg /L ，增殖系数为6. 20,三代内增殖效果稳定；生根培养的最佳培养基为1/2M S +IB A 0. 9mg /L ，生根率为94. 44%，根数为11. 40条，根长为2.94 cm ;驯化后移栽成活率达88.33%。

关键词茎段；诱导；芽；生根；驯化美味称猴桃（c /izweTiszsw .AZfdow )又称硬毛猕猴桃，属大型落叶藤本[1]，在秦岭一带广为分布，休眠枝条冬季抗冻阈值在一18〜_10 °C [2]，果实大，被有刺状长硬毛，维生素C 含量40〜350 mg /100 g ,还含有丰富的糖类、有机酸、氨基酸等，不仅食用价值高，且具备清热、消炎、抗癌等药用价值。

随着人们对美味猕猴桃的认识及现代育种技术的不断发展，选育出了大量的优质猕猴桃品种，如“徐香”w 、“华美二号”M 、“秦美”[5]、“贵长”W 等。

但对于苗木繁殖，生产上主要采用扦插、嫁接等方式[7]，美味猕猴桃类扦插成活率普遍较低[8]，春季嫁接又是猕猴桃溃疡病多发季节，影响猕猴桃产业的健康发展。

组织培养具有不受生长季节限制、繁殖快、遗传性状稳定等特点[1°]，已成为猕猴桃苗木繁育的重要手段。

‘贵长’猕猴桃叶片高效直接再生体系的建立

‘贵长’猕猴桃叶片高效直接再生体系的建立
猕猴桃是一种高营养、口感清香的水果，不仅具有丰富的营养成分，还有较强的药用价值。

而猕猴桃植物的叶子通常被认为是废弃物，但事实上，猕猴桃叶片对植物直接再生研究有很大的潜力。

为此，我们建立了一个贵长的猕猴桃叶片高效直接再生体系。

体系概述
我们的体系介绍了一个高效的猕猴桃叶片直接再生方法。

该方法涵盖了以下主要步骤：
1.准备组织 - 首先，我们需要获取猕猴桃叶片的样品。

之后，
将叶片切碎并称重。

2.发育基质- 使用MS培养基作为基础配方，添加不同的激素，根据实验需要进行调整。

3.创伤处理 - 为了激活植物生长素，我们使用创伤处理方法获
得切口组织。

4.培养 - 将叶片组织培养在高含激素的培养基上，培养时间通
常在4到6周。

5.移植 - 将培养好的组织移植到新的培养基上继续生长。

6.增殖 - 通过不断的培养，可扩大数量。

体系优势
相比于其他的再生方法，我们的体系有许多优势：
1.高效 - 该体系利用高含激素的培养基，可实现高效的再生。

2.经济 - 该体系利用猕猴桃叶片，能够降低成本，在农业上更有吸引力。

3.稳定性 - 通过多次移植和增殖，体系的稳定性得到了极大提升。

总结
通过我们的体系，我们可以高效、经济地再生猕猴桃植物。

这个方法可以应用于农业、医学和基础研究。

通过对生物植物组织再生研究不断前进，我们的世界将变得更绿色和健康。

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１材料与方法
１．１试验材料及其表面消毒试验材料为“红阳”猕猴桃（Ａｃｔｉｎｉｄｉａｃｈｉｎｅｎｓｉｓｃｖ．‘ＲｅｄＳｕｎ’），由重庆市绿康果业有限公司提供．取
当年生枝条，洗净，裁成长３～５ｃｍ茎段（无腋芽），在无菌条件下先用７５％乙醇消毒３０ｓ，再用０．１％ＨｇＣｌ２消毒１０ｍｉｎ，无菌水冲洗４～５次，然后切成长０．５～１ｃｍ茎段，接种．１．２愈伤组织的诱导与增殖
表３植物生长调节剂对 “红阳 ”猕猴桃不定芽诱导的影响
培养基编号Ｂ１Ｂ２Ｂ３Ｂ４Ｂ５Ｂ６
植物生长调节剂／（ｍｇ·Ｌ－１）
６－ＢＡ３＋ＮＡＡ０．１６－ＢＡ４＋ＮＡＡ０．１６－ＢＡ５＋ＮＡＡ０．１６－ＢＡ４＋ＮＡＡ０．２６－ＢＡ３＋ＮＡＡ０．３６－ＢＡ４＋ＮＡＡ０．３
８
西南大学学报（自然科学版）ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ第３５卷
最先分化出不定芽；６０ｄ后，不定芽分化趋于稳定．部分培养基未能诱导不定芽发生．在产生不定芽的培养基中，Ｂ３培养基愈伤出芽率（８３．３３％）最高，出芽数（７．５个／外植体）最多，且与其它培养基差异显著；平均芽长（２．３ｃｍ）最长，与Ｂ１、Ｂ２和Ｂ６培养基差异显著（表３）．同时，试验表明其不定芽的茎、叶分化正常，长势良好（图１－４）；其余培养基中的不定芽生长较差，多为顶芽萎缩、叶片膨大的畸形苗（图１－５）．因此，在本试验中，Ｂ３培养基即ＭＳ＋５ｍｇ／ＬＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ为“红阳”猕猴桃不定芽最佳诱导培养基．
开始木质化，并逐渐褐化死亡（图１－３），证明 “红阳 ”猕猴桃愈伤组织适宜暗培养．
表２植物生长调节剂对 “红阳 ”猕猴桃愈伤组织增殖的影响
培养基
植物生长调节剂
各代愈伤组织增殖倍数／鲜质量比
编号Ｃ１Ｃ２Ｃ３Ｃ４
／（ｍｇ·Ｌ－１）２，４－Ｄ２＋６－ＢＡ０．５２，４－Ｄ２＋６－ＢＡ０．４２，４－Ｄ２＋６－ＢＡ０．３２，４－Ｄ２＋６－ＢＡ０．２
１１．０±０．１０ｃ３．０±０．１０ａ２．０±０．１５ｂ２．３±０．２５ｂ
２１．２±０．１７ｃ３．２±０．１５ａ２．１±０．２６ｂ２．０±０．２５ｂ
本试验于２０１０年９月至２０１２年４月在西南大学生命科学学院进行．所用基本培养基为ＭＳ（生根为１／２ＭＳ），附加３０ｇ／Ｌ蔗糖、８ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ５．８；培养温度（２５±２）℃，光照强度４５００ｌｘ（１６ｈ／ｄ）．愈伤组织诱导培养基见表１，增殖培养基Ｃ１～Ｃ４分别为２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ附加０．５，０．４，０．３，０．２ｍｇ／ＬＢＡ；不定芽诱导培养基Ｂ１～Ｂ６分别为３，４，５ｍｇ／ＬＢＡ与０．１，０．２，０．３ｍｇ／ＬＮＡＡ配比，增殖培养基Ｚ１～Ｚ６分别为２，３，４ｍｇ／ＬＢＡ与０．５，１ｍｇ／ＬＮＡＡ配比．愈伤组织培养和不定芽诱导前７ｄ为暗培养，其余为光照培养．每个培养基接种外植体２４个（３个／瓶），重复３～４次．
关键词：“红阳” 猕猴桃；茎段；增殖；植株再生
中图分类号：Ｓ６６３．４
文献标志码：Ａ
猕猴桃属猕猴桃科多年生藤本果树，种类繁多，其栽培品种也较多，主要是中华猕猴桃和美味猕猴桃．我国是猕猴桃的原产地，有着丰富的猕猴桃遗传资源［１］，其中，稀有种质红肉猕猴桃已在四川、湖南等地培育或发现［２］．１９８６年，四川苍溪县从中华猕猴桃实生种群中筛选培育出 “红阳”猕猴桃新品种，其果肉翡翠绿色，沿果心向外呈放射状血红色条纹，Ｖｃ及总糖含量高于其它品种，肉质细嫩、汁多味浓、品质优良［３］．该品种１９９７年通过四川省农作物品种审查委员会审定，在２００２年武汉国际猕猴桃研讨会上，被列为世界第三代猕猴桃首选品种［４］．但猕猴桃是雌雄异株植物，采用播种等常规繁殖方式容易造成品种退化［５］，而利用组织培养方法可保持良种遗传性状和实现大量繁殖．近年来，国内主要对中华猕猴桃［６－９］，国外主要对美味猕猴桃进［１０－１４］行了组织培养研究，但繁殖效率普遍较低，且对 “红阳 ”猕猴桃的研究太少［７－９］．本试验以“红阳”猕猴桃茎段为外植体，进行不定芽诱导与增殖以及生根等培养基的筛选，旨在建立高效再生体系，为其快速繁殖和遗传转化奠定基础．
接种愈伤数／块２４２４２４２４２４２４
出芽愈伤数愈伤出芽率
出芽数
切取长约３ｃｍ的不定芽，基部在０．０１％ＩＢＡ溶液中浸泡１０～６０ｍｉｎ后，接种在１／２ＭＳ固体培养基中，２０ｄ后统计生根率．将根长０．５ｃｍ以上的试管苗转入含１／２ＭＳ液体培养基的珍珠岩基质中，壮根２０ｄ后移出培养箱，室内逐渐打开瓶盖炼苗７ｄ，洗净根系，然后移栽到装有田间土壤的培养钵中，每天适量浇水，１５ｄ后统计移栽成活率．
期２０～３０ｄ，愈伤组织暗培养．在ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ培养基中，外植体脱分化率达１００％．在
ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０．４ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ培养基中，１～４代愈伤组织增殖倍数达３．３８；在ＭＳ＋５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋
０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ中，６０ｄ不定芽诱导率达８３．３３％．在ＭＳ＋３ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋１ｍｇ／ＬＮＡＡ中，不定芽１～６代平均
繁殖系数达６．７８；不定芽用０．０１％ＩＢＡ处理４０ｍｉｎ后在１／２ＭＳ培养基中生根率达１００％；８５株试管苗移栽到田
间土营养钵中，１５ｄ成活８１株，成活率达９５．２９％．
２结果与分析
２．１愈伤组织的诱导与增殖茎段外植体接种后，普遍１０ｄ左右开始膨大，１４ｄ左右产生愈伤组织（图１－１）．其中，Ｙ１和Ｙ４培养基
愈伤组织诱导率达１００％．虽然仅与Ｙ６存在显著差异（ｐ≤０．０５），而与其余培养基无显著差异（ｐ＞０．０５），但在．因此，在本试验中，Ｙ４培养基即ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ／ＬＢＡ为“红阳”猕猴桃茎段愈伤组织诱导最佳培养基．
第３５卷第２期西南大学学报（自然科学版）２０１３年２月
Ｖｏｌ．３５Ｎｏ．２
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ）
Ｆｅｂ．２０１３
文章编号：１６７３－９８６８（２０１３）０２－０００６－０５
“红阳 ”猕猴桃茎段高效再生体系的建立 ①
赵许朋，周月，杨立，罗克明，汤绍虎
西南大学生命科学学院，三峡库区生态环境教育部重点实验室，重庆４００７１５
摘要：以“红阳”猕猴桃茎段为外植体，ＭＳ为基本培养基，培养温度２５±２ ℃，光照强度４５００ｌｘ，１６ｈ／ｄ，继代周
３１．１±０．２１ｃ３．５±０．１５ａ２．３±０．１５ｂ２．１±０．１７ｂ
４１．３±０．１５ｃ３．８±０．１０ａ２．２±０．２０ｂ２．０±０．１０ｂ
平均１．１５±０．０６ｃ３．３８±０．１７ａ２．１５±０．０６ｂ２．１０±０．０７ｂ
２．２不定芽的诱导与增殖在不定芽诱导各培养基中，光照培养１４ｄ后，愈伤组织开始变绿；连续培养５０ｄ后，在Ｂ３培养基中
２４２４２４２４２４２４
脱分化外植体数／个
２４±０．００ａ２２±１．５３ａｂ２３±１．００ａ２４±０．００ａ２３±１．１３ａ２０±１．０１ｂ
愈伤组织诱导率／％１００±０．００ａ９１．６±６．３８ａｂ９５．８±４．１７ａ１００±０．００ａ９５．８±１．２５ａ８３．３±４．１６ｂ
茎段外植体接种到不同愈伤组织诱导培养基，３０ｄ后统计愈伤组织诱导率和生长状况．将产生的愈伤组织切成０．５～０．８ｃｍ小块，接种到不同愈伤组织增殖培养基，２０ｄ后统计愈伤组织增殖倍数（鲜质量比）．
① 收稿日期：２０１２－０７－１０基金项目：国家自然科学基金项目（３０８７１５７６）；西南大学博士基金项目（ＳＷＮＵＢ２００５０４２）资助．作者简介：赵许朋（１９８２－），男，河南许昌人，博士研究生，主要从事植物生理与分子生物学研究．通信作者：汤绍虎，教授．
生长状况
黄白色湿润致密黄色致密
黄白色疏松黄绿色湿润致密白色疏松含水少白色疏松含水少
注：不同字母表示同列（不同培养基）之间的差异达显著水平（ｐ≤０．０５），其余表同．