ELISA检测
Elisa检测原理及注意事项
4.试剂使用前要恢复到室温。
5.加样过程中枪头不要触碰到孔壁。
谢谢大家
5. Elisa实验注意事项：
1.加显色液要迅速，前后不要超过5min, 如果样本过多可以用排枪 加。
显色液加入以后，颜色反应就开始了，反应时间越长，颜色越深。
2.要通过预实验确定样本的稀释倍数，保证样本的吸光度在标准曲线 的量程内。吸光度超过量程，测出的浓度可能会偏低。公司的酶标仪 最高能测到4。
4. Elisa显色原理
Ab-HRP
PH<1
TMB+H2O2
H2O+OX-TMB
联苯醌 （450nm 测OD值）
蓝色 2M硫酸 黄色
酶标抗体：Ab-HRP HRP:辣根过氧化物酶 TMB：四甲基联苯胺(TMB) H2O2：过氧化氢 OX-TMB：一种氧化后的蓝色色物质
辣根过氧化物酶底物：鲁米诺、TMB 碱性磷酸酶底物：AMPPD β-D-半乳糖苷酶底物：甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷
洗
洗
涤
涤
颜色越深，待测抗 原浓度越低
标准曲线
6000
5000 4000
y = 7741.3e-1.255x R²= 0.996
3000
2000
1000
0
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
2.抗原、抗体与固相载体（Elisa 板底）结合原理
固相载体 聚苯乙烯，具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其 上后仍保留原来的免疫学活性。
洗
洗
洗
涤
涤
涤
抗原（待测蛋白）含量和颜色深 浅呈正相关，颜色越深，抗原含 量越高。
ELISA试验技术要点
ELISA试验技术要点ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的生物化学技术，用于检测特定蛋白质或其他分子在样本中的存在量。
ELISA试验技术是基于抗原-抗体相互作用原理的一种快速、敏感的定量方法。
在本文中，我们将讨论ELISA试验技术的要点，包括原理、步骤、优缺点以及应用范围。
一、ELISA试验的原理ELISA试验通过测定受检物质与特定抗体之间的结合来检测受检物质的存在量。
ELISA试验通常包括4个基本步骤：涂底板、孵育、洗板和检测。
在涂底板过程中，将要检测的抗原或抗体固定在底板上。
然后，在孵育过程中，将待测样本加入底板，与固定的抗原或抗体结合。
接着，在洗板过程中，清洗掉未结合的物质。
最后，在检测过程中，使用酶标记的二抗或底物来确定结合的抗原和抗体的量。
二、ELISA试验的步骤1.涂底板：将抗原或抗体固定在底板上。
2.孵育：加入待检测样本，经过特定时间让抗原和抗体发生结合。
3.洗板：清洗掉未结合的物质，防止干扰物质的干扰。
4.检测：加入酶标记的二抗或底物，测量酶标记反应的信号强度。
三、ELISA试验的优缺点1.优点：ELISA试验具有高灵敏度和特异性，能够快速、准确地检测目标物质的存在量。
此外，ELISA试验的操作简单，不需要昂贵的设备。
2.缺点：ELISA试验在一定程度上受到干扰物质的影响，有时需要多步骤操作，容易出现误差。
四、ELISA试验的应用范围ELISA试验广泛应用于医学、生物化学、环境科学、食品安全等领域。
在医学领域，ELISA试验可用于诊断感染病原体、筛查肿瘤标志物等。
在生物化学领域，ELISA试验可用于研究蛋白质的相互作用、酶活性等。
在环境科学领域，ELISA试验可用于检测水体或土壤中的污染物。
在食品安全领域，ELISA试验可用于检测食品中的残留农药、重金属等。
总之，ELISA试验技术是一种重要的生物化学技术，具有广泛的应用价值。
elisa的检测原理及步骤
elisa的检测原理及步骤ELISA也就是酶联免疫吸附法，是常见的一种免疫学实验技术，广泛应用于疾病诊断、药物检测和基因工程等多个领域。
下面对该检测方法的原理和步骤进行详细介绍。
一、原理ELISA是一种通过酶标记在特定抗原-抗体反应后，通过测定酶活性或者荧光强度来检测特定抗体或抗原的方法。
具体原理包括以下几个方面：1.抗体/抗原的孕育：为了进行ELISA检测，首先需要制备抗体或者抗原，在抗原的孕育过程中，一般采用细胞、细胞质、蛋白质、肝炎病毒核心抗原、抗体等作为抗原。
2.抗原加到板上：将抗原添加到检测板上，用于捕获待测样品中的特定抗体/抗原。
5.辣根过氧化物酶标记抗体加入：将与辣根过氧化物酶标记的抗体加入到检测板上，抗体与待测样品中的抗原结合。
6.底物加入：将底物（可以是苯基乙酸和过氧化物的混合物）加入到检测板上，通过酶标记抗体加强底物的催化，产生颜色。
7.读板：用酶标记抗体催化反应的底物生成的颜色强度，表示样品中的相应抗体或抗原的含量。
二、步骤ELISA步骤如下：1.制备捕获抗体：制备捕获抗体，将其吸附到检测板上。
2.将样品加入检测板：向检测板添加待测物质，例如蛋白质或者抗体。
3.洗涤步骤：用缓冲液冲洗检测板上的非特异性结合物质，以减少假阳性反应的出现。
4.加入探针抗体：加入与待测物质特异性结合的酶标记抗体。
6.底物加入：加入底物，让酶标记物质生成颜色。
7.读板：对反应所生成的颜色进行测量，例如比色法或者发光法等。
三、总结ELISA检测具有以下优点：非常准确、灵敏性高、易于操作、可产生准确可靠的结果等。
其通过测定酶活性成分的存在，展示了其在生物医学领域中的重要应用，帮助人们更好地理解生物分子，并依据该理解开展诸如疾病诊断、药物检测和基因工程等工作。
ELISA六种方法类型及原理
ELISA六种方法类型及原理ELISA（酶标检测）是用于检测免疫学反应的一种技术，全称为酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assays, ELISA），该技术是测定抗体及抗原的特异性相互作用的一种常用的检测方法。
ELISA通过酶联试验来灵敏地检测特异性抗体或抗原的含量。
ELISA检测方法有很多种。
常用的ELISA检测方法有以下六种：一、双抗体沉淀反应ELISA（DAP-ELISA）双抗体沉淀反应ELISA是一种比较简单的ELISA方法，该方法的原理是，在受体表面点涂两种类型的抗体，例如兔抗人IgG，而免疫反应物则是人IgG，受体与免疫反应物结合后，形成抗体-抗原复合物，其上自发形成特异性沉淀。
随着浓度的增加，抗原越多，沉淀凝固物也越多，膜上形成沉淀下降，沉淀量可以通过酶标仪测定，或者免疫发光法检测，大体上，兔抗人IgG及抗原分别点涂及酶标探针可能以1:1:2的比例，也就是在100 L的反应液中加入到受体和兔抗人IgG各10 L，抗原20 L的条件下进行反应。
二、夹心ELISA（Sandwich ELISA）夹心ELISA是一种常见的ELISA检测方法，它利用特殊的标记抗体完成免疫反应，以达到检测目的。
以IgG为例，在受体表面点涂一种特异性抗体,如兔抗人IgG，受体与人IgG结合形成复合物，在这一抗原复合物上再添加第二种特异性抗体，如抗兔IgG，第二种抗体结合复合物，并将复合物结合在受体表面，形成抗原“夹心环”，该免疫反应体系可以通过酶标仪来检测指示物的夹心量，计算受体中抗原的含量。
三、竞争ELISA（Competitive ELISA）竞争ELISA提高ELISA检测的灵敏度，竞争式ELISA也属ELISA技术范畴，该技术通过特异性抗体与抗原间竞争性结合而形成的结果来检测特异性抗原的浓度。
竞争ELISA的原理是：将偶氮羟化物体表膜点涂含有特异性抗原区域的抗体，若添加一定量的抗原（相同的特异性抗原）至反应液，则可形成抗原-抗体复合物，受体与抗原的竞争性结合，而非特异性的抗体-抗原复合物。
ELISA检测方法
ELISA检测方法ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学检测方法，广泛应用于医学、生物科学及环境科学等领域。
该方法利用抗体和酶的相互作用，能够检测和测定特定抗原或抗体的存在和浓度。
下面将详细介绍ELISA的原理、步骤、应用以及优缺点。
ELISA的原理主要基于抗原-抗体结合的原理。
首先，在固体表面（晶髓酶标板等）上吸附或共价结合抗原，形成抗原固相。
然后，将待测样品加入酶标板孔中与固定的抗原发生反应，形成抗原-抗体复合物。
随后加入特异性的酶标记抗体，使其与复合物形成二抗三重复合物。
最后，通过添加底物，酶催化底物产生可检测的色变反应，测定抗原或抗体的浓度。
1.抗原固定：将已知浓度的抗原加入酶标板中，并使其吸附在固体表面，形成抗原固相。
固相吸附通常通过物理吸附或共价结合实现。
2.试样加入：将待测样品加入酶标板中与固定抗原发生反应，形成抗原-抗体复合物。
通常需要对样品进行初步处理，如稀释、加入染色剂等。
3.二抗加入：将特异性酶标记的二抗加入酶标板中，与复合物发生特异性反应，形成二抗三重复合物。
4.清洗：通过洗涤剂将非特异性结合物洗去，以减少干扰。
5.基质加入：加入特定底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯二胺）或ABTS（2,2'-联氨基二（2-甲基丙酰氧）乙烷磺酸铵），酶催化产生彩色反应。
6.反应停止：用酸、碱或金属离子等停止反应，阻断底物的氧化反应，维持产色稳定。
7.反应测定：使用光度计测定产生的色素的吸光度或荧光。
ELISA具有广泛的应用。
在医学领域，ELISA常用于检测血液中的抗体和抗原，从而诊断传染病、自身免疫疾病等。
在生物科学研究中，ELISA可用于测定细胞因子、蛋白质等生物大分子的浓度。
此外，ELISA也可以用于检测环境样品中的污染物，如重金属、农药等。
1.灵敏度高：ELISA可以检测到较低浓度的抗原或抗体，常常超过其他方法的敏感度。
2.特异性强：ELISA利用特异性抗体进行识别，可准确检测特定的抗原或抗体。
ELISA试验技术要点
ELISA试验技术要点1.抗原和抗体：ELISA试验的基础是抗原与抗体的特异性结合。
抗原是分子或物质，可以激发免疫系统产生抗体。
抗体是由免疫系统产生的蛋白质，可以与特定抗原结合。
在ELISA试验中，通常至少需要一种抗原和一种抗体。
2.固相载体：ELISA试验通常需要使用固相载体来固定抗原或抗体。
常用的固相载体包括微孔板、磁珠和膜。
微孔板是最常用的固相载体，其表面通常涂有抗原或抗体，并能与试样中的抗体或抗原发生特异性结合。
磁珠和膜在一些特定实验中也有应用。
3.目标分子的检测：ELISA试验可以用于检测和定量分析各种目标分子，包括蛋白质、抗体、细胞因子、药物、代谢产物等。
通过选择合适的抗体对，可以实现对目标分子的高灵敏度和高特异性的检测。
4.直接ELISA：直接ELISA是最简单的ELISA形式之一，其适用于检测抗原。
直接ELISA中，固相载体上涂有相应的抗体，待测抗原直接与抗体发生特异性结合。
通过将固相载体进行洗涤，去除未结合的物质，可以测量已结合抗原的含量。
6.间接亲和ELISA：间接亲和ELISA在间接ELISA的基础上更进一步，通过添加竞争性抑制物来检测少量的抗体。
这种方法可以在低浓度的抗体中实现更高的敏感度。
7.双抗原ELISA：双抗原ELISA是另一种用于检测抗体的ELISA形式。
在这种方法中，首先将抗原与抗体结合，然后再添加标记有酶的第二抗体与待测抗体结合。
通过测量标记物的酶活性，可以得出待测抗体的含量。
8.酶标记物和底物：为了检测待测分子的存在，ELISA试验常使用酶标记物和底物。
酶标记物是一种酶化合物，结合在抗体或抗原上。
常用的酶标记物包括辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
底物是一种可以与酶催化产生颜色的反应物质，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯二胺）或ABTS（2,2'-氨丙基苯并咪唑-2-磺酸盐）。
通过测量底物的颜色变化，可以确定待测分子的存在和含量。
elisa检测实验报告
elisa检测实验报告ELISA 检测实验报告一、实验目的本次 ELISA 检测实验的目的是定量检测样本中特定抗原或抗体的浓度，以评估实验对象的生理或病理状态。
二、实验原理ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种基于抗原抗体特异性结合反应的免疫测定技术。
其基本原理是将已知的抗原或抗体固定在固相载体（如聚苯乙烯微孔板）表面，然后加入待检样本，样本中的待测抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
接着，加入酶标记的第二抗体（或抗原），形成抗原抗体酶标记抗体复合物。
最后，加入底物，酶催化底物反应生成有色产物，通过测定有色产物的吸光度值，即可定量分析样本中待测抗原或抗体的浓度。
三、实验材料与设备1、试剂包被缓冲液（碳酸盐缓冲液，pH 96）封闭液（含 1% 5% 牛血清白蛋白的 PBS 缓冲液）洗涤液（含 005% Tween-20 的 PBS 缓冲液）样本稀释液（PBS 缓冲液）标准品（已知浓度的抗原或抗体）酶标记的二抗（辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记）底物溶液（如 TMB 或 pNPP）终止液（如 2M 硫酸或 1M 氢氧化钠）2、仪器与设备酶标仪（能够读取 450nm 或 492nm 波长的吸光度值）恒温培养箱移液器（量程分别为20μL、200μL、1000μL）聚苯乙烯微孔板离心机四、实验步骤1、包被将已知浓度的抗原或抗体用包被缓冲液稀释至适当浓度。
向聚苯乙烯微孔板的每孔中加入100μL 稀释后的包被液，4℃过夜或 37℃孵育 2 3 小时。
2、封闭倒掉包被液，用洗涤液洗涤微孔板 3 次，每次浸泡 3 分钟，然后拍干。
每孔加入200μL 封闭液，37℃孵育 1 2 小时。
3、加样倒掉封闭液，用洗涤液洗涤微孔板 3 次，然后拍干。
将待检样本和标准品用样本稀释液进行梯度稀释。
向微孔板的每孔中分别加入100μL 稀释后的样本和标准品，空白对照孔加入100μL 样本稀释液。
37℃孵育 1 2 小时。
《ELISA检测技术》课件
总结词
通过间接利用酶标记的抗抗体与待测 样本中的抗原反应。
详细描述
间接ELISA是在固相载体上包被已知 抗原，然后加入酶标记的抗抗体与待 测样本中的抗原反应，再加入底物显 色，达到检测抗原的目的。
夹心ELISA
总结词
通过酶标记的二抗将待测样本中的抗原夹在固相载体和酶标记的抗体之间。
详细描述
夹心ELISA是在固相载体上包被特异性抗体，然后加入待测样本与酶标记的二抗 反应，形成固相抗体-抗原-酶标记抗体的复合物，再加入底物显色，达到检测 抗原的目的。
《elisa检测技术》ppt 课件
目录
• ELISA检测技术概述 • ELISA检测技术的分类 • ELISA检测技术实验步骤 • ELISA检测技术的影响因素 • ELISA检测技术的优缺点 • ELISA检测技术的应用实例
01
ELISA检测技术概述
ELISA检测技术的定义
要点一
酶联免疫吸附分析（EnzymeLinked Immu…
一种基于抗原-抗体反应的检测技术，通过酶标记的方法将 免疫反应与化学信号放大，实现对目标分子的定量或定性 分析。
要点二
特点
灵敏度高、特异性强、操作简便、适用于大量样本检测。
ELISA检测技术的原理
抗原或抗体与固相载体表 面的抗原或抗体结合，形 成固相复合物；
加入酶标记的抗原或抗体 ，与固相复合物结合；
基因表达研究
通过ELISA检测技术可以检测基因表达产物的含量和活性，了解基因表达的规律和调控机制。
THANKS
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显色
01
02
03
显色
加入显色底物，使抗原抗 体复合物呈现颜色反应。
显色底物
elisa常见实验方法
elisa常见实验方法摘要：1.ELISA实验原理简介2.ELISA实验步骤概述3.常见ELISA实验方法分类4.各类ELISA实验方法的优缺点及应用场景5.提高ELISA实验效果的方法6.ELISA实验中常见问题及解决策略正文：ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用于生物医学领域，用于检测蛋白质、抗原和抗体等生物分子的方法。
ELISA实验通过特异性抗体与待检测物结合，再通过酶标记的二抗检测结合物，从而实现对目标分子的定量分析。
以下是ELISA常见实验方法的详细介绍。
1.ELISA实验原理简介ELISA实验基于抗原抗体反应原理，将抗原或抗体固定在固相载体上，待检测样品中的目标分子与固定在载体上的抗体结合，再加入酶标记的二抗，与结合在载体上的抗原或抗体发生反应。
最后，通过底物显色反应，根据颜色的深浅判断待测物含量。
2.ELISA实验步骤概述ELISA实验一般分为以下四个步骤：（1）抗原或抗体固定：将抗原或抗体吸附在固相载体（如酶标板）上；（2）样品处理：对待测样品进行适当处理，使其与实验体系相适应；（3）加样：将处理后的样品和酶标记的二抗加入酶标板，incubate；（4）底物显色：加入底物，酶标记的二抗与抗原或抗体结合后，底物被酶催化显色；（5）读数：用酶标仪测定显色程度，换算成待测物浓度。
3.常见ELISA实验方法分类根据实验过程中抗原抗体结合的方式，ELISA实验可分为以下几类：（1）双抗原夹心法：待测物为抗原，实验中使用两种针对抗原不同表位的抗体；（2）竞争法：待测物为抗体，与固定抗原竞争结合酶标抗体；（3）间接法：待测物为抗体，通过酶标记的二抗检测；（4）免疫共沉淀法：利用抗原抗体结合后形成的免疫复合物与底物结合。
4.各类ELISA实验方法的优缺点及应用场景（1）双抗原夹心法：优点为特异性高、灵敏度高，适用于抗原含量较低的检测；缺点为操作复杂，易出现交叉反应。
（2）竞争法：优点为操作简便，适用于抗体含量较低的检测；缺点为特异性相对较低，易受其他物质干扰。
elisa的检测原理
elisa的检测原理Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用于生物学和医学领域，用于检测目标物质的方法。
Elisa的检测原理基于抗原与抗体之间的特异性结合，通过化学反应产生可测量的信号。
本文将介绍Elisa的检测原理及其具体步骤。
第一部分：Elisa的背景介绍Elisa是一种非常敏感和特异的实验技术，被广泛应用于疾病诊断、药物筛选、蛋白质定量等领域。
其原理是利用特异性抗原与抗体之间的结合反应，通过酶作用产生颜色或荧光信号，从而实现对目标物质的定量检测。
第二部分：Elisa的原理与步骤1. 血清处理在进行Elisa实验之前，需要从样本中提取血清，并进行预处理。
预处理的目的是去除可能干扰结果的物质，如红细胞、血浆等。
经过预处理后的血清样本即可用于后续的实验步骤。
2. 固相吸附在Elisa实验中，一般会使用96孔板作为固相载体。
首先，将需要检测的抗原溶液加入孔板中，并在孔板内表面上形成一层均匀的抗原薄膜。
通常，每个孔位会添加同样的抗原浓度，以确保实验的可靠性和准确性。
3. 特异性结合在已固定的抗原上，加入待测样本（可能存在的抗体），与孔板中的抗原进行特异性结合。
如果待测样本中存在与抗原相匹配的抗体，则会发生结合反应。
这种特异性结合可以用于检测某种特定抗体的存在。
4. 洗涤步骤为了去除未结合的物质，以及降低非特异性背景信号的干扰，需要进行洗涤步骤。
在洗涤过程中，用缓冲液冲洗反应孔位，去除非特异性结合的物质。
5. 检测物的结合在完成洗涤步骤后，加入与待测抗体特异结合的检测物（如辣根过氧化物酶标记的二级抗体）。
该检测物会与特异性结合的抗体形成复合物，并固定在孔板内。
6. 底物反应与信号检测加入底物反应液，通过酶促反应产生可测量的色素或荧光信号。
底物反应液的选择取决于检测系统的设定，在特定条件下，底物与酶的活性发生反应，产生信号。
7. 信号测量与数据分析使用光度计或荧光分析仪测量底物反应产生的信号强度。
根据标准曲线或其他定量方法，可以计算出待测样本中抗原的浓度或抗体的含量。
elisa法检测步骤
elisa法检测步骤ELISA法，即酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是一种常用于检测特定抗原或抗体的方法。
它基于免疫学原理，通过特异性抗体与抗原结合并利用酶的催化作用产生可测定的信号，从而实现对目标物质的定量检测。
下面将介绍ELISA法的基本步骤以及注意事项。
1. 抗原或抗体的固定需要将待测抗原或抗体固定在固相载体上，常用的载体有微孔板等。
固定的目的是为了使待测物能够与特异性抗体或抗原结合，并保持其稳定性。
2. 阻断非特异性结合位点在固定的抗原或抗体上，加入一种阻断剂，如牛血清蛋白（BSA）或鱼胶蛋白（Gelatin），以防止非特异性结合。
3. 特异性抗体的结合将待测样品加入到固定的抗原上，使其中的抗原与特异性抗体发生结合反应。
特异性抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，其选择应根据具体实验需求。
4. 酶标记二抗的结合经过特异性抗体的结合后，再加入酶标记的二抗。
酶标记的二抗与特异性抗体的结合形成免疫复合物。
5. 酶底物的加入在免疫复合物形成后，加入酶底物。
酶底物与酶标记的二抗结合后，酶会催化底物的反应，产生可测定的信号。
常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。
6. 反应停止根据酶底物的选择，选择合适的反应停止液，使酶催化反应停止。
常用的反应停止液有硫酸或碳酸氢钠。
7. 信号检测将停止反应后的溶液转移到酶标仪或光度计中，测定产生的信号强度。
ELISA法可以通过颜色反应或发光反应来进行信号检测。
ELISA法作为一种常用的检测方法，在临床诊断、生物医学研究和生物工业等领域都有广泛应用。
但在进行ELISA实验时，还需要注意以下几点：1. 严格控制实验条件，包括温度、时间和pH值等，以确保实验结果的准确性。
2. 选择合适的阳性和阴性对照，以验证实验的可靠性和敏感性。
3. 遵循操作规范，注意实验操作的无菌和无污染。
4. 合理选择稀释倍数，以保证实验结果在检测范围内。
elisa是什么检测方法
elisa是什么检测方法Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物学检测方法，通过测量酶标记物与抗原或抗体的特异性结合来检测目标物质的存在或浓度。
它广泛应用于医学诊断、生物研究以及食品安全等领域。
本文将对Elisa的原理、分类、应用和优缺点进行详细介绍。
首先，我们来了解Elisa的原理。
Elisa基于免疫学原理，通常由固相（如微孔板）和液相两个阶段组成。
首先，在固相上涂覆抗原或抗体，形成固定化的特异性结构，使其能与待测样品中的目标物质特异性结合。
然后，通过加入酶标记的第二抗体或第二抗原，形成复合物。
最后，加入底物，使酶标记物与底物反应，产生显色或荧光信号。
检测过程中的光学信号强度与待测物质的存在或浓度成正比。
根据使用的抗体或抗原类型，Elisa可分为直接Elisa、间接Elisa、竞争Elisa、夹心Elisa等不同类型。
直接Elisa直接利用酶标记的抗体或抗原与待测物质结合，检测过程相对简单快速。
间接Elisa中，一种非标记的抗体与待测物质结合，再加入酶标记的二抗与非标记抗体结合。
竞争Elisa中，待测物质与固相上固定的抗原结合，再加入酶标记的抗体与待测物质竞争结合。
夹心Elisa适用于检测两个特异性结合靶点的含量。
Elisa具有广泛的应用领域。
在医学诊断中，Elisa常用于检测感染病原体、自身抗体、过敏原、肿瘤标志物等。
例如，HIV抗体检测采用Elisa技术可以有效检测感染者的血液样本。
此外，Elisa还可以用于检测细胞因子、癌症相关蛋白质、药物代谢产物等生物标志物，对疾病的早期诊断、预后判断和治疗效果评估具有重要意义。
除了医学领域，Elisa在生物学研究中也发挥着重要作用。
研究人员常用Elisa来研究蛋白质相互作用、基因表达调控、细胞信号通路等。
通过检测特定蛋白质在不同条件下的表达水平，可以揭示其在生物学过程中的功能和调控机制。
此外，Elisa还广泛应用于食品安全领域。
食品中可能存在的有害物质或污染物可以通过Elisa技术进行快速、准确的检测。
ELISA试验基本步骤及材料和试剂
ELISA试验基本步骤及材料和试剂ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用于检测蛋白质或抗体的定性和定量方法。
它的基本原理是利用酶-抗体偶联物来检测特定目标物质的存在，通过酶催化底物的变化来实现信号的放大和检测。
下面将介绍ELISA试验的基本步骤以及相关的材料和试剂。
1.涂板：首先，将微孔板（96孔板或其他规格的板）用目标蛋白质或抗体溶液涂覆在表面上，使其吸附固定。
这一步通常称为“涂板”。
2.阻断：将蛋白质或抗体涂覆后的微孔板用阻断剂（例如牛血清蛋白、BSA）进行阻断处理，以防止非特异性结合。
3.样品处理：将待检测的样品加入到微孔板中，并与目标蛋白质或抗体结合（如果存在）。
样品通常需要经过一系列稀释步骤，以便在量化检测时得出准确的结果。
4.洗涤：使用缓冲液反复洗涤微孔板，以去除未结合的物质。
5.二抗处理：加入与待检测物种类对应的二抗荧光素，使其与待检测物结合。
这一步通常称为“二级标记”。
6.洗涤：再次使用缓冲液反复洗涤微孔板，以去除未结合的二抗。
7.底物结合：加入底物（如TMB或ABTS）并等待一定的反应时间，使酶催化底物的变化产生可观察的颜色变化。
8.反应停止：加入停止液（如硫酸、盐酸）停止底物的反应。
9.测量：利用酶催化反应产生的颜色变化通过酶标仪或光谱仪进行测量，得出待测量物的浓度或定性。
1.微孔板：一般使用96孔的微孔板，也可根据需要选择其他规格的板。
2.涂板物质：目标蛋白质或抗体等。
3.阻断剂：常用的阻断剂有牛血清蛋白（BSA）等。
4.样品：待检测的生物样品，可以是血清、细胞提取物或其他组织液。
5.二抗：与待检测物种类对应的二抗，通常是抗体。
6.底物：用于酶催化反应并产生颜色变化的化学底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基苯基二胺）、ABTS等。
7.停止液：停止底物的反应，如硫酸、盐酸等。
8. 缓冲液：用于洗涤和稀释的缓冲液，如PBS（磷酸盐缓冲液）、TBST（含Tween-20的洗涤缓冲液）等。
elisa是什么检测方法
elisa是什么检测方法Elisa是什么检测方法。
Elisa（酶联免疫吸附实验）是一种常用的实验方法，用于检测样本中特定蛋白质的存在和浓度。
它是一种高度敏感和特异的检测技术，广泛应用于医学诊断、生物学研究和生物制药领域。
Elisa方法的原理简单易懂，操作相对简便，因此备受科研工作者的青睐。
本文将详细介绍Elisa是什么检测方法，包括其原理、步骤、优缺点以及应用领域。
Elisa的原理是通过特定抗体与待检测物质结合，然后利用酶标记的二抗和底物染色来检测目标物质的存在和浓度。
首先，在微孔板上吸附待检测物质，然后加入特异性抗体与其结合。
接着加入酶标记的二抗，再加入底物，酶与底物反应产生显色物质，通过光密度计测定显色物质的吸光度，从而确定待检测物质的存在和浓度。
Elisa方法的操作步骤相对简单，主要包括板涂覆、抗原或抗体结合、酶标记二抗结合和底物显色等几个关键步骤。
在实验操作中，需要严格控制各步骤的条件和时间，以确保实验结果的准确性和可重复性。
Elisa方法具有高度的敏感性和特异性，可以检测样本中极低浓度的蛋白质，因此在医学诊断和生物学研究中得到广泛应用。
同时，Elisa方法还可以进行高通量的自动化检测，大大提高了检测效率和准确性。
然而，Elisa方法也存在一些局限性，例如需要较长的实验时间、不能同时检测多个样本等。
此外，Elisa方法在检测复杂样本时可能出现交叉反应，影响结果的准确性。
Elisa方法在医学诊断、生物学研究和生物制药领域有着广泛的应用。
在临床诊断中，Elisa方法可以用于检测病毒、细菌、肿瘤标志物等，对于疾病的早期诊断和预后评估具有重要意义。
在生物学研究中，Elisa方法可以用于检测细胞因子、蛋白质相互作用等，为科研工作者提供了重要的实验手段。
在生物制药领域，Elisa方法可以用于药物的质量控制和药效学研究，对于药物的研发和生产具有重要意义。
总之，Elisa是一种高度敏感和特异的检测方法，具有广泛的应用前景。
elisa检测流程
elisa检测流程Elisa检测流程Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验室检测方法，用于检测抗体或抗原的存在和浓度。
它具有高灵敏度和特异性，被广泛应用于医学、生物学、生物技术等领域。
本文将介绍Elisa检测流程的详细步骤和注意事项。
一、实验前准备在进行Elisa实验之前，需要准备试剂、标准样品和实验器材等。
试剂包括抗体、抗原、辅助试剂（如酶标底物、底物缓冲液等）等。
标准样品是已知浓度的抗体或抗原，用于建立标准曲线。
实验器材包括酶标板、离心管、试管、移液器等。
二、酶标板上样1. 将酶标板中的每个孔分别加入待检测样品、标准样品和阴性对照，每个样品重复3次，以确保结果的准确性。
2. 将加入样品的酶标板在室温下孵育一段时间，使样品中的抗体或抗原与酶标板中的特异性抗体或抗原结合。
三、洗涤1. 轻轻倾斜酶标板，将孔内的液体倒出。
2. 用洗涤缓冲液洗涤酶标板中的每个孔，洗涤次数根据实验要求而定，一般为3-5次。
3. 每次洗涤后，用吸球吸干酶标板中的液体，避免孔内残留的液体影响后续步骤的准确性。
四、添加检测抗体1. 加入特异性检测抗体，使其与已经固定在酶标板上的抗体或抗原结合。
2. 孵育一段时间，使检测抗体与酶标板上的复合物形成。
五、洗涤重复第三步骤，将酶标板中的非特异性结合物洗去，保留特异性结合物。
六、添加底物1. 加入底物缓冲液和酶标底物，使其与酶标板上的复合物发生反应。
2. 孵育一段时间，使底物转化为可检测的产物。
七、终止反应加入终止液，停止底物的反应。
终止液的选择根据酶标底物的性质而定。
八、测量结果使用酶标仪或光度计测量酶标板中每个孔的吸光度值。
根据吸光度值可以计算出样品中抗体或抗原的浓度。
九、结果分析根据标准曲线和吸光度值，可以确定样品中抗体或抗原的浓度。
同时，还可以根据阳性对照和阴性对照的结果，判断样品是否阳性或阴性。
十、实验注意事项1. 严格按照实验操作规范进行操作，避免污染和误差。
2. 注意试剂的保存条件和有效期，避免使用过期或变质的试剂。
ELISA原理、方法、操作及注意事项
ELISA是一种常用的实验技术，用于检测抗原或抗体的存在。本演示将介绍 ELISA的原理、不同方法、操作步骤，并提供注意事项，用以帮助您更好地理 解和应用ELISA技术。
ELISA概述
ELISA（酶联免疫吸附测定法）是一种常用的生物化学分析方法，通过测定 光学信号来检测抗原或抗体的存在和浓度。
操作流程严格按照规定步骤进行，减少误差。
仪器设备质量
使用可靠的仪器和试剂，确保实验结果的可靠性。
实验记录完整性
详细记录实验步骤和结果，以备后续分析和参考。
反应生成的颜色变化。
7
样品预处理
收集样品，进行预处理，如离心、稀释等。
操作实例简介
具体操作步骤，如添加抗体、洗涤、添加 底物等。
酶标记方法简介
添加酶标记的抗体或试剂，通过酶催化使 信号产生。
数据分析方法简介
根据样品信号强度与标准曲线比对，计算 样品中分析物的浓度。
ELISA检测技术的应用领域
医学
ELISA在临床诊断、病 原体检测和新药开发等 方面有重要应用。
选择性ELISA方法
选择性ELISA是根据特定需求进行的修改，可用于检测特定抗原或抗体，提高 特异性和灵敏度。
ELISA操作步骤简介
1
涂覆准备
2
将样品或标准物质固定在试板上，使其与
试板表面特异性结合。
3
洗涤方法简介
4
通过洗涤去除非特异性结合物，减少背景
信号。
5
信号检测方法简介
6
利用光学或化学方法测量信号强度，如酶
食品安全
ELISA可用于检测食品 中的污染物、过敏原等， 确保食品安全。
环境监测
ELISA检测方法操作要点
ELISA检测方法操作要点ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫化学检测方法，用于检测体液或体内细胞中的特定抗原或抗体。
ELISA技术的成熟和广泛应用使得它成为临床、生物学和分子生物学研究中常用的检测方法之一、以下是ELISA检测方法操作要点的详细说明：1.样品准备：-合理选择样品：根据实验目的，选择合适的样本类型，如血清、血浆、尿液、细胞提取物等。
-样品储存：样品应储存在适当的温度下，并避免反复冻融，以防止抗原或抗体的降解。
2.酶标板涂层：-选择合适的酶标板：常用的有96孔和384孔酶标板，根据实验需要进行选择。
-涂层溶液制备：根据实验方案中的要求，配制相应浓度的涂层溶液，如抗体或抗原。
-涂层操作：将涂层溶液加入酶标板孔中，静置一段时间，使其充分吸附在孔壁上，再进行废液排空和孔洗涤。
3.酶标抗体制备：-选择合适的酶标抗体：根据实验目的和需要，选择适当的酶标抗体。
-酶标抗体质量控制：酶标抗体应经过质量控制，并充分稀释到合适的浓度。
4.样品孔加样：-样品孔设置：根据实验设计，将需要检测的样品和相应质控品按照实验要求加到酶标板中。
-操作要点：如实验要求，控制加样量、加样顺序和均匀性，避免交叉污染。
5.洗涤步骤：-洗涤缓冲液：选择适当的洗涤缓冲液，用于洗涤酶标板孔，去除非特异性结合物质。
-洗涤方法：进行洗涤时，操作要轻柔而均匀，避免产生气泡。
6.标记抗体操作：-选择合适的标记抗体：标记抗体一般选择与目标抗原或抗体不同的免疫球蛋白。
-标记抗体质量控制：标记抗体应经过质量控制，并充分稀释到合适的浓度。
7.显色反应：-底物选择：根据实验方案，选择合适的底物，以产生特定的颜色反应。
-反应时间：根据实验方案，控制好反应时间，过长过短都可能对结果造成影响。
8.反应终止：-反应终止剂选择：根据实验要求，选择合适的反应终止剂，以停止酶反应。
-反应终止时间：反应终止剂一般在反应完成后加入，在规定的时间内进行终止。
elisa是什么检测方法
elisa是什么检测方法ELISA是一种常用的免疫学检测方法，全称酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）。
它通过检测抗体和抗原之间的特异性结合来诊断疾病、监测疾病进展、评估治疗效果等。
ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、结果可靠等优点，因此在临床诊断和科研领域得到广泛应用。
ELISA检测方法的原理是利用抗体与抗原特异性结合的原理，通过酶标记的二抗或底物来检测样品中抗原或抗体的含量。
在ELISA实验中，首先将待检测样品加入已包被在微孔板上的抗原或抗体，待样品中的抗原或抗体与包被的抗原或抗体结合后，用洗涤液去除未结合的物质，然后加入酶标记的二抗或底物，通过比色反应或荧光反应来检测待检测物质的含量。
ELISA检测方法有直接法和间接法两种。
直接法是将待检测样品直接加入包被的抗原或抗体后进行检测，适用于待检测物质为抗原的情况；间接法是将待检测样品加入包被的抗原或抗体后再加入酶标记的二抗或底物进行检测，适用于待检测物质为抗体的情况。
此外，还有竞争性ELISA和间接竞争性ELISA等衍生方法，用于检测特定的生物分子。
ELISA检测方法在临床诊断中有着广泛的应用。
例如，ELISA可以用于检测病毒、细菌、寄生虫等微生物的抗体或抗原，用于诊断感染性疾病；也可以用于检测肿瘤标志物、药物残留、激素水平等，用于诊断肿瘤、药物中毒、内分泌疾病等。
此外，ELISA还可以用于监测疾病进展和评估治疗效果，对于临床诊断和治疗具有重要的意义。
在科研领域，ELISA检测方法也被广泛应用。
科研人员可以利用ELISA方法检测蛋白质、抗体、抗原等生物分子的含量，用于研究细胞信号通路、免疫应答机制、药物作用机制等。
ELISA方法的灵敏度高、操作简便、结果可靠，使其成为科研实验室中不可或缺的技术手段。
总之，ELISA是一种常用的免疫学检测方法，具有灵敏度高、特异性强、操作简便、结果可靠等优点，在临床诊断和科研领域得到广泛应用。
elisa是什么检测方法
elisa是什么检测方法Elisa是一种常用的免疫学检测方法，它的全称是酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是一种通过酶标记的抗体或抗原来检测特定分子的方法。
Elisa检测方法具有高灵敏度、高特异性和简便易行的特点，被广泛应用于医学诊断、生物学研究和药物开发等领域。
Elisa检测方法的原理是利用酶标记的抗体或抗原与待检测物相互作用，形成特定的复合物，然后通过添加底物和显色剂来检测酶的活性，从而确定待检测物的存在量。
Elisa检测方法通常包括直接Elisa、间接Elisa、竞争性Elisa和间接竞争性Elisa等几种类型，每种类型都有其特定的应用场景和操作步骤。
在进行Elisa检测时，首先需要将待检测样品加入到包被有特定抗原或抗体的微孔板中，待待检测物与包被抗原或抗体结合后，洗涤去除未结合的物质，然后加入酶标记的二抗或底物，最后加入显色底物并测定吸光度，根据吸光度值来确定待检测物的浓度或存在量。
Elisa检测方法在临床诊断中具有重要的应用价值，可以用于检测血清中的各种生物分子，如蛋白质、抗体、荷尔蒙等，对于疾病的早期诊断、预后判断和疗效监测具有重要意义。
此外，Elisa检测方法还被广泛应用于生物学研究中，可以用于检测细胞因子、细胞表面标记物、蛋白质相互作用等，为科研人员提供了重要的实验手段。
除了在医学和生物学领域，Elisa检测方法还被广泛应用于食品安全、环境监测和药物开发等领域。
例如，Elisa检测方法可以用于检测食品中的致病菌、农药残留和重金属等有害物质，保障食品安全；在环境监测中，Elisa检测方法可以用于检测水体、土壤和大气中的污染物，为环境保护提供重要数据支持；在药物开发中，Elisa检测方法可以用于筛选药物靶点、评价药物活性和毒性，加快新药研发的进程。
总的来说，Elisa检测方法作为一种高灵敏度、高特异性的免疫学检测方法，已经成为医学诊断、生物学研究和药物开发中不可或缺的工具。
elisa检测方法
elisa检测方法Elisa检测方法。
ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学检测方法，广泛应用于医学、生物学、环境监测等领域。
它通过特定抗体和酶标记的二抗相互作用，实现对特定抗原的高灵敏度、高特异性检测。
下面将介绍ELISA检测方法的基本原理、步骤和注意事项。
1. 基本原理。
ELISA检测方法基于抗原与抗体的特异性结合，利用酶标记的二抗或底物显色反应来定量或半定量检测抗原或抗体。
其原理主要包括固相吸附、特异性结合、酶标记、底物显色等步骤。
在固相吸附阶段，待检样品中的抗原或抗体被吸附在微孔板表面；在特异性结合阶段，加入特异性抗体与待检样品中的抗原结合；在酶标记阶段，加入酶标记的二抗与特异性抗体结合形成免疫复合物；最后，在底物显色阶段，加入底物使酶催化反应产生显色产物，通过光密度测定来定量或半定量检测待测物。
2. 步骤。
ELISA检测方法的步骤主要包括样品处理、固相吸附、特异性结合、酶标记和底物显色等。
首先，将待检样品进行处理，如离心、稀释等；然后将处理后的样品加入到微孔板中，进行固相吸附；接着加入特异性抗体与待检样品中的抗原结合；随后加入酶标记的二抗与特异性抗体结合形成免疫复合物；最后加入底物使酶催化反应产生显色产物，通过光密度测定来定量或半定量检测待测物。
3. 注意事项。
在进行ELISA检测时，需要注意以下几点，首先，严格按照操作规程进行操作，避免交叉污染；其次，样品处理的过程中需要注意避免蛋白质的降解和失活；另外，在固相吸附、特异性结合、酶标记和底物显色等步骤中，需要控制好反应时间和温度，以保证实验的准确性和可重复性；最后，需要注意底物显色反应的终止时间，避免过度显色导致结果失真。
总之，ELISA检测方法是一种简单、快速、灵敏、特异性高的免疫学检测方法，广泛应用于医学、生物学、环境监测等领域。
掌握其基本原理、步骤和注意事项，对于准确、可靠地进行ELISA检测具有重要意义。
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ELISA检测 ----- 固相捕获法测IgM抗体在病原体急性感染的诊断中，通常需检测IgM抗体，如急性甲型肝炎诊断的血清抗HAVIgM检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM检测和TORCH项目的系列IgM检测等。
IgM抗体也有使用间接法测定的，如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒。
在使用间接法测IgM抗体时，由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体，其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合，从而干扰IgM抗体的检测。
因此，在使用间接法测定IgM抗体时，通常须将血清样本用抗人IgG抗体或SPA预处理，以去除IgG的干扰。
这样不但测定较为繁琐，而且影响测定的特异性和灵敏度。
目前，常用的IgM抗体检测方法为捕获法，即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体，当加入血清标本时，其中的IgM类抗体(特异的和非特异的)即可被固相抗体捕获，再加入特异抗原，其与固相上捕获的IgM抗体结合后，加入酶标抗特异抗原的抗体，最后加入底物显色。
具体操作步骤如下：1．首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。
2．加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。
3．加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等，温育一定时间后洗板；此时，特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。
4．加入酶标记的抗特异抗原的抗体，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。
5．加入酶底物，温育显色测定本方法要着重注意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的干扰。
RF(1gM类)由于其能与固相抗人u 链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体(动物IgG)反应，从而导致假阳性反应。
而非特异IgM由于其在第一步温育中，可与特异IgM竞争与固相抗体结合，所以会影响测定的灵敏度。
因此，使用本法测IgM，必须对临床样本进行适当稀释。
样本稀释后，上述产生干扰作用的非特异IgM含量减少，而特异IgM由于处于相应病原体的急性感染期，滴度很高，一定稀释后，不会有明显影响，况且，在某些病原体如HBV的慢性感染阶段，IgM类特异抗体也能持续存在，只不过滴度要低很多。
因此，如不对血清样本稀释，就直接检测，即使是没有非特异IgM的干扰，阳性测定结果也没有急性感染的诊断价值。
现在，有些试剂生产厂家，为了迎合临床实验室减轻劳动强度、简便操作的要求，生产了不需对样本进行稀释的抗HAVIgM和抗HBclgMELISA试剂盒，现有不少实验室也在使用。
鉴于上面提到的原因，我们建议临床实验室在做抗HAVIgM和抗HBc lgM等类检测时，应使用对样本进行稀释的试剂盒，以保证检测的临床价值。
酶联免疫吸附测定ELISA结果判定的常用缩写ELISA测定按其表示测定结果的方式分为定性和定量测定两大类。
定性测定只是对标本中是否含有待测抗原或抗体作出“有”或“无”的结论，分别用“阳性”和“阴性”来表示。
可见定性测定通常是用于传染性病原体的抗原或抗体的测定，以判断特定病原体感染的存在与否。
而定量测定则是对标本中待测抗原的多少进行量值测定，以具体数值表示。
定量测定基本上是用于非病原体抗原物质的测定，如激素、细胞因子、肿瘤标志物、小分子药物等。
目前国内应用的ELISA试剂盒绝大部分是用于传染性病原体的抗原或抗体的定性测定，也有少部分用于。
FP，hCG、细胞因子等的定量测定。
ELISA定性测定的“阴性”和“阳性”的判定依据是试剂盒所确定的阳性判定值(cut-off)。
定量测定的“量值”依据是试剂盒中所带标准品同时测定得出的剂量反应曲线(又称标准曲线)。
实验室进行室内质控时使用。
下面再解释一下在ELISA定性测定结果判定中常用的一些缩写：(1)S／CO：其中S为sample(样本)或specimen(标本)的简写，表示的是标本测定的吸光度值，CO 为cut-off值的简写。
除竞争抑制法外，其他ELISA定性测定模式中，当S／CO值大于或等于1时，标本的测定为阳性，小于1时为阴性。
(2)S／N或P／N：其中S同(1)，N为negative(阴性对照)的简写，P为patient(患者)的简写。
较早的试剂盒很多都使用S／N或P／N≥2．1为阳性判定标准，现仍有一些试剂盒使用这种方式。
这种方式与S／CO方式无根本性区别，只不过是前者将阴性对照(N)的2．1倍视为cut-off值而已.酶免疫试验的优点及局限性酶免疫试验之所以能成为临床免疫检验中的主导技术，是与它的方法上的特异性和灵敏性、操作上的简便性以及试剂的稳定性分不开的，还有很重要的一点是，其对环境没有污染威胁。
尽管如此，作为一项免疫检验技术，酶免疫试验还是有其局限性的，不但所检测的生物学体液样本如血清中有可能存在各种干扰实验的因素，而且在实验过程中，影响结果的因素也很多，尤其是进行手工的ELISA测定时。
此外，在定性ELISA测定中，阳性判定值(CUT-OFF)的建立，是在一定的统计学基础上的，相对于某个具体的受检者来说，其有可能并不具备正确性。
例如，使用ELISA方法检测抗HCV及抗HIV或HBsAg，有时候，检测所得的阳性结也许并不是真正的阳性，而需要使用其他方法如重组免疫印迹(recombinant immunoblot as—say，RIBA)、蛋白印迹(Westernbl。
t，WB)或中和试验来确认，才能报告阳性。
这里抗HCV和抗HIV的检测均使用病毒部分的基因工程抗原，其他一些病毒如流感病毒、腮腺炎病毒和水痘病毒等感染人体后，亦或一些自身抗体，也有可能会导致假阳性反应。
HBsAg的测定主要是弱阳性的问题，这与ELISA测定的“灰区”有关系，处于cut-off值周围亦即“灰区”的结果的可靠性通常较差，阳性当然需要确认，阴性却也未必是真，这一点在血站筛检献血员血液时是非常重要的，必须引起注意，并采取适当的措施，防止此类严重影响人们健康的传染性疾病经输血传播，本书后面的有关章还会对此问题做详细论述。
此外，免疫测定的基础是抗原抗体的特异反应，因此，如检测抗原，除了要求抗体(单抗或多抗)是特异的外，还要求待测抗原上必须存在有能与所用抗体结合的抗原决定簇，如果因为基因突变导致某些位点的不表达，或者结合位点因为某些原因被封闭或阻断，都会影响抗体与抗原的结合，造成假阴性结果。
如检测抗体，则要求所用包被抗原应尽可能包含所有的特异抗原决定簇，同时又尽可能不含有非特异的成分，这一点往往由于技术水平的限制而难以完全做到，因此，从某种意义上来说，假阳性假阴性是不能完全避免的，尽管通过努力，可以将其降至很低的程度。
这也是建立临床免疫检验方法所努力的方向.酶联免疫吸附测定操作要点1 标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。
有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。
大部分ELISA检测均以血清为标本。
血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。
制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。
除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。
在ELISA中血浆和血清可同等应用。
血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
血清标本宜在新鲜时检测。
如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。
如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。
一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。
冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。
混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。
保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。
2 试剂的准备按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。
ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。
自配的缓冲液应用pH计测量较正。
从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。
试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
3 加样在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。
加样时应将所加物加在LEISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。
加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。
每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。
有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。
也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。
加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。
4 保温在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。
抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。
ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。
以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。
这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。
在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。
这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。
温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。
37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。
在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达顶峰。
为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。
抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜，以形成最多的沉淀。
但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。
保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。
为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。