肿瘤干细胞的鉴定与分离
肿瘤干细胞的分离和鉴定技术研究
肿瘤干细胞的分离和鉴定技术研究肿瘤干细胞是肿瘤组织中具有自我更新和分化能力的一类细胞，具有高度的分化状态异质性和治疗耐药性，并在肿瘤的生长、转移以及复发中扮演了重要的角色。
因此，肿瘤干细胞已经成为肿瘤研究的热点之一，肿瘤干细胞的分离和鉴定技术也成为了肿瘤干细胞领域的重要技术之一。
肿瘤干细胞分离技术一、流式细胞术流式细胞术是门捷列夫技术在细胞生物学中的应用，该技术可以根据细胞的表面分子进行细胞的分类、分离和鉴定。
在肿瘤干细胞的分离和鉴定中，流式细胞术常常用于筛选肿瘤干细胞，通过标记表面干细胞标记物，如CD44、CD133、EpCAM等，实现肿瘤干细胞的分选和分离。
二、磁珠分离技术磁珠分离技术是一种基于特定的细胞表面标记，利用特别制备的磁珠对细胞进行快速高效的分离和鉴定的技术。
在肿瘤干细胞的分离和鉴定中，磁珠分离技术与流式细胞术具有类似的功能，即通过特异的肿瘤干细胞标记物，如CD44、CD133、EpCAM等，将肿瘤干细胞与其他细胞分离开来。
三、单细胞分离技术单细胞分离技术是一种高解析度的细胞分离方法。
该技术可以将个体细胞进行极端稀释，将单个的细胞分离出来，并进行单线索扩增(Single Cell Amplification)。
在肿瘤干细胞的分离和鉴定中，单细胞分离技术能够通过对单个肿瘤细胞进行检测和分离，发现并鉴定肿瘤干细胞及其生物学特征。
肿瘤干细胞鉴定技术一、肿瘤干细胞的生物学特征1.自我更新和分化能力在肿瘤干细胞中，只有极少数的干细胞可以不断更新和分化，形成不同类型的肿瘤细胞，并维持了肿瘤的生长和转移。
2.高表达肿瘤干细胞标记物CD44、CD133、EpCAM等干细胞标记物是肿瘤干细胞的共性，用这些标记物能够分离出具有肿瘤干细胞特性的细胞。
3.抗药性肿瘤干细胞具有耐药性，即能够在化疗或放疗后存活下来，并继续生长和分化，从而导致肿瘤复发和耐药性。
二、肿瘤干细胞的功能鉴定1.能力分析肿瘤干细胞的自我更新和分化能力是其最基本的生物特征，可以通过形成肿瘤瘤球和体外培养的方法来分析其发育潜能。
干细胞研究进展
干细胞研究进展【摘要】干细胞是人体及其各种组织细胞的最初来源，具有高度自我复制，高度增殖和多向分化的潜能。
干细胞研究正在向现代生命科学和医学的各个领域交叉渗透，干细胞技术也从一种实验室概念逐渐转变成能够看得见的现实。
干细胞研究已成为生命科学中的热点。
基于此，本篇文章就干细胞的最新研究进展情况进行了综述，旨在为读者提供了解干细胞研究的平台。
【关键词】干细胞；肿瘤干细胞；神经干细胞干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下它可以分化成多种功能细胞。
干细胞的用途非常广泛，涉及到医学的多个领域。
目前科学家已经能够在体外鉴别、分离、纯化、扩增和培养人体胚胎干细胞，并以这样的干细胞为“种子”，培育出一些人的组织器官。
干细胞及其衍生组织器官的广泛临床应用，将产生一种全新的医疗技术，也就是再造人体正常的甚至年轻的组织器官，从而使人能够用上自己的或他人的干细胞或由干细胞所衍生出的新的组织器官，来替换自身病变的或衰老的组织器官。
本文将对肿瘤干细胞、心肌干细胞以及神经干细胞的研究做如下综述。
1、肿瘤干细胞概述1.1肿瘤干细胞学说的提出。
1960年以来，许多动物实验证明只有当肿瘤细胞数大于100万时才可以形成新的肿瘤。
一些研究显示并不是所有的肿瘤细胞都能增殖，可能只有小部分肿瘤细胞具有滞留源性，而大部分是肿瘤起始细胞或肿瘤干细胞。
随着对干细胞研究的不断深入，发现干细胞和肿瘤干细胞之间具有许多共同特征：他们都具有多向分化潜能和自我更新能力，以及相似的细胞表面标志和相同的信号调节通路等[1]。
于是提出肿瘤起源于肿瘤干细胞，是一种干细胞疾病，肿瘤是正常干细胞累计突变的结果，“肿瘤干细胞学说”应运而生。
1.2肿瘤干细胞的分离和鉴定。
近年来，干细胞研究的发展很大程度上依赖于细胞分化抗原的研究进展，细胞表面特异性标志的确定是肿瘤干细胞分离的第一步。
一般原则为结合谱系标志，正常干细胞特异标志（如btsc的cd133与分离lsc的cd34）以及正常组织特异性标志等综合评价[2]，很多学者认为结合阳性标志和阴性标志可以更有效地分离干细胞。
干细胞的不对称分裂-对称分裂与肿瘤
干细胞的不对称分裂\对称分裂与肿瘤摘要干细胞通过对称和不对称分裂进行增殖。
前者多发生于发育过程或受伤害后的增殖过程中,而后者在使干细胞维持自身特性(自我更新)的同时也能产生分化的后代细胞,是其维持合适的干细胞数的一种方式,因而被认为是干细胞的典型特征。
干细胞对称分裂和不对称分裂之间的平衡对成体再生能力起关键作用,失调则可能导致肿瘤。
本文将对目前已取得的干细胞不对称分裂机制研究进展及与肿瘤发生关系进行讨论。
关键词干细胞;不对称分裂;对称分裂;肿瘤中图分类号q253文献标识码a文章编号1674-6708(2010)20-0058-02干细胞,是分化程度较低,仍具分化成不同类型细胞的潜能,且可自我更新的一类细胞。
它既可“自我更新”,产生更多的干细胞维持自身分化发育潜能,又可产生分化细胞。
其完成这两项任务的一种方式是不对称分裂,即每个干细胞分裂产生一个有干细胞特性的子细胞(自我更新)和一个分化的子细胞。
这种分裂方式在其它类型细胞中很罕见,它使细胞一次分裂便可完成两个任务,效率高且可维持干细胞数目稳定。
而干细胞的数量在发育过程中和受损后再生过程中会显著增加,因此干细胞的增殖方式不仅包括不对称分裂,还有对称分裂。
对称分裂是产生具有同样命运子细胞的分裂方式。
当一群干细胞被作为一个群体看待时,具有同样发育潜能的干细胞可能在一些分裂过程中只产生具有干性的子细胞,而在另一些分裂过程中则只产生分化细胞。
总的来说,干细胞可完全依赖于对称分裂或依赖于对称分裂和不对称分裂的组合。
在模式生物caenorhabditis elegans,drosophila和脊椎动物的研究中,干细胞的这两种分裂方式均有充足的证据。
在本篇综述中,我们将探究多数干细胞对称或不对称的分裂模式及这两种模式之间如何受发育阶段和环境中信号调控达到平衡以产生适当数量的干细胞和分化的子细胞。
在此,我们根据细胞分裂产生子细胞命运的不同将其分为对称分裂和不对称分裂。
人食管鳞癌细胞系EC109中肿瘤干细胞的分离(富集)与鉴定
【 键 词 】 食 管鳞 状 细胞 癌 ； 瘤 干 细 胞 ； 胞 球 ； Ｃ ０ 关 肿 细 Ｅ １９
【 图分 类 号 】 Ｒ ３ ． １ 中 ７ ７ ３ 【 献 标 志 码】 Ａ 文
Ｉｏ ａ ｉｎ（ ｎ ｉ ｈ ｎ ） ｎ ｈ ｒ ｃｅ ｉａ ｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｒ ｓｅ ｃ ｌ ｎ ｅ ｏ ｈ ｇ ａ ｅ ｕ ｍｏ ｓｃ ｌ ｃ ｒ ｉ ｏ ｅｌｌ ｅ Ｅ ０ ｓｌｔ ｏ ｅ ｒｃ ｍｅ ｔ ａ ｄ ｃ ａ ａ ｔ ｒｚ ｔ ｆｃ ｎ ｅ ｔｍ ｅｌ ｉ ｓ ｐ ａ ｅ ｌｓｑ ａ ｕ ｅｌ ａ ｃｎ ｍａ ｃ ｌ ｉ Ｃ１ ９ ｏ ｓ ｎ
ＣＵＩＸｉ ｎ ， ＡＮＧ ｎ ， ａｇ Ｙ Ｌａ ｇ ｙＵ ａ ， Ｑｉｎ ＲＥＮ ｎ ， Ｙｏ ｇ ＧＵＯ ｈ ｎ －ｕ 。 ＬＩ Ｑｉｎ ， Ｕ ｎ ， Ｚ ｅ ｇ ｊ ｎ ， Ｕ ａ ＡＮ ｕＷＵ ＺＨＡＮＧ ｅ ｇ ｗｕ ｏ ｇ ＢＩ Ｘｉ— ， Ｃｈ ｎ －
ｄ ｉ１ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ６ ４２ ５ ． ０ ２ ０ ． １ ｏ ： ０ ３ ６ ／．ｓ ｎ １ ７ — ２ ７ ２ １ ． ３ ０ １
・
论 著 ・
人食 管鳞 癌 细胞 系 Ｅ １ ９中肿 瘤 干细胞 的 Ｃ ０
分 离 （ 集 ） 鉴 定 富 与
崔翔 ， 浪 于 茜 任 勇。 郭政 军 刘 强。 刘 庆 崔 有宏 卞修 武 ， 杨 ， ， ， ， ， ， ， 张成武¨
Ｍ ｅ ｃ ｌＵｎ ｖ ｒ ｉｙ， ｏ ｔ ｗｅ ｔ ｎ ｅ ｎ ｅ Ｃｈ ｎ ｑ ｎ ｔ ０ ３ ） ｄｉａ ｉ ｅ ｓｔ Ｓ ｕ ｈ ｓ Ｃａ ｃ ｒ Ｃｅ ｔｒ， ｏ ｇ ｉ ｇ Ｃｉｙ ４ ０ ８
［ ｓｒｃ］ Ｏｂ ｅｔ ｅ Ｔｏ ｉｏａｅ ｅ ｒ ｈ ａ ｄ ｃ ａａ ｔｒｚ ｈ ａ ｃ ｒｓｅ ｃｌ ｎ ｅ ｏ ｈ ｇ ａ ｓｑ ａ ｕ ｅｌ Ａｂ ｔａ ｔ ｊｃｉ ｖ ｓ ｌｔ／ ｎ ｉ ｎ ｈ ｒｃｅ ｉ ｔ ｅｃ ｎ ｅ ｔｍ ｅｌ ｉ ｓ ｐ ａ ｅ ｌ ｅ ｕ ｍｏ ｓ ｃｌ ｃ ｅ ｓ
胃癌细胞系SGC-7901肿瘤干细胞样细胞的分离和鉴定
文献 标识码 ： Ａ
文章 编号 ： １ ６ ７ ２
近年研 究 表 明 ， 肿瘤是一种 干细胞疾病 ， 在 多 种 实体 瘤及 其 衍 生 肿 瘤 细 胞 系 中 已经 发 现 了 肿 瘤 干 细胞 的存 在 ， 胃癌 干 细 胞 的 研 究 虽 进展 缓 慢 但 逐 渐 受 到 重 视ｌ ＿ 】 ］ 。Ｌ ｉ 和 Ｓ ｈ ｅ等 运 用 Ｓ ｉ ｄ ｅ Ｐ ｏ ｐ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
（ Ｓ Ｐ ） 法 证 明 了 不 同 胃癌 细 胞 系 中 Ｓ Ｐ 细 胞 的 干 细 胞
试剂 Ｅ ． Ｃ ｏ ｌ ｉ ｐ ｏ ｌ ｙ Ａ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ （ ＮＥ Ｂ ） 、 Ｍ— ＭＩ Ｖ Ｒ ｅ —
ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ Ｔｒ ａ ｎ ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ ａ ｓ ｅ （ 美国Ｐ ｒ ｏ ｍｅ ｇ ａ 公 司） ， Ｓ ＹＢ Ｒ ⑧
［ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ （ Ｓ Ｐ ） 侧群 细胞的含量 ； ＮＯ Ｄ／ Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ 鼠体 内异 位 移 植 成 瘤 实 验 检 测 成 瘤 能 力 ； 基 因 芯 片技 术 筛 选 悬 浮 细 胞 球 与
贴 壁 细胞 差 异 表 达 的 基 因 ； 实 时荧 光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ验证基 因芯片结果 。 结 果 （ ８ ． Ｏ （ ］ ±０ ． ５ ４ ） Ｓ Ｇ Ｃ ７ ９ ０ １细 胞 在 无
Ｐ ｒ ｅ ｍｉ ｘ Ｅ ｘ Ｔ ａ ｑ Ｉ Ｉ （ Ｅ ｔ 本 Ｔａ ｋ ａ ｒ ａ公 司 ） ， 华 联 表 达
谱 基 因芯 片 （ 上 海康 成生 物工 程 ） 。
１ ． １ ． ２ 动 物 雌性 ＮＯＤ ／ Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ 鼠［ 上 海 实 验 动物
肿瘤干细胞
解决肿瘤问题的方案
⑴基因治疗：通过分析肿瘤干细胞和一般肿瘤细胞之间基因 表达的差异,从而检测出不同类别细胞对治疗的敏感性,指 导用药，还可以把多表达于肿瘤干细胞的一些基因序列作 为肿瘤治疗的靶点。
⑵调控信号传导通路：肿瘤干细胞具有和正常干细胞相同的 调控自我更新的信号传导通路，可以通过抑制这些信号通 路来杀伤肿瘤干细胞，但是否会同时抑制正常干细胞而发 生严重的毒副作用还有待于探讨。
• 微环境对于干细胞定位、增殖 和分化具有关键意义，甚至决 定干细胞的分化方向。细胞的 增殖水平与分化方向要接受外 界信息的指令。慢性组织损伤 是肿瘤发生的原因之一,吸烟、 饮酒、胃溃疡、胃酸反流、炎 性肠炎等因素均可引起损伤组 织的不断更新,干细胞长期处在 细胞分裂和信号传导途径的激 活状态，如果无法还原到静止 期，干细胞就发展成为了肿瘤 干细胞。
• 干细胞是一类具有自我更新能力和多向分 化潜能的原始细胞 • 恶性肿瘤进行性生长、转移和复发的特点 与干细胞的基本特性十分相似
• 推测肿瘤是干细胞分化增殖失调而产生的 异常组织
肿瘤干细胞研究的临床启示
肿瘤干细胞研究的临床意义
• 根据肿瘤干细胞的特点，以及对微环境的 要求，可通过对微环境的改变，来诱导肿 瘤干细胞的分化及凋亡，抑制肿瘤干细胞 的增殖。寻找诱导分化的药物。 • TSC理论可以解释临床上肿瘤对放射治疗与 化疗药物治疗不敏感的原因。TSC理论认为， 肿瘤一开始就有转移能力，只要TSC到达一 个新的区域，转移将不可避免。所以，肿 瘤治疗的焦点是杀伤TSC。
• ……
谢谢大家！
1997年Bonnet等首次确认了人类急性髓性白血病 中肿瘤干细胞的存在，并成功分离出来。研究 发现只有0．2%~1%的细胞亚群有持续的克隆形 成能力,与造血干细胞有相似的表型，即 CD34+CD38-Thy-细胞,这种细胞移植到NOD/SCID 小鼠后能形成类似AML的肿瘤细胞。
一步法快速分离鉴定肿瘤干细胞的单细胞微流控芯片
一步法快速分离鉴定肿瘤干细胞的单细胞微流控芯片马丛丛;朱强远;徐亚楠;牟颖【摘要】应用多层软光刻技术，以聚二甲基硅氧烷(PDMS)作为芯片材料，制作一种新型的可用于单细胞鉴定研究的微流控芯片(60 mm×40 mm×4 mm).将肺癌细胞 A549无血清悬浮培养富集肿瘤干细胞，制成单细胞悬液，与逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的反应液混合后通入芯片，细胞随机分布在2048个微腔室中裂解并进行RT-PCR.该芯片集细胞捕获、分离、裂解及聚合酶链式反应(PCR)于一体，实现了一步法快速鉴定肿瘤干细胞的目的，通过统计阳性小室数可计算出肿瘤细胞中肿瘤干细胞的比例.%Using multilayer soft lithography technology,poly-dimethylsiloxane (PDMS)as the chip material,we made a novel microfluidic chip (60 mm×40 mm×4 mm)for single cell identific ation research.We enriched tumor stem cells in serum-free suspension culture of lung cancer cell A549 into single cell suspension. RT-PCR reaction liquid mixed into the chip, and cells were randomly distributed and reverse transcription PCR (RT-PCR)in 2 048 micro chamber.The chip integrated in cellcapture,separation,lysing and PCR reaction to achieve rapid identificationof tumor stem cells. By counting the number of positive reaction,we could calculate the proportion of tumor stem cell in the total cells.【期刊名称】《吉林大学学报（理学版）》【年(卷),期】2016(054)006【总页数】6页(P1456-1461)【关键词】单细胞;微流控芯片;肿瘤干细胞;分离鉴定;一步法【作者】马丛丛;朱强远;徐亚楠;牟颖【作者单位】浙江大学工业控制技术国家重点实验室，分析仪器研究中心，生命科学学院，杭州 310058;浙江大学工业控制技术国家重点实验室，分析仪器研究中心，生命科学学院，杭州 310058;浙江大学工业控制技术国家重点实验室，分析仪器研究中心，生命科学学院，杭州 310058;浙江大学工业控制技术国家重点实验室，分析仪器研究中心，生命科学学院，杭州 310058【正文语种】中文【中图分类】Q31单细胞分析对重大疾病的早期诊断、治疗、药物筛选及细胞生理、病理过程的研究有重要意义[1-2]. 传统的细胞学研究依赖于大量细胞(103～104个),将群体值作为反应结果[3],但相同状态下的细胞在表型和基因型方面也存在异质性[4-5]. 通过细胞群体分析获得的统计平均结果,掩盖了单个细胞之间的差异[1]. 检测单个细胞内化学组分,有助于检测和鉴别大量细胞群体中少量非正常细胞(如肿瘤干细胞和循环肿瘤细胞). 肿瘤干细胞(tumor stem cell,TSC)是肿瘤发生、发展、转移的主要原因,也是肿瘤复发与耐药的根源[6],目前对肿瘤干细胞理论的研究较少. Wallingford等[7]首次采用毛细管电泳(CE)分析单细胞,由于毛细管的结构限制,单细胞进样和溶膜操作复杂,分析速度慢,不易实现连续操作,因此连续测定的报道较少. 流式细胞仪技术可以实现高通量获取单细胞,但设备昂贵,需要专业人员操作及特定的抗体标记,且需要的细胞量较大(>104个),因此应用较少. 微流控芯片具有高通量、低消耗、微型化、集成化和大规模平行处理等特点,且微流控技术可以准确地操作分析微量样品,从而为单细胞的研究提供了一个新平台[8-10]. 文献[11-14]通过重力、流体力、磁力实现对单细胞的捕获,但均不能在芯片上进行单细胞后续分析. White等[15]研制出单细胞RT-qPCR微流控芯片,该芯片集成了细胞捕获、裂解、逆转录以及聚合酶链式反应(PCR),但其捕获细胞及进样依赖于微阀控制,芯片结构复杂,且通量较低(300个/次). 本文基于文献[16-17]设计针对单细胞研究的微流控芯片,实现了单细胞捕获、裂解、逆转录PCR(RT-PCR)于一体,一步法快速实现对肺癌细胞A549中肿瘤干细胞的鉴定及分析. 该芯片操作简单、价格低廉,并具有微阵列芯片高通量的特性.1.1 试剂与仪器A549肺癌细胞(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)； SU8-3025,SU8-3050负性光胶(美国MicroChem Corp公司)；聚二甲基硅氧烷(PDMS,美国Dow Corning公司)； MGL96G型PCR仪(杭州朗基科学仪器有限公司)；Maestro Ex IN-VIVO IMAGING SYSTEM型荧光成像仪(美国CRI Maestro公司)；IX71型荧光倒置显微镜(日本Olympus公司)；TaqMan® One-Step RT-PCR Master Mix Reagent Kit(美国Life Technologies公司)； DMEM/F-12培养基(美国Thermo Scientific公司)；细胞计数仪(美国Life Technologies公司).1.2 微流控芯片的设计与制作用Corel DRAW软件设计芯片通道图样,采用多层软光刻技术制作芯片模具. 微流控芯片包括3层PDMS和防水涂层,用玻璃片封接底部. 先配m(PDMS单体(A))∶m(PDMS固化剂(B))=5的PDMS预聚合物,抽真空除气后,旋涂到模具上,85 ℃烘烤使其凝固. 再配制m(A)∶m(B)=10的PDMS预聚合物,倾倒在模具上,厚度为4 mm,于85 ℃烘烤40 min; 再配制m(A)∶m(B)=30的PDMS预聚合物,旋涂到空白硅片上作为基底层,于85 ℃烘烤40 min. 将PDMS层从模具上剥下,打孔,再将其覆到基底层PDMS上,于85 ℃烘烤黏合. 待两层PDMS黏合后从控制层模具上剥下切割成合适体积的块,将盖玻片和芯片用等离子体处理后,黏合并于85 ℃下烘烤4 h固定.1.3 肿瘤干细胞培养及分离取对数期生长的A549细胞,用体积分数为0.25%的胰蛋白酶消化,制成单细胞悬液,用无血清DMEM/F-12培养液培养. 在100 mL DMEM/F-12培养液中,先加入100 μg/mL表皮生长因子(EGF)50 μL,再加入100 μg/mL碱性成纤维生长因子(bFGF)和白细胞介素-6(IL-6)各20 μL. 每隔2 d添加1次培养液(半数换液),直至球体形成收集细胞,TrypLETM Express酶消化,离心制成单细胞悬液,用细胞计数仪计数.1.4 肿瘤干细胞染色用ALDEFLOUR®试剂盒对肿瘤干细胞染色. 取1 mL A549细胞和培养7 d后的A549 CSC制成单细胞悬液于1.5 mL EP管中,1 000 r/min离心5 min,弃上清液,向EP管中加入1 mL的ALDHFLOUR®缓冲液轻轻吹打,再向其中加入10 μL的ALDHFLOUR®染料并用移液枪反复吹打,使细胞充分接触染料,置于37 ℃培养箱中温育40 min. 染色完成后,用1 mL 1×PBS(磷酸盐缓冲液)冲洗3遍,最后加入1 mL 1×PBS重悬,用细胞计数仪计数统计.1.5 微流控芯片进样及反应配制反应体系：将一步法反应混合物5 μL、无RNA酶水10 μL、 CD133探针1 μL、φ(吐温)=0.1% 1 μL及A549 CSC细胞悬液3 μL混匀,取4.5 μL样品通入芯片.PCR反应程序：50 ℃预热2 min；95 ℃预变性10 min；95 ℃变性15 s,60 ℃退火延伸60 s,进行45个循环.1.6 检测和分析反应结束后,用荧光成像仪进行观察,用电荷耦合元件(CCD)成像系统对芯片的反应结果进行成像,荧光激发光为455 nm,发射光为520 nm. 成像后用软件分析,可计算阳性小室个数.2.1 用于单细胞研究的微流控芯片设计与制作设计的微流控芯片是一种集细胞分离捕获、操纵、溶胞及检测等多个步骤于一体的用于单细胞分析的集成流路芯片装置,其结构如图1所示. 芯片共4层,包括上层10∶1的PDMS支撑层、防蒸发的纳米涂层、5∶1的PDMS微阵列层以及30∶1的PDMS基底层,最后用玻璃片封接芯片底部. 芯片尺寸为60 mm×40 mm×4 mm (图1(C)),一张芯片包括两个反应区,每个区含有2 048个小室,小室的尺寸为100 μm× 100 μm × 250 μm,小室体积为2.5 nL. 芯片只有进样口而无出样口,从而防止反应液流出导致气溶胶污染，且节省试剂. 测得所培养的肿瘤干细胞直径为10～30 μm. 为防止细胞在通道中发生堵塞,设计的通道宽为50 μm、高为40 μm. 芯片的通道结构逐级等分,进样口到每个小室的距离等距,从而保证反应液均匀分布在各小室中. 芯片有一层PDMS基底层,可保证小室四周均为PDMS,避免通入细胞后产生贴壁现象. 该装置无需外接驱动系统和阀门开关控制装置,减少了装置的复杂性,在高通量、低消耗和大规模平行处理方面具有较大优势.2.2 微流控芯片的进样设计的芯片利用PDMS溶气性原理驱动实现无动力、无阀进样. 当PDMS脱气后,芯片处于负压状态,当与外界大气相通时,芯片的内外压力差驱使液体引入芯片. 反应液和油相在压力差的作用力下相继引入芯片,反应液先进入通道再进入反应小室,然后油相进入通道,将主通道中的样品溶液冲入后续的反应小室,直至样品进入所有的反应小室,从而将反应样品封入反应小室内,使其在反应过程中彼此独立,实现样品的无阀隔离与自吸分液式进样. 进样过程如图2所示.2.3 单细胞捕获将细胞制成单细胞悬液,稀释成特定浓度,与RT-PCR的反应液混合后通入芯片,使通入芯片的细胞数约为微反应室数目的3/4(1 500/2 048). 图3为细胞通入芯片后,在荧光倒置显微镜下观察细胞在微反应室中的分布情况. 由图3可见,细胞随机分配到微反应室中,实现了单细胞捕获.2.4 RT-PCR反应结果分析反应完将芯片擦拭干净,用荧光成像仪观察反应结果,激发光为455 nm,绿色荧光发射波长为520 nm. 图4(A)和(B)分别为A549普通肿瘤细胞和无血清悬浮培养7 d 后的A549 CSC用一步法的RT-PCR反应结果,其中绿色亮点表示阳性反应,右侧图为荧光倒置显微镜下观察到的细胞在微反应室中的分布情况,分别对应左侧反应结果荧光图中的红色框区域. 由图4可见,多数含有细胞的微反应室反应结果呈阴性,说明原始细胞中只有少数肿瘤干细胞,而反应结果呈阳性(绿色框)的微反应室所含的细胞为肿瘤干细胞. 因此,利用所设计的单细胞微流控芯片通过一步法可以达到快速鉴定肿瘤干细胞的目的.在显微镜下观察细胞在微反应室中的分布情况,反应结束后统计荧光亮点(阳性微反应室),可计算出阳性百分数(原始细胞中含有肿瘤干细胞的百分数),实现对肿瘤干细胞的定量分析,计算结果列于表1. A549细胞中含有少量具有干性的细胞,可通过无血清悬浮培养进行筛选,达到富集的目的. 由表1可见,A549细胞中约含有(2.64±0.22)%的干性细胞,通过无血清悬浮培养后干性细胞百分数为(10.08±1.19)%,表明无血清悬浮培养能达到富集肿瘤干细胞的目的.2.5 肿瘤干细胞的染色结果分析ALDEFLUOR®试剂盒法是根据乙醛脱氢酶(ALDH)的底物氟化硼配合氨基乙醛(BAAA)可以通过自由扩散进入细胞膜,并在细胞内被ALDH氧化成具有极性荧光的物质,使高表达ALDH的细胞带有绿色荧光. 基于ALDH活性的Aldefluor分析法已应用于分选和鉴定多种肿瘤干细胞[18-20]. 邹爱梅[21]通过Alderflour流式细胞仪从A549细胞株分选出ALDH1+细胞,并研究了其生物学功能,发现ALDH1+细胞仅占(2.00±0.26)%,相比于A549细胞,由于ALDH1+肺癌细胞具有自我更新、增殖克隆、迁移以及高致瘤性,具备肿瘤干细胞特性,因此ALDH1可作为肺癌干细胞的标志物. ALDEFLUOR®试剂盒染色后用细胞计数仪检测A549细胞和A549 CSCs染色情况,激发光为488 nm,发射光为525 nm. 染色法统计结果表明,A549细胞中ALDH1+百分数约为(2.12±0.91)%,与文献[21]中用流式细胞仪检测结果相符,无血清悬浮培养7 d后ALDH1+百分数约为(12±0.94)%. 用单细胞微流控芯片检测与染色法检测结果相符,表明本文设计用于单细胞研究的微流控芯片可用于肿瘤干细胞的鉴定及定量分析.微流控芯片用于单细胞分析,可将细胞捕获分离、培养、分选、裂解、反应以及分析检测等步骤集成在一块芯片上,微流控装置能准确操纵单细胞，使其成为单细胞研究的重要工具[22-24]. 本文研制的单细胞微流控芯片,可将数千个细胞单独分隔到不同的微反应室,不再互相干扰,也不易发生漏检,随即将分离的单细胞直接裂解并进行RT-PCR. 反应结束后,芯片可以直接在荧光成像仪或荧光显微镜上观察反应结果,无需开盖进行电泳分析,不会对实验环境产生产物气溶胶污染.综上所述,本文研制的微流控芯片可自吸分液式进样,无需辅助设备控制流路. 芯片易操作、敏感度高(单细胞)、准确性好(可计数)、节省试剂(几微升/芯片),适于实验室进行肿瘤干细胞等稀少细胞的快速鉴定. 为肿瘤干细胞的研究提供了一种单细胞分离与特异性鉴定的新工具,可用于鉴定肿瘤干细胞的分子遗传特征和特异标志物,解决了肿瘤干细胞特异性鉴定较难的问题，可用于癌症及感染性疾病的早期诊断、单细胞分析以及产前诊断.【相关文献】[1] Di C D,Aghdam N,Lee L P. Single-Cell Enzyme Concentrations,Kinetics,and Inhibition Analysis Using High-Density Hydrodynamic Cell Isolation Arrays [J]. Analytical Chemistry,2006,78(14): 4925-4930.[2] Ryan D L,REN Kangning,WU Hongkai. Single-Cell Assays [J]. Biomicrofluidics,2011,5(2): 1399-1406.[3] Toriello N M,Douglas E S,Thaitrong N,et al. 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手术切除的结直肠癌组织中的肿瘤干细胞的培养及鉴定
手术切除的结直肠癌组织中的肿瘤干细胞的培养及鉴定唐娜;周略;成志强;邓永键;丁彦青【摘要】目的获得结直肠癌患者手术切除癌组织的肿瘤干细胞(CSC),培养并鉴定其干细胞特性.方法通过原代培养手术切除结直肠癌组织获得结直肠癌细胞,再通过有限稀释法和无血清培养法筛选结直肠癌CSC,软琼脂集落实验检测CSC和对照组人结直肠癌细胞株SW480的增殖能力;用低数量级细胞裸鼠皮下成瘤实验,检测结直肠癌CSC和SW480的成瘤能力;并运用Western blot及免疫荧光方法,检测CSC和SW480的免疫表型.结果临床结直肠癌标本原代培养的CSC,加入血清培养可使CSC分化.软琼脂集落形成实验结果显示,原代培养的CSC克隆形成率为56.64％和54.45％,对照组人结直肠癌细胞株SW480的克隆形成率为4.41％,CSC 与SW480集落形成率的差异具有统计学意义(P<0.01).裸鼠皮下成瘤实验中,原代培养的CSC皮下注射500个细胞可形成皮下瘤,而SW480皮下注射500个细胞不形成皮下瘤.CSC表达CD133、CD44,不表达CK7;SW480细胞不表达CD133、CD44,表达CK7.结论原代培养的手术切除结直肠癌组织标本获得的肿瘤细胞,再行无血清培养可形成CSC,鉴定具有CSC的自我更新及分化能力.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2019(039)004【总页数】7页(P415-421)【关键词】肿瘤干细胞;结直肠癌;原代培养【作者】唐娜;周略;成志强;邓永键;丁彦青【作者单位】南方科技大学第一附属医院//深圳市人民医院病理科,广东深圳518020;暨南大学第二临床医学院//深圳市人民医院病理科,广东深圳518020;南方科技大学第一附属医院//深圳市人民医院放疗科,广东深圳518020;南方科技大学第一附属医院//深圳市人民医院病理科,广东深圳518020;南方医科大学南方医院病理科,广东广州510515;南方医科大学基础医学院病理学系,广东广州510515;南方医科大学南方医院病理科,广东广州510515;南方医科大学基础医学院病理学系,广东广州510515【正文语种】中文肿瘤干细胞（CSC）学说认为CSC是肿瘤发生、转移和复发的根源，这群细胞有自我更新能力、无限增殖、多向分化潜能的干细胞特性［1］。
肿瘤干细胞
肿瘤干细胞研究的前景及方向
继续寻找各类肿瘤干细胞特异性的表面 标记，以便进一步分离、纯化肿瘤干细 胞，并设计针对肿瘤干细胞的特异性的 治疗方案；
进一步阐明正常干细胞生理和肿瘤干细 胞病理生理功能的分子调控途径以及导 致成肿瘤干细胞生成的分子机制，以便 找到新的治疗靶点； 进一步研究肿瘤细胞群体的异质性并设 计综合性的治疗方案。
二 起源于过渡细胞群 过渡细胞群细胞也有可能成为肿瘤突 变的靶细胞，过渡细胞的突变可使其重 新获得自我更新能力并诱导干细胞表面 标记的表达，从而成为肿瘤干细胞。
肿瘤干细胞和正常干细胞自我 更新的共同调控途径
（一）Bmi-1信号通路 Bmi-1是一种转录抑制因子，在小鼠 和人的HSC中呈高表达，说明Bmi-1可能 参与正常造血。 Bmi-1通过抑制 P16lnk4a和P19Alf蛋白的表达发挥作用， 这两种蛋白分别具有抑制细胞增殖和促 进细胞死亡功能
研究人员将Bmi-1基因敲除小鼠的干细胞 植入放射线照射后的正常小鼠体内，发 现HSC只能短暂地产生正常血细胞，至 第8周时来源于植入细胞的血细胞几乎全 部消失。同时，如果第6周时将该植入小 鼠的骨髓再次植入第二只小鼠体内，则 未见Bmi-1缺失的血细胞生成。
肿瘤干细胞研究的临床启示
肿瘤干细胞可逃避放疗和化疗药物 的作用， 的作用，是肿瘤耐药和复发的根源
肿瘤干细胞
武汉大学医学院免疫学系
概述
肿瘤-较均质的细胞群体 20世纪50年代提出-异质性-肿瘤干细胞 目前已证实: 白血病干细胞 乳腺癌干细胞 脑癌干细胞
干细胞的分裂特性
它们分裂时,一个子细胞分化成特定类型 的细胞并最终停止分裂,而另一个仍保持 干细胞的特性,以相同的途径再次分裂的 能力
传统观点
肿瘤干细胞的研究进展
肿瘤干细胞的研究进展肿瘤干细胞（Tumor Stem Cells，TSCs）是一类具有自我更新能力和多向分化能力的肿瘤细胞，被认为是导致肿瘤发生、发展和复发的重要原因之一、对肿瘤干细胞进行研究可以帮助我们深入理解肿瘤的起源和进展机制，并为癌症的治疗和预防提供新的策略。
本文将从肿瘤干细胞的鉴定、功能、调控以及应用方面总结目前的研究进展。
首先，肿瘤干细胞的鉴定是研究的基础。
一般通过其中一种特定的表面标志分离和鉴定肿瘤干细胞，如CD133+、CD44+、CD24-/low和ALDH1等。
然而，不同的肿瘤类型和个体之间对肿瘤干细胞的标志物可能存在差异，因此需要针对不同类型的肿瘤进行个体化的鉴定。
其次，肿瘤干细胞在肿瘤的进展中具有重要的功能。
肿瘤干细胞具有自我更新和多向分化的能力，可以不断产生非干细胞的肿瘤细胞。
此外，肿瘤干细胞还具有抗药性和逃避免疫监视的能力，使得肿瘤在治疗过程中往往难以彻底清除。
因此，针对肿瘤干细胞的治疗策略是目前研究的热点。
第三，肿瘤干细胞的功能通过多种分子机制进行调控。
在肿瘤微环境中，肿瘤干细胞受到多种信号通路的调控，包括Wnt、Hedgehog、Notch、PI3K/AKT和JAK/STAT等信号通路。
这些信号通路在维持肿瘤干细胞的自我更新和多向分化能力以及抗药性和免疫逃避方面发挥着重要的作用。
因此，针对肿瘤干细胞的治疗策略可以通过影响这些信号通路来实现。
最后，肿瘤干细胞的研究已经在临床应用方面取得了一些进展。
目前，一些肿瘤干细胞标志物已经被用于肿瘤的诊断和预后判断。
此外，针对肿瘤干细胞的治疗策略也在临床试验中进行。
例如，靶向维持肿瘤干细胞自我更新和多向分化能力的信号通路的药物已经在临床试验中展示出一定的治疗效果。
然而，由于肿瘤干细胞的异质性和复杂性，其治疗策略仍然存在一定的挑战。
总之，肿瘤干细胞的研究为我们深入理解肿瘤的起源和进展机制提供了新的视角，并为肿瘤的治疗和预防提供了新的思路。
胃癌细胞系SGC-7901肿瘤干细胞样细胞的分离和鉴定
胃癌细胞系SGC-7901肿瘤干细胞样细胞的分离和鉴定许扬梅;龚福生;陈雪芳;郑秋红【摘要】Objective To identify gastric cancer stem-like cells in SGC-7901 cell line . Methods SGC-7901 cells were cultured in the serum free media at a density of 1 000 cells/mL to form spheres . Side Population (SP ) was tested by flow cytometry to identify cancer stem-like cells . The in vivo NOD/SCID xenograft assay was done to test their tumor-forming capacity . Microarray experiment was used to search for differentially expressed genes between floating spheres and adherent cells ,and the re-sults were further confirmed by real-time flurogenetic quantitative PCR (RFQ-PCR ) . Results Only (8 .00 ± 0 .54)% of SGC-7901 cells could form floating spheres in serum free media , which contained (12 .34 ± 1 .01)% of SP cel ls . Tumor formation assay showed that sphere cells were more tumorigenic than adherent cells . Microarray experiment revealed that sphere cells highly expressed stem cell associat-ed proteins :ABCG2 ,HES1 and KRT153 ,which were verified by RFQ-PCR . Conclusions SGC-7901 cell line contains gastric cancer stem-like cells .%目的：探讨人胃癌细胞系SGC-7901中鉴定胃癌干细胞样细胞。
肿瘤干细胞的分离和鉴定
肿瘤干细胞的分离和鉴定随着现代医学的发展，对肿瘤的研究也日趋深入。
其中一个研究方向是肿瘤干细胞的分离和鉴定。
这个领域的重要性在于，肿瘤干细胞是一类能够自我更新并在肿瘤生长、转移和复发中起关键作用的细胞。
因此，对肿瘤干细胞的研究有望为肿瘤治疗提供新的思路和方法。
1. 肿瘤干细胞的定义和特点肿瘤干细胞是一类具有自我更新和多能分化特性的肿瘤细胞。
它们是肿瘤中能够产生各种不同类型细胞的祖细胞，并且有能力维持肿瘤的生长和发展。
与普通肿瘤细胞不同的是，肿瘤干细胞具有更强的代谢活性、更强的生存能力和更高的抗药性。
此外，肿瘤干细胞能够逃避免疫系统监控，从而在肿瘤发展进程中起到重要的作用。
2. 肿瘤干细胞的分离和鉴定方法肿瘤干细胞的分离和鉴定是肿瘤干细胞研究的基础。
目前主要的方法有以下几种：（1）细胞表面标记法通过将不同的细胞表面分子标记成不同的颜色，然后利用流式细胞术或细胞排序技术将不同的肿瘤细胞分离出来，从而分离和鉴定肿瘤干细胞。
常用的肿瘤干细胞表面标记分子包括CD133、CD44、CD24等。
（2）肿瘤球形体法肿瘤球形体法是通过将肿瘤细胞培养在特殊的培养基中，使细胞形成三维球状结构，从而富集肿瘤干细胞。
随着肿瘤球体的扩大，肿瘤干细胞比例会不断增加，从而方便肿瘤干细胞的研究。
（3）功能鉴定法通过对肿瘤细胞进行体外悬浮培养，利用细胞双层培养室将肿瘤细胞暴露在低氧环境中，从而富集肿瘤干细胞。
然后通过肿瘤球体形成、体内移植等一系列功能实验验证肿瘤干细胞的存在和功能。
3. 肿瘤干细胞在肿瘤治疗中的应用前景肿瘤干细胞的存在和作用是肿瘤治疗中的重要问题。
肿瘤干细胞具有较强的抗药性和低的分裂速度，这使得传统的化疗和放疗很难对其产生杀伤作用。
因此，发现并针对肿瘤干细胞的治疗方法成为了肿瘤治疗的重要方向。
（1）肿瘤干细胞抗靶向药物治疗由于肿瘤干细胞具有较强的自我更新、多能分化和抗药性等特点，它们成为了肿瘤治疗的一个难题。
近年来，研究人员发现肿瘤干细胞表面分子的存在为对其进行靶向治疗提供了可能。
肺腺癌细胞株SPC-A1中侧群细胞的分离与肿瘤干细胞样特征的鉴定
肺腺癌细胞株SPC-A1中侧群细胞的分离与肿瘤干细胞样特征的鉴定朱言亮;陈龙邦;王靖华;褚晓源;陈一天;张群;夏欣一【摘要】背景与目的近来已有充分的研究表明在实体肿瘤中存在肿瘤干细胞,肿瘤干细胞的发现改变了我们对肿瘤发生机制及化疗耐药的观点.本文拟从人肺腺癌细胞株中分离并鉴定具有干细胞特征的肿瘤干细胞样细胞.方法采用无血清培养结合流式细胞术分离人肺腺癌细胞株中的边群细胞(SP,side population),通过增殖能力、克隆形成、裸鼠成瘤及表型分析鉴定其干细胞特性.结果肺腺癌细胞株中存在SP细胞,经无血清培养后,SP细胞的比例显著提高.SP细胞具有高增殖活性、高克隆形成率及强致瘤性.具有肿瘤干细胞的特性.结论人肺腺癌细胞株中存在具有肿瘤干细胞性质的SP细胞,无血清培养可以富集肺腺癌细胞株中的SP细胞.【期刊名称】《中国肺癌杂志》【年(卷),期】2008(011)005【总页数】5页(P681-685)【关键词】肿瘤干细胞;细胞培养;肺肿瘤;分离【作者】朱言亮;陈龙邦;王靖华;褚晓源;陈一天;张群;夏欣一【作者单位】210002,南京,南京军区总医院肿瘤内科;210002,南京,南京军区总医院肿瘤内科;210002,南京,南京军区总医院肿瘤内科;210002,南京,南京军区总医院肿瘤内科;210002,南京,南京军区总医院肿瘤内科;210002,南京,南京军区总医院肿瘤内科;210002 南京,南京军区总医院I临床检验中心【正文语种】中文【中图分类】R734.2近年提出的肿瘤干细胞学说认为肿瘤组织中存在极少量干细胞样癌细胞亚群，它具有无限增殖的潜能，在启动肿瘤形成和生长中起着决定性的作用[1,2]。
肿瘤干细胞的存在已经在白血病、胶质瘤及实体肿瘤如：乳腺癌、前列腺癌、结肠癌及胰腺癌中得到证实[3-5]。
但是由于缺乏有效的表面标记物及体外分离、培养困难等限制，实体肿瘤组织中肿瘤干细胞的研究进展缓慢，因此对细胞系的研究将为实体组织肿瘤干细胞的生物学研究奠定良好的基础。
肿瘤干细胞分离方法的研究进展
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肿瘤干细胞分离与分析技术
肿瘤干细胞分离与分析技术肿瘤干细胞（tumor stem cell，TSC）是肿瘤组织中具有增殖、分化、自我更新和肿瘤形成能力的一类细胞。
与普通癌细胞相比，TSC在肿瘤生长、转移和复发中起着关键作用。
因此，对TSC进行分离和分析具有重要的临床意义，有助于深入了解肿瘤的病理生理和治疗机制。
一、TSC分离技术TSC在肿瘤组织中数量极少，且不同类型的肿瘤中的TSC表达不同，因此TSC的分离技术具有一定的挑战性。
传统的TSC分离技术主要包括限制性稀释法、流式细胞术、排序细胞术和磁珠分选法。
1. 限制性稀释法这种方法是将肿瘤细胞以一定的浓度进行限制性稀释，使得每个细胞单独生长成一个肿瘤球体，由此分离出TSC。
这种方法简单易行，但效率较低，且分离出的细胞存活率较低。
2. 流式细胞术流式细胞术是一种高通量的TSC分离技术，可以通过TSC表面标志物鉴定和分离。
目前已经鉴定出许多TSC表面标志物，如CD44、CD133和CD24等。
通过流式细胞术，可以精确地分离出TSC，但仍存在一定的误差。
3. 排序细胞术排序细胞术是流式细胞术的一种改良方法，也是一种基于细胞表面标志物鉴定的技术。
与流式细胞术不同的是，排序细胞术采用电子脉冲或光束来分离细胞。
这种方法能够减少细胞损伤，提高细胞分离效率。
4. 磁珠分选法磁珠分选法是一种基于TSC表面标志物的分离技术，通过在TSC表面标志物上结合磁珠，然后用磁力分离出TSC。
这种方法具有高效、不依赖特殊设备且可以大规模筛选的优点。
二、 TSC分析技术TSC分析技术包括细胞培养、体外转移和肿瘤形成等实验方法。
这些方法可以用于探究TSC在肿瘤生长、治疗耐药和复发中的作用机制。
1. 细胞培养TSC细胞培养是TSC分离后的第一步，通过这种方法可以得到足量、纯度高的TSC，并且可以探究TSC的稳定性、增殖能力和分化能力。
目前，培养TSC的常用培养基为鼠肝基质上清液（Matrigel）。
在Matrigel中培养的TSC可以保持其自我更新和分化能力，从而为肿瘤的治疗提供理论基础。
无血清培养基分离并鉴定U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞
无血清培养基分离并鉴定U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞发表时间：2015-03-25T15:00:04.877Z 来源：《医药前沿》2014年第31期供稿作者：杨寒石1 袁峰 2 郭开今 2 孟柏屹 2 葛保健2 [导读] 骨肉瘤是一种起源于间叶组织的恶性肿瘤，多见于青少年。
杨寒石1 袁峰 2 郭开今 2 孟柏屹 2 葛保健2（通信作者）（1 徐州医学院研究生院 221002）（2徐州医学院附属医院骨科 221002）【摘要】目的应用无血清培养基分离U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞，并鉴定相关肿瘤标志物表达。
方法体外培养人骨肉瘤U2OS细胞株和U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞，免疫荧光检测U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞球中CD105表达。
采用免疫印迹法检测人骨肉瘤U2OS细胞株和U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞Nanog和Oct4蛋白表达。
采用半定量PCR检测人骨肉瘤U2OS细胞株和U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞SOX2、Nanog和Oct4 mRNA的表达。
结果荧光显微镜下可见，U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞球中部分细胞CD105呈阳性表达。
免疫印迹检测结果显示人骨肉瘤U2OS细胞株的Nanog和Oct4蛋白相对表达量为0.853±0.404和0.603 ±0.153，均明显低于U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞0.973±0.305 和0.827±0.322（均p<0.05）。
半定量PCR检测结果显示U2OS人骨肉瘤肿瘤干细胞SOX2、 Nanog和Oct4 mRNA的相对表达量为0.190±0.027、0.178±0.025、0.170±0.021，均明显高于人骨肉瘤U2OS细胞株0.032±0.009、0.086±0.016、0.019±0.006（均p<0.05）。
结论人骨肉瘤U2OS细胞株中存在肿瘤干细胞，无血清培养可用于分离培养人骨肉瘤肿瘤干细胞。
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＋ 在有 关 乳 腺 癌 的 研 究 中， 最早发现 Ｃ Ｄ ４ ４ －／ ｌ ｏ ｗ Ｃ Ｄ ２ ４ 乳腺癌细胞在非肥胖糖尿病重症联合免疫 缺陷（ ｎ ｏ ｎ ｏ ｂ ｅ ｓ ｅｄ ｉ ａ ｂ ｅ ｔ ｉ ｃ ／ ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ｅｃ ｏ ｍ ｂ ｉ ｎ ｅ ｄｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｄ ｉ ｆ ｉ
ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ，Ｎ Ｏ Ｄ／ Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ ） 小鼠体内具有较强的致瘤能力，
＋ －／ ｌ ｏ ｗ 认为 Ｃ Ｄ ４ ４ Ｃ Ｄ ２ ４ 为乳腺癌干细胞的免疫表型。 ＋ －／ ｌ ｏ ｗ 但Ｃ Ｄ ４ ４ Ｃ Ｄ ２ ４ 细胞群并非同质群体。 Ｇ ｉ ｎ ｅ ｓ ｔ ｉ ｅ ｒ １ ］ ＋ －／ ｌ ｏ ｗ 等［ 发现 Ｃ Ｄ ４ ４ Ｃ Ｄ ２ ４ 细胞群中可进一步分选出
肿瘤干细胞学说认为， 肿瘤是由一小群具有自我 更新能力的肿瘤细胞不断增殖分化形成的， 这群细胞 被称为肿瘤干细胞。肿瘤干细胞通过自我更新维持 自身的数量， 通过增殖分化形成整个肿瘤克隆。它们 可在体外形成克隆并无限传代； 可在动物体内致瘤产
生与原发肿瘤相似的肿瘤组织。现就目前肿瘤干细 胞的鉴定与分离方法作一综述。 １ 免疫表型 在许多实体肿瘤及血液系统肿瘤组织或细胞群 中均发现少量具有特定免疫表型的细胞具有干细胞 样特性。 １ １之光 陈波斌
【 摘要】 肿瘤干细胞被认为是肿瘤复发的根源。目前通过特定的免疫表型来分离鉴定肿瘤干细 胞是最常用的方法。侧群（ Ｓ Ｐ ） 细胞分离技术也已经相当成熟， 利用 Ｗｎ ｔ 通路在肿瘤细胞的表达活性差 异来分离肿瘤干细胞的方法正受到关注。构建干细胞龛来捕获肿瘤干细胞的方法有待进一步评价。 【 关键词】 肿瘤干细胞；免疫表型分型 Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎａ ｎ ｄｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ Ｌ Ｉ ＮＺ ｈ ｉ ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ，Ｃ Ｈ Ｅ ＮＢ ｏ ｂ ｉ ｎ ．Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｈ ｅ ｍ ａ ｔ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｈ ｕ ａ ｓ ｈ ａ ｎＨ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ，Ｆ ｕ ｄ ａ ｎＵ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ０ ４ ０ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ ：Ｃ Ｈ Ｅ ＮＢ ｏ ｂ ｉ ｎ ，Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ：ｂ ｏ ｂ ｉ ｎ ＿ ｃ ｈ ｅ ｎ ＠ｙ ａ ｈ ｏ ｏ ． ｃ ｏ ｍ 【 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｒ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｉ ｄ ｅ ｒ ｅ ｄｔ ｏ ｂ ｅ ｔ ｈ ｅ ｏ ｒ ｉ ｇ ｉ ｎｏ ｆ ｔ ｕ ｍ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｐ ｓ ｅ ．Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｙ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｍｂ ｙｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ａ ｌ ｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｅ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ｈ ｅｍ ｏ ｓ ｔ ｃ ｏ ｍ ｍ ｏ ｎ ｌ ｙｕ ｓ ｅ ｄｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ． Ｔ ｈ ｅｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅｏ ｆ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇＳ Ｐｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｓ ｖ ｅ ｒ ｙｍ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ．Ｍ ｏ ｒ ｅａ ｔ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓａ ｒ ｅｂ ｅ ｉ ｎ ｇｐ ａ ｉ ｄｔ ｏｔ ｈ ｅｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓｕ ｓ ｉ ｎ ｇｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｌ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｗｎ ｔ ｐ ａ ｔ ｈ ｗ ａ ｙ ｏ ｎｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ｏ ｆ ｔ ｕ ｍ ｏ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ．Ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｉ ｎ ｇ ｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｎ ｉ ｃ ｈ ｅ ｓ ｔ ｏ ｃ ａ ｐ ｔ ｕ ｒ ｅ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｔ ｕ ｍ ｏ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｒ ｅ ｍ ａ ｉ ｎ ｓ ｔ ｏｂ ｅｆ ｕ ｒ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｄ ． 【 Ｋ ｅ ｙｗ ｏ ｒ ｄ ｓ 】 Ｎ ｅ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃｓ ｔ ｅ ｍｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ；Ｉ ｍ ｍ ｕ ｎ ｏ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｔ ｙ ｐ ｉ ｎ ｇ
·４ １ ２ ·
国际肿瘤学杂志 ２ ０ １ １年 ６月第 ３ ８卷第 ６期 Ｊ Ｉ ｎ ｔ Ｏ ｎ ｃ ｏ ｌ ，Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０ １ １ ，Ｖ ｏ ｌ ３ ８ ，Ｎ ｏ ６
＋ 肝癌细胞均表达 表达 Ｃ Ｄ １ ３ ３ ， 但并非所有的 Ｃ Ｄ １ ３ ３ ＋ Ａ Ｌ Ｄ Ｈ 。进一步研究发现， Ｃ Ｄ １ ３ ３ Ａ Ｌ Ｄ Ｈ＋ 肝癌细胞 ＋ － 比Ｃ Ｄ １ ３ ３ Ａ Ｌ Ｄ Ｈ－和 Ｃ Ｄ １ ３ ３ Ａ Ｌ Ｄ Ｈ－ 肝癌细胞具有
Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ７ ６ ０ ／ ｃ ｍ ａ ． ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ ４ ２ ２ Ｘ ． ２ ０ １ １ ． ０ ６ ． ０ ０ ４ 基金项目： 上海市自然科学基金资助项目（ １ ０ Ｚ Ｒ １ ４ ０ ５ ２ ０ ０ ） 作者单位： ２ ０ ０ ０ ４ ０上海， 复旦大学附属华山医院血液科 通信作者： 陈波斌， Ｅ Ｍ ａ ｉ ｌ ： ｂ ｏ ｂ ｉ ｎ ＿ ｃ ｈ ｅ ｎ ＠ｙ ａ ｈ ｏ ｏ ． ｃ ｏ ｍ
·４ １ １ ·
ｐ ｈ ｉ ｓ ｍａ ｎ ｄｃ ｅ ｒ ｖ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ａ ｒ ｃ ｉ ｎ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ ．ＪＣ ｌ ｉ ｎＰ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ，２ ０ ０ ７ ，６ ０ （ ３ ） ： ３ ０ ３ ３ ０ ６ ． ［ １ ４ ］Ｊ ａ ｎ ｇ Ｊ Ｓ ，Ｋ ｉ ｍＫ Ｍ，Ｋ ａ ｎ ｇＫ Ｈ ，ｅ ｔ ａ ｌ ．Ｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｍ ｓ ｉ ｎｔ ｈ ｅｓ ｕ ｒ ｖ ｉ ｖ ｉ ｎ ｇ ｅ ｎ ｅ ａ ｎ ｄｔ ｈ ｅ ｒ ｉ ｓ ｋｏ ｆ ｌ ｕ ｎ ｇｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ．Ｌ ｕ ｎ ｇＣ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ，２ ０ ０ ８ ，６ ０ （ １ ） ： ３ １ ３ ９ ． ［ １ ５ ］Ｗａ ｎ ｇ Ｙ Ｈ ，Ｃ ｈ ｉ ｏ ｕＨ Ｙ ，Ｌ ｉ ｎＣ Ｔ ，ｅ ｔ ａ ｌ ．Ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎｓ ｕ ｒ ｖ ｉ ｖ ｉ ｎ ｇ ｅ ｎ ｅ ｐ ｒ ｏ ｍ ｏ ｔ ｅ ｒ ３ １ Ｃ ／ Ｇｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｍａ ｎ ｄ ｕ ｒ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｃ ａ ｒ ｃ ｉ ｎ ｏ ｍ ａ ｒ ｉ ｓ ｋ ｉ ｎ Ｔ ａ ｉ ｗ ａ ｎ ｅ ｓ ｅ ｐ ｏ ｐ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ．Ｕ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， ２ ０ ０ ９ ， ７ ３ （ ３ ） ： ６ ７ ０ ６ ７ ４ ． ［ １ ６ ］Ｈ ａ ｎＣ Ｈ ，Ｗｅ ｉ Ｑ ，Ｌ ｕＫ Ｋ ，ｅ ｔ ａ ｌ ．Ｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｎ ｓ ｉ ｎｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｒ ｖ ｉ ｖ ｉ ｎｐ ｒ ｏ ｍ ｏ ｔ ｅ ｒ ａ ｒ ｅ ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｅ ｄｗ ｉ ｔ ｈａ ｇ ｅｏ ｆ ｏ ｎ ｓ ｅ ｔ ｏ ｆ ｏ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｎｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ．Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｃ ｌ ｉ ｎ Ｅ ｘ ｐＭ ｅ ｄ ， ２ ０ ０ ９ ， ２ （ ４ ） ： ２ ８ ９ ２ ９ ９ ． ［ １ ７ ］Ｗａ ｇ ｎ ｅ ｒ Ｍ，Ｓ ｃ ｈ ｍ ｅ ｌ ｚＫ ，Ｄ ｏ ｒ ｋ ｅ ｎＢ ，ｅ ｔ ａ ｌ ．Ｅ ｐ ｉ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃａ ｎ ｄｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓｏ ｆ ｔ ｈ ｅｓ ｕ ｒ ｖ ｉ ｖ ｉ ｎｐ ｒ ｏ ｍ ｏ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎａ ｃ ｕ ｔ ｅｍ ｙ ｅ ｌ ｏ ｉ ｄｌ ｅ ｕ ｋ ｅ ｍ ｉ ａ ．Ｌ ｅ ｕ ｋ Ｒ ｅ ｓ ， ２ ０ ０ ８ ， ３ ２ （ ７ ） ： １ ０ ５ ４ １ ０ ６ ０ ． （ 收稿日期： ２ ０ １ １ ０ １ ０ ７ 修回日期： ２ ０ １ １ ０ ４ ２ ６ ）